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巴利昔单抗抑制人T淋巴细胞活化与增殖的体外实验研究

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巴利昔单抗抑制人T淋巴细胞活化与增殖的体外实验研究

作者：冯豪华中科技大学

学位级别：硕士

目的:抗人CD25单克隆抗体(巴利昔单抗)是临床器官移植常用的免疫诱导治疗药物,虽然理论上其主要通过阻断T淋巴细胞激活的第三信号发挥免疫抑制作用,但其对T细胞活化、增殖以及细胞因子分泌的影响却鲜有报道。本实验通过在体外建立稳定... 详细信息

目的:抗人CD25单克隆抗体(巴利昔单抗)是临床器官移植常用的免疫诱导治疗药物,虽然理论上其主要通过阻断T淋巴细胞激活的第三信号发挥免疫抑制作用,但其对T细胞活化、增殖以及细胞因子分泌的影响却鲜有报道。本实验通过在体外建立稳定的抗原非特异性T淋巴细胞反应体系及同种异体抗原特异性混合淋巴细胞反应(MLR)体系,利用舒莱(巴利昔单抗,Novartis)进行干预,观察舒莱抑制T细胞活化及增殖反应的强度,为阐明巴利昔单抗的免疫学作用机制提供实验证据。方法:体外分别建立抗原特异性人T淋巴细胞反应及抗原非特异性人T淋巴细胞反应体系。其中抗原非特异性T淋巴细胞反应是利用抗人cd3/cd28抗体直接刺激T细胞活化增殖,刺激后第3天使用抗人cd3、cd4、cd8、CD25及cd69等流式抗体检测反应性T细胞活化及增殖情况,并留取培养体系的上清做细胞因子检测。而抗原特异性T淋巴细胞反应则是首先分离不同健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),其中一个个体的PBMC作为MLR的反应细胞,另一个体的PBMC进行放射照射灭活后作为MLR的刺激细胞,应用细胞培养技术,建立同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)体系。两种体外细胞培养体系中的反应细胞均在培养前使用CFSE进行染色,以便通过流式细胞技术检测培养后T细胞的增殖情况。两种实验方法均分为阴性对照组和给药组,其中给药组设计0.001μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml等6个不同药物浓度梯度的舒莱进行干预,培养3天后用流式细胞术检测各组T细胞活化和增殖的程度,CBA法检测细胞因子的分泌情况,观察不同浓度舒莱抑制T细胞增殖的强度。结果:体外实验证实,不同浓度的舒莱对特异性和非特异性T细胞增殖均有剂量依赖性抑制效果,正常同种异体淋巴细胞反应(MLR)体系中,T细胞增殖比例可达20-50%,而抗cd3/cd28抗体刺激T细胞增殖比例可达50-70%(cd4T和cd8T细胞均有显著增殖)。而给药组T细胞的增殖受到显著抑制,T细胞的增殖比例分别降至4%-10%和8-20%。此外,T细胞中期活化标志CD25分子的表达也明显下调,而对T细胞早期活化标志cd69分子的表达影响较小。CBA法检测细胞分泌IL-2、IFN-γ等细胞因子,其中给药的大剂量组IFN-γ分泌量较对照组明显减少,而IL-2的含量显著高于对照组。结论:体外实验表明,巴利昔单抗能显著结合初始活化的人T淋巴细胞,抑制其进一步激活与增殖,对T淋巴细胞反应具有较强的免疫抑制作用。本研究为巴利昔单抗的临床应用提供了进一步的实验证据。

关键词：外周血单个核细胞 T细胞增殖 CD25 巴利昔单抗混合淋巴细胞反应

IFN-α2b对慢性乙肝患者抗病毒及免疫调节作用

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中国药学杂志 2008年第1期43卷 71-74页

作者：王健王瑜江水清安徽理工大学医学院病原学与免疫教研室安徽淮南232001 淮南新华医院感染病科安徽淮南232052

目的探讨IFN-α2b对慢性乙肝患者抗病毒效果及对CD25的免疫调节作用。方法选择160例慢性乙肝患者(轻度93例,中度67例),随机分为IFN和常规治疗组,用生物素-链霉亲和素(BSA)法和Real-time PCR法分别动态检测PHA诱导前后CD25和CD25 mRNA的... 详细信息

目的探讨IFN-α2b对慢性乙肝患者抗病毒效果及对CD25的免疫调节作用。方法选择160例慢性乙肝患者(轻度93例,中度67例),随机分为IFN和常规治疗组,用生物素-链霉亲和素(BSA)法和Real-time PCR法分别动态检测PHA诱导前后CD25和CD25 mRNA的表达水平,PCR法动态检测患者治疗前后HBV-DNA水平。结果轻、中度组患者经干扰素治疗后,静息态和诱导态CD25表达水平逐渐升高,其CD25 mRNA含量亦升高。第3疗程后,轻、中度组中以干扰素治疗者CD25表达水平与同期常规治疗者相比,差异有显著性(PCD25 mRNA表达水平与CD25的表达具有平行性。IFN治疗者血清和PBMC内HBV-DNA阴转率均高于常规治疗者(PCD25表达水平增加,通过免疫调节发挥抗病毒作用。

关键词： IFN—α2b HBV—DNA CD25 mRNA 定时定量PCR

抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒的构建与瞬时表达

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中国生物制品学杂志 2010年第2期23卷 113-117页

作者：潘勇兵张爱华胡迪超闭兰杨晓明武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060

目的构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行瞬时表达。方法采用RT-PCR技术,设计针对信号肽的简并引物,钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因,以质粒PAG4622为模板,钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因,分别将... 详细信息

目的构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行瞬时表达。方法采用RT-PCR技术,设计针对信号肽的简并引物,钓取抗CD25杂交瘤细胞的重、轻链可变区基因,以质粒PAG4622为模板,钓取人抗体IgG1重、轻链恒定区基因,分别将重、轻链可变区基因与相应的恒定区基因进行拼接,将完整的重、轻链嵌合基因分别与真核表达载体pOptiVEC和pcdNA3.3连接,构建抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒,将其通过脂质体法共转染至293T细胞中进行表达。通过RT-PCR法检测嵌合抗体基因的转录水平,ELISA法检测嵌合抗体的表达量,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合活性。结果抗CD25人鼠嵌合抗体基因真核表达质粒构建正确;RT-PCR显示嵌合抗体基因在293T细胞中成功转录;转染后48、72、96和120h,细胞培养上清中嵌合抗体的含量分别为7.47、11.72、8.02和18.28ng/ml;FCM检测其能特异性与IL-2Rα链结合。结论已成功构建了抗CD25人鼠嵌合抗体基因的真核表达质粒,并能在293T细胞中瞬时表达。

关键词： CD25 嵌合抗体瞬时表达

羟基喜树碱对大鼠角膜移植后cd4、cd8、CD25表达的影响

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眼科新进展 2013年第2期33卷 118-121页

作者：黄竹李兵金创辽宁医学院附属第一医院眼科辽宁省锦州市121000 汕头大学/香港中文大学联合汕头国际眼科中心广东省汕头市515041

目的研究羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对大鼠角膜移植术后cd4、cd8、CD25表达的影响。方法以成年雌性Wistar大鼠为供体,雄性SD大鼠为受体建立穿透性角膜移植模型,受体大鼠随机分为3组,每组6只,分别为对照组、环孢霉素A(CsA... 详细信息

目的研究羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对大鼠角膜移植术后cd4、cd8、CD25表达的影响。方法以成年雌性Wistar大鼠为供体,雄性SD大鼠为受体建立穿透性角膜移植模型,受体大鼠随机分为3组,每组6只,分别为对照组、环孢霉素A(CsA)组和HCPT组,3组在移植术后第1天开始每天腹腔分别注射生理盐水2mL·kg-1、5g·L-1CsA溶液10mg·kg-1和1g·L-1HCPT溶液2.0mg·kg-1,至术后第12天。在术后第14天,应用免疫组织化学方法检测各组角膜植片中cd4、cd8、CD25的表达。结果术后第14天,cd4、cd8、CD25阳性细胞计数对照组分别为22.170±2.639、16.500±1.517、21.670±3.204,CSA组分别为7.330±1.033、5.170±1.329、6.670±0.816,HCPT组分别为4.770±1.577、3.830±0.983、3.670±1.033,两用药组角膜植片中表达cd4、cd8、CD25阳性细胞计数均较对照组明显减少(均为Pcd4、CD25表达少于CsA组(Pcd4、cd8及CD25的表达。

关键词：羟基喜树碱穿透性角膜移植免疫排斥 cd4 cd8 CD25

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CD25在人肝毛细胆管的表达

中华肝脏病杂志 2007年第10期15卷 791-792页

作者：陆忠华印永祥裴浩黄利华华惠琦冯云霞邢益平南京医科大学第一附属医院感染科 210029 无锡市妇幼保健医院病理科无锡市传染病医院肝科

肝脏疾病种类繁多,有相当一部分涉及肝毛细胆管,但毛细胆管用普通HE染色无法辨认,往往需电子显微镜才能观察其形态,导致我们对毛细胆管的分布、形态、病变认识不足。因此,有必要寻求一种方便、实用、低成本的方法来标记肝毛细胆管。本... 详细信息

肝脏疾病种类繁多,有相当一部分涉及肝毛细胆管,但毛细胆管用普通HE染色无法辨认,往往需电子显微镜才能观察其形态,导致我们对毛细胆管的分布、形态、病变认识不足。因此,有必要寻求一种方便、实用、低成本的方法来标记肝毛细胆管。本研究通过免疫组织化学,免疫荧光均证实人肝组织毛细胆管表达CD25,并通过阻断试验进一步证实CD25表达的特异性。

关键词：免疫组织化学荧光免疫测定 CD25 肝毛细胆管阻断试验

人参皂苷Rg1与Rh1对树突状细胞表达HLA-DR、CD25、cd44、cd54、cd11c及E-selectin的影响

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中国免疫学杂志 2007年第1期23卷 46-48,52页

作者：王毅郝钰邱全瑛黄启福中国中医科学院医学实验中心北京100700 北京中医药大学微生物免疫教研室北京100029 北京中医药大学病理教研室北京100029

目的观察人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞(Dendriticcell,DC)表面分子CD25、HLA-DR、cd44、ICAM-1、cd11c及E-selectin表达的影响。方法用不同浓度的Rg1和Rh1分别加入成熟DC中,刺激一定时间后,用免疫组化法观察,并用图像分析法分析结果。... 详细信息

目的观察人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞(Dendriticcell,DC)表面分子CD25、HLA-DR、cd44、ICAM-1、cd11c及E-selectin表达的影响。方法用不同浓度的Rg1和Rh1分别加入成熟DC中,刺激一定时间后,用免疫组化法观察,并用图像分析法分析结果。结果除E-selectin外,Rg1和Rh1均可不同程度地促进HLA-DR、CD25、cd11c、cd44和ICAM-1的表达。结论Rg1、Rh1可增强DC表面促进T细胞活化的第一、二类信号系统分子的表达,提高其抗原递呈能力,并促进DC-T细胞簇的形成而活化初始T细胞。

关键词：树突状细胞人参皂苷 CD25 HLA-DR cd44 ICAM-1

灭活HIV-1颗粒对人cd4^+T细胞活化标记分子CD25、cd71和HLA-DR表达的作用

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免疫学杂志 2009年第4期25卷 397-401,417页

作者：黄秀艳曾耀英王辉暨南大学组织移植与免疫中心深圳市东湖医院肝病研究所

目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的cd4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(cd71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理... 详细信息

目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的cd4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(cd71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制。方法AT-2灭活HIV-1IIIB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ng/mL;然后按照p24抗原量为0.1 ng/mL(记作HIV-1 1/500组)、1 ng/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ng/mL(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中cd4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中cd4+T细胞cd71和HLA-DR的表达百分率。结果24 h后,空白对照组中,cd4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-1 1/500组为(14.89±2.53)%,HIV-1 1/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,cd4+T细胞cd71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-1 1/500组为(11.70±2.34)%,HIV-1 1/50组为(18.45±3.19)%,HIV-1 1/5组为(22.59±2.96)%;cd4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-1 1/500组为(14.52±1.68)%,HIV-1 1/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%。结论AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒能够明显的诱导PBMCs中cd4+T细胞活化,并可能引起cd4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞"。

关键词： HIV-1颗粒 CD25 cd71 HLA-DR 同种异基因识别

外周血cd4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞与HCV感染的相关性

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肝脏 2019年第9期24卷 1085-1087页

作者：蒋自卫南京中医药大学附属南京医院(南京市第二医院)

cd4^+CD25^+调节性T淋巴细胞(T regulatory lymphoey cell,Treg)可抑制T细胞免疫反应,正常外周血中cd4^+CD25^+Treg约占cd4^+T细胞的5%~10%。越来越多的研究表明cd4^+CD25^+Treg在人类体内对诱导和维持免疫耐受起着重要作用且与多种疾... 详细信息

cd4^+CD25^+调节性T淋巴细胞(T regulatory lymphoey cell,Treg)可抑制T细胞免疫反应,正常外周血中cd4^+CD25^+Treg约占cd4^+T细胞的5%~10%。越来越多的研究表明cd4^+CD25^+Treg在人类体内对诱导和维持免疫耐受起着重要作用且与多种疾病的免疫有关[1-6]。CD25既是cd4^+CD25^+Treg的特征性标志,又是T细胞激活的标志,因此,不能仅借助CD25将两者鉴别开来,而Foxp3是Treg的主要转录因子,可调控Treg的生长发育与功能效应[6-7],故以cd4^+CD25^+Foxp3^+标志Treg更为可靠。本研究旨在探讨HCV感染时外周血中cd4^+CD25^+Foxp3^+Treg出现的频率及其与HCVRNA含量的相关性。

关键词：调节性T淋巴细胞 HCV感染 CD25 T细胞激活特征性标志调节性T细胞免疫耐受 cd4

类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞cd_(25)、HLA-DR的表达特征分析

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首都食品与医药 2019年第4期26卷 31-32页

作者：杨金玲河南省焦作市第二人民医院 454000

目的对类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞cd_(25)、HLA-DR的表达特征进行分析。方法取我院收治的31例类风湿关节炎患者患者作为研究对象,对其关节滑膜液淋巴细胞cd_(25)、HLA-DR的表达行流式细胞仪检测,设立正常对照组。结果风湿关节... 详细信息

目的对类风湿关节炎患者关节滑膜液淋巴细胞cd_(25)、HLA-DR的表达特征进行分析。方法取我院收治的31例类风湿关节炎患者患者作为研究对象,对其关节滑膜液淋巴细胞cd_(25)、HLA-DR的表达行流式细胞仪检测,设立正常对照组。结果风湿关节炎患者关节滑膜液表达cd_(25)的B淋巴细胞与表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞与正常对照组相比,差异有统计学意义(Pcd_(25)、HLA-DR的表达特征为增高,在类风湿关节炎患者发病机制中有重要作用。

关键词：类风湿关节炎关节滑膜液淋巴细胞 CD25 HLA-DR