检索结果-南通市图书馆

作者：付振坤大连医科大学

学位级别：硕士

研究背景:心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一种极具威胁性的疾病,它会导致患者心律失常以及心脏骤停,甚至导致患者猝死。心肌持续性缺血缺氧是导致心肌梗死的主要原因,在缺血缺氧之后,心肌细胞往往会出现损伤,严重损伤的心肌细胞... 详细信息

研究背景:心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一种极具威胁性的疾病,它会导致患者心律失常以及心脏骤停,甚至导致患者猝死。心肌持续性缺血缺氧是导致心肌梗死的主要原因,在缺血缺氧之后,心肌细胞往往会出现损伤,严重损伤的心肌细胞会启动细胞的死亡程序,例如:自噬(Autophagy),坏死(Necrosis),凋亡(Apoptosis),铁死亡(Ferroptosis),焦亡(Pyroptosis)等。其中自噬被认为是细胞质成分的整体降解和再循环利用的保守过程,对维持组织以及细胞的稳态具有重要作用。但一些研究表明,超过一定阈值的自噬可能是有害的,严重的缺血缺氧会导致心肌的严重自噬,这种异常的严重自噬会使相应心肌细胞加速损伤,促进心肌细胞死亡,从而促进心肌梗死的形成。钙蛋白酶(calpain,capn)是细胞内的中性半胱氨酸内肽酶。广泛存在的钙蛋白酶有钙蛋白酶1(u-calpain,capn1)、钙蛋白酶2(m-calpain,capn2),还有钙蛋白酶3(capn3)。其中capn1和capn2在各组织中普遍表达,而capn3只在骨骼肌中特异性表达。研究发现,在缺血缺氧以及缺血再灌注后,心肌细胞内Ca2+的浓度显著升高,导致capn2的激活。通过查阅GEO数据库,发现capn2在心肌缺血缺氧后表达量增加尤其显著,并且基本存在着随缺血缺氧的时间延长而增加的趋势,而且在缺血缺氧以及缺血再灌注损伤发生时伴随着心肌细胞自噬的显著增强,以上提示capn2可能参与心梗心肌自噬的发生与发展。在骨肉瘤细胞、神经细胞、肝细胞中capn2或其所在的capn家族会促进相应细胞自噬现象的发生,但在心脏中capn2对心肌细胞影响的研究尚未报道。已有报道称,PI3K/AKT/mTOR通路是调节细胞自噬的重要通路,但PI3K/AKT/mTOR信号通路是否作为capn2影响缺氧心肌细胞自噬的途径,仍有待于我们进一步探索。研究目的:1.探索在心肌梗死组织中capn2以及多种自噬指标(Beclin1、ATG5、P62)的表达特征;2.探索心肌细胞缺氧后capn2对于心肌细胞自噬的影响;3.探索心肌细胞缺氧后capn2是否通过PI3K/AKT/mTOR通路影响心肌细胞自噬。研究方法:1.心肌梗死组织中capn2以及多种自噬指标(Beclin1、ATG5、P62)的表达特征采用蛋白质免疫印记技术(Western Blot),并结合GEO数据库研究capn2以及多种自噬指标(Beclin1、ATG5、P62)在心肌梗死组织中的表达特征。2.心肌细胞缺氧后capn2对于细胞自噬的影响(1)培养心肌细胞2天后使细胞生长至对数期,生长状态良好汇合度达到80%左右,对细胞分别进行缺氧处理0小时,12小时,18小时,24小时,36小时,48小时,利用蛋白质免疫印记技术对各组缺氧细胞进行分析。根据capn2以及自噬指标(Beclin1、ATG5、P62)的表达情况最终选取24小时作为本实验缺氧条件。(2)通过缺氧处理心肌细胞24小时以及转染si-capn2对心肌细胞进行研究转染si-capn2进入心肌细胞中,首先利用q RT-PCR和Western Blot技术验证转染成功。然后利用Western Blot技术检测各组心肌细胞中Beclin1、ATG5、P62等自噬指标蛋白质水平的表达变化。(3)通过缺氧处理心肌细胞24小时以及添加外源性capn2抑制剂MDL28170对心肌细胞进行研究加入外源性capn2抑制剂MDL28170培养心肌细胞,根据加入抑制剂后心肌细胞的增殖能力和对capn2的抑制强度,选取10μmol/L作为本研究的实验条件。利用Western Blot技术验证抑制效果有意义。然后检测各组心肌细胞中Beclin1、ATG5、P62等自噬指标蛋白质水平的表达变化。***2通过PI3K/AKT/mTOR通路影响心肌细胞自噬(1)通过缺氧处理心肌细胞24小时以及转染si-capn2,利用Western Blot技术检测心肌细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关分子的表达变化。(2)通过缺氧处理心肌细胞24小时以及添加外源性capn2抑制剂MDL28170,利用Western Blot技术检测心肌细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关分子的表达变化。研究结果:1.在心肌梗死后,capn2表达增高,自噬现象增强。2.常氧条件下沉默或抑制capn2,心肌细胞自噬无明显变化;缺氧处理心肌细胞后capn2表达增多,同时细胞自噬增强;缺氧并沉默或缺氧并抑制capn2后与缺氧组相比capn2表达下降,与此同时细胞自噬减弱。3.常氧条件下沉默或抑制capn2,PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达无明显变化;缺氧处理心肌细胞后capn2表达增多,

关键词：心脏 capn2 自噬 PI3K/AKT/mTOR信号通路

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capn2在卵巢上皮性恶性肿瘤中的表达及临床意义

CAPN2在卵巢上皮性恶性肿瘤中的表达及临床意义

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作者：陈香楠苏州大学

学位级别：硕士

目的:检测钙蛋白酶2(calpain 2,capn2)在卵巢上皮性恶性肿瘤(Epithelial ovarian cancer,EOC)中的表达水平,探讨capn2在EOC(尤其是卵巢浆液性腺癌)中的作用,通过分析capn2于EOC患者的临床病理特征组间表达的差异,并探讨其对EOC患者预后... 详细信息

目的:检测钙蛋白酶2(calpain 2,capn2)在卵巢上皮性恶性肿瘤(Epithelial ovarian cancer,EOC)中的表达水平,探讨capn2在EOC(尤其是卵巢浆液性腺癌)中的作用,通过分析capn2于EOC患者的临床病理特征组间表达的差异,并探讨其对EOC患者预后的影响,旨在为靶向capn2用于EOC的早期诊断、治疗及监测预后提供理论依据。方法:收集于苏州大学附属第三医院接受手术治疗的卵巢肿瘤患者的标本,时间范围为2008年01月至2017年12月,其中实验组共68例标本(EOC)、对照组共11例标本(卵巢上皮性良性肿瘤),还有1例为卵巢上皮性交界性肿瘤。本研究采用免疫组织化学染色法对capn2在收集标本中的表达进行检测,并通过Mann-Whitney U检验分析capn2表达水平及其与卵巢肿瘤患者临床病理特征之间的相关性。此外,本研究还采用Kaplan-Meier法分析capn2的表达水平与EOC患者总生存期(Overall survival,OS)之间的关系,并采用Cox回归分析各临床病理特征对EOC患者预后的影响。结果:1、根据免疫组化结果,我们发现capn2主要分布在卵巢上皮性肿瘤细胞的胞浆,并且与良性对照组相比,capn2在EOC患者肿瘤组织中的表达水平显著升高,两者间有显著性差异(Z=-4.542,P2、在68例EOC患者中,47例(69.12%)年龄≥50岁,21例(30.88%)年龄capn2 染色 H-score 分别为 215.00(180.00,255.00)和 200.00(162.50,252.50),无统计学意义(Z=-0.133,P>0.05)。13例(19.12%)为早期(Ⅰ期)患者,55 例(80.88%)为中晚期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期)患者,capn2 的 H-score 评分为 185.00(135.00,225.00)和 215.00(180.00,255.00)(Z=-1.709,P>0.05),两组间的差别没有显著性。68例EOC患者中,未行淋巴结清扫者有39例(57.36%),行淋巴结清扫者有29例,其中无淋巴结转移者共22例(32.35%),有淋巴结转移者共7例(10.29%),capn2 染色 H-score 分别为 195.00(168.75,251.25)和 245.00(230.00,255.00)(Z=-1.429,P>0.05),表明差异没有统计学意义。68例EOC患者包括60例浆液性腺癌(88.23%)、6例粘液腺癌(8.83%)和2例子宫内膜样癌(2.94%),其中子宫内膜样癌未进行统计差异分析,前两者的capn2染色评分分别为215.00(180.00,253.75)和 192.50(135.00,290.00)(Z=-0.402,P>0.05),提示两者没有统计学差异。68 例EOC患者中,未有病理分化报告共7例(10.29%),有41例为低分化者(60.29%),有20例为中/高分化者(29.41%),低、中/高分化capn2染色H-score分别为200.00(175.00,242.50)和 247.50(196.25,282.50),两者差异有统计学意义(Z=-2.552,Pcapn2的表达相关,而其余临床病理指标无明显相关性。4、以EOC组织中capn2的免疫组化染色H-score=142.50为截断值,H-score2.50 的EOC患者OS为[67.00(60.95,77.38)]个月,H-score≥142.50的EOC患者OS为[35.00(31.92,38.08)]个月。EOC患者中capn2高表达者的OS明显低于capn2低表达者,且差异有统计学意义(P2,95%CI:1.007～3.408)、临床分期(HR=2.285,95%CI:1.056～4.946)以及 capn2 的表达水平(HR=4.730,95%CI:1.402～15.955)(P均capn2的表达水平是影响EOC患者预后的主要因素。根据多因素Cox模型分析,capn2表达水平(HR=3.888,95%CI:1.071～14.117)为EOC患者预后的独立影响因素,其差异有统计学意义(Pcapn2表达显著增高,capn2高表达的患者OS显著低于capn2低表达的患者,且capn2的表达水平为影响EOC患者预后的独立因素。capn2可能在EOC的发生发展中具有重要作用,也可作为评估EOC患者预后的新指标,有

关键词：钙蛋白酶 capn2 卵巢上皮性恶性肿瘤预后

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capn1和capn2增强顺铂诱导的食管癌细胞焦亡的分子机制及临床意义研究

CAPN1和CAPN2增强顺铂诱导的食管癌细胞焦亡的分子机制及临床意义...

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作者：李荣耀汕头大学

学位级别：硕士

研究背景与研究目的:食管癌是全球第七大常见癌症,传统的食管癌治疗方法包括手术、放疗、化疗和综合治疗。基于顺铂的化疗方案被广泛应用于晚期食管癌的一线治疗。然而,由于顺铂耐药和缺乏可靠的预测患者顺铂敏感性的生物标志物,食管癌... 详细信息

研究背景与研究目的:食管癌是全球第七大常见癌症,传统的食管癌治疗方法包括手术、放疗、化疗和综合治疗。基于顺铂的化疗方案被广泛应用于晚期食管癌的一线治疗。然而,由于顺铂耐药和缺乏可靠的预测患者顺铂敏感性的生物标志物,食管癌患者的生存和预后仍不理想。因此,寻找食管癌中顺铂敏感性的潜在生物标志物至关重要。有研究发现顺铂通过caspase-3/GSDME信号轴诱导肿瘤细胞焦亡（Pyroptosis）,从而增强肿瘤的顺铂敏感性。然而,顺铂诱导细胞焦亡的具体分子机制尚不清楚。本研究基于大样本的食管癌蛋白质组学数据,寻找影响食管癌细胞焦亡的关键分子,并探讨其参与顺铂诱导食管癌细胞焦亡的分子机制,为临床预测食管癌顺铂敏感性和预后提供理论依据。材料与方法:1)应用生物信息学综合分析124对食管癌与癌旁组织的蛋白质组学数据,分析细胞焦亡相关蛋白对食管癌患者预后的预测效能,从而筛选出关键蛋白进行验证。2)通过构建Cox比例风险回归模型,单因素和多因素独立预后分析,风险热图分析,ROC曲线分析,进一步评价候选分子capn1（calpain-1）和capn2（calpain-2）的预后价值。3)采用免疫组织化学的方法检测并分析108例食管癌患者接受同步放化疗治疗前的肿瘤活检组织中capn1和capn2的表达特征和临床意义。4)在细胞层面,应用钙蛋白酶抑制剂PD150606或Calpeptin处理,以及CRISPR-Cas9基因敲除capn1或capn2的食管癌细胞模型,通过钙蛋白酶活性检测,蛋白免疫印迹、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放检测和细胞活力检测,确定capn1和capn2是否参与顺铂诱导的食管癌细胞焦亡。5)通过CRISPR-Cas9基因敲除模型和蛋白免疫印迹实验探索capn1和capn2促进顺铂诱导食管癌细胞焦亡的分子机制。研究结果:1)蛋白质组学和生物信息学分析结果表明capn1和capn2是重要的食管癌细胞焦亡相关蛋白。与配对癌旁相比,细胞焦亡相关蛋白capn1的蛋白表达水平在124例食管癌组织中显著下调;capn1与capn2在食管癌组织中的蛋白表达量呈显著正相关;capn1和capn2的高表达与食管癌患者良好的总生存和无瘤生存相关。2)capn1和capn2联合病理分期的综合风险模型的患者预后预测效能比单独capn1、capn2或者p TNM分期的预测效能更高。3)在接受处理前的食管肿瘤活检样本中,capn1和capn2的高表达与食管癌患者同步放化疗的完全缓解和良好预后有关。4)细胞水平上,顺铂诱导食管癌细胞焦亡,联用钙蛋白酶抑制剂或者capn1/capn2的基因敲除均减少了顺铂处理后caspase-3和GSDME的剪切以及LDH的释放,细胞活力增加。这些结果表明,capn1和capn2在顺铂诱导细胞焦亡和顺铂敏感性中发挥重要作用。5)分子机制上,免疫印迹实验结果表明,顺铂处理后钙蛋白酶激活BAX和BAK,进而导致caspase-9和caspase-3的剪切,引发GSDME依赖的食管癌细胞焦亡。研究结论:capn1和capn2通过激活BAK/BAX-caspase-9-caspase-3-GSDME信号轴促进了顺铂诱导的食管癌细胞焦亡,增强了食管癌细胞的顺铂敏感性。capn1和capn2有望成为预测食管癌患者顺铂敏感性和良好预后的潜在生物标志物,为指导食管癌个性化治疗提供了新的思路。

关键词： capn1 capn2 顺铂敏感性细胞焦亡食管癌

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钙蛋白酶capn2在肾细胞癌中的表达及功能学研究

钙蛋白酶CAPN2在肾细胞癌中的表达及功能学研究

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作者：苗陈岿南京医科大学

学位级别：硕士

背景:钙蛋白酶2（capn2,calpain2）在各种恶性肿瘤中呈上调趋势。先前的研究已经报道了capn2在人类肿瘤中起着致癌因子的作用。然而,其对肾细胞癌（又称肾癌,renal cell carcinoma,RCC）转移和增殖能力的影响和潜在分子机制尚不清楚。... 详细信息

背景:钙蛋白酶2（capn2,calpain2）在各种恶性肿瘤中呈上调趋势。先前的研究已经报道了capn2在人类肿瘤中起着致癌因子的作用。然而,其对肾细胞癌（又称肾癌,renal cell carcinoma,RCC）转移和增殖能力的影响和潜在分子机制尚不清楚。故本研究拟定探索肾癌组织和细胞系中capn2的表达量,并进一步研究其在肾癌发展中的作用及潜在的调控机制。材料与方法:本研究采用实时荧光定量反转录-聚合酶连锁反应（quantitative real time-polymerase chain reaction,q RT-PCR）与免疫印迹法（Western Blot）,检测人肾癌细胞株和正常肾小管上皮细胞株HK-2、30对肾癌组织和邻近癌旁组织中capn2的信使RNA（messenger RNA,m RNA）和蛋白表达水平。通过组织芯片和免疫组织化学技术对74例肾癌术后肿瘤组织和正常肾脏组织进行capn2蛋白水平的检测。根据肾癌术后病人的临床随访数据,进行Kaplan-Meier生存曲线分析以评估capn2与肾肿瘤患者预后之间的相关性。通过Transwell穿膜实验和CCK-8（Cell Counting Kit-8）增殖实验测定肾癌细胞的迁移,侵袭和增殖能力。结果:qRT-PCR和Western Blot结果显示:与邻近的非肿瘤组织和正常人肾小管上皮细胞HK-2相比,capn2在人肾癌组织和肾癌细胞系中呈现出显著的过表达。通过随访74例肾癌患者标本的临床资料,我们发现capn2高表达与肾癌患者的肿瘤分期和组织学级别有明显的关联（*P＜0.05）。此外,体外细胞实验证实:敲低capn2的表达可显著抑制肾癌细胞系769-P与Caki-1的迁移、侵袭和增殖潜能。相反,在capn2过表达的Caki-2细胞系中可观察到细胞生物学潜力的增加。体内裸鼠皮下成瘤试验显示,敲低capn2组的皮下成瘤大小明显小于对照组（*P＜0.05）。挽救性实验表明,在肾癌细胞中过表达capn2的同时,加入Akt磷酸化抑制剂MK2206,能够抑制过表达capn2对肾癌生物学行为的促进作用,同时Akt磷酸化水平也显著下降。机制研究表明capn2可通过激活肾细胞癌中Akt/m TOR信号传导通路,增强上皮向间质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和MMP9蛋白表达量,促进肾癌迁移、增殖和恶性进展。结论:在肾细胞癌中,capn2可作为一种肿瘤促进因子,通过活化Akt/m TOR信号通路在肾癌转移和增殖中发挥调控作用。capn2可被视为评估肾癌进展的临床指标,成为肾癌患者治疗的一个新型靶点。

关键词： capn2 肾癌转移/增殖 EMT Akt/mTOR信号

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线粒体钙蛋白酶系统

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山西农业大学学报（自然科学版） 2017年第7期37卷 469-476页

作者：常泓尹淑琴袁建琴山西农业大学期刊社山西太谷030801 山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

[目的]综述线粒体蛋白酶系统的成员、功能及调控。[方法]文献综述法。[结果]钙蛋白酶一直被看作是细胞质酶,但是近几年的研究证明capn1、capn2和capn10存在于线粒体中,并在坏死和凋亡细胞死亡等一系列病理生理情况下起重要作用。[结论]... 详细信息

[目的]综述线粒体蛋白酶系统的成员、功能及调控。[方法]文献综述法。[结果]钙蛋白酶一直被看作是细胞质酶,但是近几年的研究证明capn1、capn2和capn10存在于线粒体中,并在坏死和凋亡细胞死亡等一系列病理生理情况下起重要作用。[结论]本文概述了线粒体蛋白酶系统的主要特征及它在细胞、普通生化和病理生理学中的一些作用。

关键词：线粒体 capn1 capn2 capn10 钙蛋白酶抑制蛋白细胞凋亡

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