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Gene expression of ccl8 and CXCL10 in peripheral blood leukocytes during early pregnancy in cows

Journal of Animal Science and Biotechnology 2018年第4期9卷 813-823页

作者： Ryosuke Sakumoto Kosuke Iga Ken-Go Hayashi Shiori Fujii Hiroko Kanahara Misa Hosoe Tadashi Furusawa Division of Animal Breeding and Reproduction Research Institute of Livestock and Grassland Science National Agriculture and Food Research Organization (NARO) Division of Livestock and Forage Research Tohoku Agricultural Research CenterNARO Division of Animal Sciences Institute of Agrobiological SciencesNARO

Background: The aim of the present study was to evaluate ccl8 and CXCL10 expression and its regulatory mechanism in peripheral blood leukocytes(PBLs) at the time of maternal recognition in cows. Blood samples were collected on 14, 15, 16, 17 and 18 d after artificial insemination(AI). Based on the day of return of estrus, cows were divided into three groups, pregnant(n = 5), early embryonic mortality(EEM; n = 5) and late embryonic mortality(LEM; n = 5). The gene expression levels in PBLs were assessed with quantitative real-time reverse transcription ***: The expression of ccl8 and CXCL10 mRNA in PBLs gradually increased from 14 to 18 d of pregnant cows and significant differences were observed on 18 d(P 8 d which was significant on 18 d of pregnant cows as well as in LEM cows(P ccl8 and CXCL10 in PBLs was regulated by pregnancy-related substances or not, expression level was assessed after exposure to interferon-τ(IFNT) and ccl16. Monocytes, granulocytes and lymphocytes were obtained using density-gradient centrifugation and flow cytometry. The addition of IFNT(100 ng/mL) and ccl16(100 ng/mL) to cultured PBLs increased the expression of ccl8 and CXCL10 mRNA(P ccl16(P ccl8 and CXCL10 genes increased in PBLs during early pregnancy. Since IFNT stimulated ccl8 and CXCL10 expression in cultured PBLs, the increase of ccl8 and CXCL10 might be pregnancy-dependent *** expression of both ccl8 and CXCL10 in PBLs was stimulated by ccl16 as wel as IFNT, suggesting a chemokine interaction that at least includes ccl8, CXCL10 and ccl16, and m

关键词： ccl8 Cow CXCL10 Leukocytes Pregnancy

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Chemokine ccl8 and its Receptor CCR5 in the Spinal Cord contributes to the maintenance of Visceral Pain following Inflammatory Bowel Disease in Mice

Chemokine CCL8 and its Receptor CCR5 in the Spinal Cord cont...

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中国神经科学学会第十二届全国学术会议

作者： Ying Lu Bao-Chun Jiang De-Li Cao Lin-Xia Zhao You-Li Zhang School of medicine Jiangsu University Department of Nutrition and Food Hygiene School of Public Health Nantong University Pain Research Laboratory Institute of Nautical Medicine Nantong University

Objective The pathogenesis of visceral pain caused by inflammatory bowel disease（IBD） is not well known, and as a result current therapies are ineffective. The objective of this study was to investigate the effects of spinal chemokine ccl8 and its primary receptor CCR5 on visceral hypersensitivity in mice with IBD to better understand the mechanism of visceral pain. Methods We injected mice intracolonically with 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid（TNBS） to induce IBD. Colonic inflammationwas detected by myeloperoxidase（MPO） activity assay. Visceral hypersensitivity was evaluated by measuring the nociceptive pain threshold in response to colorectal distension. The m RNA and protein level of ccl8 and CCR5 in the spinal cord was detected by Real-time PCR, ELISA or Western blot. The activation of extracellular signal-regulated kinase（ERK） was detected by Western blot. The cellular localization of spinal ccl8 and CCR5 were examined by double immunofluorescence. Varying doses of ccl8 neutralizing antibody or CCR5 antagonist were intrathecally administered to investigate the role of ccl8 and CCR5 in visceral hypersensitivity. Results Intracolonic injection of 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid（TNBS） in mice produced significant colonic inflammation and visceral hypersensitivity to colorectal distension. Moreover, the m RNA and protein expression of ccl8 and CCR5 in the lumbosacral spinal cord were greatly upregulated. Both of ccl8 and CCR5 were expressed in superficial dorsal horn neurons. Furthermore, TNBS induced the activation of extracellular signal-regulated kinase（ERK） in the spinal cord. The induction of visceral pain by TNBS was attenuated by intrathecal injection of ERK upstream kinase（MEK） inhibitor PD98059. Finally, intrathecal ccl8 neutralizing antibody or CCR5 antagonist DAPTA dose-dependently suppressed TNBS-evoked visceral hyperalgesia and spinal ERK activation. Conclusions ccl8 and CCR5, expressed and upregulated in spinal neurons after colonic inflammatio

关键词： Visceral hypersensitivity ccl8 CCR5 ERK Spinal cord

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ccl8在脑胶质瘤中表达的临床意义及相关机制研究

CCL8在脑胶质瘤中表达的临床意义及相关机制研究

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作者：程诗琦郑州大学

学位级别：硕士

背景:胶质瘤(Glioma)是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,具有高复发率及高致死率的特点。尽管胶质瘤的标准治疗有多种形式,包括手术、化疗和放疗,但其生存期仍然很短,胶质瘤中恶性程度最高的胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM,WHO Ⅳ级),其... 详细信息

背景:胶质瘤(Glioma)是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,具有高复发率及高致死率的特点。尽管胶质瘤的标准治疗有多种形式,包括手术、化疗和放疗,但其生存期仍然很短,胶质瘤中恶性程度最高的胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM,WHO Ⅳ级),其中位生存时间小于15个月。基于治疗胶质瘤过程中所面临的临床挑战,急需寻找新的治疗方法来提高临床效果。趋化因子是一类可以分泌到细胞外的小分子蛋白,主要作用是调节免疫细胞的趋化、招募,在肿瘤发生发展过程中发挥关键作用,已有很多研究表明可以利用其趋化特性来提高肿瘤免疫治疗的效果。CC趋化因子配体8(CC chemokine ligand 8,ccl8)也称作单核细胞趋化因子-2(monocyte chemoattractant protein-2,MCP-2),属于CC趋化因子家族成员。目前研究发现,ccl8在乳腺癌、黑色素瘤等多种恶性肿瘤组织中表达异常,并与多种恶性肿瘤的发生发展关系密切。然而,ccl8在胶质瘤组织中的表达及临床意义尚不清楚。因此,探究趋化因子ccl8在胶质瘤中的表达情况及临床意义就显得非常重要。目的:探究趋化因子ccl8在脑胶质瘤中表达的临床意义及相关机制。方法:***-PCR方法检测胶质瘤组织中ccl8的表达水平;2.分析 CGGA(Chinese Glioma Genome Atlas)、TCGA(The Cancer Genome Atlas)和临床标本中ccl8表达水平与胶质瘤WHO分级的关系;3.分析CGGA和TCGA数据库中ccl8表达水平与异柠檬酸脱氢酶(Isocitrate dehydrogenase,IDH)突变状态的关系及对IDH野生型(IDH wild-type,IDH-WT)胶质瘤的诊断价值;4.分析CGGA和TCGA数据库中ccl8表达水平与胶质瘤分子亚型的关系及对间质型(mesenchymal)胶质瘤的诊断价值;5.分析CGGA数据库中ccl8表达水平与免疫功能相关的基因簇之间的关系;6.分析CGGA和TCGA数据库中胶质瘤ccl8表达水平与T细胞功能的关系;7.分析CGGA和TCGA数据库中胶质瘤ccl8表达水平与巨噬细胞功能之间的关系;8.分析TCGA数据库中胶质瘤ccl8表达水平与组织中浸润的肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)之间的关系;9.分析TGGA数据库中胶质瘤ccl8表达水平对患者预后的影响。结果:1.与低级别胶质瘤(Low grade glioma,LGG)相比,胶质母细胞瘤组织中ccl8 mRNA表达水平显著升高;2.在CGGA、TCGA数据库中,与WHO Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤相比,GBM中ccl8 mRNA表达水平显著升高;3.与 IDH 突变型(IDH mutant-type,IDH-Mut)胶质瘤相比,ccl8mRNA在IDH-WT型胶质瘤中表达水平显著升高,且对IDH-WT型胶质瘤具有诊断价值;4.与胶质瘤其他分子亚型相比,ccl8 mRNA在间质亚型胶质瘤中的表达水平显著升高,且对间质型胶质瘤具有诊断价值;5.胶质瘤中ccl8 mRNA表达水平与代表巨噬细胞功能和T细胞功能的基因簇呈正相关;***8与T细胞活化、细胞因子产生和免疫应答等过程呈正相关,而与T细胞介导的对肿瘤细胞的免疫反应呈负相关;***8与巨噬细胞活化、分化以及细胞因子产生等过程均呈现明显的正相关;8.胶质瘤中ccl8表达水平与组织中浸润的肿瘤相关巨噬细胞关系密切;***8 mRNA高表达组的胶质瘤患者平均生存时间显著低于低表达组患者。结论:1.胶质瘤中ccl8的表达水平与其恶性表型关系密切。2.胶质瘤中ccl8的表达水平与肿瘤组织中浸润的M2型巨噬细胞呈显著正相关。3.胶质瘤中ccl8表达水平升高预示患者的不良预后。

关键词：胶质瘤 ccl8 巨噬细胞

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人趋化因子ccl5和ccl8的重组制备及功能表征

人趋化因子CCL5和CCL8的重组制备及功能表征

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作者：孙婷婷中国石油大学(华东)

学位级别：硕士

趋化因子ccl5、ccl8是一类具有细胞趋化活性的细胞因子,它们及其受体在细胞免疫炎症反应等多种疾病过程中发挥着重要作用,是重要的药物设计模板或作用靶点。尽管其分子量较小,且结构相对简单,但是关于趋化因子及其受体的研究受限于两方... 详细信息

趋化因子ccl5、ccl8是一类具有细胞趋化活性的细胞因子,它们及其受体在细胞免疫炎症反应等多种疾病过程中发挥着重要作用,是重要的药物设计模板或作用靶点。尽管其分子量较小,且结构相对简单,但是关于趋化因子及其受体的研究受限于两方面的因素:1)天然趋化因子含量极低,而趋化因子在大肠杆菌中重组表达时极易形成包涵体,因此,对于趋化因子在大肠杆菌中毫克级、活性可溶性表达并应用于结构与功能研究和药物筛选的需求也越来越迫切。2)由于细胞免疫趋化系统的复杂性,同一个受体(CCR3)可以与多个趋化因子(如ccl5、ccl8、ccl11和ccl24等)相结合并发挥作用,因此,对于不同趋化因子与其同一受体相互作用的详细表征及其功能分析,对于更特异、高效的药物设计具有重要意义。针对以上问题,本论文以ccl8和ccl5为研究对象,首先对趋化因子在大肠杆菌体内的过量、可溶性表达方法进行了探索。通过优化载体构建方式以及系统优化诱导培养条件,实现了ccl8在大肠杆菌中的可溶性过量表达,并建立了简便有效的ccl8的纯化方法。采用该方法最终可获得纯度大于98%的ccl8蛋白约1.5 mg/L。圆二色光谱分析表明,所纯化制备的ccl8与其他典型趋化因子相似,表明其已基本正确折叠。通过石英晶体微天平(QCM)对ccl8与CCR3的体外相互作用研究表明,所制备ccl8可以与CCR3体外结合,经拟合得到其二者的平衡解离常数K为1.22×10。采用同样的方法,我们对ccl5的重组制备方法进行了研究。结果发现ccl5融合蛋白可以在大肠杆菌中实现过量可溶性表达,可以获得纯度在90%以上的融合蛋白约0.4 mg/L,并通过SDS-PAGE、Western-Blot、圆二色光谱等对融合蛋白进行了初步表征。然而,融合蛋白经酶切后,ccl5会出现大量沉淀,难以获得大量酶切后的重组ccl5蛋白。在上述工作的基础上,我们以ccl5为主要研究对象,探讨了分子伴侣GroEL和GroES辅助减少大肠杆菌表达包涵体的方法。采用将分子伴侣GroEL和GroES与ccl5质粒共转化,发现分子伴侣GroEL和GroES可以显著提高ccl5的可溶性表达。通过进一步优化共转化表达条件,获得0.47 mg/L的ccl5水溶性融合蛋白产量,产量提高了17.5%,包涵体的形成量明显减少,证明分子伴侣GroEL和GroES对ccl5融合蛋白具有辅助折叠作用,可以有效减少大肠杆菌包涵体的产生。最后,本论文还对不同趋化因子(ccl5、ccl8、ccl11和ccl24)与同一受体CCR3的相互作用进行了初步探讨。与其他几个趋化因子类似,我们证明实验室制备的趋化因子ccl8可以使瞬转表达在细胞膜上的CCR3-EGFP发生内化现象,同时具有细胞趋化活性,且该趋化活性呈现明显的浓度依赖性,当趋化因子浓度为200nM时,趋化指数可达4.76。趋化实验还表明,该四种趋化因子均具有显著地细胞趋化活性,但是不同趋化因子的趋化能力具有显著差别,ccl5与ccl8的趋化活性要略低于ccl11和ccl24。此外,我们还对趋化因子引起的钙流现象进行了初步探索。本研究为明晰不同趋化因子对同一受体的偏好性激活现象提供了一定的方法和实验基础。

关键词：趋化因子 ccl5 ccl8 分子伴侣

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ccl8在疾病免疫调节中的作用

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国际免疫学杂志 2016年第3期39卷 250-253页

作者：周倩张国龙王秀丽上海市皮肤病医院、同济大学医学院光医学研究所 200443

单核细胞趋化蛋白2（MCP-2）即ccl8是cc趋化蛋白家族中的一员，可通过与CCR1、CCR2、CCR3和CCR5受体结合，招募单核细胞、T细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、NK细胞和树突状细胞在炎症反应、抗瘤免疫和aGVHD中发挥着重要的免疫调节作用。... 详细信息

单核细胞趋化蛋白2（MCP-2）即ccl8是cc趋化蛋白家族中的一员，可通过与CCR1、CCR2、CCR3和CCR5受体结合，招募单核细胞、T细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、NK细胞和树突状细胞在炎症反应、抗瘤免疫和aGVHD中发挥着重要的免疫调节作用。研究ccl8的一般分子生物学特性及其在疾病免疫调节中作用可以促进对其进一步的研究，因而具有重要意义。

关键词：免疫趋化因子 ccl8

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趋化因子ccl8及其在疾病研究中的进展

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热带医学杂志 2015年第9期15卷 1287-1291页

作者：刘记岑俊杰吕志跃吴忠道中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510080 中山大学中山医学院热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080

趋化因子ccl8是趋化因子CC家族中的一员,它在血液和组织中的水平改变与许多炎症和感染性疾病密切相关。目前关于趋化因子ccl8的研究尚少,人们尚未完全认识其功能与特性。本文就趋化因子ccl8的生物遗传学特性及其在疾病研究中的进展进行... 详细信息

趋化因子ccl8是趋化因子CC家族中的一员,它在血液和组织中的水平改变与许多炎症和感染性疾病密切相关。目前关于趋化因子ccl8的研究尚少,人们尚未完全认识其功能与特性。本文就趋化因子ccl8的生物遗传学特性及其在疾病研究中的进展进行综述。

关键词： ccl8 趋化因子炎症感染性疾病

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多房棘球蚴病患者肝病灶组织差异表达基因的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第1期39卷 48-54页

作者：朱吉海曹得萍赵珺刘珺史虎祥刘燕青海大学附属医院西宁810001 青海大学医学院西宁810001

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠肝差异基因在多房棘球蚴病患者肝病灶组织中的表达情况及意义。方法选取高通量基因表达数据库中编号为GSE24376的小鼠感染多房棘球蚴基因芯片数据集,分析感染小鼠和未感染小鼠之间的差异表达基因,对差异表达... 详细信息

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠肝差异基因在多房棘球蚴病患者肝病灶组织中的表达情况及意义。方法选取高通量基因表达数据库中编号为GSE24376的小鼠感染多房棘球蚴基因芯片数据集,分析感染小鼠和未感染小鼠之间的差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体(GO)分析。取6例多房棘球蚴病患者肝病灶组织和距离病灶组织2 cm的周围肝组织,采用荧光定量PCR检测2个高表达差异基因mRNA相对转录水平。取45份多房棘球蚴病患者石蜡包埋肝组织样品(炎性反应和肝纤维化改变严重的病灶29份,较少炎性细胞浸润和肝纤维化病变的肝组织16份),采用免疫组化法分析2个高表达差异基因的表达情况。用SPSS 21.0统计学软件对数据进行统计分析。结果生物信息学分析结果显示,共筛选出21个差异表达基因,其中9个基因表达上调,12个基因表达下调。GO分析结果显示,差异基因主要位于细胞内囊泡及细胞外基质等细胞成分中,参与了中性粒细胞的脱颗粒及活化等生物过程,并且具有CC趋化因子受体结合活性及趋化因子活性。高表达差异基因CHI3L3 (在人体中为CHI3L1)和ccl8荧光定量PCR结果显示,6例多房棘球蚴病患者肝病灶组织中CHI3L1和ccl8 mRNA相对转录水平均高于病灶周围肝组织(P ccl8蛋白高表达。16份多房棘球蚴病患者肝组织轻微炎症样品中,2份(占13%)呈CHI3L1蛋白阳性;4份(占33%)呈ccl8蛋白阳性。炎性反应和肝纤维化改变严重的病灶组织中,CHI3L1和ccl8蛋白的阳性表达率分别达96%和97%,均高于轻微炎症肝组织的3%和8%(P ccl8蛋白在多房棘球蚴病患者肝组织中表达增高,提示二者在机体对虫体的免疫应答过程中发挥了一定作用。

关键词：多房棘球蚴感染差异表达基因 CHI3L3 ccl8

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急性感染性荨麻疹的临床分析及相关炎症分子的初步探索

急性感染性荨麻疹的临床分析及相关炎症分子的初步探索

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作者：刘哲彰南昌大学

学位级别：硕士

背景和目的:急性感染性荨麻疹是急性荨麻疹的一种特殊类型,其风团持续时间更长,常伴有发热、胸闷、腹痛等症状,治疗上需要将糖皮质激素和抗生素联合使用,目前确切的发病机制尚不清楚;我们旨在比较分析急性感染性荨麻疹和急性非感染性荨... 详细信息

背景和目的:急性感染性荨麻疹是急性荨麻疹的一种特殊类型,其风团持续时间更长,常伴有发热、胸闷、腹痛等症状,治疗上需要将糖皮质激素和抗生素联合使用,目前确切的发病机制尚不清楚;我们旨在比较分析急性感染性荨麻疹和急性非感染性荨麻疹患者的临床特征及两者间相关炎症分子的表达水平,进一步探索急性感染性荨麻疹的发病机制。方法:研究纳入了18例急性感染性荨麻疹患者和18例急性非感染性荨麻疹患者。首先,我们对两组患者的临床特征及血清中前炎症因子的表达差异进行统计分析;其次,检测治疗前后急性感染性荨麻疹患者血清中辅助性T细胞(Th细胞)相关细胞因子和感染相关趋化因子的表达水平;最后,通过HE染色和免疫组化进一步研究患者皮损中的中性粒细胞与中性粒细胞来源的髓过氧化物酶(MPO)之间的关系。结果:急性感染性荨麻疹组的白细胞、中性粒细胞、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(D-dimer)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-8的表达水平显著高于急性非感染性荨麻疹组。治疗前急性感染性荨麻疹组血清的趋化因子ccl8表达水平明显高于治疗后。同时,本研究发现急性感染性荨麻疹组血清CRP与IL-6的表达水平间呈显著正相关,血清ccl8及CRP的表达水平均与中性粒细胞数呈显著正相关。两组的皮损在HE染色下均未见中性粒细胞浸润,但在免疫组化中可见到急性感染性荨麻疹的皮损中MPO表达呈阳性。结论:我们推测感染因素所介导的机体炎症反应在急性感染性荨麻疹的发病中扮演着重要作用,中性粒细胞可能参与其发病过程,血清IL-8和ccl8的表达升高可能与体内中性粒细胞的升高和活化相关,同时其皮损中可见到MPO的阳性表达,这可能直接参与其特殊皮损的形成。

关键词：急性感染性荨麻疹 ccl8 中性粒细胞 MPO

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