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Ursolic Acid Inhibits T-Cell Activation through Modulating Nuclear Factor-κB Signaling

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Chinese Journal of Integrative Medicine 2012年第1期18卷 34-39页

作者：曾光陈疆梁清华游万辉吴汉军熊新贵 Institute of Integrative Medicine Xiangya HospitalCentral South University Telemedicine Centre Xiangya HospitalCentral South University

Objective： To investigate the effects of ursolic acid （UA） on T-cell proliferation and activation, as well as to examine its effect on nuclear factor- κ B （NF- κ B） signaling pathway in T cells. Methods： T-cells isolated from BALB/c mice were incubated with UA at concentrations ranging from 5-30μmol/L in the presence of phorbol 12-myristate 13-acetate （PMA） or PMA plus ionomycin. The proliferation of T cells was measured by the MIF assay. The expressions of cd69, cd25, and cd71 on T-cell surface were analyzed using flow cytometry. The level of interleukin-2 （IL-2） in the culture supernatant of activated T cells was quantified by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The level of phosphorylated I κ B-α （p-I κ B-α ） in total protein and p65, a subunit of NF- κ B, nuclear translocation were measured by Western blot analysis. Results： UA in a dose-dependent manner significantly decreased the proliferation and inhibited the surface expressions of cd69, cd25, and cd71 in murine T lymphocytes upon in vitro activation （P〈0.01）. Significant reduction of IL-2 production was found in activated T cells treated with UA （P〈0.01）. The PMA-induced increase in p-I κ B-α protein was inhibited, and nuclear translocation of p65 from the cytoplasm was blocked by UA. Conclusion： UA is a potent inhibitor for T cell activation and proliferation; these effects are associated with the inhibition of NF- κ B signaling pathway.

关键词： ursolic acid T-cell activation cd69 cd25 cd71 nuclear factor- κ B

cd71作为增殖指标在血液肿瘤中的表达及与Ki-67的相关性分析

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中国实验血液学杂志 2015年第1期23卷 234-240页

作者：魏园玉张晓飐张帆李曌博王宁宁刘帅岳保红郑州大学第一附属医院检验科郑州大学医学检验系河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室河南郑州450052

目的:本研究旨在探讨cd71作为增殖指标在血液肿瘤中的表达情况及与Ki-67的相关性,评价cd71替代Ki-67用于流式细胞术(FCM)检测血液肿瘤细胞增殖活性的可行性。方法:分别以细胞系和临床标本为研究对象:1以静止期成熟的B淋巴细胞作为对照,... 详细信息

目的:本研究旨在探讨cd71作为增殖指标在血液肿瘤中的表达情况及与Ki-67的相关性,评价cd71替代Ki-67用于流式细胞术(FCM)检测血液肿瘤细胞增殖活性的可行性。方法:分别以细胞系和临床标本为研究对象:1以静止期成熟的B淋巴细胞作为对照,检测血液肿瘤细胞系的细胞周期以及cd71和Ki-67的表达情况,分析cd71的表达与细胞增殖活性和Ki-67表达的相关性;2以非血液病患者成熟B淋巴细胞作为对照,采用Ki-67/cd71/cd45/cd123、Ki-67/cd71/cd45/cd20或Ki-67/cd71/cd45/cd138抗体组合,分析临床标本中白血病细胞和骨髓瘤细胞cd71和Ki-67的表达情况和相关性。结果:1血液肿瘤细胞系cd71的表达情况:在髓系白血病细胞系中HL-60细胞cd71表达率为(99.77±0.064)%,NB4细胞cd71表达率为(99.23±0.12)%,THP-1细胞cd71表达率为(98.90±0.30)%,K562细胞cd71表达率为(97.03±0.15)%,在淋巴瘤细胞系中Raji细胞和M ino细胞cd71表达率分别为(99.35±0.21)%和(96.95±0.42)%,均明显高于对照组细胞(Pcd71的表达情况:在分化差的急性髓系白血病中cd71表达率为(51.50±19.31)%,在急性早幼粒细胞白血病(AML-M3)中cd71表达率为(35.71±14.02)%,在急性单核细胞白血病(AML-M5)中cd71表达率为(30.54±14.38)%,在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)和急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中cd71表达率分别为(68.40±20.83)%和(39.67±18.27)%,在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中cd71表达率为(1.32±0.33)%,在多发性骨髓瘤(MM)中cd71表达率为(55.49±18.15)%,除CLL细胞与对照组细胞差异无统计学意义(P>0.05)外,其余血液肿瘤细胞cd71表达率均高于对照组细胞(Pcd71阳性表达率和S期细胞比率(SPF)呈线性正相关(r=0.914,Pcd71和Ki-67阳性表达率呈线性正相关(r=0.894,r=0.904,Pcd71可以替代Ki-67作为FCM评估血液肿瘤细胞增殖活性的指标,在方法学上FCM检测cd71优于对Ki-67的检测。

关键词： cd71 Ki-67 血液肿瘤细胞增殖活性

间日疟原虫MSP1P-19蛋白结合的人红细胞表面受体的筛选与鉴定

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间日疟原虫MSP1P-19蛋白结合的人红细胞表面受体的筛选与鉴定

作者：陆佳晨江南大学

学位级别：硕士

疟疾是一种严重威胁全球公共卫生的蚊媒传染病,而间日疟原虫(P.vivax)是分布范围最广的感染人类的疟原虫种。P.vivax的宿主网织红细胞(Ret)嗜性导致的体外连续培养系统的缺乏,以及对间日疟临床症状严重程度的低估,使得间日疟疫苗研发进... 详细信息

疟疾是一种严重威胁全球公共卫生的蚊媒传染病,而间日疟原虫(P.vivax)是分布范围最广的感染人类的疟原虫种。P.vivax的宿主网织红细胞(Ret)嗜性导致的体外连续培养系统的缺乏,以及对间日疟临床症状严重程度的低估,使得间日疟疫苗研发进展缓慢。鉴于目前没有可用的有效疫苗,因而,迫切需要确定潜在的疫苗靶点。疟疾相关临床症状均发生在红内期感染阶段,而裂殖子表面表达的疟原虫配体参与入侵红细胞(RBC),因此,这些配体被认为是药物和疫苗开发的靶点。我们之前的研究表明,P.vivax裂殖子表面蛋白1旁系同源物(Pv MSP1P)是一种与P.vivax入侵相关的RBC结合蛋白,其C端19 k Da片段(Pv MSP1P-19)具有很强的RBC结合能力,但其介导的裂殖子顶端与RBC结合的分子基础尚待探索。本研究旨在鉴定并表征Pv MSP1P-19结合的人RBC及Ret表面受体,并初步探讨Pv MSP1P-19与其受体的相互作用在疟原虫入侵过程中的功能,为了解P.vivax的潜在入侵机制提供科学依据,也为间日疟疫苗研发策略提供新思路。本研究主要内容如下:1.PvMSP1P-19结合的潜在人RBC及Ret膜受体的鉴定:密码子优化并合成pvmsp1p-19及与其高度同源的食蟹猴疟原虫(pc)pcmsp1p-19基因。PCR扩增msp1p-19基因并使用In-Fusion技术构建原核质粒p ET32a-MSP1P-19及真核质粒p EGFP-HSVg D1-MSP1P-19。将p EGFP-HSVg D1-MSP1P-19转染至HEK293T细胞使MSP1P-19蛋白在细胞表面表达。利用大肠杆菌原核表达系统表达MSP1P-19蛋白。纯化MSP1P-19可溶蛋白,并免疫小鼠制备其多抗血清用于后续实验。基于HEK293T细胞的花环实验表明,MSP1P-19有Ret结合偏好性。通过Percoll密度梯度离心法富集脐带血中的Ret,并采用低渗法提取RBC及Ret膜。提取新鲜可溶的RBC及Ret膜蛋白后,采用串联亲和纯化和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术筛选与Pv MSP1P-19结合的RBC及Ret膜蛋白。结果表明,Band 3和cd71分别是MSP1P-19结合的潜在人RBC及Ret膜受体。2.MSP1P-19与Band 3及cd71相互作用的表征:基于LC-MS的结果,克隆、表达及纯化Band 3胞外环区(Band 3-L4、L5、L6)及cd71的C端胞外域(Ecd)。通过Flag-pull down及ELISA筛选MSP1P-19结合的Band 3胞外环区,结果表明Band 3与Pv MSP1P-19及Pc MSP1P-19结合的关键区域均为loop 5。合成Band 3-P5多肽,通过ELISA进行竞争性结合分析和抗体抑制分析,结果表明MSP1P-19与Band 3-L5特异性结合。此外,通过pull down、ELISA及表面等离子共振实验等一系列生化分析方法,表明MSP1P-19与的cd71-Ecd特异性结合,结合亲和力为3.55×10M,且MSP1P-19能够识别Ret膜中天然全长cd71。最后,通过检测与未处理或酶处理的RBC的结合以研究MSP1P-19的RBC受体特异性,结果表明MSP1P-19与人RBC的结合对糜蛋白酶敏感,且MSP1P-19通过Band 3的糜蛋白酶敏感的～40 k Da片段与人RBC结合。此外,初步探究MSP1P-19与Band 3及cd71的相互作用在Ret结合及疟原虫入侵中的功能。通过花环实验检测MSP1P-19、Band 3-P5及cd71-Ecd多抗血清对MSP1P-19与Ret结合的影响,结果表明它们均可有效抑制MSP1P-19与Ret结合。通过体外入侵实验检测MSP1P-19对恶性疟原虫(P.falciparum)入侵RBC的抑制能力,结果表明MSP1P-19蛋白能以浓度依赖性方式抑制P.falciparum体外入侵。综上所述,得出以下结论:揭示了MSP1P-19与Band 3及cd71的相互作用在裂殖子入侵中的重要作用,为进一步了解P.vivax入侵Ret的机制提供理论依据,并为P.vivax疫苗研发策略提供新思路。

关键词：间日疟原虫裂殖子表面蛋白1旁系同源物入侵 Band3 cd71

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基因芯片诊断地中海贫血的研究

中华儿科杂志 2005年第1期43卷 31-34页

作者：区小冰张力余一平李梅爱何艳明广州市儿童医院检验科血液室 510120

目的　探讨基因芯片用于地中海贫血 (简称地贫 )检测的应用价值。方法　应用基因芯片技术对 6 2例初筛诊断为α地贫 ;93例初筛诊断为β地贫 (轻型 6 0例 ,重型 33例 )的患儿血样标本进行α及β珠蛋白的基因分析。结果　 (1)成功检测出... 详细信息

目的　探讨基因芯片用于地中海贫血 (简称地贫 )检测的应用价值。方法　应用基因芯片技术对 6 2例初筛诊断为α地贫 ;93例初筛诊断为β地贫 (轻型 6 0例 ,重型 33例 )的患儿血样标本进行α及β珠蛋白的基因分析。结果　 (1)成功检测出中国人中常见的 3种缺失型α地贫 ( SEA, α3 7, α4 2 ) ,2种非缺失型α地贫 (HbCS ,HbQS )的杂合子、纯合子及双重杂合子。 (2 )在 6 0例轻型 β地贫 ,33例重型 β地贫 12 6条染色体中共检测到 8种突变类型 ,其中cd4 1 4 2占 33 5 % ,IVS Ⅱ 6 5 4占2 3 9% ,TATAbox 2 8占 15 0 % ,cd17占 15 0 % ,cd71 cd72 (+A )占 4 8% ,βE2 6占 2 4 % ,cd2 7 cd2 8(+C )占 2 4 % ,cd71 cd72 (+T)占 1 5 %。 (3)在 6 0例β地贫杂合子中检测到 8例 (13 3% ) ,在 33例重型 β地贫中检测到 2例 (6 % )同时复合有α地贫基因。结论　基因芯片技术具有简便、省时等特点 ,其无需接触放射性同位素 ,可同时检测α与 β地贫 ,便于推广应用。

关键词：诊断地中海贫血重型杂合子 cd71 初筛基因芯片推广应用突变类型同时检测

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第11期24卷 1059-1061,1065页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志cd25和cd71分子的表达;取中期活化的细胞上清,利用LuminexTM100... 详细信息

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志cd25和cd71分子的表达;取中期活化的细胞上清,利用LuminexTM100分析上清中IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量变化。结果:ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol/L时明显抑制cd25的表达而对cd71没有明显影响;下调Th2型细胞因子及上调Th1型细胞因子的分泌量,但没有剂量依赖效应。结论:ICA下调cd25、IL-2和Th2型细胞因子水平,抑制T细胞活化,同时有一定程度的促进细胞免疫反应,因此ICA可能具有双向调节免疫平衡的作用。

关键词：淫羊藿甙 T淋巴细胞 cd25 cd71 流式细胞术

转铁蛋白受体cd71在脓毒症诊疗及预后中的研究进展

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临床医学进展 2023年第12期13卷 19484-19488页

作者：胡枞宇张大权新疆医科大学研究生院新疆乌鲁木齐新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科新疆乌鲁木齐

脓毒症是重症监护病房患者的主要死亡原因,由于缺少特异性诊断标志物和针对性治疗,其死亡率一直居高不下。转铁蛋白受体1 (Transferrin Receptor 1, TfRl),即cd71分子,是一种参与铁代谢和调节细胞生长所必需的膜蛋白,其在许多类型的细... 详细信息

脓毒症是重症监护病房患者的主要死亡原因,由于缺少特异性诊断标志物和针对性治疗,其死亡率一直居高不下。转铁蛋白受体1 (Transferrin Receptor 1, TfRl),即cd71分子,是一种参与铁代谢和调节细胞生长所必需的膜蛋白,其在许多类型的细胞表面均有表达,与细胞的成熟、增殖、分化密切相关。近年来研究发现铁代谢在脓毒症中意义重大,同时铁死亡被证实在脓毒症的病程发展中发挥着重要的作用,这使铁代谢的研究具有重大的意义。本文综述了脓毒症中铁代谢的研究现况以及转铁蛋白受体1在临床中的相关应用,通过分析其共同的病理生理过程,以期找到更多转铁蛋白受体cd71在脓毒症中表达的意义,为帮助鉴别诊断脓毒症,判断患者病情严重程度,指导预后等提供潜在的生物标志物,同时为脓毒症提供新的干预靶点和治疗手段。

关键词：脓毒症转铁蛋白受体1 TfRl cd71 铁代谢

急性白血病患儿白血病干细胞表面cd96和cd71的表达对其疗效和预后的影响

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吉林大学学报（医学版） 2017年第4期43卷 776-781页

作者：苏军燕李迎今徐长妍吉林大学第一医院小儿肿瘤科吉林长春130021 吉林大学第一医院急诊内科吉林长春130021

目的:观察白血病干细胞(LSC)表面cd96和cd71表达对急性白血病患儿疗效及预后的影响,阐明白血病患儿LSC的分子生物学特征与其疗效和预后的关联性。方法:选择80例急性白血病患儿作为研究对象,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)39例,急性髓系白... 详细信息

目的:观察白血病干细胞(LSC)表面cd96和cd71表达对急性白血病患儿疗效及预后的影响,阐明白血病患儿LSC的分子生物学特征与其疗效和预后的关联性。方法:选择80例急性白血病患儿作为研究对象,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)39例,急性髓系白血病(AML)41例。应用流式细胞术对其LSC表面cd96和cd71表达情况进行检测,对患者的首次化疗疗效、5年生存率、化疗后感染、化疗后复发和髓外浸润发生率进行观察和比较。结果:38例(47.5%)患儿LSC表面cd96阳性表达,45例(56.3%)患儿LSC表面cd71阳性表达,2种抗原阳性表达率比较差异无统计学意义(χ~2=1.227,P=0.268);AML患儿LSC表面cd96和cd71阳性表达率均明显高于ALL患儿(χ~2=22.225,χ~2=34.028,均Pcd96阴性表达患儿首次化疗后的临床有效率和疗效分布均优于LSC表面cd96阳性表达患儿,LSC表面cd71阴性表达的患儿首次化疗后的临床有效率和疗效分布优于LSC表面cd71阳性表达患儿(χ~2=11.323,χ~2=16.589,Pcd96阴性表达患儿的5年生存率明显高于LSC表面cd96阳性表达患儿(χ~2=5.051,Pcd96阳性表达患儿(χ~2=8.316,χ~2=13.288,χ~2=5.389,均Pcd71阴性表达患儿化疗后感染发生率和化疗后复发率明显低于LSC表面cd71阳性表达的患儿(χ~2=6.622,χ~2=10.787,均Pcd96和cd71表达水平与疾病亚型、首次化疗疗效具有一定的关联性,可作为辅助诊断和评价疗效的标志物;cd96的表达水平与患者的预后具有关联性,可作为预测患儿预后的指标。

关键词：白血病干细胞 cd96 cd71 急性白血病疗效预后

抗cd71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第7期24卷 509-513页

作者：叶庆王志华朱慧芬王硕沈关心江汉大学医学与生命科学学院武汉430056 华中科技大学同济医学院免疫学系

目的　通过体外实验探讨抗cd71人鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法　以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测... 详细信息

目的　通过体外实验探讨抗cd71人鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法　以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(cdC)。以EBV转化的B细胞为刺激细胞 ,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率 ;以同种异体的PBMC为刺激细胞 ,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养 (MLC)中的增殖抑制率。结果　嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应 ,且二者抑制率差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,其抑制作用随抗体浓度增加而增强 ,PBMC和丝裂原共同孵育 12h后加入抗体的增殖抑制效应最明显 ;在新鲜补体存在下 ,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有cdC作用 ,而鼠源性单抗cdC作用较弱 ;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用 ,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组 (P cd71人鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应 ,其作用明显强于抗cd71鼠源性单克隆抗体。

关键词：抗cd71人-鼠嵌合抗体淋巴细胞 PBMC 淋巴细胞活化 cd71 移植排斥反应

党参多糖对环磷酰胺所致小鼠贫血的治疗效果观察

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临床误诊误治 2022年第1期35卷 99-102页

作者：邢秀玲赵海鹰李丽君高丽华才蔚涛王海燕王巍田菲孙映雪刘伟然杜美容唐山市妇幼保健院中医科河北唐山063000 解放军联勤保障部队第九八二医院肿瘤科河北唐山063000 天津中医药大学第一附属医院肿瘤科天津300000

目的探讨党参多糖对环磷酰胺(CTX)所致小鼠贫血的疗效。方法将60只SPF级健康雄性BALB/c小鼠均分为空白组、模型组和低、中、高剂量组及阳性对照组6组,除空白组外,其他5组分别于实验第1天按100 mg/kg剂量腹腔注射CTX,每日1次,空白组予等... 详细信息

目的探讨党参多糖对环磷酰胺(CTX)所致小鼠贫血的疗效。方法将60只SPF级健康雄性BALB/c小鼠均分为空白组、模型组和低、中、高剂量组及阳性对照组6组,除空白组外,其他5组分别于实验第1天按100 mg/kg剂量腹腔注射CTX,每日1次,空白组予等容积生理盐水腹腔注射,连续7 d。实验第2天注射CTX后2 h,低、中、高剂量组分别予党参多糖10、20、40 ml/kg灌胃,阳性对照组予生血宁溶液400 mg/kg每日1次灌胃,连续7 d。采用全自动血球计数仪测定各组红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)及红细胞压积(HCT),采用ELISA法测定促红细胞生成素(EPO)、多能集落刺激因子(multi-CSF)水平,采用流式细胞仪测定外周血cd71+和Ter119+水平。结果与空白组比较,模型组外周血RBC、Hb和HCT均显著降低(Pcd71+和Ter119+水平显著低于空白组(Pcd71+和Ter119+水平均显著升高(Pcd71+和Ter119+水平均低于阳性对照组(P<0.01)。结论党参多糖能有效改善CTX所致小鼠贫血。

关键词：小鼠贫血党参多糖环磷酰胺血红蛋白红细胞压积多能集落刺激因子 cd71