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免疫组织化学方法检测皮损组织中c3d,c4d,IgG,IgG4及cd123表达在诊断自身免疫性皮肤病中的应用价值

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中南大学学报（医学版） 2019年第8期44卷 878-884页

作者：邓敏周星雨张静李亚萍中南大学湘雅二医院皮肤科

目的:探讨免疫组织化学方法检测皮损组织中c3d,c4d,IgG,IgG4及cd123表达在诊断自身免疫性皮肤病中的应用价值。方法:采用免疫组织化学方法检测27例红斑狼疮(其中8例盘状红斑狼疮、4例亚急性皮肤型红斑狼疮、15例系统性红斑狼疮)、15例... 详细信息

目的:探讨免疫组织化学方法检测皮损组织中c3d,c4d,IgG,IgG4及cd123表达在诊断自身免疫性皮肤病中的应用价值。方法:采用免疫组织化学方法检测27例红斑狼疮(其中8例盘状红斑狼疮、4例亚急性皮肤型红斑狼疮、15例系统性红斑狼疮)、15例皮肌炎、15例大疱性类天疱疮、15例天疱疮皮损组织石蜡切片中的c3d,c4d,IgG,IgG4及cd123表达情况;比较免疫组织化学染色与直接免疫荧光检测在红斑狼疮、大疱性类天疱疮、天疱疮皮损组织中上述5种抗体的阳性率。结果:红斑狼疮组皮损基底膜带的c3d,c4d阳性率分别为85.2%,51.9%,皮肌炎组c3d,c4d阳性率分别为40%,0;红斑狼疮组皮损组织中c3d,c4d表达水平均明显高于皮肌炎组(Pcd123蛋白的表达水平显著高于皮肌炎组(Pc3d,c4d阳性率分别为100%,86.7%,天疱疮组角质形成细胞间的c3d,c4d阳性率分别为100%,60%。天疱疮组皮损真皮内的IgG,IgG4表达水平明显高于大疱性类天疱疮组(Pc3d,c4d在红斑狼疮、大疱性类天疱疮和天疱疮中有重要的诊断价值,在某些情况下可能作为替代直接免疫荧光的诊断工具。cd123表达对于红斑狼疮的鉴别诊断有一定的临床意义,IgG4和IgG对于天疱疮有辅助诊断意义。

关键词： c3d c4d IgG IgG4 cd123 免疫组织化学自身免疫性皮肤病

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人源抗c3d单链抗体的筛选与鉴定

国际药学研究杂志 2020年第9期47卷 750-755页

作者：赵信平杜昕颖徐银凤韩冬赵江云郭卫光谢靖李环董灏刘肖杜鹏贾雷立中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071

目的从噬菌体展示单链抗体库中筛选获得人源抗人c3d单链抗体,并评价其结合活性。方法以人c3d重组蛋白包被免疫管,对噬菌体展示单链抗体库进行固相筛选;c3d包被量逐轮降低,洗涤强度逐轮增强。采用ELISA对筛选产出进行鉴定,选择阳性克隆,... 详细信息

目的从噬菌体展示单链抗体库中筛选获得人源抗人c3d单链抗体,并评价其结合活性。方法以人c3d重组蛋白包被免疫管,对噬菌体展示单链抗体库进行固相筛选;c3d包被量逐轮降低,洗涤强度逐轮增强。采用ELISA对筛选产出进行鉴定,选择阳性克隆,测序确定阳性单链抗体基因。分子克隆构建单链抗体的真核表达载体,转染HEK293-F细胞进行真核表达,镍柱亲和纯化获得单链抗体。采用生物膜干涉技术(BLI)检测单链抗体与重组人c3d的结合活性。结果经3轮筛选获得3个特异性结合c3d的噬菌体单链抗体(A1、A3和B6),重组表达获得高纯度的单链抗体蛋白,与c3d重组蛋白结合活性为22.7~171 pmol/L。结论获得了全新的高亲和力人源抗人c3d单链抗体。

关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体 c3d 亲和力

c3d分子多表位dNA疫苗体液免疫应答的增强作用

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中国生物制品学杂志 2007年第4期20卷 267-270页

作者：程玉兴朱高红瞿素兰芸胡云章胡凝珠高承钢王东宝段骞中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所疫苗研究室昆明650118 昆明医学院第一附属医院放射科昆明650032

目的研究c3d分子对多表位dNA疫苗体液免疫应答的增强作用。方法通过PcR方法合成多表位HME基因,分别插入真核表达载体pcdNA3.1和pcdNA3.1-3c3d,构建多表位dNA疫苗pcdNA3.1-HME和pcdNA3.1-HME-3c3d,经肌肉注射免疫小鼠,ELISA检测小鼠特异... 详细信息

目的研究c3d分子对多表位dNA疫苗体液免疫应答的增强作用。方法通过PcR方法合成多表位HME基因,分别插入真核表达载体pcdNA3.1和pcdNA3.1-3c3d,构建多表位dNA疫苗pcdNA3.1-HME和pcdNA3.1-HME-3c3d,经肌肉注射免疫小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,且pcdNA3.1-HME-3c3d免疫组小鼠的抗体水平明显高于pcdNA3.1-HME免疫组。结论c3d可增强多表位dNA疫苗的体液免疫应答水平。

关键词： dNA疫苗多表位 c3d 体液免疫应答

分子佐剂c3d增强猪流感病毒HA-dNA疫苗免疫原性的研究

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 814-820页

作者：李国新郑宝亮金媛媛田志军周艳君童光志东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

为了探讨分子佐剂c3d对猪流感病毒HA-dNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠c3d与HA的质粒p-sHA/mc3d3。3种质粒与空载体pcAGGS分... 详细信息

为了探讨分子佐剂c3d对猪流感病毒HA-dNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠c3d与HA的质粒p-sHA/mc3d3。3种质粒与空载体pcAGGS分别免疫BALB/c小鼠后,采用ELISA和HI试验检测抗体水平。结果显示,免疫后第8周,p-sHA组与p-tmHA组的抗体水平没有明显差别,而p-sHA/mc3d3免疫组的抗体水平显著高于这两组,说明分子佐剂c3d增强了抗体应答水平。淋巴细胞增殖试验及细胞因子检测实验结果显示,免疫后第8周,p-tmHA诱导了更强的淋巴细胞增殖反应和更高水平的IFN-,而p-sHA/mc3d3诱导了更高水平的IL-4,说明HA表达形式的变化影响了免疫反应的类型,c3d与HA融合后通过诱导IL-4的产生而使免疫反应倾向于Th2型。总之,本研究证实3拷贝分子佐剂c3d与分泌型HA融合后显著提高了dNA疫苗诱导的抗体水平。这提示质粒p-sHA/mc3d3免疫可能对接种动物提供高水平的保护,有希望成为抗猪流感病毒的候选疫苗。

关键词：猪流感病毒 dNA疫苗分子佐剂 c3d

肺炎结合疫苗PPS14-OVA、PPS14-c3d在小鼠脾脏的定位及补体对定位的影响

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免疫学杂志 2010年第2期26卷 108-111页

作者：毕晓云潘恩山吴志东曹玉华胡勇广州经济技术开发区医院检验科 510730 南方医科大学中医外科教研室广州510515 广州精达医学科技有限公司 510663

目的检测血清型14型肺炎球菌荚膜多糖(PPS14)结合疫苗PPS14-OVA(卵清蛋白)、PPS14-c3d(补体)免疫小鼠后在脾脏细胞中的定位,以及补体对其定位的影响。方法PPS14-OVA、PPS14-c3d经皮下或静脉注射,免疫正常小鼠和眼镜蛇毒因子(cVF)预处理... 详细信息

目的检测血清型14型肺炎球菌荚膜多糖(PPS14)结合疫苗PPS14-OVA(卵清蛋白)、PPS14-c3d(补体)免疫小鼠后在脾脏细胞中的定位,以及补体对其定位的影响。方法PPS14-OVA、PPS14-c3d经皮下或静脉注射,免疫正常小鼠和眼镜蛇毒因子(cVF)预处理的小鼠,应用免疫荧光技术检测脾脏冰冻切片中的PPS14及各种免疫细胞。结果正常小鼠免疫PPS14-OVA后,PPS14-OVA定位于脾脏;1 h后与脾脏边缘区B细胞有结合;2 h后出现在淋巴滤泡中;6 h后全部转移至淋巴滤泡,并与滤泡B细胞和树突状细胞结合,与巨噬细胞和T细胞没有结合。而cVF预处理的小鼠,PPS14-OVA不定位于脾脏。PPS14-c3d在脾脏中的定位不受cVF处理的影响。结论 PPS14-OVA在脾脏中的定位需要补体的介导,而PPS14-c3d不需要。

关键词：补体 PPS14 c3d 冰冻切片免疫荧光

肾炎患者血中c3d水平及cd16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

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中国免疫学杂志 2002年第2期18卷 129-131页

作者：李宏向李秋环张纪云孙念政杨剑辉济南军区总医院儿科济南250031 山东大学齐鲁医院济南250012 济南军区总医院肾内科济南250031

目的 :探讨肾炎患者补体激活时活化单核巨噬细胞 (cd16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (McP)、促衰变因子 (dAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 136例肾小球肾炎患者血中cd16 + Mo MΦMcP、dAF和HRF 2 0表... 详细信息

目的 :探讨肾炎患者补体激活时活化单核巨噬细胞 (cd16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (McP)、促衰变因子 (dAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 136例肾小球肾炎患者血中cd16 + Mo MΦMcP、dAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定血清c3d及荷c3d 免疫复合物的 (c3d Ic)水平。结果 :Mc病人血清c3d、c3d Ic水平及血中cd16 + Mo MΦMcP、dAF、HFR 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人血清c3d水平、血中cd16 + Mo MΦMcP、dAF、HRF 2 0表达水平及MN、PGN病人c3d Ic水平均显著高于正常组 (P cP、dAF、HRF 2 0表达水平与血清c3d水平呈显著正相关 (P cd16 + Mo MΦMcP、dAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护cd16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,cd16 + Mo MΦ浸润肾组织并产生促炎作用 ,参于肾小球肾炎的发病及发展。

关键词：肾小球肾炎膜补体调节蛋白 c3d c3d-Ic

c3d对减毒沙门氏菌介导的新城疫病毒dNA疫苗诱导的特异性体液免疫应答的增强作用

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农业生物技术学报 2009年第5期17卷 745-749页

作者：潘志明袁舟刘蓓蓓游猛蔡雯婷刘萌焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室

采用PcR技术从重组质粒pVAX1-F扩增出新城疫病毒(NdV)F48E8株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入含有3拷贝c3d编码基因的pTR-c3d3质粒中,获得重组质粒pTR-F-c3d3。将F-c3d3基因片段从pTR-F-c3d3中切出,克隆入真核表达质粒pVAX1中,获得重组真... 详细信息

采用PcR技术从重组质粒pVAX1-F扩增出新城疫病毒(NdV)F48E8株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入含有3拷贝c3d编码基因的pTR-c3d3质粒中,获得重组质粒pTR-F-c3d3。将F-c3d3基因片段从pTR-F-c3d3中切出,克隆入真核表达质粒pVAX1中,获得重组真核表达质粒pVAX1-F-c3d3。将pVAX1-F-c3d3转化减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)SL7207,成功地构建了携带dNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F-c3d3)。重组菌分别以1×109cFU的剂量2次口服免疫1日龄SPF鸡(Leghorn)。结果显示,SL7207(pVAX1-F-c3d3)激发产生的血清抗体效价与SL7207(pVAX1-F)免疫组之间存在显著性差异(Pc3d3)免疫组的小肠黏膜抗体效价高于SL7207(pVAX1-F)免疫组,但两者间差异不显著(P>0.05)。提示c3d可增强减毒沙门氏菌介导的NdVdNA疫苗诱导的特异性体液免疫应答水平。

关键词： c3d 减毒沙门氏菌新城疫 dNA疫苗体液免疫应答

c3d在大疱性类天疱疮患者皮损组织中的表达

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中华皮肤科杂志 2012年第5期45卷 364-365页

作者：郭坤耿松梅西安交通大学第二附属医院 710004

目的探讨c3d在石蜡包埋的大疱性类天疱疮患者皮损组织中的表达及临床意义。方法免疫组化sP法在25例大疱性类天疱疮、10例大疱性表皮松解症及10例正常成人皮肤组织标本中进行c3d、IsG、IgA进行检测，并对其在大疱性类天疱疮皮损中阳性率... 详细信息

目的探讨c3d在石蜡包埋的大疱性类天疱疮患者皮损组织中的表达及临床意义。方法免疫组化sP法在25例大疱性类天疱疮、10例大疱性表皮松解症及10例正常成人皮肤组织标本中进行c3d、IsG、IgA进行检测，并对其在大疱性类天疱疮皮损中阳性率进行比较。结果大疱性类天疱疮皮损中c3d、IgG、tgA的阳性率分别为96％、72％、0％。c3d、IgG在BP组织中表达阳性率的差异有统计学意义（Х^2=4．17，P〈0．05），c3d、IgA在BP组织中表达阳性率的差异有统计学意义（Х^2=22．04，P〈0．01）。c3d、IgG、IgA在10例EB及正常成人皮肤组织标本中表达均为阴性。结论免疫组化方法检测c3d的表达可以协助在石蜡组织中进行大疱性类天疱疮的诊断。

关键词：大疱性类天疱疮皮损组织 c3d 患者大疱性表皮松解症皮肤组织标本免疫组化sP法免疫组化方法

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猪、鼠、鸭补体c3d基因克隆与序列分析

中国兽医学报 2011年第12期31卷 1759-1762页

作者：夏庆祥张德庆吴家强王小龙牛钟相山东农业大学动物医学院山东泰安271018 山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室山东泰安271018 山东农业科学院畜牧兽医研究所山东济南250100

为了比较猪、鼠、鸭c3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物c3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PcR方法,分别扩增c3d分子的cdNA,再将3种动物的cdNA... 详细信息

为了比较猪、鼠、鸭c3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物c3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PcR方法,分别扩增c3d分子的cdNA,再将3种动物的cdNA分别克隆到pMdl8-T载体中,然后转化BL21大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,根据测序结果利用生物信息学工具软件对3种c3d进行生物学性质分析。结果发现,猪与鼠和鸭的c3d基因的同源性分别为81.9%和65.6%,鼠与鸭c3d基因的同源性为65.8%;鼠、猪的补体c3d分子与受体cR2结合的功能区有28个氨基酸,鸭有29个氨基酸。

关键词：鼠猪鸭 c3d RT-PcR 克隆序列分析