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Novel cd9-targeted therapies in gastric cancer

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World Journal of Gastroenterology 2015年第11期21卷 3206-3213页

作者： Yoko Murayama Kenji Oritani Shusaku Tsutsui Department of Gastro-enterology and Hepatology Itami City Hospital Department of Hematology/Oncology Graduate School of MedicineOsaka University

There are 33 human tetraspanin proteins,emerging as key players in malignancy,the immune system,fertilization,cellular signaling,adhesion,morphology,motility,proliferation,and tumor ***9,a member of the tetraspanin family,associates with and influences a variety of cell-surface *** these interactions,cd9 modifies multiple cellular events,including adhesion,migration,proliferation,and ***9 is therefore considered to play a role in several stages during cancer *** cd9 expression is generally related to venous vessel invasion and metastasis as well as poor *** found that treatment of mice bearing human gastric cancer cells with anti-cd9 antibody successfully inhibited tumor progression via antiproliferative,proapoptotic,and antiangiogenic effects,strongly indicating that cd9 is a possible therapeutic target in patients with gastric ***,we describe the possibility of cd9 manipulation as a novel therapeutic strategy in gastric cancer,which still shows poor prognosis.

关键词： cd9 Tetraspanin Gastric cancer Tumo-rigenicity The

cd9 negatively regulates collective electrotaxis of the epidermal monolayer by controlling and coordinating the polarization of leader cells

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Burns & Trauma 2023年第1期11卷 361-374页

作者： Xiaoqiang Liu Jinrui Yang Meng Kong Min Jiang Luojia Liu Jinghong Zhang Ying Chen Xu Chen Ze Zhang Chao Wu Xupin Jiang Jie Liu Jiaping Zhang Department of Plastic Surgery State Key Laboratory of TraumaBurns and Combined InjurySouthwest HospitalThird Military Medical University(Army Medical University)29 Gaotan Yan StreetShapingba400038 ChongqingChina

Background:Endogenous electric fields(EFs)play an essential role in guiding the coordinated collective migration of epidermal cells to the wound centre during wound *** polarization of leadercells is essential for collective migration,the signal mechanisms responsible for the EF-induced polarization of leader cells under electrotactic collective migration remain *** study aims to determine how the leader cells are polarized and coordinated during EF-guided collective migration of epidermal cell ***:Collective migration of the human epidermal monolayer(human immortalized ker-atinocytes HaCaT)under EFs was observed via time-lapse *** involvement of tetraspanin-29(cd9)in EF-induced fibrous actin(F-actin)polarization of leader cells as well as electrotactic migration of the epidermal monolayer was evaluated by genetic ***,rescue and co-culture experiments were conducted to explore the downstream signalling of ***:EFs guided the coordinated collective migration of the epithelial monolayer to the anode,with dynamic formation of pseudopodia in leader cells at the front edge of the monolayer along the direction of migration.F-actin polarization,as expected,played an essential role in pseudopod formation in leader cells under *** confocal microscopy,we found that cd9 was colocalized with F-actin on the cell surface and was particularly downregulated in leader cells by ***,genetic overexpression of cd9 abolished EF-induced F-actin polarization in leader cells as well as collective migration in the epidermal ***,cd9 determined the polarization of F-actin in leader cells by downregulating a disintegrin and metalloprotease 17/heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor/epidermal growth factor receptor(ADAM17/HB-EGF/EGFR)*** abolished polarization of leader cells due to cd9 overex-pression could be restored in a co-culture monolayer where normal c

关键词： cd9 Electric fields Collective migration Wound healing F-actin polarization leader cells

RNF149通过泛素化介导的cd9降解调控细胞增殖

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生物化学与生物物理进展 2013年第12期40卷 1230-1238页

作者：李燕阮林浩索塔林王鹏唐捷中国科学院生物物理研究所北京100101 中国科学院大学北京100049 中国科学技术大学合肥230026

选取功能未知的泛素连接酶RNF149作为研究对象.该分子同GRAIL(gene related to anergy in lymphocytes)具有较高的同源性,属于Ⅰ型跨膜蛋白.激光共聚焦显微镜的观察结果显示,RNF149是一个定位在溶酶体上的蛋白质,它与cd9在细胞内有共定... 详细信息

选取功能未知的泛素连接酶RNF149作为研究对象.该分子同GRAIL(gene related to anergy in lymphocytes)具有较高的同源性,属于Ⅰ型跨膜蛋白.激光共聚焦显微镜的观察结果显示,RNF149是一个定位在溶酶体上的蛋白质,它与cd9在细胞内有共定位.免疫共沉淀实验证明RNF149与cd9有相互作用.RNF149通过泛素分子的第48位赖氨酸多泛素化cd9.在HeLa细胞中转染数量一定的cd9质粒和数量梯度增加的RNF149质粒24 h后,蛋白质印迹检测外源RNF149和cd9的表达,结果表明,随外源RNF149表达量梯度增高,外源cd9的表达量梯度降低.在HEK293T细胞内以shRNA敲低内源的RNF149,并检测内源cd9的变化,发现RNF149被敲低后内源cd9的量增多.上述结果提示,cd9很有可能是RNF149的底物,被RNF149通过泛素化降解.此外,RNF149被敲低的HEK293T细胞增殖受到抑制,这可能与其内源cd9的量增多有关,提示RNF149可能是一种细胞增殖的调控因子.

关键词： RNF149 cd9 细胞增殖泛素化泛素连接酶溶酶体

cd9蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

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中华消化杂志 2014年第7期34卷 473-476页

作者：赵严汤茂春孙瑞青殷国建王锋胡国勇王兴鹏同济大学附属第十人民医院消化内科上海200072 上海交通大学附属第一人民医院消化科

目的分析cd9蛋白与胰腺癌进展及预后的关系.方法收集2005年9月至2009年12月间90例胰腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织标本及临床资料,采用免疫组织化学方法,检测胰腺癌组织和癌旁组织标本中cd9蛋白的表达情况,分析其与胰腺癌患者... 详细信息

目的分析cd9蛋白与胰腺癌进展及预后的关系.方法收集2005年9月至2009年12月间90例胰腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织标本及临床资料,采用免疫组织化学方法,检测胰腺癌组织和癌旁组织标本中cd9蛋白的表达情况,分析其与胰腺癌患者临床病理特征关系,组间率的比较行卡方检验.对90例患者的术后生存时间进行生存分析.结果胰腺癌组织中cd9蛋白的高表达率（64.4％,58/90）显著高于癌旁组织（45.6％,41/90）,差异有统计学意义（χ2=6.847,P＜0.05）.分化程度高、无淋巴结转移的胰腺癌组织中cd9蛋白多呈高表达[74.6％（50/67）比39.1％（9/23）,χ2=9.554,P＜0.01;50.0％（17/34）比73.2％（41/56）,χ2=5.856,P＜0.05],cd9表达与性别、年龄无相关性（P均＞0.05）;高表达cd9的患者较低表达者的总生存时间和无进展生存时间显著延长（中位总生存时间为33.0个月比7.0个月,χ2=15.400,P＜0.01;中位无进展生存时间为30.5个月比5.0个月,χ2=13.750,P＜0.01）.结论 cd9蛋白是一种影响胰腺癌侵袭能力的相关蛋白,在胰腺癌发展和转移中起着一定的作用,一定程度上能帮助判断预后情况.

关键词：胰腺肿瘤 cd9 转移预后

肿瘤相关因子cd9在鹿茸干细胞中的表达检测及功能分析

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农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1130-1138页

作者：王大涛张伟巴恒星李春义中国农业科学院特产研究所/特种经济动物分子生物学国家重点实验室

cd9是一个肿瘤相关因子,早期的研究证实cd9的表达能够抑制肿瘤的生长和转移,后来有研究人员提出cd9表达量在肿瘤细胞中升高,并证实其表达促进肿瘤的发展,因此cd9在肿瘤发展过程中的角色仍然存在巨大争议。鹿茸再生过程中,细胞增殖速度... 详细信息

cd9是一个肿瘤相关因子,早期的研究证实cd9的表达能够抑制肿瘤的生长和转移,后来有研究人员提出cd9表达量在肿瘤细胞中升高,并证实其表达促进肿瘤的发展,因此cd9在肿瘤发展过程中的角色仍然存在巨大争议。鹿茸再生过程中,细胞增殖速度甚至超过肿瘤,cd9同样在鹿茸干细胞中高表达。为了探讨鹿茸干细胞中cd9的功能,本研究利用Western blot,免疫荧光和流式细胞仪分析技术系统地检测了鹿茸干细胞(包括生茸区骨膜细胞(antlerogenic periosteum cells,APC),角柄骨膜细胞(pedicle periosteum cells,PPC)和鹿茸尖部间充质细胞(reserve mesenchymal cells,RMC))中cd9的表达情况;并利用Anti-cd9抗体抑制cd9活性,检测了cd9对鹿茸干细胞迁移和增殖的影响。结果显示,3种鹿茸干细胞均高水平表达cd9,原代培养的鹿茸干细胞cd9阳性率超过90%;抑制cd9活性,对鹿茸干细胞的迁移影响不显著,但对部分鹿茸干细胞(PPC和鹿茸RMC)的增殖有促进作用;分析了cd9有关的细胞基质-整合素和细胞粘附信号通路,并从鹿茸干细胞转录组中检测到绝大多数因子。本研究揭示了cd9在鹿茸干细胞中的功能并推测了可能的调控机制,将有助于揭示cd9在快速增殖的细胞特别是肿瘤细胞中的作用。

关键词：鹿茸干细胞 cd9 细胞迁移细胞增殖信号通路

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大鲵免疫分子cd9的克隆与鉴定(英文)

中国生物化学与分子生物学报 2015年第4期31卷 397-407页

作者：尤修玲聂东宋秦华夏刘榴陈晓俊廖志勇温州大学生命与环境科学学院、浙江省水环境与海洋生物资源像护重点实验室浙江温州325035 湖南理工学院化学化工学院湖南岳阳414006

cd9是4次跨膜蛋白家族成员,对机体的免疫调控发挥着重要作用.本文首次报道了大鲵cd9的鉴定及其对免疫刺激的应答.大鲵cd9(Chinese giant salamander cd9,cgs cd9)由232个氨基酸组成,被4个跨膜结构域分割成1个胞内环、2个胞外环和2个短... 详细信息

cd9是4次跨膜蛋白家族成员,对机体的免疫调控发挥着重要作用.本文首次报道了大鲵cd9的鉴定及其对免疫刺激的应答.大鲵cd9(Chinese giant salamander cd9,cgs cd9)由232个氨基酸组成,被4个跨膜结构域分割成1个胞内环、2个胞外环和2个短的胞内末端,这是4次跨膜蛋白的主要结构特征.1个糖基化位点NDS、1个CCG模体和7个半胱氨酸残基保守地存在于cgs *** cd9与其它脊椎动物cd9具有最高77%氨基酸序列一致性,并与两栖动物cd9归属一族.实时定量RT-PCR结果显示,cgs cd9在大鲵中分布广泛,脾脏组织的表达水平最高,并且脂多糖能显著提高cgs cd9 mRNA的表达.过表达于Jurkat细胞中的cgs cd9能促进核因子κB的活化以及白介素-6的表达,而cgs cd9的作用在CCG模体突变为AAA后几乎丧失.上述结果表明,cgs cd9在大鲵抵抗细菌的免疫应答中发挥重要作用.

关键词：大鲵 cd9 c DNA克隆免疫应答

cd9、GPI-AP在卵母细胞表面的表达及其在精卵融合中的作用

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中国妇幼保健 2010年第24期25卷 3435-3437页

作者：郑颖闻姬李静孙伟崔薇陈军山东中医药大学第二附属医院生殖科山东济南250001

目的:探讨cd9(cluster of differentiation9)、CPI-AP(glycosylphosphatidy-linositol anchored proteins)在卵母细胞膜表面的表达及其在精卵融合过程中的作用。方法:用免疫组化法测定cd9和GPI锚定蛋白在正常和未受精卵细胞膜上的表达,通过加入单克隆抗体观察其对受精率的影响,并计算阳性表达率与受精率的关系。结果:①cd9、GPI-AP主要在正常卵母细胞表面表达,在未受精卵母细胞呈低表达,cd9及GPI-AP在正常卵母细胞膜表面的阳性表达率(70.0%,63.3%)明显高于未受精卵母细胞膜表面的阳性表达率(24.0%,28.0%),差异有统计学意义(Pcd9及GPI-AP单克隆抗体的浓度增加,受精率显著下降,提示cd9在精卵融合中起着重要的作用,且呈剂量依赖性。③受精率与卵母细胞表面cd9、GPI-AP阳性表达率具有相关性(Pcd9、GPI-AP在精卵融合过程中起重要作用,其检测对精卵融合的发生有预测意义。

关键词： cd9 GPI-AP 精卵融合

cd9在电场诱导表皮细胞单层集体定向迁移中的作用与信号机制研究

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CD9在电场诱导表皮细胞单层集体定向迁移中的作用与信号机制研究

作者：刘小强中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:创面愈合的基本特征是通过创面上皮化恢复完整的表皮屏障,也被称为再上皮化。创缘新生表皮细胞向创面中心集体定向迁移是创面再上皮化的重要过程,该过程受阻和缺陷将导致创面慢性难愈。创面微环境中的化学和物理因素在... 详细信息

研究背景及目的:创面愈合的基本特征是通过创面上皮化恢复完整的表皮屏障,也被称为再上皮化。创缘新生表皮细胞向创面中心集体定向迁移是创面再上皮化的重要过程,该过程受阻和缺陷将导致创面慢性难愈。创面微环境中的化学和物理因素在诱导表皮细胞向创面中心定向集体迁移中发挥重要作用;其中,创面内源性电场(EFs)被认为具有不可或缺的重要作用。由于表皮的跨上皮电势(TEP)破坏,创面内源性电场在皮肤创面形成后瞬间产生,导致创面中心的电势比周围区域更负,形成了由创面周围指向创面中心的电场,其大小约为42-200mV/mm。研究表明,电信号可以引导上皮细胞的集体定向迁移,这被称为趋电性。体外研究发现,培养成片的表皮细胞单层的趋电反应明显优于单个培养的表皮细胞。然而,电场如何引导细胞单层的集体定向迁移,以及这种效应如何比孤立的细胞更有效,这在很大程度上仍是未知的。细胞集体定向迁移涉及到两个功能不同的细胞群包括领导细胞(leader cells,LC)和跟随细胞(follower cells,FC)之间的有机协调。领导细胞感知迁移方向性信号,导致以肌动蛋白(actin)为基础结构的方向性伪足形成,进而在启动和维持集体定向迁移过程中发挥重要作用。跟随细胞被认为主要通过细胞间相互作用机制传导来自领导细胞的方向性信号,以完成协调性集体迁移过程。cd9属于四跨膜蛋白超家族的成员之一。已有研究证明,cd9可与细胞骨架F-actin共定位于细胞表面的丝状伪足,并具有调节肌动蛋白细胞骨架排列的作用。然而,与许多其他膜表面蛋白相比,cd9并不具有受体或激酶的功能。研究表明,cd9通常需与信号分子受体、整合素或解整合素金属蛋白酶(ADAMs)等膜蛋白结合或相互作用,从而介导多种生理和细胞过程。课题组前期研究发现,cd9和解整合素金属蛋白酶结构域17(ADAM17)共定位于表皮细胞膜表面,并证实cd9具有负调节ADAM17脱落酶活性的重要作用。ADAM17是已知的EGFR配体如HB-EGF的前体脱落酶,并发现能增强HCC细胞板层基顶端的肌动蛋白细胞骨架重构。我们前期研究还发现,ADAM17通过激活HB-EGF/EGFR信号轴在电场驱动表皮细胞单层定向集体移行中起重要作用。然而,在电场驱动的表皮单层集体迁移中,诱导和控制领导细胞极化的机制仍有待阐明。此外,细胞间的通信被认为是提高集体迁移效率的关键,而旁分泌是细胞间通讯的一种主要形式,细胞通过它对附近细胞产生的因子作出反应。研究表明,HB-EGF通过旁分泌作用在细胞增殖、迁移和炎症反应中发挥多种功能。然而,领导细胞之间是否存在这种旁分泌机制来协调其在电场下的极化和迁移行为,从而提高细胞集体迁移的电趋性,还需要进一步研究。综上所述,我们提出“电场通过下调膜分子cd9表达,促进ADAM17/HB-EGF/EGFR信号活化,诱导F-actin极性分布和伪足形成,进而介导表皮单层集体定向迁移”的科学假设,并采用实验方案予以验证。研究旨在揭示电场诱导表皮细胞集体定向迁移的分子机理,不仅为电场技术的临床应用提供理论支撑,同时还可能为创面治疗提供潜在的新靶点。研究内容与方法:1.电场诱导表皮细胞单层集体定向迁移及其与领导细胞F-actin极化的内在关系首先采用细胞趋电模型,观察表皮细胞(HaCaT)单层的集体趋电响应情况;其次观察在电场作用条件下,集体定向迁移中表皮单层的领导细胞F-actin极化与伪足形成情况;最后观察用细胞松弛素B抑制F-actin的聚合对电场诱导领导细胞F-actin极化、伪足形成及集体定向迁移的影响,明确领导细胞F-actin极化与集体定向迁移的内在关系。***9在电场诱导领导细胞F-actin极化和表皮细胞单层集体定向迁移中的作用首先通过免疫荧光和Western Blot实验观察电场对表皮细胞单层cd9表达及分布的影响;其次通过腺病毒转染,增强cd9表达,观察电场作用条件下表皮单层领导细胞F-actin极化、伪足形成及集体定向迁移变化,明确cd9在电场诱导领导细胞F-actin极化和表皮细胞单层集体趋电性中的作用。***9介导电场作用条件下领导细胞F-actin极化和表皮细胞单层集体定向迁移的下游机制首先,通过酶联免疫吸附(ELISA)、Western Blot等技术,明确cd9过表达对电场作用条件下表皮细胞单层ADAM17活性和EGFR磷酸化的影响;其次,采用过表达cd9、抑制ADAM17活性和EGFR磷酸化以及外源性添加重组HB-EGF等手段,观察电场作用条件下表皮细胞单层前缘领导细胞极化、伪足形成和集体定向迁移变化;最后,将正常表皮细胞与cd9过表达细胞共培养,观察共培养表皮细胞单层中不同cd9表达水平的前缘领导细胞极化、伪足形成和细胞集体定向迁移变化。通过外源性添加anti-HB-EGF,观察其对上述

关键词： cd9 创面愈合电场集体定向迁移 F-actin极化领导细胞

生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT和小鼠表皮细胞运动性及cd9表达的影响

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中华烧伤杂志 2021年第1期37卷 34-41页

作者：冀然张泽王文平张琼吕艳玲江旭品滕苗重庆医科大学附属第一医院整形烧伤外科 400016 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT和小鼠表皮细胞运动性及cd9表达的调节作用。方法采用实验研究方法。取对数生长期人永生化表皮细胞株HaCaT细胞及分离自16只1~3 d龄雌雄不拘BALB/c小鼠的原代表皮细胞进行实验。将HaCaT细胞分为... 详细信息

目的探讨生物强度电场对人表皮细胞株HaCaT和小鼠表皮细胞运动性及cd9表达的调节作用。方法采用实验研究方法。取对数生长期人永生化表皮细胞株HaCaT细胞及分离自16只1~3 d龄雌雄不拘BALB/c小鼠的原代表皮细胞进行实验。将HaCaT细胞分为200 mV/mm电场强度处理3 h的加电组和模拟处理的假电组,在活细胞工作站中观察细胞迁移(运动方向、位移速度、轨迹速度,加电组样本数为46、假电组样本数为34)及排列,免疫荧光法检测cd9蛋白的分布及表达。将HaCaT细胞与小鼠表皮细胞均分为假电组(模拟处理)和进行相应电场强度处理3 h的50 mV/mm组、100 mV/mm组、200 mV/mm组、400 mV/mm组,将HaCaT细胞与小鼠表皮细胞均分为未行处理的空白对照组和用200 mV/mm电场强度分别处理相应时间点的1 h组、3 h组、6 h组,蛋白质印迹法检测cd9的蛋白表达(样本数为3)。对数据行Mann-Whitney U检验、单因素方差分析、独立样本t检验及LSD检验。结果处理3 h内,加电组HaCaT细胞明显趋向负极移动,假电组HaCaT细胞围绕原点随机运动;与假电组比较,加电组HaCaT细胞方向性显著增强,位移速度、轨迹速度显著加快(Z=-3.975、-6.052、-6.299,Pcd9蛋白(均位于细胞膜上)相对表达量明显低于假电组(t=4.527,Pcd9蛋白表达量分别为0.332±0.021、0.283±0.032、0.254±0.020、0.231±0.041、0.212±0.031与0.565±0.021、0.453±0.022、0.389±0.020、0.338±0.021、0.233±0.011。对于2种细胞而言,与假电组比较,电场处理4组细胞cd9蛋白表达量均明显降低(Pcd9蛋白表达量均明显降低(Pcd9蛋白表达量均明显降低(Pcd9蛋白表达量明显降低(Pcd9蛋白表达量分别为0.962±0.031、0.784±0.020、0.531±0.021、0.409±0.011与0.963±0.031、0.872±0.031、0.778±0.040、0.591±0.041。对于2种细胞而言,与空白对照组比较,1 h组、3 h组、6 h组细胞cd9蛋白表达量均明显降低(Pcd9蛋白表达量均明显降低(Pcd9蛋白表达量明显降低(Pcd9的表达,且呈电场强度与处理时间依赖性。

关键词：细胞运动生物强度电场表皮细胞 cd9