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lncHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和细胞凋亡

医学分子生物学杂志 2024年第2期21卷 115-123页

作者：孟晓源乌尔坎·叶尔肯王志刚马乐新疆维吾尔自治区人民医院骨科中心关节运动病区乌鲁木齐市830001

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HOXD反义生长相关长链非编码RNA(HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA,lncHAGLR)对大鼠膝关节退行性软骨细胞c518细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制。方法采用StarBase和荧光素酶报告基因法预测和确认ln-cHAGLR和微小RNA(microRNA,miR)-26a之间的相互作用。为研究lncHAGLR对miR-26a表达的调控作用,将c518细胞分为沉默lncHAGLR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)载体质粒(si-ln-cHAGLR)组、siRNA的阴性对照(negative control of siRNA,si-Nc)组、miR-26a抑制剂阴性对照(nega-tive control of miR-26a inhibitor,inhibitor-Nc)组、miR-26a的抑制剂(miR-26a-inhibitor)组。此外,为研究lncHAGLR是否通过调控miR-26a对c518细胞的炎症和凋亡具有调控作用,将c518细胞分为5组:control组、白细胞介素(interleukin,IL)-1β组、IL-1β+si-Nc组、IL-1β+si-lncHAGLR组和IL-1β+si-lncHA-GLR+miR-26a-inhibitor组。采用实时定量PcR(real-time quantitative PcR,qRT-PcR)分析lncHAGLR和miR-26a的水平。采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydro-genase,LDH)和流式细胞术(flow cytometry,FcM)检测c518细胞的增殖、细胞毒性和凋亡情况。蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶3(cLEAVED-cASPASE3)、核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)、磷酸化的NF-κB P65(phosphorylated NF-κB P65,P-NF-κB P65)的表达。ELISA法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的释放。结果lncHAGLR直接靶向miR-26a。在IL-1β组,lncHAGLR水平明显较control组增高,miR-26a水平较control组降低(P均cHAGLR组减轻了IL-1β诱导的c518细胞的炎症并抑制了凋亡,而且细胞的活力增加,LDH释放减少,cLEAVED-cASPASE3的表达被抑制,TNF-α和IL-6的分泌减少,且p-NF-κB P65表达减少(P均cHAGLR+miR-26a-inhibitor组逆转了IL-1β+si-lncHAGLR组的结果(P均cHAGLR通过抑制miR-26a激活NF-κB促进c518细胞的炎症反应和细胞凋亡,表明lncHAGLR可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点。

关键词： lncHAGLR 骨关节炎 c518细胞细胞凋亡 miR-26a NF-κB P65

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鹿筋胶原蛋白多肽对骨细胞的作用

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时珍国医国药 2017年第11期28卷 2633-2635页

作者：庞博潘黛安魏星华齐滨白雪媛赵大庆赵雨张鹤长春中医药大学中医药与生物工程研发中心吉林长春130117 吉林省科普服务中心吉林长春130021 长春中医药大学附属医院实验中心吉林长春130021

目的研究鹿筋胶原蛋白中氨基酸组成及其对骨细胞的作用。方法以双酶法制备的鹿筋胶原蛋白多肽为研究对象,利用柱前衍生化的方法测定其氨基酸的相对含量;采用MTT法检测其对c518软骨细胞和Mc3T3-E1成骨细胞的增殖作用。结果在鹿筋胶原蛋白... 详细信息

目的研究鹿筋胶原蛋白中氨基酸组成及其对骨细胞的作用。方法以双酶法制备的鹿筋胶原蛋白多肽为研究对象,利用柱前衍生化的方法测定其氨基酸的相对含量;采用MTT法检测其对c518软骨细胞和Mc3T3-E1成骨细胞的增殖作用。结果在鹿筋胶原蛋白中,甘氨酸相对含量最高,为31.81%,羟脯氨酸的相对含量为6.99%,符合胶原蛋白组成的特点。与对照组比较,鹿筋胶原蛋白多肽对c518细胞、Mc3T3-E1细胞均具有显著的增殖作用,其增殖作用呈量效关系,当浓度为200μg/m L时,增殖作用最为显著。结论鹿筋胶原蛋白多肽对骨细胞具有明显的增殖作用,为其产品的开发提供理论依据。

关键词：鹿筋胶原蛋白多肽氨基酸 c518细胞 Mc3T3-E1细胞

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