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铅接触及铅中毒工人外周血T细胞cd3ζ基因的表达特点

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第三军医大学学报 2009年第14期31卷 1399-1400页

作者：刘思初潘焕玉徐媛李萡杨力建刘薇薇陈嘉榆暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州市第十二人民医院职业病科广州510620 广州市第十二人民医院血液科广州510620

目的了解铅接触及铅中毒工人外周血中T细胞信号传导分子cd3ζ基因表达水平,为铅接触和铅中毒工人免疫系统损害的机制提供资料。方法利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR分别检测10例铅接触工人、6例铅中毒工人和20例正常人外周血单个核细胞的cd... 详细信息

目的了解铅接触及铅中毒工人外周血中T细胞信号传导分子cd3ζ基因表达水平,为铅接触和铅中毒工人免疫系统损害的机制提供资料。方法利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR分别检测10例铅接触工人、6例铅中毒工人和20例正常人外周血单个核细胞的cd3ζ基因表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-△Ct)计算铅接触、铅中毒工人与正常人cd3ζ基因表达水平差异。结果正常人、铅接触和铅中毒工人外周血cd3ζ基因表达水平分别为(3.01±2.11)、(11.4±13.3)和(2.42±3.01)。与正常人相比,铅接触工人外周血cd3ζ基因表达上升(Pcd3ζ基因表达下降(Pcd3ζ基因表达异常,提示机体接触铅后T细胞活化过程存在障碍。

关键词：铅 cd3ζ 基因实时定量PCR

人cd3ζRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第1期28卷 40-42,45页

作者：高美华王娟张蓓王冰解西河青岛大学医学院免疫学教研室青岛市中心医院生物治疗中心

目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对cd3ζ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法:利用DNA重组技术,设计3条60 bp能转录产生靶向cd3ζ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以***+gfp质粒作为空载体经限... 详细信息

目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对cd3ζ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法:利用DNA重组技术,设计3条60 bp能转录产生靶向cd3ζ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以***+gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建cd3ζ-pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆。结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明cd3ζ-pSUPER retroRNAi重组质粒构建成功;脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。结论:成功地构建了特异性沉默cd3ζ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究cd59与cd3ζ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据。

关键词： shRNA cd3ζ cd59 PA317 逆转录病毒载体

cd3ζ RNAi重组质粒的构建及对T细胞信号转导的作用研究

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CD3ζ RNAi重组质粒的构建及对T细胞信号转导的作用研究

作者：王娟青岛大学

学位级别：硕士

目的：采用前期已构建的cd59pSUPER-RNAi质粒转染Jurkat细胞,探讨特异性沉默cd59前后cd59对cd3介导Jurkat细胞活化信号转导的相关作用。方法：应用Lipofectamine2000转染病毒包装细胞系PA317,然后收集病毒的上清感染Jurkat细胞,经G418... 详细信息

目的：采用前期已构建的cd59pSUPER-RNAi质粒转染Jurkat细胞,探讨特异性沉默cd59前后cd59对cd3介导Jurkat细胞活化信号转导的相关作用。方法：应用Lipofectamine2000转染病毒包装细胞系PA317,然后收集病毒的上清感染Jurkat细胞,经G418压力筛选建立稳定转染细胞系,利用RT-PCR检测转染后cd59在基因水平的表达抑制效果。实验分为未转染的Jurkat细胞组,转染空质粒pSUPER组和转染cd59pSUPER-RNAi质粒的Jurkat细胞组,采用噻唑蓝（MTT）比色法、Western Blot技术和激光共聚焦显微镜来分别检测交联cd59单抗与固相化cd3单抗联合作用后对三组细胞的细胞增殖效应、ZAP-70酪氨酸的磷酸化水平以及细胞浆内钙离子的变化水平。结果：重组干扰载体转染后,经G418压力筛选得到稳定转染细胞系,且RT-PCR结果表明转染cd59pSUPER-RNAi质粒的Jurkat细胞组cd59分子的表达被抑制。转染干扰质粒Jurkat细胞组cd59与cd3联合作用后细胞增殖能力、ZAP-70酪氨酸磷酸化水平以及胞内钙离子浓度均明显低于未转染组与转染空质粒组（P＜0.05）;但未转染组和转染空质粒组之间无差异。结论：cd59对cd3介导T细胞活化信号转导有增强效应。目的：采用RNAi技术构建并筛选携带针对cd3ξ基因的pSUPER-RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞克隆。方法：应用DNA重组技术,设计三条60bp可转录生成靶向cd3ξ小发卡RNA （shRNA）的寡核苷酸序列,并以***+gfp质粒作为空载体,经过限制性核酸内切酶酶切后与设计序列进行重组,以构建cd3ζ pSUPER-RNAi逆转录病毒载体,用脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆。结果：重组载体经过限制性核酸内切酶酶切、PCR和基因测序鉴定证实cd3ζ pSUPER-RNAi重组质粒构建成功;脂质体法把重组载体转染包装细胞系PA317,镜下观察可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。结论：本实验成功地构建了特异性沉默cd3ξ基因的pSUPER-RNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系,为后续研究cd59与cd3ξ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据。目的：将前期构建好的pSUPER-cd3ζNAi与pSUPER-cd59RNAi真核表达载体于Jurkat细胞中稳定表达,研究cd59与cd3分子在T细胞活化信号转导通路中的相互作用,从而探讨cd59向T细胞内传递信号的相关机制。方法：收集病毒上清,然后感染Jurkat细胞,经过G418压力筛选建立稳定转染的细胞系,利用RT-PCR检测转染后cd3ξ在mRNA水平的表达抑制效果;利用噻唑蓝（MTT）比色法检测转染重组载体前后各组Jurkat细胞的增殖效应;采用Western Blot技术检测各组Jurkat细胞的ZAP-70酪氨酸磷酸化的水平;利用激光共聚焦显微镜检测各组细胞胞浆内Ca2+的变化;应用ELISA检测细胞上清中白介素2（IL-2）的变化水平,比较各组差异。结果：RT-PCR结果表明重组载体转染后cd3ξ基因表达受抑制,且3条干扰序列中有2条可以明显抑制cd3ξ基因的表达（sicd3ζ-R2and sicd3ζ-R3）,其中sicd3ζ-R2和sicd3ζ-R3组mRNA的表达分别降低到42.71%（P＜0.01）和47.52%（P＜0.01）。转染干扰质粒的细胞组在联合作用后其细胞增殖能力,ZAP-70酪氨酸磷酸化水平,钙离子浓度及IL-2变化均明显低于未转染组与空质粒组,其差别有统计学意义（P＜0.05）,并且转染cd3ζNAi质粒组低于转染cd59RNAi质粒组,两组细胞比较其差别有统计学意义（P＜0.05）结论：cd59和cd3在T细胞活化信号转导中存在协同作用,且cd59可借助cd3ξ向胞内传递信号。

关键词： cd59 cd3 Jurkat细胞信号转导协同效应 shRNA cd3ζ PA317 逆转录病毒载体真核表达载体 Jurkat 细胞信号转导

肝癌靶向性T淋巴细胞活化融合基因hdsFv-cd3ζ的构建、表达与应用的研究

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肝癌靶向性T淋巴细胞活化融合基因hdsFv-CD3ζ的构建、表达与应用...

作者：李锴男第四军医大学

学位级别：硕士

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)简称肝癌，是恶性程度极高的肿瘤，在我国有着较高的发病率和死亡率，目前，临床对肝癌的诊治仍然十分困难。随着现代分子生物学，基因工程技术和蛋白质工程技术的发展，基因工程抗体的诞生... 详细信息

肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)简称肝癌，是恶性程度极高的肿瘤，在我国有着较高的发病率和死亡率，目前，临床对肝癌的诊治仍然十分困难。随着现代分子生物学，基因工程技术和蛋白质工程技术的发展，基因工程抗体的诞生为肿瘤的诊断和治疗带来了希望，尤其是单链抗体的应用成为免疫基因治疗的热点。我室成功的构建了一二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体(hdsFv)，提高了抗体的稳定性，降低了亲本鼠源性抗肝癌单链抗体的免疫原性，而其亲和性和特异性无明显下降。cd3是主要分布于成熟T淋巴细胞表面的分子，与TCR非共价结合形成TCR／cd3复合物，构成T淋巴细胞活化信号，而cd3ζ链在TCR／cd3信号转导中起重要作用。本研究将抗肝癌hdsFv的基因与人T细胞活化信号cd3ζ基因融合，构建了肝癌靶向性T细胞的嵌合受体，并在人PBMC和Jurkat T淋巴瘤细胞中表达，为制备肝癌靶向性T细胞奠定了实验基础。 1．构建真核表达载体pcdNA3-hdsFv-cd3ζ。采用RT-PCR从正常人外周血T淋巴细胞总RNA中克隆cd3ζ的胞内区及跨膜区基因，经测序，与GenBank公布的序列一致。用PCR从含有抗肝癌单链抗体的原核表达载体第四军医大学硕士学位论文 pET一22b(+)一hdsFv中克隆其基因序列，经测序，与已知序列相同。将二者序列重组导入真核表达载体pcdNA3，构建重组表达载体 peDNA3一hdsFv一cd3乙，经酶切鉴定序列分析与GenBank公布的cd3乙和已知的hdsFv序列相同。 2.肝癌靶向性T淋巴细胞活化融合基因hdsFv一cd3心的表达与定位检验。将构建好的真核表达载体pcdNA3一hdsFv一cd3心用脂质体法转染 JurkatT淋巴瘤细胞，经G418筛选获得正常生长的阳性克隆，用Western blotting检测表明转染后Jurkat细胞中有hdsFv一cd3心融合蛋白的表达。再经细胞化学染色鉴定和灰度分析，hdsFv--cd3心表达于Jurkat细胞的细胞膜上，经修饰的Jurkat细胞可表达较高量的cd3心分子。用RT一PCR从经hdsFv一cd3心修饰的Jurkat细胞中检验出了hdsFv的表达。 ***一cd3心修饰的Jurkat和PBMC的功能检验。将hdsFv一cd3心修饰的Jurkat细胞与HepGZ细胞共培养，发现Jurkat细胞粘附在HepGZ 上，说明了经hdsFv一cd3乙修饰的Jurkat细胞具有良好的靶向性。再将 pcdNA3一hdsFv一cd3心用脂质体法转染pBMC，经细胞化学染色鉴定，cd3 心的表达量增加，证实hdsFv一cd3心导入PBMC中。由于活化的T细胞表达cd25，用hdsFv一cd3心修饰活化的的PBMC，经直接免疫荧光染色和FCM 分析cd25的表达增加。用hdsFv一cd3心修饰活化的PBMC的培养液上清进行IL一2的生物活性检测，结果证实修饰后的PB毗的IL一2分泌增加。 hdsFv一cd3心修饰的PBMC，与肝癌H即G2细胞共培养，以未转染的PBMC 与HepGZ细胞共培养做对照，培养6h后，AnnexinV荧光染色检测HepGZ 细胞的凋亡，结果表明经hdsFv一cd3心修饰活化的PBMC可以较好的诱导 HepGZ细胞的凋亡。将hdsFv一cd3心、hdsFv修饰的PBMC与未转染的PBMC 与肝癌HePGZ细胞和宫颈癌H。1a细胞按50:1的效靶比共培养，结果表 4 第四军医大学硕士学位论文明，hdsFv一cd3乙、hdsFv修饰的PBMC均可显著杀伤HepGZ细胞，但以 hdsFv一cd3心修饰的PBMC杀伤作用最强，共培养6h后，HepGZ细胞即有死亡，12h后死亡细胞进一步增加，18h时，转染hdsFv和hdsFv一cd3心的PBMC对H即G2细胞的杀伤率分别可达到62.39%和75.85%。转染 hdsFv一cd3心的PBMC也可显著杀伤Hela细胞，18h时可达63.13%。转染hdsFv一cd3心的PB毗对Hela细胞杀伤率较高除与cd3乙有活化T细胞的功能外，还与PBMC培养时加入了IL一2引起的非特异性活化有关，应属于非特异性活化杀伤。本研究成功的克隆了cd3心的胞内区及跨膜区基因，构建了抗肝癌 hdsFv与T淋巴细胞活化信号cd3心嵌合受体的真核表达载体 penNA3一hdsFv一Cn3心，转染入PB讹和JurkatT淋巴瘤细胞，并以此为基础进行了T淋巴细胞活化与功能检验。修饰后的PBMC和肝癌H即G2细胞共培养，与

关键词：肝癌靶向性治疗 T淋巴细胞抗体 cd3ζ

cd3ζ链引入YRHQ基序显著促进靶向Her2的CAR-T细胞抗肿瘤活性

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CD3ζ链引入YRHQ基序显著促进靶向Her2的CAR-T细胞抗肿瘤活性

融合蛋白TCRαζβζ中cd3ζ分子与T细胞膜的共定位分析

第十四届全国免疫学学术大会

作者：王田张征峥王晓峰张紫梦宋淑霞河北医科大学

目的:探索在cd3ξ链胞内区羧基末端引入YRHQ基序,能否提高靶向Her2的CAR-T细胞对肿瘤特异性杀伤活性。方法:通过DNA合成获得包含靶向Her2的scFv及cd28、cd3ξ(或引入YRHQ基序)胞内区编码嵌合抗原受体H28ξ或H28ξ(YRHQ)的DNA片段。通过... 详细信息

目的:探索在cd3ξ链胞内区羧基末端引入YRHQ基序,能否提高靶向Her2的CAR-T细胞对肿瘤特异性杀伤活性。方法:通过DNA合成获得包含靶向Her2的scFv及cd28、cd3ξ(或引入YRHQ基序)胞内区编码嵌合抗原受体H28ξ或H28ξ(YRHQ)的DNA片段。通过慢病毒载体分别将该DNA片段转导健康人外周血T细胞,制备H28ξ-CAR-T及H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞。将2种CAR-T细胞分别与Her2阳性的SKOV3、MDA-MB-453和Her2阴性的MCF-7细胞共孵育,LDH释放法检测CAR-T细胞的杀伤活性,ELISA方法检测IL-2、IFN-γ和GZMB的水平,Western Blot方法检测stat3的磷酸化水平及免疫检查点分子TIM-3、PD-1的表达。流式细胞仪检测细胞表面CCR7、cd45RO的表达,分析初始T细胞(TN) CCR7cd45RO、效应T细胞(TEFF) CCR7cd45RO、中央记忆T细胞(TCM) CCR7cd45RO及效应记忆T细胞(TEM) CCR7cd45RO等不同亚型T细胞分布。结果:H28ξ-CAR和H28ξ(YRHQ)-CAR在T细胞的表达率分别为33.3%±2.85%和28.30%±3.2%。在效靶比为5:1、10:1及20:1时,H28ξ-CAR-T和H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞对肿瘤特异性杀伤及IL-2、IFN-γ和GZMB释放水平均显著高于正常T细胞(P3的磷酸化水平(均P3的表达未见明显改变。与SKOV3肿瘤细胞共培养后,H28ξ(YRHQ)-CAR-T细胞中TEM表型的细胞,较NTT与H28ξ-CAR-T比较明显增加,而TCM表型的细胞明显减少(P3磷酸化水平、细胞毒活性及TEM细胞亚群比例均明显升高。表明在cd3ξ链胞内区引入YRHQ基序可在一定程度上提高CAR-T细胞快速杀伤潜力。

关键词： Her2 CAR-T STAT3 cd3ζ T细胞表型

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生物技术 2018年第2期28卷 108-112页

作者：陶嫦立邵红伟黄树林广东药科大学生命科学与生物制药学院广东广州510006 广东省生物技术候选药物研究重点实验室广东广州510006

[目的]构建融合cd3ζ的TCRαζβζ分子的双表达载体,并观察TCRαζβζ分子中的cd3ζ与细胞膜的共定位情况。[方法]设计重叠PCR引物,利用重叠PCR扩增携带荧光蛋白的融合基因TCRβζ-EYFP和TCRαζ,将其克隆到p IRES2-EGFP载体,构建双... 详细信息

[目的]构建融合cd3ζ的TCRαζβζ分子的双表达载体,并观察TCRαζβζ分子中的cd3ζ与细胞膜的共定位情况。[方法]设计重叠PCR引物,利用重叠PCR扩增携带荧光蛋白的融合基因TCRβζ-EYFP和TCRαζ,将其克隆到p IRES2-EGFP载体,构建双表达载体p IRES2-TCRβζ-EYFP/TCRαζ,将重组载体分别转染BEL-7402细胞和Jurkat T细胞,转染48 h后,细胞膜经Di D染料染色,共聚焦显微镜扫描并分析该TCRαζβζ分子的表达以及与细胞膜的共定位情况。[结果]重组双表达载体p IRES-TCRβζ-EYFP/TCRαζ经菌落PCR、酶切鉴定及测序分析证明载体构建成功;共聚焦显微镜扫描结果显示重组载体表达了融合蛋白TCRαζβζ分子;共定位程序分析显示TCRαζβζ分子中的cd3ζ与细胞膜存在共定位关系。[结论]成功构建了融合蛋白TCRαζβζ分子的双表达载体,TCRαζβζ分子中的cd3ζ与细胞膜存在共定位。

关键词： T细胞受体 cd3ζ 细胞膜共定位

大西洋蛙T细胞受体联合体cd3ζ,cd3γδ and cd3ε的特性分析

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大西洋蛙T细胞受体联合体CD3ζ,CD3γδ and CD3ε的特性分析

miR-214-3p靶向调控cd3ζ基因的研究

2008年中国水产学会学术年会

作者：刘云中国海洋大学

cd3作为T细胞受体的主要组成成分,将信号传导入细胞内部。我们报道了大西洋鲜编码cd3ζ,cd3γδ和cd3ε的cdNA及其相关基因,并利用real-time RT-PCR分析其组织表达特异性。蛙鱼cd3ζ与哺乳动物相比有较高的序列相似性,由一个短胞外（EX... 详细信息

cd3作为T细胞受体的主要组成成分,将信号传导入细胞内部。我们报道了大西洋鲜编码cd3ζ,cd3γδ和cd3ε的cdNA及其相关基因,并利用real-time RT-PCR分析其组织表达特异性。蛙鱼cd3ζ与哺乳动物相比有较高的序列相似性,由一个短胞外（EX）部分、跨膜（TM）缩氨酸和一个带3个长的免疫酪氨酸受体激活基序（ITAMs）的细胞质（CY）尾组成。编码鲜鱼cd3ζ的基因有7个外显子。cd3γδ（在哺乳动物为cd3g和cd3d）和cd3ε都由I个Ig一样EX基团、1个TM缩氨酸和1个带I个ITAMs的CY尾组成。发现2个完全不同的cd3γδ基因,每个有6个外显子。编码cd3ε的基因有5个外显子。RT-PCR也表明大西洋鲜和褐蹲退化的cd3ε有2个转录本。这个假基因与cd3γδ基因尾对尾,具有典型的cd3ε基因结构,额外多了1个外显子。大西洋蛙鱼的cd3基因在胸腺内高度表达,但cd3ε假基因与完整cd3ε基因相比只有微量表达。

关键词： Salmo salar Teleost T cell cd3ζ cd3γδ cd3ε Expression

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miR-214-3p靶向调控CD3ζ基因的研究

人源抗肝癌单链抗体scFv-cd3ζ基因真核载体的构建

第十一届全国免疫学学术大会

作者：肖彦恺郭理杏张逸铠陈少华杨力建李萡李扬秋暨南大学生命科学技术学院发育与再生教育部重点实验室暨南大学医学院血液病研究所暨南大学第一附属医院血液科

目的 :TCR(T cell receptor)是T细胞表面识别抗原的受体,由于其肽链的胞质部分很短,不具备传递抗原刺激信号的能力,必须通过与cd3分子形成TCR/cd3复合物。抗原刺激T细胞后,通过TCR/cd3复合物传递细胞刺激信号,引起T细胞活化、增殖从而... 详细信息

目的 :TCR(T cell receptor)是T细胞表面识别抗原的受体,由于其肽链的胞质部分很短,不具备传递抗原刺激信号的能力,必须通过与cd3分子形成TCR/cd3复合物。抗原刺激T细胞后,通过TCR/cd3复合物传递细胞刺激信号,引起T细胞活化、增殖从而发挥其生物学功能。本实验室前期研究发现AA患者中,TCR/cd3复合物中重要组成分子-cd3ζ较健康人表达水平明显升高,提示AA患者中T细胞异常活化可能与cd3ζ有关。越来越多的研究发现转录后调控是影响cd3ζ基因表达的关键因素,cd3ζ3′-UTR在cd3ζ基因的转录后水平发挥重要调控作用。micro RNA(mi RNA)可与基因3′-UTR区域的种子序列结合,靶向调控基因的表达。目前尚未见有关靶向调控cd3ζ表达的mi RNA的报道。因此,本研究将首先筛选和验证靶向调控cd3ζ表达的mi RNA,为今后进一步明确AA患者异常T细胞活化的分子机制提供研究资料。方法 :利用生物信息学软件预测靶向调控cd3ζ基因的mi RNA;利用双荧光素酶报告系统、实时荧光定量PCR以及Western Blot等技术验证筛选出的mi RNA能否靶向调控cd3ζ。结果 :首先通过三个在线生物软件(Target Scan,Pic Tar和micro ***)均预测mi R-214-3p可以与cd3ζ3’-UTR结合,且具有高度保守性;其次,成功构建了包含cd3ζ3’-UTR的双荧光报告重组质粒,将此重组质粒与mi R-214-3p mimic共转染至HEK293T细胞后实验组的荧光素酶活性较对照组下降50%以上(p3p后,明显抑制cd3ζm RNA表达水平和蛋白水平,抑制mi R-214-3p表达后,明显提高cd3ζ蛋白水平。结论 :首次筛选和验证mi R-214-3p可以与cd3ζ3’-UTR结合靶向调控cd3ζ表达。

关键词：再生障碍性贫血 cd3ζ microRNA T细胞

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实用医药杂志 2004年第5期21卷 439-441页

作者：王健李锴男孙妍琳刘彦仿付勇刁建升屈晓杰第四军医大学学员旅陕西西安710032 第四军医大学病理学教研室陕西西安710032 山东大学医学院病理学教研室山东济南250012

目的克隆正常人T细胞cd3ζ的胞内区、跨膜区基因,将其与二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的基因克隆入真核表达载体,为制备肝癌靶向性嵌合锚定T细胞奠定基础,并探讨其对肝癌的杀伤活性。方法应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单... 详细信息

目的克隆正常人T细胞cd3ζ的胞内区、跨膜区基因,将其与二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的基因克隆入真核表达载体,为制备肝癌靶向性嵌合锚定T细胞奠定基础,并探讨其对肝癌的杀伤活性。方法应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcdNA3,在5'端及3'端分别引入相应酶切位点;用RT-PCR法从正常外周血人T细胞扩增出cd3ζ的胞内区、跨膜区基因,然后将其克隆于scFv的下游,并在5'端及3'端引入相应的酶切位点。结果二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cdNA片段为735bp,与已知的序列相符;cd3ζ的胞内区、跨膜区的cdNA片段为294bp,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。结论完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及cd3ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcdNA3-scFv-cd3ζ的构建,为制备肝癌靶向性嵌合锚定T细胞奠定了实验基础。

关键词：单链抗体共刺激信号 cd3ζ