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cdc6在小鼠肝切除后肝再生中作用的研究

Cdc6在小鼠肝切除后肝再生中作用的研究

作者：还勇为第三军医大学

学位级别：硕士

目的:本试验分二个部分:1、设计并构建小鼠cdc6基因的RNAi真核表达载体pGCsi6/Neo/GFP/RNAi。通过尾静脉快速注射法将真核表达载体pGCsi6/Neo/GFP/RNAi转染至小鼠肝细胞中,运用荧光显微镜及RT-PCR方法观察干扰效果。2、通过观察肝切除... 详细信息

目的:本试验分二个部分:1、设计并构建小鼠cdc6基因的RNAi真核表达载体pGCsi6/Neo/GFP/RNAi。通过尾静脉快速注射法将真核表达载体pGCsi6/Neo/GFP/RNAi转染至小鼠肝细胞中,运用荧光显微镜及RT-PCR方法观察干扰效果。2、通过观察肝切除后小鼠肝细胞中cdc6表达变化及其对肝细胞增殖和细胞周期的影响来探讨其在肝切除后肝再生的作用。方法: 根据GenBank中cdc6的序列,设计并构建小鼠cdc6基因的RNAi真核表达载体pGCsi6/Neo/GFP/RNAi。通过尾静脉将质粒快速注射入小鼠体内,观察其对肝细胞中cdc6基因表达的影响。以此组小鼠为RNAi组,同时设立空载体组及空白对照组。采用Higgins＆Aderson创建的经典小鼠肝部分切除术模型,即分别于肝左叶、中叶根部结扎切除。在术后0h、6h、12h、24h、72h五个不同的时相点,分离肝细胞。肝细胞分离方法采用肝脏原位匀速加离体循环胶原酶灌注法,得到肝细胞沉淀。通过台盼蓝染色判断测定细胞活性,细胞计数。①用流式细胞法检测各组细胞增殖周期的变化②裂解细胞提取蛋白及RNA,采用Westernblot和RT-PCR方法测定各组细胞的cdc6蛋白及基因表达情况。③有3H-亮氨酸掺入法检测各组细胞的增殖率。结果: 1.经测序验证,cdc6基因的RNAi真核表达载体的模板序列与设计序列完全正确,成功构建pGCsi6/Neo/GFP/RNAi干扰质粒。 2.通过尾静脉注射法将质粒pGCsi6/Neo/GFP/RNAi转染到小鼠肝细胞中,经荧光显微镜观察到绿色荧光。 3.经过多次实验,平均每只鼠肝可获取1.5×10个肝细胞。经台盼蓝拒染实验测定细胞平均活性为96%。刚刚分离的肝细胞倒置显微镜下观察可见肝细胞呈单个分散状态,呈圆球形,细胞折光性强,接种4 h后肝细胞贴壁、伸展,连接成条索状;24 h后绝大多数肝细胞贴壁,呈扁平状、体积明显增大,连接成岛屿状;48h后肝细胞贴壁牢固,伸展为上皮样,连接成片。分离培养的细胞形态完全符合典型的肝细胞形态特征。 4.在空载体组及空白对照组中,肝细胞中cdc6的含量由6h开始升高,在24h达到高峰(P＜0.01),72h有所降低;RNAi组cdc6蛋白的含量在各时相点均表现为低水平表达,在各时相点之间变化趋势也不明显。 5.在术后12h、24h、48h和72h时相点,空载体组及空白对照组肝细胞H-亮氨酸掺入率分别与RNAi组相比较在统计学上有非常显著差异(P＜0.01)。从组内比较看,空白对照组随时间的变化细胞H-亮氨酸掺入率在持续增加,从术后6h即有变化,24h更为明显,但是24h到72h之间变化较慢,维持在较高水平;空载体组和空白对照组具有相似性变化;而实验组术后H-亮氨酸掺入率0h-72h一直保持在较低水平,变化不大。 6.与RNAi组相比,空载体组与空白对照组G/G期细胞逐渐降低,S期细胞明显增加,在术后各个时相点与RNAi组有明显差异(P＜0.05或者P＜0.01),其高峰在术后24h,72h有明显降低。另外,空载体组和空白对照组相比较,差异无显著性。结论: 1.成功构建pGCsi6/Neo/GFP/RNAi干扰质粒,并通过尾静脉注射法成功将质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/RNAi转染到小鼠肝细胞中。 2.小鼠肝部分切除术后早期cdc6表达增加,由6h开始升高,在24h达到高峰,72h有所降低,提示cdc6基因在肝切除术后早期即被激活。 3.小鼠肝部分切除术后早期即被激活的cdc6基因可以明显促进肝细胞的蛋白质合成和细胞生长。随着术后时间的延长,肝细胞H-亮氨酸掺入率在持续增加,从术后6h升高,24h达到高峰,72h开始降低;而转染后的小鼠肝细胞H-亮氨酸掺入率则变化不大。 4.小鼠肝部分切除术后肝细胞明显处于增殖状态,G/G期细胞逐渐降低,S期细胞明显增加。而转染后小鼠肝细胞则停滞于G/G期,说明这种增殖状态和cdc6基因在肝部分切除术后早期激活密切相关。也说明cdc6参与肝细胞周期的启动,是启动肝细胞复制的关键因子。总之,cdc6基因在肝切除术后早期即被激活,可以同时促进细胞生长和细胞增殖,在肝再生过程中发挥重要作用。深化对此基因以及细胞生长和细胞增殖间关系的研究将进一步丰富肝再生理论。

关键词：肝再生肝部分切除术 cdc6 细胞生长细胞增殖

HCMV感染对HEL细胞MCM装载因子cdc6与Cdt1的影响

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HCMV感染对HEL细胞MCM装载因子Cdc6与Cdt1的影响

作者：贺晓日中南大学

学位级别：硕士

目的研究人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染对人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblastic，HEL)细胞的MCM装载因子cdc6与Cdt1表达的影响，从分子水平上探讨HCMV的发病机制。方法用血清饥饿法同步化HEL细胞于G／G... 详细信息

目的研究人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染对人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblastic，HEL)细胞的MCM装载因子cdc6与Cdt1表达的影响，从分子水平上探讨HCMV的发病机制。方法用血清饥饿法同步化HEL细胞于G／G期，流式细胞术测细胞周期;用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态改变至感染后7天。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收获细胞，提取总的RNA，采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测cdc6 mRNA的表达水平;用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMV Cdt1蛋白。结果 1．模拟感染组未见细胞形态学改变，感染组感染后36h HEL细胞有形态学的改变即可见局部HEL细胞变圆、胞体变大、膨胀，7天时形态学的改变更加明显，所有细胞均发生病变。 2．12h、24h、48h、72h和96h两组HEL细胞cdc6 mRNA表达水平均有显著性差异(P＜0.05)，12h、24h和48h时感染组较模拟感染组明显增加，72h和96h时模拟感染组较感染组明显升高。感染组在感染后12h时cdc6 mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至72h时达最低水平，96h时又稍有回升;模拟感染组在感染12h时cdc6mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至48h时达最低水平，72h时后开始回升，96h时继续回升。 3．12h、24h、和96h两组HEL细胞Cdt1蛋白水平均有显著性差异(P＜0.05)，而48h、72h两组HEL细胞Cdt1蛋白水平无明显差异(P＞0.05)。12h和96h时感染组较模拟感染组明显降低，24h感染组较模拟感染组明显升高。模拟感染组在感染后12h时Cdt1蛋白表达水平最高，后逐渐下降，至24h时达最低水平，96h又稍有回升;感染组在感染后12h Cdt1蛋白表达水平较低，24h达到最高峰，48h时急剧下降，一直维持较低的稳定水平。结论 ***诱导cdc6 mRNA过度表达，导致cdc6的积聚，最终将影响细胞周期的进程。 ***诱导Cdt1蛋白表达延迟，从而影响了MCM复合物的装载和pre-RC的形成，使细胞停滞在G期，阻止DNA的复制。

关键词：人巨细胞病毒 HEL细胞 cdc6 Cdt1

MCM4、cdc6、CDK1、TFF2在宫颈癌中的表达及其与HPV16/18感染的相关性研究

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MCM4、CDC6、CDK1、TFF2在宫颈癌中的表达及其与HPV16/18感染的相...

作者：陈丽萍山西医科大学

学位级别：硕士

目的:研究MCM4、cdc6、CDK1、TFF2在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制,进一步寻找有利于宫颈癌诊断的新的分子标志物,以指导其诊断与预后。方法:采用免疫组织化学方法对50例宫颈鳞癌、20例CINⅠ、2... 详细信息

目的:研究MCM4、cdc6、CDK1、TFF2在宫颈癌组织中的表达及其与HPV16/18感染的相关性,以探讨宫颈癌的发生机制,进一步寻找有利于宫颈癌诊断的新的分子标志物,以指导其诊断与预后。方法:采用免疫组织化学方法对50例宫颈鳞癌、20例CINⅠ、20例CINⅡ-Ⅲ、20例正常宫颈组织进行MCM4、cdc6、CDK1、TFF2的检测,同时采用PCR技术检测HPV16/18感染情况。实验数据的统计方法:计数资料采用χ2检验、Fisher,s确切概率法;等级资料采用非参数秩和检验;相关性检验采用Spearman秩相关分析数据。结果:(1)在宫颈癌组织中MCM4、cdc6、CDK1的阳性率高于CIN和正常宫颈组织,差异有显著性(均Pcdc6、CDK1阳性表达率与病理分级有关,差异有显著性(均Pcdc6阳性表达率均与淋巴结转移有关(均Pcdc6和CDK1的阳性表达率与年龄分组、临床分期无关(均P>0.05)。在宫颈癌组织中TFF2的阳性率低于CIN和正常宫颈组织,差异有显著性(P0.05)。(2)HPV16/18在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性率逐渐升高,差异有显著性(P0.05)。(3)MCM4、CDK1与cdc6的表达有正相关性(rs= 0.390 ,Pcdc6均与HPV16/18感染有关(rs = 0.634, P6, Pcdc6、HPV16/18的表达有负相关性(rs = -0.375, P6, Pcdc6、TFF2表达的改变可能与HPV16/18感染有关,且互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生。HPV16/18是导致宫颈癌的易感性增加的重要因素之一,但不是唯一因素。MCM4、cdc6、CDK1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关,可作为宫颈癌筛查、预后判断的有利指标。

关键词： MCM4 cdc6 CDK1 TFF2 人乳头瘤病毒(HPV) 宫颈癌

BCAT1和cdc6的表达在胶质瘤中的临床意义及对胶质瘤细胞生物学特性的影响

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BCAT1和CDC6的表达在胶质瘤中的临床意义及对胶质瘤细胞生物学特...

作者：熊莱四川大学

学位级别：硕士

背景和目的:胶质瘤是中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的30%,所有中枢神经系统恶性肿瘤的80%。外科手术很难完全切除胶质瘤,且该肿瘤易复发,耐药性和抗辐射性强,患者总体生存期短,因此它对人类健康构成较大的威... 详细信息

背景和目的:胶质瘤是中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的30%,所有中枢神经系统恶性肿瘤的80%。外科手术很难完全切除胶质瘤,且该肿瘤易复发,耐药性和抗辐射性强,患者总体生存期短,因此它对人类健康构成较大的威胁。虽然近些年来很多新兴治疗手段显示出一定成效,外科手术切除方式和放化疗技术也具有一些革新,但胶质瘤的整体预后效果仍然不乐观。随着分子生物学、细胞生物学、遗传学等科学研究和医学检测技术的不断深入,分子标记物已成为近年来肿瘤疾病领域研究的热点。研究胶质瘤的病理分子生物学特征从而找出明确的发病相关基因,对探索有效的早期诊断和预后评价指标、提供有效的个性化治疗方式、提升病患的存活率都具有极其重要的临床意义。生物信息学作为许多生物学领域研究的重要组成,其主要研究内容是利用相关的软件工具和生物算法对生物数据进行采集、处理、存储、分析和解释。它能够让我们更好地挖掘生物遗传中的信息,更好地理解某些基因和蛋白质表达在肿瘤发生发展过程中的调节作用。研究发现支链氨基酸转移酶1(BCAT1)和细胞分裂周期蛋白6(cdc6)在多种恶性肿瘤中异常表达提示其能够促进肿瘤细胞增殖、侵袭及转移,它们或许是相关恶性肿瘤潜在的生物分子标记物或者治疗靶点。但目前国内外仍然缺乏BCAT1和cdc6与胶质瘤相关的研究。本文旨在以CGGA数据库中胶质瘤基因表达谱数据为研究对象通过生物信息学的方法探讨胶质瘤组织中BCAT1和cdc6在m RNA水平上的表达情况,与患者临床特征及预后的相关性以及BCAT1和cdc6作用的信号通路,免疫组化的方法研究胶质瘤组织中BCAT1和cdc6在蛋白水平上的表达情况并探究BCAT1和cdc6对胶质瘤细胞生物学特性的影响。方法:1.基于R 3.6.1软件对CGGA数据库内胶质瘤相关m RNA表达量和Clinical数据进行差异分析,初步筛选出在胶质瘤中呈差异性表达的目标基因。2.以CGGA数据库内BCAT1和cdc6在胶质瘤组织内的表达量中位值为标准,分别将纳入病例分为高、低表达组,采用Kaplan-Meier生存分析探讨BCAT1和cdc6表达量对胶质瘤患者生存的影响。COX单因素及多因素回归分析BCAT1、cdc6、性别、年龄、病理类型、病理分级、复发状态、放疗、化疗、IDH突变状态、染色体1p/19q联合缺失状态等得出独立预后因子。运用ROC曲线研究预后相关的预测因素。通过Wilcoxon检验和Kruskal-Wallis检验分析BCAT1和cdc6表达量与临床特征的相关性。3.根据CGGA数据库的胶质瘤患者中BCAT1和cdc6的m RNA表达量的中位值作为基准,分别将纳入的病例分为高、低表达组。从分子特征数据库下载参考集***[Gene ontology],设置随机模拟计算的数量为1000,统计学P值(NOM P)cdc6高表达状态所激活的信号通路对胶质瘤生物学功能的影响,进而更深层次理解BCAT1和cdc6差异性表达对胶质瘤预后的影响机制。4.纳入92例2014年1月至2016年12月于四川大学华西医院病理确诊为高级别胶质瘤的病例,免疫组化法检测这些患者BCAT1和cdc6的表达情况。采用Kaplan-Meier法对患者BCAT1表达、cdc6表达以及其他6个因素进行生存分析,Spearman检验分析BCAT1和cdc6在胶质瘤组织中的表达相关性,采用COX回归比例风险模型进行患者生存的单因素和多因素分析,卡方检验分析BCAT1和cdc6表达与临床因素的相关性,采用ROC曲线分析患者预后相关的预测因素。5.通过CCK-8处理BCAT1和cdc6下调后的胶质瘤细胞以及经过替莫唑胺处理48h后的胶质瘤细胞并测定各孔在450nm波长处的吸光度值探究U87细胞和U251细胞分别经BCAT1和cdc6下调后细胞增殖和化疗抵抗能力的变化。6.通过Transwell模型和Matrigel基质胶并在显微镜下对迁移细胞和侵袭细胞的计数探究U87细胞和U251细胞分别经BCAT1和cdc6下调后迁移侵袭能力的变化。7.通过流式细胞仪检测U87细胞和U251细胞分别经BCAT1和cdc6下调后在细胞凋亡和细胞周期的变化。结果:1.经过生存分析过滤、COX多因素分析过滤以及ROC曲线过滤这三层过滤后筛选出包括BCAT1和cdc6在内的131个基因可以作为在胶质瘤中呈差异性表达的目标基因。2.生存分析提示BCAT1和cdc6低表达组生存情况显著优于高表达组,该两组具有显著统计学差异(P6%和58.9%,cdc6高

关键词：胶质瘤生物信息学 BCAT1 cdc6 富集分析 shRNA

Mcm7和cdc6在乳腺癌组织中的表达及临床意义

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Mcm7和Cdc6在乳腺癌组织中的表达及临床意义

作者：刘广岚苏州大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过检测乳腺癌组织中Mcm7mRNA和cdc6mRNA的表达,并探讨其与年龄、病理分期、组织学分级、淋巴结转移、肿瘤大小及其相互之间的关系,以分析其作为肿瘤增殖标志物与乳腺癌生物学行为和预后的关系。为临床病情预测和预后判断... 详细信息

目的:本实验通过检测乳腺癌组织中Mcm7mRNA和cdc6mRNA的表达,并探讨其与年龄、病理分期、组织学分级、淋巴结转移、肿瘤大小及其相互之间的关系,以分析其作为肿瘤增殖标志物与乳腺癌生物学行为和预后的关系。为临床病情预测和预后判断提供参考。方法:收集我院78例乳腺癌改良根治术标本,在无菌条件下取新鲜癌组织及癌旁正常组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Mcm7mRNA和cdc6mRNA在癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,并与相应的临床病理资料进行相关分析。结果:1、Mcm7mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率(85.90%)明显高于癌旁正常乳腺组织中的表达率(41.03%),差异有显著性意义(p60岁)表达率高;Ⅲ-Ⅳ期阳性表达率高于Ⅱ期和Ⅰ期;有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组织,统计学分析差异均有显著性(p67呈显著正相关(r=0.262 0.290 0.315,p0.05)。2、cdc6mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率(69.23%)明显高于癌旁正常乳腺组织中的表达(35.89%),差异具有统计学意义(pcdc6mRNA的阳性表达与肿瘤病理分期、组织学分级及淋巴结转移相关(pcdc6mRNA的表达率明显高于无淋巴结转移者。Spearman相关分析显示:cdc6mRNA与肿瘤分期、组织学分级和淋巴结转移呈正相关(r=0.275 0.389 0.330,pcdc6mRNA的阳性表达率在不同年龄组间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。cdc6mRNA与肿瘤大小、ER、PR、ki-67和Her-2无相关性(p>0.05)。3、78例浸润导管性乳腺癌组织中,Mcm7mRNA和cdc6mRNA两者表达一致率为75.64%。cdc6mRNA阳性表达的乳腺癌组织中,Mcm7mRNA阳性表达率为94.40%;cdc6mRNA表达阴性乳腺癌组织中,Mcm7mRNA阴性表达率为33.30%,统计学分析有显著意义(pcdc6mRNA在乳腺癌中高表达,明显高于在癌旁组织中的表达。cdc6mRNA在肿瘤病理分期的3期中阳性表达率高于2期和1期;在组织学分级中3级cdc6mRNA的阳性表达明显高于2级和1级;有腋淋巴结转移组较无腋淋巴结转移组阳性表达率明显增高。相关分析显示cdc6mRNA与病理分期、组织学分级和腋淋巴结转移呈正相关,提示cdc6高表达与乳腺癌病情进展及远处转移相关,是作为判断肿瘤恶性程度及预后不良的一个较好指标。***7mRNA和cdc6mRNA的表达具有协同作用,它们的高表达可导致细胞的异常增殖、癌变及远处转移。

关键词：乳腺癌基因 Mcm7 cdc6 RT-PCR

抑制cdc6表达可提高非小细胞肺癌细胞系H460对化疗药物的敏感性

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抑制Cdc6表达可提高非小细胞肺癌细胞系H460对化疗药物的敏感性

作者：周江芬广州医学院

学位级别：硕士

背景：我国是肺癌高发的国家，其发病率和病死率都呈上升的趋势，其中80%为非小细胞肺癌（NSCLC），早期诊断困难，绝大部分已失去了手术的机会,化疗是晚期NSCLC患者的主要治疗手段之一。但是化疗耐药往往使得肺癌的治疗效果不佳，生... 详细信息

背景：我国是肺癌高发的国家，其发病率和病死率都呈上升的趋势，其中80%为非小细胞肺癌（NSCLC），早期诊断困难，绝大部分已失去了手术的机会,化疗是晚期NSCLC患者的主要治疗手段之一。但是化疗耐药往往使得肺癌的治疗效果不佳，生存率并没有得到明显的提高。大部分化疗药物是通过特异性或非特异性地作用于细胞周期某一特定位点，起到杀死肿瘤细胞的目的。cdc6是细胞周期调控主要因子之一，它的异常表达与肿瘤的发生发展有一定的关系。那么，干扰cdc6的表达，是否能够提高化疗药物对肺癌的敏感性呢？方法：通过western blot和Q-PCR的方法，检测了非小细胞肺癌细胞株H460、A549、SPC-A-1、NCI-H520中cdc6的蛋白和基因表达情况。最后选取表达量最高的H460细胞株用于后续的干扰和药敏实验。首先用瞬时转染的方法导入cdc6-siRNA，并通过western blot和Q-PCR的方法验证cdc6蛋白和基因表达的抑制情况。同时，也分别导入miR26a及miR26b的模拟物，观察cdc6蛋白和基因表达的抑制情况。抑制cdc6的表达后，用MTT的方法，比较干扰前后H460对化疗药物吉西他滨和多烯紫杉醇敏感性的变化。结果：在非小细胞肺癌细胞株A549、H460、NCI-H520中cdc6的蛋白和基因都呈高表达，且呈正相关。其中H460细胞株中cdc6的表达量最高。H460细胞株转染cdc6-siRNA后，蛋白和基因的表达水平都有明显的下降。同时我们也发现，导入miR26a及miR26b的模拟物后，cdc6的蛋白和基因水平也有明显下降，与转染cdc6-siRNA后起到相关的作用效果。cdc6表达的下降后，期对化疗药物吉西他滨和多烯紫杉醇的IC50有明显的下降，及药物的敏感性有明显的提高，结果都具有明显的统计学上的差异（Pcdc6在非小细胞肺癌细胞株中呈高表达趋势。下调cdc6的表达后，非小细胞肺癌细胞株H460对吉西他滨和多烯紫杉醇的敏感性有明显的提高。另外，本研究还发现cdc6在H460中的高表达可能与miR26a和miR26b的低表达有关，具体的机制有待进一步的研究。

关键词：非小细胞肺癌 H460 cdc6 miR26ab siRNA 化疗敏感性

miR-586通过靶向作用于cdc6促进OS细胞的增殖与侵袭

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miR-586通过靶向作用于CDC6促进OS细胞的增殖与侵袭

作者：付解辉福建医科大学

学位级别：硕士

目的:探究miR-586在骨肉瘤(osteosarcoma,OS)发生发展中的作用及其下游的作用靶点,为今后骨肉瘤的临床诊治提供理论实验依据。方法:利用q RT-PCR检测人成骨细胞株(h FOB1.19)和OS细胞系(U2OS,143B)中miR-586的表达水平;CCK-8法检测细胞... 详细信息

目的:探究miR-586在骨肉瘤(osteosarcoma,OS)发生发展中的作用及其下游的作用靶点,为今后骨肉瘤的临床诊治提供理论实验依据。方法:利用q RT-PCR检测人成骨细胞株(h FOB1.19)和OS细胞系(U2OS,143B)中miR-586的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot实验检测细胞内相关蛋白表达水平;在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase和miRWALK预测miR-586的靶基因,根据预测的靶点与OS发生发展的相关性,确定细胞分裂周期蛋白6(Cell division cycle 6,cdc6)作为miR-586的一个潜在调控位点;通过合成双荧光素酶报告载体转染细胞验证miR-586和cdc6的靶向作用;过表达miR-586基因和cdc6基因后,共转染至OS细胞中,q RT-PCR和Western Blot检测OS细胞中cdc6基因和蛋白的表达,并通过CCK-8法验证miR-586及cdc6对OS细胞增殖的影响。结果:相比于正常人成骨细胞株,miR-586在OS细胞系中的表达显著升高(P均6 mimic、miR-586 mimic NC分别转染OS细胞,结果显示,miR-586 mimic组中miR-586的表达显著高于对照组和mimic NC组。CCK-8法检测miR-586对OS细胞增殖能力的影响,观察OS细胞在0 h,12 h,24 h和48 h细胞的增殖情况。结果显示,在0 h,12 h,各组细胞的增殖趋势无显著差异;而在24 h与48 h这两个时间点,与Control组和miR-586 mimic NC组分别比较,miR-586 mimic组的细胞增殖水平均显著升高(P6 mimic组的细胞在相同面积中成功发生侵袭的密度明显大于Control组和miR-586 mimic NC组,表明miR-586 mimic组成功发生侵袭的细胞数量显著增多(Pcdc6是miR-586的下游靶点。当miR-586表达上调,cdc6 m RNA及蛋白水平显著升高(P6是否通过调控cdc6影响OS细胞的生物学行为,首先构建了cdc6过表达载体,采用q PCR和WB检测转染效率,探究miR-586与cdc6对OS细胞的影响。结果显示,转染cdc6过表达载体后,细胞中的cdc6 m RNA和蛋白表达均明显上调(P6 mimic+cdc6 NC组、miR-586 mimic NC+cdc6 OE组和miR-586 mimic+cdc6 OE组。各组细胞转染成功后,利用CCK-8检测OS细胞在0 h,12 h,24 h和48 h时间段的增殖情况,结果显示,与对照组相比,miR-586 mimic+cdc6 NC组和miR-586mimic NC+cdc6 OE组细胞增殖能力均显著升高(P6 mimic+cdc6 OE组升高的最明显。此外,相较于miR-586 mimic+cdc6 NC组,miR-586mimic+cdc6 OE组的细胞增殖能力亦显著增强,比较差异具有统计学意义(P6在OS细胞中显著上调,miR-586的过表达能够促进OS细胞增殖与侵袭。cdc6是miR-586的下游靶基因,miR-586能够通过靶向作用于cdc6,促进cdc6的表达进而增强OS细胞的增殖。

关键词： miR-586 骨肉瘤细胞 cdc6 增殖侵袭

YWHAE和cdc6表达与结直肠癌临床病理特征关系的分析

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YWHAE和CDC6表达与结直肠癌临床病理特征关系的分析

作者：陈鼎香海南医学院

学位级别：硕士

目的:探讨结直肠癌组织中YWHAE及cdc6的表达,分析两者的表达与患者的临床病理特征及预后的关系,并进一步分析两者的相关性。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载结直肠癌患者YWHAE mRNA和cdc6 mRNA的表达谱及临... 详细信息

目的:探讨结直肠癌组织中YWHAE及cdc6的表达,分析两者的表达与患者的临床病理特征及预后的关系,并进一步分析两者的相关性。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载结直肠癌患者YWHAE mRNA和cdc6 mRNA的表达谱及临床数据集,分析两者的表达与结直肠癌患者临床病理特征、预后的关系,并分析两者的相关性;通过cBio Portal网站分别获取cdc6、YWHAE的共表达基因,进一步对共表达基因进行富集分析。收集本院结直肠癌患者的石蜡组织标本并制作成组织芯片,采用RNAscope技术检测YWHAE mRNA和cdc6 mRNA的表达情况,分析其表达与临床病理特征的关系,并分析两者的相关性;采用免疫组织化学方法检测YWHAE、cdc6在结直肠癌组织的表达情况,使用卡方检验分析两者在结直肠癌组织的表达与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法进行单因素分析并绘制生存曲线,生存率比较采用Log-rank检验,单因素及多因素分析用COX风险比例回归模型。结果:1.生物信息学分析结果显示:YWHAE mRNA在结直肠癌组织表达水平的中位数(423.7)与正常组织表达水平的中位数(330.05)比较差异具有统计学意义(Pcdc6 mRNA在结直肠癌组织表达水平的中位数(22.81)与正常组织表达水平的中位数(6.04)比较差异具有统计学意义(Pcdc6 mRNA在结直肠癌的表达呈正相关(Pcdc6共表达基因富集分析结果显示,两者均参与细胞周期等生物学过程。***检测结果显示:YWHAE mRNA和cdc6 mRNA在结直肠癌组织的表达显著高于正常组织(Pcdc6蛋白在正常组织中高表达率为23.49%,在癌组织中高表达率为66.46%,两组间比较差异具有统计学意义(Pcdc6蛋白高表达组的平均生存期明显低于低表达组,差异有统计学意义(Pcdc6 mRNA在结直肠癌组织中高表达,与细胞周期等生物学过程有关,两者可能是结直肠癌发生早期阶段的一个分子事件。***蛋白和cdc6蛋白在结直肠癌组织中均高表达,与淋巴结转移、病理分期及不良预后有关,两者有望成为结直肠癌患者预后不良的生物学标记物及治疗的潜在靶点。***及cdc6在结直肠癌组织的表达呈正相关,两者可能共同参与结直肠癌的发生、进展过程,为进一步研究两者相关的分子机制提供一定的理论基础。

关键词：结直肠癌 YWHAE cdc6 临床病理特征

cdc6和Ki-67蛋白与口腔鳞癌的相关性研究

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医学综述 2013年第5期19卷 958-960页

作者：梁守建雷志敏武汉大学人民医院生物医学工程专业武汉430000

目的探讨细胞分裂周期蛋白6(cdc6)和核蛋白抗原(Ki-67)在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义。方法武汉大学人民医院采用免疫组织化学SP法检测42例口腔鳞癌组织和42例正常口腔黏膜组织中cdc6和Ki-67蛋白的表达情况,研究口腔鳞癌组织中cdc6... 详细信息

目的探讨细胞分裂周期蛋白6(cdc6)和核蛋白抗原(Ki-67)在口腔鳞癌组织中的表达及临床意义。方法武汉大学人民医院采用免疫组织化学SP法检测42例口腔鳞癌组织和42例正常口腔黏膜组织中cdc6和Ki-67蛋白的表达情况,研究口腔鳞癌组织中cdc6、Ki-67与病理特征的相关性。结果 cdc6和Ki-67在口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为76.19%、71.42%,在正常口腔黏膜组织中阳性表达率分别为11.90%、23.81%;cdc6和Ki-67蛋白在口腔鳞癌中的表达与患者淋巴结转移、细胞分化程度和肿瘤TNM分期有关(Pcdc6和Ki-67蛋白的高表达与口腔鳞癌的发生、发展以及增殖密切相关,联合检测两者的表达有助于更深入地了解口腔鳞癌的发病机制,并为口腔鳞癌的诊治提供理论依据。

关键词：口腔鳞癌 cdc6 Ki-67 免疫组织化学