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四川大学学报（医学版） 2018年第5期49卷 716-719页

作者：严崎方窦磊宦俊杨德琴重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科重庆401147 重庆医科大学附属口腔医院口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆401147 重庆医科大学附属口腔医院重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室重庆401147

目的探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓细胞,... 详细信息

目的探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓细胞,在体外采用CGF或矿物三氧化物聚合体(mineral trioxide aggregate,MTA)处理人牙髓细胞,分别在第1、3、7天,cck-8法测定各组细胞增殖水平、碱性磷酸酶活性、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果与MTA组相比,CGF组的细胞增殖能力增强,S期细胞的比例增加,且第3、7天ALP活性增高(P增殖,抗凋亡以及诱导成骨/成牙分化的能力。

关键词：血小板浓缩生长因子矿化三氧化物聚合物牙髓细胞 cck8增殖成牙分化

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血小板浓缩生长因子盖髓效果的体内外研究

血小板浓缩生长因子盖髓效果的体内外研究

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作者：严崎方重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景:牙髓组织具有形成功能、营养功能、感觉功能、防御功能,对牙齿行使正常功能具有着重要意义,直接盖髓治疗是临床保髓的重要方法。选择合适的盖髓材料是直接盖髓治疗的一个重要环节,并会影响患牙的预后。目前临床上常用的盖髓材... 详细信息

研究背景:牙髓组织具有形成功能、营养功能、感觉功能、防御功能,对牙齿行使正常功能具有着重要意义,直接盖髓治疗是临床保髓的重要方法。选择合适的盖髓材料是直接盖髓治疗的一个重要环节,并会影响患牙的预后。目前临床上常用的盖髓材料有氢氧化钙和矿物三氧化物聚合体(MTA,mineral trioxide aggregate),但各自存在着许多不足。氢氧化钙直接盖髓后,易引起牙髓的炎症反应和牙髓钙化。MTA也存在着许多缺点,如其固化时间较长,不易塑形,容易使牙齿变色,成本较高等。因此,探索研究更理想的直接盖髓材料是有必要的,血小板浓缩生长因子(CGF,concentrated growth factors)作为新一代的血小板浓缩制品,具有良好的生物相容性,可从自体外周血获取,富含多种生长因子,具有抗炎、促进组织修复的作用,已有报道支持CGF可能是一种潜在的直接盖髓材料。目的:本课题拟研究CGF在体外对人牙髓细胞存活、增殖及矿化的作用,以及在动物模型中直接盖髓后修复性牙本质形成和牙髓炎症反应情况,进而评估CGF用作直接盖髓材料的可行性。方法:在重庆医科大学附属口腔医院颌面外科门诊收集因正畸治疗拔除的健康恒牙,获取人牙髓组织,采用改良组织酶消化法分离培养人牙髓细胞(hDPCs,human dental pulp cells);采集健康人外周血,离心提取CGF;在体外分别采用CGF和MTA处理hDPCs,在处理后第1、3和7天时采用cck8法检测细胞的增殖情况,采用碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测处理后细胞的碱性磷酸酶活性,采用PI染液处理细胞后流式细胞仪检测细胞周期分布,采用Annexin V细胞凋亡试剂盒检测处理后细胞的凋亡情况。选择10月龄比格犬2只(共计16颗牙齿),颊侧制备V类洞,造成约0.5mm直径穿髓孔,建立牙髓暴露的动物直接盖髓研究模型,分别采用CGF和MTA对其行直接盖髓术,化学固化玻璃离子垫底,复合树脂3M Z350 XT充填。2个月后,拍摄X线片观察根尖周组织情况,注射过量麻醉剂将实验犬安乐死后拔出实验牙,多聚甲醛固定,采用Micro CT检测直接盖髓后牙本质桥形成情况,采用苏木精-伊红(HE,Hematoxylin and Eosin)染色检测盖髓处牙髓组织的炎症情况。采用秩和检验和单因素方差分析对实验数据进行统计分析。结果:体外细胞实验结果表明CGF诱导细胞增殖能力强于MTA;与MTA组相比,CGF组S期细胞的比例增加;碱性磷酸酶活性检测显示CGF组ALP活性高于空白对照组。第1,7天CGF处理组hDPCs凋亡率明显低于MTA。X线片和锥形束CT结果显示CGF和MTA盖髓后均很少导致根尖周暗影,Micro CT检测显示CGF组牙本质钙化桥形成较MTA组弱。组织学检查显示CGF和MTA直接盖髓后均无明显的炎症反应。结论:CGF是一种无细胞毒性,具有良好的生物相容性和生物活性的自体生物材料,在体外具有促进牙髓细胞增殖,抗凋亡的作用,在体内不会引起牙髓组织炎症反应,具有作为直接盖髓材料的应用价值,在将来可以考虑单独或联合用于盖髓治疗。

关键词：血小板浓缩生长因子矿化三氧化物聚合物 cck8增殖成牙分化直接盖髓

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