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表皮生长因子受体反义RNA抑制胶质瘤细胞生长增殖的体外试验

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中国肿瘤临床 1998年第12期25卷 869-873页

作者：刘旭文刘爱学浦佩玉王广秀王春艳天津医科大学总医院神经外科

目的：研究表皮生长因子受体基因对于胶质瘤发生发展的作用，探索以ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ进行反义基因治疗胶质瘤的可行性。方法：将含ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的质粒通过脂质体介导转入Ｃ６恶性胶质瘤细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定... 详细信息

目的：研究表皮生长因子受体基因对于胶质瘤发生发展的作用，探索以ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ进行反义基因治疗胶质瘤的可行性。方法：将含ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的质粒通过脂质体介导转入Ｃ６恶性胶质瘤细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定外源基因整合情况，ＭＴＴ法测定细胞存活率，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、细胞原位ｍＲＮＡ杂交及ＥＧＦＲ免疫组化染色检测ＥＧＦＲｍＲＮＡ及蛋白表达，核仁组成区相关嗜银蛋白染色（ＡｇＮＯＲ计数）检测细胞增殖活性。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明外源性反义ＥＧＦＲ基因（互补于ＥＧＦＲ基因全长及３端部分序列）分别在Ｃ６细胞中整合（分别命名为Ｃ－ｐＲ１和Ｃ－ｐＲ３），通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、原位杂交及细胞免疫组织化学检测均显示转染ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的Ｃ６细胞比转染前ＥＧＦＲｍＲＮＡ水平及ＥＧＦＲ蛋白水平有不同程度的降低。表达高水平反义ＲＮＡ的克隆在培养状态下细胞增殖活性较对照组有明显下降。结论：ＥＧＦＲ在恶性胶质瘤细胞的发生发展过程中起十分关键的作用，ＥＧＦＲ有可能成为基因治疗恶性胶质瘤的优选靶的之一。

关键词：表皮生长因子受体反义RNA c6细胞胶质瘤

IL-24基因对大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响

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中华肿瘤杂志 2005年第3期27卷 141-144页

作者：李文玲单保恩闫蕴力郑力芬李巧霞周娜静赵文清河北医科大学基础所细胞生物室石家庄050017 河北医科大学第四医院科研中心河北省人民医院神经外科

目的　探讨IL 2 4基因对c6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响。方法　应用逆转录病毒载体 ,将IL 2 4基因导入c6细胞 ,经G4 18筛选后获得表达IL 2 4分子的阳性细胞克隆c6 /IL 2 4 ;用RT PcR方法检测目的基因表达 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检... 详细信息

目的　探讨IL 2 4基因对c6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响。方法　应用逆转录病毒载体 ,将IL 2 4基因导入c6细胞 ,经G4 18筛选后获得表达IL 2 4分子的阳性细胞克隆c6 /IL 2 4 ;用RT PcR方法检测目的基因表达 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞体外增殖状况 ,流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并制作荷瘤动物模型 ,观察c6 /IL 2 4和c6细胞的体内致瘤性。结果　RT PcR检测表明 ,外源IL 2 4基因于mRNA水平在c6 /IL 2 4细胞已获得稳定表达。c6 /IL 2 4细胞系的体外增殖性较亲代c6细胞明显下降 ,流式细胞术检测其细胞增殖指数 (PI)为 (2 9.71± 0 .89) %。 9只接种c6 /IL 2 4细胞的实验组大鼠中 ,6只颅内成瘤 ,肿瘤体积为 (14 .0 8± 9.81)mm3 ,明显小于接种c6细胞大鼠的肿瘤体积 (P 细胞异常增殖的肿瘤特性。

关键词： IL-24 c6细胞胶质瘤细胞大鼠目的基因肿瘤体积体外增殖 mRNA水平克隆生长状况

半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛

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浙江大学学报（医学版） 2009年第6期38卷 598-604页

作者：蔡蓓蕾黄雪琴董晓武方三华卢韵碧张纬萍胡永洲魏尔清浙江大学医学院药理学系浙江杭州310058 浙江大学药学院药物研究所浙江杭州310058

目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(cysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达cysLT2受体的大鼠c6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为cysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂... 详细信息

目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(cysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达cysLT2受体的大鼠c6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为cysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物。采用cysLT1/cysLT2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和cysLT2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照。结果:RT-PcR鉴定表明c6细胞高表达cysLT2受体。LTD41μmol/L能显著升高c6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37.5%。cysLT2受体拮抗剂抑制LTD4诱导的c6细胞内钙升高,cysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD4诱导的细胞内钙升高。结论:LTD4诱导的c6细胞的钙信号变化可作为cysLT2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有cysLT2受体拮抗活性。

关键词：半胱氨酸/遗传受体白三烯/遗传半胱氨酰白三烯 cysLT2受体受体拮抗剂钙离子 c6细胞

人胚胎神经干细胞体外条件下对胶质瘤细胞的趋向性特点

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第24期11卷 4690-4692页

作者：姬西团章翔费舟张剑宁刘卫平蒋晓帆宋少军宋蕾梁景文解放军第四军医大学西京医院全军神经外科研究所陕西省西安市710032

目的:以Hs683、3T3成纤维细胞作为对照,探讨人胚胎神经干细胞在体外条件下对SHG44、c6胶质瘤细胞的趋向性。方法:①来源于怀孕子宫肌瘤切除术或流产的10～14周胚胎(西安市中心医院妇产科、西安交大二院妇产科、北方医院妇产科提供),产... 详细信息

目的:以Hs683、3T3成纤维细胞作为对照,探讨人胚胎神经干细胞在体外条件下对SHG44、c6胶质瘤细胞的趋向性。方法:①来源于怀孕子宫肌瘤切除术或流产的10～14周胚胎(西安市中心医院妇产科、西安交大二院妇产科、北方医院妇产科提供),产妇及其家属均签署知情同意书。Hs683成纤维细胞系由田晓峰博士馈赠,SHG44胶质瘤细胞系、c6胶质瘤细胞系、3T3成纤维细胞系均为本研究所冻藏。②将原代培养8d的人胚胎神经干细胞悬液离心、收集备用,最终神经球浓度达8×104 L-1。③将预先消毒的盖玻片(24mm×24mm)放置于培养皿内,将SHG44胶质瘤细胞系、c6胶质瘤细胞系、Hs683成纤维细胞系、3T3成纤维细胞系的4组细胞复苏后,加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基。当各组细胞爬片上的细胞贴壁达75%～85%时,取出盖玻片,与上述制备的人胚神经球悬浮液共同培养。④将预先制备好的SHG44胶质瘤细胞、c6胶质瘤细胞、Hs683成纤维细胞、3T3成纤维细胞爬片(各10张)从培养瓶取出,置于新的培养皿,分别与神经干细胞克隆球在含体积分数为0.01～0.02胎牛血清的DMEM培养液中共培养72h,观察并统计各细胞系每张爬片的克隆球数。上述4种细胞爬片周边3mm以外相同面积、无胶质瘤/成纤维细胞区域作为其各自空白对照。⑤分别将神经干细胞克隆球+c6胶质瘤细胞+3T3成纤维细胞、神经干细胞克隆球+SHG44胶质瘤细胞+Hs683成纤维细胞同法共培养72h,观察人胚神经干细胞在SHG44、Hs683、c6、3T3细胞爬片上的分布情况。结果:①人胚神经干细胞对SHG44、c6胶质瘤细胞的趋向作用:SHG44/c6胶质瘤细胞+人胚神经干细胞克隆球共培养72h后,胶质瘤细胞爬片上的神经克隆球体积均有所增大,且数量均明显高于外周无胶质瘤细胞的空白对照区(P均细胞对Hs683、3T3成纤维细胞的趋向作用:Hs683/3T3成纤维细胞+人胚神经干细胞克隆球共培养72h后,成纤维细胞爬片上的神经克隆球数量与周围无成纤维细胞区基本相似(P均>0.05)。③人胚神经干细胞+SHG44/c6胶质瘤细胞+Hs683/3T3成纤维细胞共培养下的体外趋向作用:SHG44胶质瘤细胞+Hs683成纤维细胞+人胚神经干细胞共培养72h后,SHG44胶质瘤细胞爬片上的神经球数量明显多于Hs683成纤维细胞爬片(Pc6胶质瘤细胞+3T3成纤维细胞+人胚神经干细胞共培养72h后,c6胶质瘤细胞爬片上的神经球数量明显多于3T3成纤维细胞爬片(P细胞与胶质瘤细胞体外共培养后,神经球出现向胶质瘤细胞周围集聚的趋势,提示胶质瘤细胞可能分泌某种对神经干细胞有一定作用的活性因子。

关键词：趋向性 SHG44细胞 c6细胞神经干细胞

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

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畜牧兽医学报 2008年第3期39卷 337-342页

作者：李玉荣周向梅尹晓敏杨建民乔俊文赵德明中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing ... 详细信息

本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PcR鉴定,测序正确后,脂质体法转染c6细胞,采用实时荧光定量RT-PcR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低c6细胞PrP mRNA表达(Pc6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

关键词： RNAi c6细胞朊蛋白表达超氧化物歧化酶

脑胶质瘤MRI某些特征参数与病理对照的实验研究

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中国医科大学学报 2006年第3期35卷 288-289页

作者：关丽明佟志勇徐克方长兴刘树立中国医科大学附属第一医院放射科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院神经外科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院病理科辽宁沈阳110001

目的探讨大鼠c6脑胶质瘤磁共振成像(MRI)所测某些参数之间的相关性并与细胞密度和血管生成等病理组织学变化进行对照研究。方法采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种c6细胞,于接种7,14,21d行磁共振(MR)平扫及增强扫描。... 详细信息

目的探讨大鼠c6脑胶质瘤磁共振成像(MRI)所测某些参数之间的相关性并与细胞密度和血管生成等病理组织学变化进行对照研究。方法采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种c6细胞,于接种7,14,21d行磁共振(MR)平扫及增强扫描。大鼠处死后取脑组织HE染色。在各序列图像上测算肿瘤体积、肿瘤强化程度以及水肿指数(EI),与其病理表现进行对照分析。结果24只大鼠荷瘤成功,其MR表现与文献报道相似。肿瘤生长(肿瘤体积增大)伴随着细胞密度增加、血管生成增多和瘤周围组织水肿程度加重,肿瘤体积、强化程度和EI之间呈正相关。结论MRI能够显示大鼠脑胶质瘤的生长状态,所测肿瘤体积、强化程度和EI之间的相关性是肿瘤病理的集中体现。

关键词：胶质瘤磁共振成像 c6细胞大鼠动物模型病理组织学

黄芪多糖抑制大鼠神经胶质瘤细胞增殖的实验研究

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中国老年学杂志 2009年第1期29卷 41-43页

作者：孙聪韩业超洪敏马南南周文龙长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130117 吉林省兽药饲料监察所吉林大学白求恩医学部生物化学与分子生物学教研室

目的观察黄芪多糖抑制信号转导子与转录活化子3(STAT3)对大鼠神经胶质瘤c6细胞的影响。方法用黄芪多糖作用于体外培养的大鼠胶质瘤细胞株c6,MTT法观察黄芪多糖作用后胶质瘤细胞存活率的变化,并用流式细胞分析技术检测肿瘤细胞的凋亡情... 详细信息

目的观察黄芪多糖抑制信号转导子与转录活化子3(STAT3)对大鼠神经胶质瘤c6细胞的影响。方法用黄芪多糖作用于体外培养的大鼠胶质瘤细胞株c6,MTT法观察黄芪多糖作用后胶质瘤细胞存活率的变化,并用流式细胞分析技术检测肿瘤细胞的凋亡情况。通过West-ern印迹和半定量RT-PcR了解STAT3基因在不同水平的表达。结果黄芪多糖作用胶质瘤细胞株后肿瘤细胞存活率明显下降,肿瘤细胞凋亡比例升高。黄芪多糖对c6细胞存活率和凋亡的影响与黄芪多糖的浓度和作用时间有关。可使细胞内STAT3表达下降,同时mRNA水平也有所下降。结论黄芪多糖可以降低STAT3的表达,进而抑制大鼠c6细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡。

关键词：黄芪多糖 c6细胞 STAT3

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鳢肠水溶性部位的化学和药理研究

上海第二医科大学学报 2005年第3期25卷 223-226,231页

作者：杨韵若聂宝明邓克敏陈泽乃陆阳上海第二医科大学基础医学院化学教研室上海200025

目的研究鳢肠属植物鳢肠水溶性部位的化学成分及其药理活性。方法通过溶剂提取法和色谱技术分离化学成分,运用光谱手段进行结构鉴定,利用c6细胞和Pc12细胞观察鳢肠水溶性成分对细胞增殖活性的抑制作用。结果从该部位分离得到3个三萜皂苷... 详细信息

目的研究鳢肠属植物鳢肠水溶性部位的化学成分及其药理活性。方法通过溶剂提取法和色谱技术分离化学成分,运用光谱手段进行结构鉴定,利用c6细胞和Pc12细胞观察鳢肠水溶性成分对细胞增殖活性的抑制作用。结果从该部位分离得到3个三萜皂苷,分别为3-O-β-D-吡喃葡糖刺囊酸(Ⅰ)、3-O-β-D-吡喃葡糖刺囊酸-28-O-β-D-吡喃葡糖苷(Ⅱ)和3-O-(2-O-硫酰基-β-D-吡喃葡糖)刺囊酸(Ⅲ),还分离得到了豆甾醇(Ⅳ)和蟛蜞菊内酯(Ⅴ);化合物Ⅰ具有抑制c6细胞和Pc12细胞增殖的活性。结论化合物Ⅰ是鳢肠水溶性部位抑制细胞增殖的活性成分。

关键词：部位 c6细胞药理研究 Pc12细胞细胞增殖活性葡糖苷三萜皂苷鳢肠蟛蜞菊内酯

反义AKT2 cDNA治疗c6胶质瘤的体内外实验研究

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中华神经外科杂志 2005年第5期21卷 260-264页

作者：康春生浦佩玉李捷王虎董伦王广秀张云亭全冠民天津医科大学总医院神经外科天津市神经病学研究所300052 天津医科大学总医院MRI室天津市影像学研究所

目的研究反义AKT2(antisenseAKT2,ASAKT2)cDNA对鼠脑胶质瘤细胞系c6的生长抑制作用。方法将ASAKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系c6,原位杂交和蛋白印迹鉴定后,应用PcNA阳性率和MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法计算凋亡指数。应用立体... 详细信息

目的研究反义AKT2(antisenseAKT2,ASAKT2)cDNA对鼠脑胶质瘤细胞系c6的生长抑制作用。方法将ASAKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系c6,原位杂交和蛋白印迹鉴定后,应用PcNA阳性率和MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法计算凋亡指数。应用立体定向技术将c6细胞和转染反义AKT2cDNA的c6细胞种植到SD大鼠的右侧尾状核作为对照组和转染组;并对颅内已经形成c6胶质瘤的大鼠进行脂质体包裹的ASAKT2cDNA和空载体治疗;MRI动态监测大鼠颅内肿瘤生长情况,并检测标本AKT2和PcNA表达以及细胞的凋亡情况。结果转染ASAKT2cDNA后c6细胞AKT2表达显著抑制,增殖减慢,凋亡指数增加。反义治疗组和转染组大鼠生存时间明显延长;转染组和治疗组肿瘤标本AKT2表达下降或消失,PcNA阳性率降低,可见大量凋亡细胞,而对照组和空载组标本几乎没有凋亡细胞。结论体内外实验证明ASAKT2cDNA可以抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。

关键词： c6胶质瘤体内外 DNA治疗实验研究胶质瘤细胞系 cDNA 生长抑制作用 DNA构建体细胞增殖能力 MTT法检测 TUNEL法立体定向技术 PcNA表达肿瘤细胞增殖凋亡指数 c6细胞凋亡细胞脂质体包裹蛋白印迹原位杂交转染反义