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拟南芥总RNA的提取及RT-PCR扩增cbf1基因

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考试周刊 2016年第4期 168-170页

作者：熊结标南昌大学生命科学学院

cbf1基因的扩增是研究植物抗旱基因的前期工作。本研究用Trizol试剂法提取模式植物拟南芥叶片的总RNA,经过反转录进行PCR扩增,将产物DNA回收后,连接PCR片段与T载体,电击转化入***大肠杆菌感受态细胞;涂平板长出菌落,挑取半个白斑菌落电... 详细信息

cbf1基因的扩增是研究植物抗旱基因的前期工作。本研究用Trizol试剂法提取模式植物拟南芥叶片的总RNA,经过反转录进行PCR扩增,将产物DNA回收后,连接PCR片段与T载体,电击转化入***大肠杆菌感受态细胞;涂平板长出菌落,挑取半个白斑菌落电泳鉴定转化子;鉴定完成后提取质粒,用双酶切法进行鉴定,结果表明获得cbf1基因。

关键词：拟南芥 RNA 抗旱基因 cbf1

利用PCR方法对cbf1在多种植物中同源性的研究

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利用PCR方法对CBF1在多种植物中同源性的研究

转录因子cbf1基因的克隆及在百脉根中的表达

2005年全国植物逆境生理与分子生物学研讨会

作者：严海燕蔡绮张越中国科学院武汉植物园中国科学院武汉植物园中国科学院武汉植物园

＜正＞低温冻害是农业生产中一种严重的自然灾害,也是许多农作物区域性和季节性的限定因素,因低温引起的植物（如粮、棉、油料作物和园艺作物等）伤害常常造成农作物的严重减产甚至绝收。近年来在拟南芥新发现的一系列cbf（CRT/DRE bind... 详细信息

＜正＞低温冻害是农业生产中一种严重的自然灾害,也是许多农作物区域性和季节性的限定因素,因低温引起的植物（如粮、棉、油料作物和园艺作物等）伤害常常造成农作物的严重减产甚至绝收。近年来在拟南芥新发现的一系列cbf（CRT/DRE binding factor,CRT（c-repeat））能够诱导多方面的基因表达,从而提高抗冻性。它们是植物抗冻适应机制中重要的调控因子, 可望成为基因工程提高植物抗冻性重要工具。研究cbf在植物界中存在的普遍性问题将为其实际应用提供参考。人们相继在油菜、小麦、黑麦、番茄中发现了类似cbf的蛋白,为其普遍存在提供了一些证据。为了进一步证明cbf冷调控系统存在的普遍性,我们PCR对25种植物进行了检验。

关键词： cbf1 抗冻基因同源性

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转录因子CBF1基因的克隆及在百脉根中的表达

低温胁迫下拟南芥cbf1超表达突变体Ca2+变化分析

增强自主创新能力促进吉林经济发展——启明杯·吉林省第四届科学技术学术年会

作者：郭喜英刘艳芝韦正乙邢少辰东北师范大学

许多低温相关基因的启动子中都含有CRT/DRE元件,cbf1蛋白可以和这个元件结合而使这些基因得以表达。本研究依据GeneBank数据库中发表的cbf1的基因序列设计引物,以拟南芥基因组DNA为模板,利用PCR扩增得到cbf1基因序列。测序结果表明,与Ge... 详细信息

许多低温相关基因的启动子中都含有CRT/DRE元件,cbf1蛋白可以和这个元件结合而使这些基因得以表达。本研究依据GeneBank数据库中发表的cbf1的基因序列设计引物,以拟南芥基因组DNA为模板,利用PCR扩增得到cbf1基因序列。测序结果表明,与GeneBank数据库中发表的cbf1的基因序列完全相同。构建植物表达载体,利用农杆菌转化的方法转到百脉根中,经初步检测,得到转cbf1基因的百脉根植株,为利用cbf1基因提高植物的抗寒性奠定了基础。

关键词： cbf1 低温抗寒低温相关基因

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低温胁迫下拟南芥CBF1超表达突变体Ca2+变化分析

农杆菌介导的cbf1基因对松南结缕草的遗传转化

中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会

作者：张国增白玲宋纯鹏河南大学生命科学学院河南省植物逆境生物学重点实验室

＜正＞低温是限制许多植物地理分布和生长的环境因子,严重影响着世界上作物的产量和品质。同时,细胞内Ca2﹢浓度的变化已被证明是低温信号转导通路中的重要环节。以拟南芥cbf1超表达突变体为材料研究了

关键词：水母发光蛋白拟南芥钙离子 cbf1 低温胁迫

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园艺学报 2005年第5期32卷 953-953页

作者：王渭霞朱廷恒胡张华陈锦清玄松南中国水稻研究所杭州310006 浙江工业大学生物与环境工程学院杭州310014 浙江省农业科学院杭州310021

cbf1(C-repeat/dehydration responsive element binding factors 1)基因为来源于拟南芥的一类与干旱、高盐及低温耐性有关的转录因子基因.松南结缕草(Zoysia sp.)是本实验室育成的形态特征介于日本结缕草与沟叶结缕草之间的一种中型结... 详细信息

cbf1(C-repeat/dehydration responsive element binding factors 1)基因为来源于拟南芥的一类与干旱、高盐及低温耐性有关的转录因子基因.松南结缕草(Zoysia sp.)是本实验室育成的形态特征介于日本结缕草与沟叶结缕草之间的一种中型结缕草,在长江以南地区广泛种植.作者将cbf1基因转入松南结缕草,以改良其抗逆性.

关键词：农杆菌结缕草转化 cbf1

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转cbf_1基因棉花的耐旱生理研究

西北植物学报 2015年第12期35卷 2497-2504页

作者：孔德真崔郑龙柴秀娟祝建波沈海涛王爱英新疆石河子大学生命科学学院新疆石河子832000

以转cbf_1基因棉花及其野生型棉花为材料,设置轻度(900 mL)、中度(400 mL)、重度(300 mL)和对照(1 200mL)浇水处理的不同干旱胁迫和复水处理,考察各种处理后对盆栽植株不同部位叶片光合性能和离体叶片在暗处理条件下叶绿素含量的变化,... 详细信息

以转cbf_1基因棉花及其野生型棉花为材料,设置轻度(900 mL)、中度(400 mL)、重度(300 mL)和对照(1 200mL)浇水处理的不同干旱胁迫和复水处理,考察各种处理后对盆栽植株不同部位叶片光合性能和离体叶片在暗处理条件下叶绿素含量的变化,以及在大田苗期、蕾期、花期、铃期断水胁迫对棉花产量的影响,为转基因抗旱棉花新品种的培育提供理论依据。结果表明:(1)在盆栽试验中,随着干旱胁迫时间的延长和复水3d处理,各浇水处理的转基因和野生型棉花叶片净光合速率(P_n)、原初光能转化效率(F_v/F_m)表现出先降低后增加的变化趋势,受到胁迫后对顶部叶片的影响比中部叶片大,且转基因棉花叶片保留数量显著高于野生型棉花;它们的离体叶片叶绿素a、叶绿素b的含量随着干旱胁迫时间的延长而逐渐下降,但转基因棉花的下降速率显著低于野生型棉花。(2)在田间试验的苗期、蕾期、花期、铃期干旱胁迫下,各干旱胁迫处理的转基因植株的皮棉产量、衣分、种子质量、株高均显著高于野生型棉花;转基因棉花的籽棉产量分别比正常灌溉处理降低了78.4%、55.1%、12.7%、8.3%,野生型棉花则分别降低了80.4%、55.4%、19.2%、14.4%,不同时期的水分胁迫严重影响了棉花籽棉产量,但是转基因棉花的籽棉产量显著高于野生型棉花。研究认为,在不同干旱胁迫条件下,转cbf_1基因棉花表现出优良的生长和生理优势,可提高棉花的耐旱性。

关键词：转基因棉花耐旱性 cbf1 光合效率叶绿素含量

哈密瓜果实转录因子Cmcbf_1的克隆及表达分析

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新疆农业科学 2017年第10期54卷 1765-1774页

作者：张婷潘俨孟新涛郑素慧徐斌新疆农业科院农产品贮藏加工研究所乌鲁木齐830091

【目的】研究cbf在哈密瓜果实采后抗冷过程中的调控功能,对转录因子Cmcbf_1进行克隆与表达分析,为进一步研究哈密瓜果实低温贮藏过程中的冷害发生机制提供理论依据。【方法】以新密3号采后离体果实为试材,根据已报道的甜瓜cbf1预测序列(... 详细信息

【目的】研究cbf在哈密瓜果实采后抗冷过程中的调控功能,对转录因子Cmcbf_1进行克隆与表达分析,为进一步研究哈密瓜果实低温贮藏过程中的冷害发生机制提供理论依据。【方法】以新密3号采后离体果实为试材,根据已报道的甜瓜cbf1预测序列(XM_008440940),与基因组甜瓜组(https://***)进行BLAST比对,确定基因编码区起始和终止位置,针对cbf1编码区设计特异性引物,通过对果实c DNA进行扩增,获得cbf1全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其在不同温度条件下的表达特性。【结果】克隆获得哈密瓜果实转录因子cbf1,命名为Cmcbf_1,该基因序列为639 bp(Gen Bank登录号为KT737742),编码212个氨基酸,蛋白质分子量为23.89 k Da,等电点为5.23;同源性分析表明,哈密瓜果实转录因子Cmcbf_1与草莓Fa cbf1亲缘关系较近,达到85%。qRT-PCR分析结果显示,哈密瓜果实转录因子Cmcbf_1在1、3及5℃低温诱导条件下特异性表达,在20℃室温条件下几乎不表达。【结论】转录因子Cmcbf1的表达与哈密瓜果实采后冷害发生负相关(r=-0.663)。

关键词：哈密瓜 Cm cbf1 克隆表达

Atcbf1基因转化水稻和拟南芥的比较研究

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AtCBF1基因转化水稻和拟南芥的比较研究

作者：金建凤浙江大学

学位级别：硕士

低温是影响植物生长的重要环境限制因素。植物在低温处理后，一方面，传递低温信号和调控基因表达的调节性蛋白被诱导，另一方面，直接保护细胞的功能性蛋白也被诱导。拟南芥cbf1基因，是一个响应低温的转录激活因子，能开启一系列抗冷... 详细信息

低温是影响植物生长的重要环境限制因素。植物在低温处理后，一方面，传递低温信号和调控基因表达的调节性蛋白被诱导，另一方面，直接保护细胞的功能性蛋白也被诱导。拟南芥cbf1基因，是一个响应低温的转录激活因子，能开启一系列抗冷相关基因的表达。本实验以cbf1基因为主要研究对象，利用农杆菌介导法转化水稻愈伤组织和拟南芥植株，并对转基因后代开展了抗冻性、形态变异观察、T-DNA插入位点分析以及遗传稳定性分析。同时还制作了一系列供深入研究cbf1功能的拟南芥遗传材料。取得以下主要结果： 1 将cbf1基因与CaMV-35S启动子融合构建植株表达载体pCAMBIA1301-cbf1，以农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织和拟南芥植株，获得转化植株。经cbf1基因的PCR鉴定和转基因后代(水稻T1和拟南芥T1、T2和T3代)的潮霉素抗性分析和GUS报告基因分析，获得单位点插入的转基因水稻株系2个，拟南芥单位点插入的转基因纯系1个。 2 水稻植株和悬浮细胞的脯氨酸含量测定及小苗冻害观测结果表明，cbf1基因的表达有利于提高转基因植株的脯氨酸含量，进而提高植株的抗冻能力。 3 转基因水稻植株不产生矮化等表型变异;转基因拟南芥表型变异明显，3号株系出现白化叶等表型变异，但这些表型变异可能是由T-DNA插入突变引起。 4 利用Tail-PCR法进行T-DNA插入位点分析。在水稻基因组中检测到T-DNA的存在，但具体位置不能确定。拟南芥转基因植株中，确定了2个株系的插入位点。1号株系，插入在1号染色体上的一个At1g11670(功能未知)基因的第二个外显子内;3号株系，插入于3号染色体上的一个At3g49880基因(糖基水解酶)内部。故推测3号株系出现的白化叶等表型变异可能和T-DNA插入失活糖基水解酶有关。 5 利用杂交制作一系列带有cbf1基因的突变体植株，得到Abi4-1-cbf1、Abi3-cbf1及esk1-cbf1的纯系;同时利用转基因方法得到拟南芥转AEQ植株纯系(AEQ是从水母中分离，是胞内高度灵敏的生物发光Ca指示剂)。

关键词：水稻拟南芥 cbf1 抗冻性脯氨酸农杆菌介导转基因 Tail-PCR杂交

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低温胁迫对赤霉素代谢的调控研究

北京林业大学学报 2014年第6期36卷 135-141页

作者：高琼钮世辉李伟陈晓阳北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室华南农业大学林学院

通过4℃处理,对模式植物拟南芥与烟草赤霉素(GA)代谢相关基因的表达进行了分析,结果表明:低温胁迫抑制赤霉素前体GGPP合成通路众多基因的表达,而促进催化GA失活酶编码基因及赤霉素受体基因的表达。通过对超表达Pt GA20ox、Pt GA2ox1及At... 详细信息

通过4℃处理,对模式植物拟南芥与烟草赤霉素(GA)代谢相关基因的表达进行了分析,结果表明:低温胁迫抑制赤霉素前体GGPP合成通路众多基因的表达,而促进催化GA失活酶编码基因及赤霉素受体基因的表达。通过对超表达Pt GA20ox、Pt GA2ox1及At cbf1的转基因烟草及4℃处理野生型烟草植株GA1含量及代谢相关基因的表达分析表明,低温胁迫下,GGPP合成与GA失活酶编码基因的表达属于主动调控,低温响应通路中关键因子cbf1可能参与了此调控过程,而赤霉素受体基因表达受到了低水平GA的反馈调控。该研究揭示低温胁迫下生长延滞可能是植物主动响应环境变化的过程,通过抑制前体积累及加速失活而降低GA水平可能在植物适应低温胁迫过程中发挥着重要作用。

关键词：赤霉素低温胁迫 cbf1 GGPP