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第三军医大学学报 2015年第15期37卷 1543-1549页

作者：秦琴石韵洁赵青青陈元吴静赵敏重庆医科大学附属第一医院眼科重庆市眼科学重点实验室重庆400016

目的探讨cd25sirna基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的作用,及术后植片中IL-10和FOXP3的含量变化。方法配制50μL EntransterTM-反义cd25sirna和50μL EntransterTMcd25sirna点眼纳米转染试剂,50μL生理盐水为对照。建立Wistar-SD... 详细信息

目的探讨cd25sirna基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的作用,及术后植片中IL-10和FOXP3的含量变化。方法配制50μL EntransterTM-反义cd25sirna和50μL EntransterTMcd25sirna点眼纳米转染试剂,50μL生理盐水为对照。建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型,右眼为术眼,采用单纯随机抽样方法,分为对照组(A组)、EntransterTM-反义cd25sirna转染组(B组)和EntransterTM-cd25sirna转染组(C组),每组28只。术后每日对植片行临床评分并分别于3、7、14、21 d行HE染色、免疫组化、Western blot和qRT-PCR检测。结果角膜植片生存曲线显示cd25sirna转染组角膜植片的生存率显著优于其余2组(Pcd25sirna转染组较其余2组,角膜植片新生血管减少,炎症细胞渗入减少;同时,术后各时间点cd25sirna转染组中cd25表达均低于其余2组(P0.05)。结论 cd25sirna转染通过上调抗炎性细胞因子IL-10表达,抑制炎症反应,进而延长角膜植片生存时间,提高植片生存率。

关键词： cd25sirna 移植排斥反应纳米转染试剂 IL-10 FOXP3

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EntransterTM-cd25sirna基因转染在大鼠穿透性角膜移植免疫中的作用

EntransterTM-CD25siRNA基因转染在大鼠穿透性角膜移植免疫中的作...

引用

作者：秦琴重庆医科大学

学位级别：硕士

背景cd25是IL-2R的α链,作为IL-2R的组成部分,参与IL-2R介导的信号通路,发挥相应生理功能。先前的研究表明,IL-2/IL-2R/cd25介导的信号通路能诱导角膜移植排斥反应的发生,是导致角膜移植手术失败的主要原因。国内外已有几篇文献报道,应... 详细信息

背景cd25是IL-2R的α链,作为IL-2R的组成部分,参与IL-2R介导的信号通路,发挥相应生理功能。先前的研究表明,IL-2/IL-2R/cd25介导的信号通路能诱导角膜移植排斥反应的发生,是导致角膜移植手术失败的主要原因。国内外已有几篇文献报道,应用cd25的单克隆抗体可以抑制角膜移植排斥反应的发生,有效延长植片的生存时间。本课题组先前已用慢病毒载体接连cd25sirna质粒转染大鼠角膜移植模型,结果显示治疗组能有效延长角膜植片的存活时间。然而,应用纳米载体接连cd25sirna转染角膜移植排斥反应的文献,国内外至今未见报道,其治疗的效果、副作用及相应的机制尚不清楚。本实验共包括两部分。目的;一、探讨纳米载体EntransterTM-cd25sirna、脂质体-cd25sirna对正常成年SD大鼠眼角膜的转染率和转染毒性,筛选最佳转染试剂及转染时间点。二、观察EntransterTM-cd25sirna基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的治疗作用、副反应及相应的机制。方法：一、采用随机数字表法将80只正常成年SPF级SD大鼠平均分为四组,即EntransterTM-cd25sirna复合物组(EntransterTM组)、脂质体-cd25sirna复合物组(脂质体组)、cd25sirna组(sirna组)和生理盐水组(对照组)。于给予点眼试剂后12h,24h,3d,7d在裂隙灯下观察大鼠眼球情况,行荧光显微镜检测四种转染试剂的转染率,行HE染色、TUNEL染色检测转染试剂对角膜的毒性,行cdllb检测角膜对转染试剂的免疫应答。二、构建Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型,采用单纯随机抽样方法将模型平均分为对照组、EEntransterTM-反义cd25sirna转染组和EntransterTM-cd25sirna转染组。术后每日对植片行临床评分并分别于术后3、7、14、21d行HE染色、免疫组化、Western Blotting和qRT-PCR检测植片中cd25表达及分布。行免疫组化检测术后14天IL-10. TGF-β、INF-γ、IL-1β、TNF-α和FOXP3的表达。结果：一、荧光显微镜检测结果显示EntransterTM组荧光表达数量及强度高于脂质体组,sirna组荧光表达早但至24h已完全衰减,对照组荧光阴性。HE染色、TUNEL染色、cdllb检测结果显示脂质体转染试剂引起角膜的炎性反应、角膜细胞凋亡和免疫应答明显强于其余三组。二、在Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型中,裂隙灯和HE检查显示cd25sirna转染组植片组织形态显著优于其余两组;生存时间较其余两组显著延长(pcd25蛋白表达和cd25mRNA水平均低于其余两组(pcd25sirna转染正常SD大鼠眼角膜,具有转染效率高、低毒性、不引起角膜免疫反应的特点,是角膜基因治疗较理想的纳米转染试剂。二、EntransterTM-cd25sirna基因治疗能有效抑制角膜植片中cd25表达,从而在一定程度上抑制角膜移植排斥反应的发生,延长角膜植片的存活时间,并维持角膜植片较好的形态学结构。其机制可能在于通过上调IL-10和TGF-β的表达,下调INF-γ、IL-1β和TNF-α的表达来完成。

关键词：纳米载体 cd25sirna 基因治疗角膜移植排斥反应

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