检索结果-南通市图书馆

作者：任黎复旦大学

学位级别：硕士

结直肠癌是常见的消化系统疾病,临床上主要采取以手术为主、化疗和放疗为辅的综合治疗,但其总体疗效仍不理想,术后5年生存率一直徘徊于50%-60%,其中肝转移是治疗失败的最主要原因。约15%-25%的患者在原发灶确诊时已伴有肝转移,原发灶根... 详细信息

结直肠癌是常见的消化系统疾病,临床上主要采取以手术为主、化疗和放疗为辅的综合治疗,但其总体疗效仍不理想,术后5年生存率一直徘徊于50%-60%,其中肝转移是治疗失败的最主要原因。约15%-25%的患者在原发灶确诊时已伴有肝转移,原发灶根治术后的肝转移发生率仍高达15%-25%,因结直肠癌死亡的患者中约50%存在肝转移。尽管对结直肠癌肝转移已经进行了大量临床和基础研究,但是其机制仍未完全明确。因此,从分子生物学水平上探索结直肠癌肿瘤细胞增殖和侵袭能力以及对于转移机制的研究,会有利于结直肠癌肝转移的早期预测和诊断,从而提高结直肠癌术后5年生存率,具有重要意义。基因治疗（gene therapy）是将功能基因转移至患者体内,纠正有缺陷的基因或赋予患者功能,以达到临床治疗或预防疾病目的。通过转基因技术,也可使导入的DNA序列干扰癌基因表达、恢复抑癌基因功能及启动某种新的功能等。RNA干扰（RNAinterference, RNAi）技术是由双链RNA启动序列特异的基因沉默,是生物体在进化中形成的一种内在基因表达调控机制。目前,RNAi技术已经广泛应用于基因功能鉴定,基因表达及转录后调控等热门研究领域,并为多种疾病的基因治疗提供新的思路。本课题组前期已应用基因芯片杂交技术筛选了结直肠癌肝转移患者与结直肠癌无肝转移患者中差异表达的基因,并用实时荧光定量PCR技术验证了具有显著差异表达的基因。基因芯片和实时荧光定量PCR验证结果均显示周期素依赖性激酶样1基因（cyclin-dependent kinase like 1, cdkl1）是其中最显著表达上调的基因之一,提示其可能与结直肠癌肝转移有关。本研究第一部分,设计了4个针对cdkl1基因的干扰片段,构建了RNAi-cdkl1慢病毒表达载体及pEGFP-N1-3FLAG-cdkl1真核过表达载体,将这两种质粒共转染293T细胞,筛选出可有效抑制cdkl1表达的干扰序列。荧光显微镜观察结果显示,所构建的慢病毒载体可高效转染293T细胞。Western blot结果显示,所设计的4段siRNA中,靶序列2（CTACTGTGATACCAAGAAA）对cdkl1基因表达具有显著的敲减和沉默作用,并进一步将此shRNA载体进行慢病毒的包装。第二部分,将包装好的慢病毒感染人结肠癌DLD-1和SW480细胞,qPCR和Western blot结果显示cdkl1敲减后,两种细胞中cdkl1的表达得到明显抑制。MTT法、克隆形成实验、流式细胞仪细胞周期检测和侵袭转移实验结果表明,上述结肠癌细胞的生长和增殖受到到明显抑制,克隆形成率明显降低,细胞周期中细胞阻滞在G1期,复制能力、增殖指数和侵袭能力明显降低,表明cdkl1具有影响结直肠癌细胞增殖、细胞周期和侵袭转移的功能。综上所述,本研究应用前期基因筛选的结果,利用RNAi技术构建siRNA-cdkl1慢病毒载体感染结肠癌细胞DLD-1和SW480,可显著抑制cdkl1 mRNA及蛋白的表达,上述细胞株内cdkl1受到敲减和沉默后,DLD-1和SW480细胞增殖受到明显抑制,克隆形成率明显下降,细胞周期阻滞于G1期,侵袭能力减弱。本研究结果提不cdkl1基因具有促使结直肠癌肿瘤细胞增殖和侵袭的功能,可作为结肠癌治疗的潜在作用靶点。

关键词：周期素依赖性激酶 cdkl1 RNA干扰结直肠癌肝转移基因芯片

cdkl1在ER阴性的乳腺癌耐药细胞中的作用研究

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CDKL1在ER阴性的乳腺癌耐药细胞中的作用研究

作者：李翔电子科技大学

学位级别：硕士

乳腺癌是全世界女性癌症患者中具有高发病率和致死率的癌症。由于诊断不当以及化疗的敏感性问题,乳腺癌的治疗效果依然不令人满意。因此,研究者尝试探索可靠的预测性生物标志物从而推进乳腺癌的靶向治疗。已有文献报道cdkl1在乳腺癌组... 详细信息

乳腺癌是全世界女性癌症患者中具有高发病率和致死率的癌症。由于诊断不当以及化疗的敏感性问题,乳腺癌的治疗效果依然不令人满意。因此,研究者尝试探索可靠的预测性生物标志物从而推进乳腺癌的靶向治疗。已有文献报道cdkl1在乳腺癌组织中表达上调,对cdkl1的功能抑制可增加细胞对化疗药物的敏感性,但是cdkl1在肿瘤细胞周期调控中的功能和其相关信号通路依然不明确。本论文目的在于研究cdkl1在乳腺癌耐药细胞和非耐药细胞中的表达水平及其与乳腺癌耐药的潜在关联。同时,对SKBR-3细胞系用他莫昔芬诱导筛选新型乳腺癌耐药细胞株,以期在后续研究中,在同一雌激素受体阴性的乳腺癌细胞系下对耐药细胞和非耐药细胞中cdkl1的表达量进行比较。本实验用蛋白质印迹技术测定了乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7以及乳腺癌他莫昔芬耐药细胞OHTR-T1000中cdkl1的蛋白表达水平,用MTT法测定了乳腺癌细胞的存活率。同时,将cdkl1蛋白在不同乳腺癌细胞中的表达量与乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐受水平进行分析比较。实验观测数据提示,cdkl1在雌激素受体阳性和雌激素受体阴性乳腺癌细胞中的表达水平有显著差异,但尚不能得出乳腺癌细胞的耐药水平是否与cdkl1在不同细胞系中的表达差异有关的结论,后续研究需要继续扩大细胞系的检测范围并多次重复试验,才能得到更为可靠的结论。此外,为了进一步研究cdkl1在乳腺癌耐药中的分子机制,对雌激素阴性乳腺癌细胞中cdkl1表达水平进行深入探讨,本人用低浓度到高浓度的他莫昔芬对乳腺癌SKBR-3细胞进行半年以上的诱导处理,得到了耐药程度为普通SKBR-3细胞(IC为25.48±2.94μg/ml)1.7倍的SKBR-3耐药细胞(IC值为43.42±6.05μg/ml),且有统计学意义。经蛋白质印迹技术检测,cdkl1在他莫昔芬耐药的SKBR-3细胞中的表达水平高于其在普通SKBR-3细胞中的表达水平,提示雌激素受体阴性的乳腺癌细胞的耐药可能和cdkl1的高表达有关,但仍需在其它雌激素受体阴性的乳腺癌细胞中进行验证。该耐药细胞株为下一步以信号通路为基础,探究cdkl1与乳腺癌耐药的分子机制提供了载体。

关键词： cdkl1 雌激素受体乳腺癌耐药

iASPP和cdkl1的表达及其沉默对肿瘤细胞生物活性的影响

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iASPP和CDKL1的表达及其沉默对肿瘤细胞生物活性的影响

作者：高燕芳南京医科大学

学位级别：硕士

目的：检测iASPP和cdkl1在癌组织中的表达，探索它们在癌症发生、发展中的作用，用以指导临床肿瘤诊断与治疗。方法：分别用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和Western blot方法检测56例卵巢癌患者的癌组织及对应的癌旁组织中iASPP ... 详细信息

目的：检测iASPP和cdkl1在癌组织中的表达，探索它们在癌症发生、发展中的作用，用以指导临床肿瘤诊断与治疗。方法：分别用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和Western blot方法检测56例卵巢癌患者的癌组织及对应的癌旁组织中iASPP (inhibitor of ASPPfamily)mRNA和蛋白表达水平，并用受试者工作特征曲线(Receiver operatingcharacteristic curve，ROC曲线)分析iASPP mRNA表达水平对卵巢癌的诊断价值;以人类卵巢癌细胞株OVCA420为研究对象，用siRNA干扰的方法使iASPP表达降低，用RT-PCR和Western blot方法检测转染效果;进行细胞功能学检测，观察转染后细胞的体外生长情况，CCK-8试验检测细胞增殖水平，Hoechst33342染色检测细胞凋亡水平。RT-PCR方法检测186例乳腺癌组织与98例乳腺良性肿瘤组织中cdkl1mRNA表达水平。免疫组织化学染色方法检测30例石蜡包埋乳腺癌组织中cdkl1蛋白表达水平。用cdkl1特异性短发夹RNA(shorthairpin RNA, shRNA)抑制乳腺癌细胞MCF-7中cdkl1基因表达，检测cdkl1对细胞增殖的影响及转染后细胞对化疗药物敏感性的改变。结果：卵巢癌组织中iASPP mRNA和蛋白水平都明显高于癌旁组织(P=0.001);针对iASPP的特异性siRNA转入卵巢癌细胞OVCA420后，经RT-PCR和Westernblot检测，与空白对照相比，iASPP表达均明显降低;CCK-8实验结果显示iASPP基因沉默后细胞增值水平降低(Pcdkl1在乳腺癌组织中表达高与良性对照组织，表达阳性率为77%(144/186)，临床资料分析显示，cdkl1在组织中表达阳性率高于与ER, PR, P53, VEGF和E-cad表达(Pcdkl1表达后，MCF-7细胞生长抑制在G2/M期，且对细胞周期特异性化疗药物敏感性增强。结论：iASPP及cdkl1都在癌组织中高表达显示其在肿瘤发生过程中发挥重要作用，且具有一定诊断价值;而RNA干扰(RNAi)方法使这两个基因表达沉默后，抑制细胞生长，说明iASPP和cdkl1可作为肿瘤基因治疗的有效靶点。

关键词： iASPP cdkl1 卵巢癌乳腺癌 RNA干扰

周期蛋白cdkl1在肺癌放射增敏和免疫逃逸中的作用机制研究

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周期蛋白CDKL1在肺癌放射增敏和免疫逃逸中的作用机制研究

作者：李子璇华中科技大学

学位级别：硕士

目的:肺癌是危及人类健康最主要的恶性肿瘤。放疗联合免疫治疗是肺癌的主要治疗手段,但临床上仍有50%的患者存在放射免疫抵抗,其潜在的分子机制尚有待进一步阐明。cdkl1(Cyclin-dependent kinase-like 1)是周期蛋白依赖性激酶CDK(Cyclin... 详细信息

目的:肺癌是危及人类健康最主要的恶性肿瘤。放疗联合免疫治疗是肺癌的主要治疗手段,但临床上仍有50%的患者存在放射免疫抵抗,其潜在的分子机制尚有待进一步阐明。cdkl1(Cyclin-dependent kinase-like 1)是周期蛋白依赖性激酶CDK(Cyclin-dependent kinase)家族的一员,参与调控纤毛形成、脑发育及肿瘤发生发展,但其在肺癌中的功能目前尚不明确。本文旨在研究cdkl1在肺癌放射免疫增敏中的功能及分子机制,为肺癌治疗提供潜在的分子靶标。方法:(1)在TCGA数据库中分析cdkl1在肺癌组织和正常组织中的表达差异。(2)用Kaplan-Meier法分析cdkl1的表达和肺癌患者临床预后是否相关。(3)通过Western blot实验检测cdkl1在肺癌细胞系和正常肺细胞中的蛋白表达差异。(4)运用细胞生长计数实验、平板克隆形成实验及Ed U实验明确cdkl1对肺癌细胞生长与增殖的影响。(5)彗星实验、γHAX焦点形成实验及细胞克隆形成实验共同验证cdkl1在体外对肺癌放射敏感性的影响。(6)裸鼠皮下移植瘤模型(利用慢病毒构建cdkl1过表达稳定系)在体内验证cdkl1对肺癌放疗敏感性的影响。(7)运用串联亲和纯化和质谱技术筛选cdkl1的相互作用蛋白。(8)免疫共沉淀技术验证cdkl1和候选互作蛋白YBX1之间的相互作用。(9)胞浆胞核蛋白表达及免疫荧光共定位技术检测cdkl1对YBX1定位的影响。(10)运用Ch IP(Chromatin immunoprecipitation)-PCR技术明确cdkl1通过YBX调控PD-L1的具体作用机制。(11)Real-time PCR、Western blot和流式细胞术体外验证cdkl1对肺癌细胞PD-L1表达的影响。(12)构建过表达cdkl1的C57BL/6J小鼠皮下移植瘤模型,流式检测CD8T细胞的数量及其活性标志,体内验证cdkl1在肺癌免疫逃逸中的作用。(13)将过表达cdkl1、RT(放疗)和PD-L1单抗三者联合观察对C57BL/6J小鼠体内放射免疫增敏效应。结果:(1)TCGA肺癌数据库的结果显示cdkl1在肺癌组织中低表达。(2)Kaplan-Meier法分析发现cdkl1高表达与肺癌患者的临床预后呈正相关。(3)cdkl1蛋白在肺癌细胞系中的表达水平低于肺正常细胞。(4)体外实验结果显示Si RNA敲低cdkl1促进肺癌细胞的生长和增殖,过表达cdkl1则抑制肺癌细胞的生长和增殖。(5)过表达cdkl1可以使放疗后肺癌细胞DNA的损伤增加,克隆形成能力减弱,增强其放射敏感性,而敲低cdkl1后表现出相反的效应。(6)体内实验证明过表达cdkl1裸鼠皮下移植瘤的生长速度明显减慢,放疗敏感性也明显增强。(7)串联亲和纯化和质谱技术筛选出YBX1为cdkl1的候选相互作用蛋白。(8)免疫共沉淀技术证实cdkl1和YBX1在肺癌中存在相互作用。(9)胞浆胞核蛋白实验和免疫荧光共定位技术共同验证cdkl1与YBX1的相互作用不影响YBX1的定位。(10)Ch IP-PCR技术确定cdkl1抑制转录因子YBX1在PD-L1启动子区的结合能力。(11)肺癌细胞中cdkl1可负向调控PD-L1的表达,且这种效应依赖于YBX1。(12)体内动物实验显示过表达cdkl1可增加CD8T细胞的比例,同时上调其表面活性分子IFN-γ和GZMB的表达。(13)过表达cdkl1、RT和抗PD-L1单抗三者联合显示出最强的放射免疫增敏效应。结论:cdkl1在肺癌细胞和组织中低表达,抑制肺癌细胞的生长与增殖,在体内外均表现出放射增敏效应。机制上,cdkl1可与转录因子YBX1相互作用,抑制YBX1和PD-L1启动子区的结合,减少PD-L1的转录和膜表达,进而促进了CD8T细胞的活化,最终抑制肺癌细胞的免疫逃逸。重要的是,过表达cdkl1联合放疗和抗PD-L1治疗显示出最强的放射免疫增敏效应。

关键词：肺癌 cdkl1 YBX1 PD-L1 放射敏感性免疫逃逸

SCIN、cdkl1、CUGBP1、SLC16A7基因与结直肠癌及肝转移临床相关性研究

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SCIN、CDKL1、CUGBP1、SLC16A7基因与结直肠癌及肝转移临床相关性...

作者：潘向欧复旦大学

学位级别：硕士

目的：用免疫组化方法检测结直肠癌原发病灶中SCIN、cdkl1、CUGBP、SLC16A7基因的表达,并进一步研究上述基因表达与结直肠癌及肝转移的发生、临床病理特征及预后相关性。方法：随机选取2001年～2009年复旦大学附属中山医院普外科手术治... 详细信息

目的：用免疫组化方法检测结直肠癌原发病灶中SCIN、cdkl1、CUGBP、SLC16A7基因的表达,并进一步研究上述基因表达与结直肠癌及肝转移的发生、临床病理特征及预后相关性。方法：随机选取2001年～2009年复旦大学附属中山医院普外科手术治疗的结直肠癌病例300例,根据术前、术中诊断及术后随访,分为结直肠癌无肝脏转移组（n=100）、结直肠癌同时性肝脏转移组（n=100）和结直肠癌异时性肝脏转移组（n=100）,运用免疫组化技术检测SCIN、DKL1、CUGBP1、SLC16A7基因在各组结直肠癌癌组织和正常结直肠组织中的表达,采用非参数Wilcoxon检验和Kaplan-meier生存分析方法,单因素和多因素Cox比例风险模型分析与原发灶病理特征、肝脏转移发生及生存预后的关系。结果：1、在结直肠癌组织中,SCIN基因在同时性肝转移组较无转移组表达上调,P=0.021。异时性肝转移组与无转移组（P=0.117）和同时性肝转移组（P=0.404）表达比较均无明显差异。SCIN基因表达在大体类型（P=0.034）、浸润深度（P=0.011）、淋巴结转移（P=0.012）、癌结节（P=0.027）、神经侵犯（P=0.041）等方面有差异。SCIN基因在溃疡型、T3-T4期、淋巴结转移阳性、癌结节阳性、神经侵犯阳性的癌组织中表达上调。在正常组织中,SCIN在同时性肝转移组中表达较无转移组明显上调（P=0.014）,异时性肝转移组表达较无转移组明显也上调（P=0.019）,同时性肝转移组和异时性肝转移组之间无明显差异（P=0.931）。2、在结直肠癌组织中,CUGBP1在无转移、同时性肝转移及异时性肝转移三组之间虽无明显差异,但P值接近0.05。其表达与临床病理方面无明显差异相关性（P＞0.05）。在正常组织中,CUGBP1在异时性肝转移组表达较无转移组明显上调（P=0.029）。同时性肝转移组较无转移组,同时性肝转移组较异时性肝转移组之间无明显差异。CUGBP1在各组及总体结直肠癌组织中较正常组织明显上调,P＜0.0001。3、cdkl1在结直肠癌组织中,异时性肝转移组较无转移组表达上调（P=0.023）;无转移组与同时肝转移性组及同时性肝转移组与异时性肝转移组无统计学差异。在正常结直肠组织中,cdkl1在无转移组、同时性肝转移组和异时性肝转移组之间表达无明显差异,P＞0.05。cdkl1在各组及总体结直肠癌组织中较正常组织明显上调,P＜0.0001。在结直肠癌组织中,cdkl1表达在组织学分型和浸润深度方面有差异。在粘液腺癌中表达明显高于非粘液腺癌（P＜0.001）;在T3-T4期肿瘤中表达高于T1-T2期肿瘤（P=0.014）。4、SLC16A7在结直肠癌组织中,异时性肝转移组与无转移组（P=0.015）和同时性肝转移组（P=0.005）比均明显下调。同时性肝转移组和无转移组比无明显差异。其表达与临床病理方面无明显差异相关性（P＞0.05）。在结直肠癌正常组织中,三组之间SLC16A7表达无明显差异。结直肠癌组织与正常组织比：在无转移组中,结直肠癌和正常组织比SLC16A7表达无差异;在同时性肝转移组中,结直肠癌组织较正常组织表达上调（P=0.013）;在异时性肝转移组中,结直肠癌组织较正常组织表达下调（P=0.0005）。5、单因素分析提示同时性肝转移的发生与年龄、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、癌结节、脉管侵犯、神经侵犯相关。异时性肝转移的发生与浸润程度、淋巴结转移、癌结节相关。多因素分析提示淋巴结转移阳性、癌结节阳性、SCIN基因高表达情况是结直肠癌同时性肝转移发生的独立风险因素。浸润深度越深、淋巴结转移阳性、SLC16A7低表达是结直肠癌异时性肝转移发生的独立风险因素。6、单因素分析提示结直肠癌肝转移总体生存时间与浸润深度、淋巴结转移、癌结节、神经侵犯、CUGBP1基因表达情况、SCIN基因表达情况相关。多因素分析提示癌结节阳性、神经侵犯、SCIN基因高表达是结直肠癌肝转移独立风险预后因素。结论：1、SCIN基因在结直肠癌组织中,同时性肝转移组表达较无转移组上调。可作为预测结直肠癌肝转移指标。SCIN基因在溃疡型、T3-T4期、淋巴结转移阳性、癌结节阳性、神经侵犯阳性的癌组织中表达上调。2、结直肠癌组织中,CUGBP1在无转移、同时性肝转移及异时性肝转移三组之间虽无明显差异,但P值接近0.05。在正常结直肠组织中,CUGBP1在异时性肝转移组表达较无转移组明显上调。3、在结直肠癌组织中,cdkl1在结直肠癌异时性肝转移组表达较无转移组上调。在粘液腺癌及T3-T4期肿瘤中表达上调。提示cdkl1基因可能是结直肠癌异时性肝转移的预测因素。4、SLC16A7在结直肠癌组织中,异时性肝转移组与无转移组和同时性肝转移组比均明显

关键词：结直肠癌肝转移免疫组化 SCIN cdkl1 CUGBP1 SLC16A7

cdkl1基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

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临床肿瘤学杂志 2012年第12期17卷 1070-1072页

作者：王晓明梁志超江苏省肿瘤医院检验科南京210009

目的探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(cdkl1)基因在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR技术检测62例乳腺癌及其癌旁组织中cdkl1 mRNA的表达情况。结果乳腺癌及其癌旁组织中cdkl1 mRNA阳性表达率分别为75.8%... 详细信息

目的探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(cdkl1)基因在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR技术检测62例乳腺癌及其癌旁组织中cdkl1 mRNA的表达情况。结果乳腺癌及其癌旁组织中cdkl1 mRNA阳性表达率分别为75.8%(47/62)和27.4%(17/62),差异有统计学意义(P=0.000)。在乳腺癌组织中,cdkl1 mRNA的表达与PR和ER有关,而与HER-2、年龄、肿瘤大小、月经状态、淋巴结转移和临床分期无关。结论 cdkl1表达与乳腺癌的发生、发展密切相关,可能是一种潜在的分子标记物。

关键词： cdkl1 乳腺癌临床病理特征

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cdkl1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

现代肿瘤医学 2017年第8期25卷 1187-1191页

作者：蒋本春孙威中国医科大学附属盛京医院胃肠营养减肥外科辽宁沈阳110004

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(cdkl1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用。方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组。通过细胞划痕实验检测胃癌SGC790... 详细信息

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(cdkl1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用。方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组。通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测cdkl1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,cdkl1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(Pcdkl1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明cdkl1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关。

关键词： cdkl1 胃癌侵袭转移