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中国畜牧杂志 2024年

作者：梁才康兰隽儿孙勇庞玉莲黄世会牛熙王嘉福冉雪琴贵州大学动物科学学院贵州大学农业生物工程研究院

通过比较基因组学分析，在香猪白细胞分化抗原9（Cluster Of Differentiation 9，cd9）基因中检测到一个长度为315 bp的结构变异（Structure Variant，SV）。该SV位于cd9基因的第2内含子中。为了探索cd9-I2-sv315的多态性是否对基因表... 详细信息

通过比较基因组学分析，在香猪白细胞分化抗原9（Cluster Of Differentiation 9，cd9）基因中检测到一个长度为315 bp的结构变异（Structure Variant，SV）。该SV位于cd9基因的第2内含子中。为了探索cd9-I2-sv315的多态性是否对基因表达有影响，本研究通过在该SV上下游设计特异性引物，通过PCR验证cd9-I2-sv315在大白猪和香猪中的群体分布；采用生物信息学技术分析cd9-I2-sv315区域是否存在影响基因表达的功能元件。采用实时荧光定量PCR方法检测香猪主要组织及不同cd9-I2-sv315基因型之间cd9基因的表达变化。结果表明，香猪群体中cd9-I2-sv315位点检测到2种基因型，DD型和ID型（D为缺失基因，I与参考基因一致），其中D等位基因的频率为84.5%；大白猪群体中存在3种基因型，II型、ID型和DD型，D等位基因频率为55%。本文比较了香猪主要组织中cd9基因的表达量，得出肺组织的表达量最高。生物信息学分析提示cd9-I2-sv315区域中包含一个短散在元件（Short Interspersed Element，SINE）和36个miRNAs结合位点，可能影响cd9基因的表达效率。进一步检测肺组织中3种基因型的相对表达量，得出：DD型>ID型>II型。本文研究结果提示，香猪cd9基因的结构变异cd9-I2-sv315以DD型为主，DD型中cd9表达量高于其他基因型，可能与香猪较强的抗病力有关。

关键词：香猪 cd9基因结构变异多态性肺

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牛cd9基因、TNP2基因多态性及其与公牛繁殖性能的关联分析

牛CD9基因、TNP2基因多态性及其与公牛繁殖性能的关联分析

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作者：高青山东师范大学

学位级别：硕士

本课题以392头荷斯坦公牛为样本，通过直接测序、PCR-RFLP和CRS-RFLP等方法对公牛TNP2基因和cd9基因中的单核苷酸多态性(SNPs)位点进行扫描，将这些SNPs位点与公牛的精液品质进行关联分析，筛选与公牛精液品质相关的分子标记，并初步探... 详细信息

本课题以392头荷斯坦公牛为样本，通过直接测序、PCR-RFLP和CRS-RFLP等方法对公牛TNP2基因和cd9基因中的单核苷酸多态性(SNPs)位点进行扫描，将这些SNPs位点与公牛的精液品质进行关联分析，筛选与公牛精液品质相关的分子标记，并初步探究这些SNPs影响精液品质的遗传机理，为下一步培育高产优质种公牛提供参考依据。一．TNP2基因多态性与公牛精液品质的关联性分析精子发生过程中，单倍体精细胞在形态和生理上经历了一系列复杂的变化。染色质重组是其中非常重要的过程，它是由过渡蛋白和鱼精蛋白取代组蛋白来介导的。Prm1、Prm2和TNP2三个基因编码基本的染色体蛋白，它们位于同一个基因簇，协同调控精子发生过程。牛的TNP2基因长1560bp，只有一个内含子，在精子中大量表达，表达过程受转录后基因调控，该基因最初在圆形精子中转录，之后保持约6d失活状态，最终在长形精子细胞中翻译为TNP2蛋白。本实验在公牛TNP2基因中发现了3个SNPs，分别为g.269G>A，g.480C>T和g.1536C>T。g.269G>A位于外显子1上，该突变为错义突变，突变后第62个氨基酸Arg变为His，该位点GG和AA基因型个体鲜精活力显著高于GA基因型个体，畸形率显著低于GA基因型;g.480C>T位于内含子上，毗邻外显子，经预测该突变可能导致TNP2蛋白空间构型变化，该位点TT基因型个体畸形率显著低于CC和CT基因型;g.1536C>T位点位于3’UTR区域，预测能够与miRNA结合，调控基因表达，该位点CC是优良基因型，其采精量和冻后活力都显著高于CT和TT个体。利用SHEsis和PHASE在线软件对3个SNPs位点进行单倍型构建，共构建出8种单倍型，发现18种单倍型组合，通过SAS软件对不同单倍型组合个体的精液品质进行关联分析，结果显示，H1H4和H8H4是精液品质较高的单倍型组合，其个体的鲜精密度、鲜精活力显著高于其他个体，且畸形率较低。二．Bta-miR-154与牛TNP2基因3’UTR相互作用 miRNAs是一类小分子非编码RNA，长约184nt，它主要通过与靶基因mRNA3’UTR特异性序列结合，引起mRNA降解或翻译抑制，从而在转录后水平调节靶基因的蛋白质合成。通过软件预测发现Bta-miR-154可能与突变后的TNP2基因3’UTR结合，且g.1536C>T位于结合种子区。通过细胞内实验来验证这一预测，将bta-miR-154质粒，TNP23’UTR荧光素酶表达质粒以及β-gal质粒共转MLTC-1细胞，结果表明，与miRNA control质粒相比，bta-miR-154质粒与pMIR-REPORT Luciferase-TNP2突变后的重组质粒共转染可使细胞的荧光素酶活性下降，并且有剂量依赖性。通过Q-PCR检测g.1536C>T位点不同基因型个体中TNP2mRNA的含量，结果发现，TT基因型个体中TNP2mRNA的含量显著低于CC和CT基因型(P＜0.05)，同样说明miRNA的结合导致TNP2mRNA含量下降，与细胞内荧光素酶结果一致。三．cd9基因启动子活性分析 cd9是四次跨膜蛋白超家族的成员之一，它是介导精卵质膜融合的一种重要的蛋白分子，牛的cd9基因5’端启动子区域缺失TATA box，但含有GC富集区，－302到－183区域GC含量高达88％，其间一些序列可与各种转录因子结合，包括sPl、AP2、GATA、NF-ΚB等，这些位点的存在可能涉及基因的转录调控机制。为探讨cd9基因的表达调控机制，本实验首先对cd9基因的5’区域进行了克隆并筛选SNPs位点，然后根据生物信息学分析构建了不同长度的缺失片段表达载体，转染293T和MLTC-1细胞，并通过双荧光素酶报告系统对各个片段的启动子活性进行了检测。结果发现，cd9基因5’调控区存在两个SNPs位点，分别为g.-298C＞G和g.-943C＞A。其核心启动子位于-609—+50bp处，-1640—-1125bp之间存在负调控元件。启动子活性不具有严格的细胞特异性，但在MLTC-1细胞中的启动子活性显著高于293T细胞。g.-943C＞A位点突变导致启动子活性下降，原因可能是由于影响了启动子与转录因子SP1的结合。

关键词：荷斯坦公牛 TNP2基因 cd9基因多态性精液品质

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绵羊cd9基因g.208082881C>A位点多态性与产羔数的关联分析

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中国草食动物科学 2018年第1期38卷 1-6页

作者：汤继顺狄冉刘秋月王翔宇胡文萍储明星中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京100193 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所合肥230031

为了探究绵羊cd9基因g.208082881C>A位点多态性与产羔数之间的关系,利用Sequenom Mass ARRAYR~SNP技术对多羔绵羊品种(小尾寒羊380只)和单羔绵羊品种(滩羊、苏尼特羊、萨福克羊、杜泊羊和草原藏羊共380只)cd9基因g.208082881C>A位点... 详细信息

为了探究绵羊cd9基因g.208082881C>A位点多态性与产羔数之间的关系,利用Sequenom Mass ARRAYR~SNP技术对多羔绵羊品种(小尾寒羊380只)和单羔绵羊品种(滩羊、苏尼特羊、萨福克羊、杜泊羊和草原藏羊共380只)cd9基因g.208082881C>A位点多态性进行了检测,并与产羔数进行关联分析。结果表明:cd9基因g.208082881C>A位点存在AA和CA两种基因型,A基因为优势等位基因,等位基因频率在单羔、多羔绵羊品种间差异达到极显著水平(P0.05);关联分析表明,该位点多态性与小尾寒羊不同胎次产羔数之间并无显著关联(P>0.05),AA型第二、三胎产羔数高于CA型。综上可知,cd9基因g.208082881C>A位点多态与小尾寒羊产羔数没有显著相关性。

关键词：绵羊 cd9基因 SNP分型产羔数

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人cd9基因的克隆及原核蛋白表达

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重庆理工大学学报（自然科学） 2011年第11期25卷 34-38页

作者：郑小莉罗波张艺刘佳佳泸州医学院基础医学院生物化学教研室四川泸州646000 泸州医学院基础医学院机能实验室四川泸州646000 泸州医学院基础医学院免疫学教研室四川泸州646000

通过RT-PCR技术,对人cd9基因的全长开放阅读框cdNA进行了扩增、克隆、序列测定和分析,再将cdNA插入原核表达载体PET30a(+)后转化大肠杆菌BL21,进而融合表达重组蛋白PET30a(+)/cd9。实验结果表明:RT-PCR方法扩增人cd9 cdNA],获得其全长... 详细信息

通过RT-PCR技术,对人cd9基因的全长开放阅读框cdNA进行了扩增、克隆、序列测定和分析,再将cdNA插入原核表达载体PET30a(+)后转化大肠杆菌BL21,进而融合表达重组蛋白PET30a(+)/cd9。实验结果表明:RT-PCR方法扩增人cd9 cdNA],获得其全长开放阅读框为690bp,测序结果与NCBI上登录的人cd9基因序列完全一致;成功融合表达出了重组蛋白PET30a(+)/cd9,重组蛋白的分子量为30 KDa。

关键词： cd9基因克隆原核表达

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