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Blockade of cd300a enhances the ability of human NK cells to lyse hematologic malignancies

Cancer Biology & Medicine 2024年第4期21卷 331-346页

作者： Shuangcheng Li Tianci Wang Xinghui Xiao Xiaodong Zheng Haoyu Sun Rui Sun Hongdi Ma Zhigang Tian Xiaohu Zheng Hefei National Research Center for Physical Sciences at Microscale The CAS Key Laboratory of Innate Immunity and Chronic DiseaseSchool of Basic Medical SciencesCenter for Advanced Interdisciplinary Science and Biomedicine of IHMDivision of Life Sciences and MedicineUniversity of Science and Technology of ChinaHefei 230027China Institute of Immunology University of Science and Technology of ChinaHefei 230027China Hefei TG ImmunoPharma Corporation Limited Hefei 230601China Research Unit of NK Cell Study Chinese Academy of Medical SciencesBeijing 100864China Key Laboratory of Quantitative Synthetic Biology Shenzhen Institute of Synthetic BiologyShenzhen Institute of Advanced TechnologyChinese Academy of SciencesShenzhen 518055China

Objective: The human cluster of differentiation(cd)300A, a type-I transmembrane protein with immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs, was investigated as a potential immune checkpoint for human natural killer(NK) cells targeting hematologic malignancies(HMs).Methods: We implemented a stimulation system involving the cd300a ligand, phosphatidylserine(PS), exposed to the outer surface of malignant cells. Additionally, we utilized cd300a overexpression, a cd300a blocking system, and a xenotransplantation model to evaluate the impact of cd300a on NK cell efficacy against HMs in in vitro and in vivo settings. Furthermore, we explored the association between cd300a and HM progression in ***: Our findings indicated that PS hampers the function of NK cells. Increased cd300a expression inhibited HM lysis by NK cells. cd300a overexpression shortened the survival of HM-xenografted mice by impairing transplanted NK cells. Blocking PS–cd300a signals with antibodies significantly amplified the expression of lysis function-related proteins and effector cytokines in NK cells, thereby augmenting the ability to lyse HMs. Clinically, heightened cd300a expression correlated with shorter survival and an “exhausted” phenotype of intratumoral NK cells in patients with HMs or solid ***: These results propose cd300a as a potential target for invigorating NK cell-based treatments against HMs.

关键词： NK cell cd300a phosphatidylserine immune checkpoint hematologic malignancy

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cd300a表达对大肠埃希菌介导的尿路感染患者病情进展的影响及作用机制分析

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中国病原生物学杂志 2023年第6期18卷 662-666,671页

作者：赵展王海波朱千三温州市中医院泌尿外科浙江温州325608

目的分析cd300a表达对大肠埃希菌介导的尿路感染患者病情进展的影响及作用机制。方法选取2021年1月至2022年12月本院收治的大肠埃希菌尿路感染患者75例,均为女性,根据患者病情转归、病情进展分为研究组(病情转归,41例)和对照组(病情进... 详细信息

目的分析cd300a表达对大肠埃希菌介导的尿路感染患者病情进展的影响及作用机制。方法选取2021年1月至2022年12月本院收治的大肠埃希菌尿路感染患者75例,均为女性,根据患者病情转归、病情进展分为研究组(病情转归,41例)和对照组(病情进展34例),观察两组患者尿道分泌物cd300amRNA和cd300a蛋白表达及细菌负担,比较两组患者血液中性粒细胞、PCT、CRP、WBC表达并分析cd300aRNA、cd300a与感染指标相关性。另选取6~8周龄雌性小鼠16只,建立α-溶血素缺乏的UPEC菌株C93和α-溶血素充足的UPEC菌株CFT073感染模型,均分为常规组和cd300a敲除组,观察两组大鼠中性粒细胞表达及相关功能,分析cd300a对尿路感染大鼠中性粒细胞清除功能的影响及作用机制。结果研究组患者cd300amRNA和cd300a蛋白表达水平均显著高于对照组(均Pcd300amRNA和cd300a蛋白相对表达量均与细菌负担,中性粒细胞、PCT、CRP、WBC表达呈负相关(均Pcd300a。敲除组模型鼠尿液及膀胱组织中性粒细胞水平及细菌负荷均高于常规组(均Pcd300a配体水平显著升高(P0.05)。结论cd300a表达与UPEC介导的尿路感染患者病情进展具有相关性,其高表达通过提高中性粒细胞吞噬作用增强机体对UPEC的清除能力,其中α溶血素是表达cd300a的中性粒细胞清除UPEC的关键。

关键词：尿路感染大肠埃希菌 cd300a 病情进展作用机制

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BHV-1感染牛巨噬细胞对cd300a转录的影响

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中国兽医学报 2023年第2期43卷 253-259页

作者：王旭芬安冬侯琳赵润涛张贺赵洋张志丹周伟光内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 呼伦贝尔市海拉尔区疫病预防控制中心内蒙古呼伦贝尔021000

为探究抑制性受体cd300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立cd300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照... 详细信息

为探究抑制性受体cd300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立cd300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组cd300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参,使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组cd300a基因各时间段的相对表达量,分析cd300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示,BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应,测得其病毒滴度为107.23TCID50/mL。本研究建立的cd300a基因荧光定量PCR检测方法,cd300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系,溶解曲线均为特异单峰,最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性,可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的cd300a基因表达量。经计算,攻毒组cd300a表达量均高于对照组,其中,6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h(Pcd300a基因作为巨噬细胞表面的抑制性受体,表达量在BHV-1入侵时会显著变化,推测cd300a基因为协助病毒进入宿主细胞或免疫逃逸也相应增多,在抗病毒免疫机制中起到一定作用。

关键词：传染性鼻气管炎牛Ⅰ型疱疹病毒 cd300a 荧光定量PCR 单核巨噬细胞

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IBRV感染牛单核巨噬细胞后受体cd300a对炎性细胞因子的免疫调控作用

IBRV感染牛单核巨噬细胞后受体CD300a对炎性细胞因子的免疫调控作...

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作者：王旭芬内蒙古农业大学

学位级别：硕士

cd300家族分子是免疫细胞表面受体和免疫球蛋白超家族中的一类,在免疫应答中发挥重要的作用。为了探究抑制性受体cd300a在牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)免疫调控机制中的作用,本试验分离了1株IB... 详细信息

cd300家族分子是免疫细胞表面受体和免疫球蛋白超家族中的一类,在免疫应答中发挥重要的作用。为了探究抑制性受体cd300a在牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)免疫调控机制中的作用,本试验分离了1株IBRV,使用定量PCR检测IBRV在永生化单核巨噬细胞中的生长规律;建立牛源cd300a、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的荧光定量方法,检测IBRV感染巨噬细胞后0、6、12、24、48、72、96、120 h等不同时间点cd300a及各类细胞因子的转录变化;检测过表达和沉默cd300a后对IBRV复制及各类细胞因子转录变化的影响。结果显示:(1)IBRV在MDBK细胞上出现典型细胞病变,TCID为10/μL,IBRV在牛单核巨噬细胞0～24 h迅速增殖,24 h后增殖变缓,48 h进入平台期,之后停止复制;(2)本研究建立的cd300a和炎性细胞因子荧光定量检测方法,标准曲线相关系数均大于0.998,扩增效率均大于92.2%;(3)IBRV感染巨噬细胞后cd300a表达量在8个时间段均高于对照组,IL-1β、IL-8相对表达降低,IL-6、IL-10、TNF-α相对表达增高;(4)通过慢病毒载体成功将cd300a基因过表达和沉默,结果显示过表达cd300a正调控IBRV DNA的复制及IL-1β、IL-10的转录,沉默cd300a正调控IL-6、IL-8、TNF-α的转录。本实验探究了cd300a在IBRV感染单核巨噬细胞后对炎性细胞因子的调控作用和病毒复制的影响,为深入研究IBRV免疫机制提供基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 cd300a 炎性细胞因子单核巨噬细胞

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牛cd300a基因荧光定量PCR检测方法的建立及其真核表达载体的构建

牛CD300a基因荧光定量PCR检测方法的建立及其真核表达载体的构建

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作者：安冬内蒙古农业大学

学位级别：硕士

cd300a分子是cd300分子超家族中的一个重要成员,是白细胞的表面抗原之一,在调节不同的免疫细胞过程中起着重要的作用。cd300a广泛表达于髓系细胞及淋巴系细胞,且表达的差异性取决于细胞的类型,并参与调节细胞的生长过程,同时与过敏性疾... 详细信息

cd300a分子是cd300分子超家族中的一个重要成员,是白细胞的表面抗原之一,在调节不同的免疫细胞过程中起着重要的作用。cd300a广泛表达于髓系细胞及淋巴系细胞,且表达的差异性取决于细胞的类型,并参与调节细胞的生长过程,同时与过敏性疾病、感染性疾病、慢性炎症等疾病关系紧密。本研究根据GenBank中的牛源cd300a基因序列设计一对特异性引物,应用牛单核巨噬细胞cdNA作为模版,扩增cd300a基因片段,建立检测该基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法,并做出荧光定量PCR的标准曲线。再设计另外一对带有酶切位点引物,扩增cd300a全基因,构建cd300a全基因的真核表达载体,并在HEK-293T细胞进行转染。结果表明,本研究成功建立了牛cd300a基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,灵敏性达10拷贝/μL;定量PCR标准曲线的扩增效率E=90.0%,相关系数R=0.999,表明此方法可用于检测牛cd300a在细胞中的表达。对牛cd300a全基因的克隆测序发现,其基因全长为900bp,含一个跨膜螺旋结构域,在氨基酸序列第182-204位,膜外区为1-181位,膜内区为205-300位;在第25氨基酸残基位上预测拥有信号肽剪切位点。此外,成功构建真核表达载体pEGFP-cd300a,并通过脂质体转染至HEK-293T细胞,证明cd300a蛋白在HEK-293T细胞中成功表达。以上结果表明,研究成果为研究牛cd300a在免疫调控中的作用提供了基础。

关键词：牛 cd300a 荧光定量PCR 真核表达

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cd300a在血液系统恶性肿瘤中的研究进展

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浙江医学 2017年第8期39卷 670-673,678页

作者：斯婷陆滢李枫林裴仁治宁波大学医学院 315211 宁波市鄞州人民医院血液科浙江大学血液病研究所

cd300a(IRp60)是cd300糖蛋白家族的一种Ⅰ型跨膜抑制性受体,在细胞内外刺激因子作用下与磷酸酶配体结合,磷酸化细胞质尾部内嵌于免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIMs)中的酪氨酸残基,调控胞内信号活动。cd300a广泛表达于髓系以及淋巴细胞表面... 详细信息

cd300a(IRp60)是cd300糖蛋白家族的一种Ⅰ型跨膜抑制性受体,在细胞内外刺激因子作用下与磷酸酶配体结合,磷酸化细胞质尾部内嵌于免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIMs)中的酪氨酸残基,调控胞内信号活动。cd300a广泛表达于髓系以及淋巴细胞表面,且因细胞类型及分化程度不同而差异性表达,参与调节细胞的一系列功能。另外,cd300a异常表达与血液系统恶性肿瘤的发生、发展及疾病预后关系密切。本文结合目前研究成果,就cd300a在血液系统中的研究进展作一综述,包括cd300a的结构、在不同血细胞中的功能与调节及其与血液系统恶性肿瘤间的关系等。

关键词： cd300a 血细胞白血病淋巴瘤

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