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乳源β-酪啡肽-5对c2c12细胞的抗氧化损伤作用

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食品科学 2011年第9期32卷 257-260页

作者：范英兰任欢欢韩东宁张源淑南京农业大学动物医学院农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

通过建立过氧化氢(H2O2)对c2c12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-cM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法:1)MTT法测定72h内β-cM5对c2c12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度... 详细信息

通过建立过氧化氢(H2O2)对c2c12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-cM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法:1)MTT法测定72h内β-cM5对c2c12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度H2O2对c2c12细胞活力的影响,筛选H2O2的最佳剂量和作用时间;3)测定β-cM5对H2O2损伤后细胞活力的影响;4)检测培养液中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性。结果:1)β-cM5各浓度组MTT值与对照组无差异;2)0.25mmol/L的H2O2作用于c2c12细胞1h,MTT值显著低于对照组(PcM5预保护组的MTT值显著升高(PcM5预保护组的SOD活性显著提高(PcM5具有较强的抗氧化作用,对H2O2损伤的c2c12细胞有明显的保护作用,其机制可能与增强抗氧化酶活力和维持细胞完整性有关。

关键词： β-酪啡肽-5 c2c12 过氧化氢超氧化物歧化酶(SOD) 乳酸脱氢酶(LDH)

NF-κB在电刺激引起c2c12肌管线粒体功能低下时的作用

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中国运动医学杂志 2013年第7期32卷 615-620页

作者：胡少娟徐晓阳云南省文山州文山学院体育系云南文山663000 华南师范大学体育科学学院

目的:探讨NF-κB在不同电刺激状态下c2c12肌管粒体功能低下时的作用。方法:采用TY-c型电刺激器(强度为45 V、20 ms、5 Hz)刺激分化6天的c2c12肌管来建立耐力运动时的神经冲动模型,对照组无任何电刺激,实验组分为刺激即刻组、孵育组和对... 详细信息

目的:探讨NF-κB在不同电刺激状态下c2c12肌管粒体功能低下时的作用。方法:采用TY-c型电刺激器(强度为45 V、20 ms、5 Hz)刺激分化6天的c2c12肌管来建立耐力运动时的神经冲动模型,对照组无任何电刺激,实验组分为刺激即刻组、孵育组和对照组,刺激即刻组的刺激时间分别为60分钟、75分钟、90分钟、120分钟、150分钟和180分钟,孵育组刺激120分钟后放入培养箱中继续培养,时间分别为30分钟、60分钟、120分钟和180分钟。测定各组细胞pIKK-α、NF-κB及MnSOD活性变化。结果:与对照组相比,电刺激即刻组c2c12细胞NF-κB活性显著升高(P120分钟和150分钟增加明显(P120分钟时NF-κB活性较孵育组其它细胞显著增加(P120分钟细胞pIKK-α蛋白表达与孵育组其他细胞相比显著升高(P120分钟时c2c12细胞线粒体MnSOD活性显著增加(Pc2c12细胞产生氧化应激,导致细胞线粒体功能的下降中,内源性ROS的产生会激活NF-κB的表达,同时激活IKK-α的磷酸化,且在电刺激强度一定时,NF-κB的活性对电刺激的应答有一定的时相性。(2)随着刺激时间的不同,细胞线粒体MnSOD的活性变化有差异,且线粒体MnSOD活性的变化与刺激时间有关,推测NF-κB的表达上调了细胞内抗氧化物酶MnSOD的表达,这在一定程度上对细胞起到保护作用。

关键词： c2c12 电刺激 NF-κB ROS 线粒体功能低下

乐果对c2c12细胞内质网应激及成肌分化的影响

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中国兽医科学 2024年

作者：康国静陈嘉伟邹辉顾建红袁燕卞建春刘学忠喀什地区动物疾病控制与诊断中心扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

本试验用不同浓度（0、0.3、0.6、0.9 mmol/L）的乐果（DIM）处理c2c12细胞24 h，采用ccK-8检测细胞活力，光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构，Western-blot检测Bip、PERK/eIF2α通路相关蛋白及成肌分化相关蛋白MyOD、MyOG、MyHc的... 详细信息

本试验用不同浓度（0、0.3、0.6、0.9 mmol/L）的乐果（DIM）处理c2c12细胞24 h，采用ccK-8检测细胞活力，光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构，Western-blot检测Bip、PERK/eIF2α通路相关蛋白及成肌分化相关蛋白MyOD、MyOG、MyHc的表达水平。结果显示，与0 mmol/L组相比，0.3 mmol/L组的细胞活力、Bip及PERK/eIF2α 通路相关蛋白表达水平、成肌分化相关蛋白的蛋白表达水平均无显著差异。随DIM浓度升高，细胞活力极显著降低（P＜0.01）；细胞形态发生改变，死细胞增多，细胞超微结构受损明显；Bip及PERK/eIF2α通路相关蛋白表达水平显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）升高；成肌分化相关蛋白的表达水平显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）降低。添加PERK/eIF2α通路特异性抑制剂GSK2606414与DIM共处理，相关蛋白的表达水平被扭转。结果表明，DIM导致c2c12细胞内质网应激并激活了下游的PERK/eIF2α通路，且该通路介导了DIM致c2c12细胞成肌分化受损的过程。

关键词：乐果 c2c12 内质网应激成肌分化

c2c12细胞近膜区域GLUT4囊泡的胰岛素应激性运动研究

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C2C12细胞近膜区域GLUT4囊泡的胰岛素应激性运动研究

作者：郎迪浙江大学

学位级别：硕士

Ⅱ型糖尿病是一种病理机制复杂的代谢紊乱疾病,胰岛素抵抗是它的重要特征及致病因素之一。在Ⅱ型糖尿病中,胰岛素抵抗会导致肌肉组织对血浆葡萄糖摄取障碍,同时引起胰脏胰岛素分泌功能损伤,最终导致机体血糖浓度失调。葡萄糖转运是机体... 详细信息

Ⅱ型糖尿病是一种病理机制复杂的代谢紊乱疾病,胰岛素抵抗是它的重要特征及致病因素之一。在Ⅱ型糖尿病中,胰岛素抵抗会导致肌肉组织对血浆葡萄糖摄取障碍,同时引起胰脏胰岛素分泌功能损伤,最终导致机体血糖浓度失调。葡萄糖转运是机体利用及摄取葡萄糖的限速环节,该过程中细胞分子机制已成为糖尿病研究的重要目标。哺乳动物中,葡萄糖摄取的重要载体-葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)主要在肌细胞、脂肪细胞中表达。机体通过调解GLUT4从胞内富集区域到膜表面转运来调解骨骼肌等细胞的葡萄糖摄取。作为胰岛素通路等众多调控通路的最终效应单位,GLUT4对于机体维持葡萄糖内稳态起关键作用,是研究糖尿病的重要靶点。大量GLUT4相关研究集中在利用生物化学方法对胰岛素调控通路以及分子转运进行检测,然而对于这个重要靶点,更高水平的实时检测技术以及对GLUT4具体转运过程的深入探讨显得越来越重要。本研究以骨骼肌细胞作为重要的机体葡萄糖吸收、储存以及利用的重要靶细胞和相关胰岛素调控通路的调控机制为理论依据,选取骨骼肌细胞系c2c12作为研究对象,建立基于全内反射荧光显微技术及激光共聚焦扫描显微技术的c2c12细胞GLUT4荧光示踪实时近膜观测模型;测定细胞内GLUT4囊泡转运过程,讨论从分布到转运到锚定融合等时间/空间层次机制,确定转运特征,融合等识别标准;探讨胰岛素刺激条件下,相关物理状态变化。通过实验研究得出以下结果:1.基础状态下GLUT4大部分分布于细胞核附近的高尔基网状结构附近;2.与脂肪细胞相关结论不同,c2c12细胞中GLUT4与IRAP并非装配在相同的运载囊泡中;3.获取c2c12细胞GLUT4囊泡转运的实时图像,并研究了转运的运动特征:沿一定轨迹在近膜区域进行不同距离的转运运动,具有双向运动性以及同一路径的运动特性,囊泡在质膜发生融合;4.在胰岛素的刺激下GLUT4囊泡的转运活动变得更加剧烈。本研究建立c2c12细胞GLUT4近膜区域实时检测平台,对GLUT4转运时空特性进行了探讨,为寻找新的糖尿病药物靶点,甚至是胞内靶点提供相关实验及理论依据。有关基于c2c12细胞的GLUT4近膜领域实时转运研究未见相关报道。

关键词： GLUT4 c2c12 时空域转运全内反射荧光显微术激光共聚焦扫描

消炎止痛膏对脂多糖诱导的c2c12分化肌管影响

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中国临床解剖学杂志 2023年第6期41卷 716-720页

作者：钟伟兴谌祖江李俊桦邝珊珊王宁张璇李义凯南方医科大学中医药学院广州510515 南方医科大学第三附属医院广州510630

目的研究消炎止痛膏对脂多糖诱导的c2c12肌管的作用机制。方法体外培养c2c12细胞,用2%马血清诱导分化c2c12为成熟肌管,设置空白组、模型组、双氯芬酸钠组、消炎止痛膏组。非空白组加入不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),探究LPS对... 详细信息

目的研究消炎止痛膏对脂多糖诱导的c2c12肌管的作用机制。方法体外培养c2c12细胞,用2%马血清诱导分化c2c12为成熟肌管,设置空白组、模型组、双氯芬酸钠组、消炎止痛膏组。非空白组加入不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),探究LPS对c2c12的最佳致炎浓度和作用时间,复制体外骨骼肌炎症细胞最佳模型;探究消炎止痛膏和双氯芬酸钠对c2c12肌管炎症模型的最佳干预浓度。采用ccK-8测定细胞活性,ELISA检测加入消炎止痛膏后LPS诱导的c2c12中IL-1β和IL-6浓度,SOD和MDA含量。结果①分化实验:经2%马血清诱导,c2c12第4~5 d分化明显,肌管形成,第9~10 d达高峰。②c2c12炎症模型:在1μg/mL LPS作用24 h后c2c12炎症反应最明显,且ccK-8显示细胞活性无明显改变。③药物浓度:消炎止痛膏溶液1.25 mg/mL、双氯芬酸钠溶液6.25μg/mL作用24 h下c2c12炎症反应最轻,且ccK-8显示细胞活性无明显改变。④机制:与模型组比较,1.25 mg/mL消炎止痛膏显著抑制LPS诱导的c2c12肌管细胞IL-1β(P=0.006)和MDA水平(P=0.002),提高SOD水平(P=0.0001);与双氯芬酸钠组比较,1.25 mg/mL消炎止痛膏抑制LPS诱导的c2c12肌管细胞IL-1β水平无显著性差异(P=0.188),但提高SOD(P=0.0001)和抑制MDA水平(P=0.014)有显著性差异。结论消炎止痛膏成分可降低LPS诱导的c2c12肌管炎症模型IL-1β、IL-6和MDA水平,提高SOD水平,可能与减轻组织炎症反应、降低机体氧化应激损害有关。

关键词： c2c12 LPS 炎症氧化应激

猪新基因cFL2真核表达载体的构建及在c2c12细胞中的瞬时表达

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畜牧与兽医 2008年第12期40卷 19-22页

作者：赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟辽宁医学院高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室辽宁锦州121001 辽宁医学院动物科学技术学院辽宁锦州121001

从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PcR技术从猪骨骼肌中获得cFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pcDNA3.1(+)/cFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测... 详细信息

从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PcR技术从猪骨骼肌中获得cFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pcDNA3.1(+)/cFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染c2c12细胞,最后利用PcR检测转基因细胞中cFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪cFL2基因已克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染的c2c12细胞中检测到细胞内较高量cFL2的表达。pcDNA3.1(+)/cFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究cFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。

关键词： cFL2 真核表达载体 pcDNA3.1(+) 猪肉 c2c12 瞬时表达

TAK1siRNA对c2c12细胞内TAK1基因表达的影响

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生物技术 2009年第4期19卷 9-12页

作者：黄志清陈小玲陈代文四川农业大学动物营养研究所四川雅安625014

目的:高效下调TAK1基因表达的小干扰RNA(siRNA)分子的获得。方法:采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#94455s、iRNA ID#94549s、iRNA ID#189006)人工合成的TAK1基因特异的小干扰RNA(siRNA)分子分别导入小鼠成肌细胞c2c12中,采用实时荧... 详细信息

目的:高效下调TAK1基因表达的小干扰RNA(siRNA)分子的获得。方法:采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#94455s、iRNA ID#94549s、iRNA ID#189006)人工合成的TAK1基因特异的小干扰RNA(siRNA)分子分别导入小鼠成肌细胞c2c12中,采用实时荧光定量PcR方法分析细胞内TAK1基因的相对表达。结果:和对照组相比,siRNA ID#94455s、iRNA ID#94549和siRNA ID#189006分别下调了细胞内TAK1基因的mRNA表达水平33.34%、46.73%和79.97%。结论:实验获得了能够高效下调TAK1基因表达的siRNA。

关键词： TAK1 siRNA c2c12 实际荧光定量PcR

利拉鲁肽影响c2c12成肌细胞分化及合成Irisin的机制探讨

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利拉鲁肽影响C2C12成肌细胞分化及合成Irisin的机制探讨

作者：王媛妹山东大学

学位级别：硕士

糖尿病是影响全身各个器官的内分泌系统疾病,以血液循环中葡萄糖浓度升高为特点,在肌肉、脂肪、肝脏组织的胰岛素抵抗为主要原因。骨骼肌是胰岛素作用的重要部位及人体调节血糖代谢的主要器官,可以消耗人体近80%的葡萄糖,但是高血糖环... 详细信息

糖尿病是影响全身各个器官的内分泌系统疾病,以血液循环中葡萄糖浓度升高为特点,在肌肉、脂肪、肝脏组织的胰岛素抵抗为主要原因。骨骼肌是胰岛素作用的重要部位及人体调节血糖代谢的主要器官,可以消耗人体近80%的葡萄糖,但是高血糖环境也可以损害骨骼肌细胞,骨骼肌病变又使外周胰岛素抵抗加重,所以治疗糖尿病的药物对骨骼肌的生长发育及损伤后修复的作用受到越来越广泛的关注。利拉鲁肽(LG)是一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物,与人体天然的GLP-1氨基酸序列具有97%的同源性,通过激活胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)作用于胰岛β细胞产生葡萄糖依赖性的促进胰岛素分泌及其抑制胰岛a细胞分泌胰高血糖素的作用已应用于2型糖尿病的临床治疗。GLP-1还可作为促分化因子促进前脂细胞的分化以及胰岛细胞的增生。然而GLP-1在对骨骼肌细胞分化及功能的作用及调控机制尚未阐明,因此我们首先研究了 GLP-1R激动剂LG能否促进骨骼肌细胞的分化,以改善糖尿病病人肌细胞的萎缩与凋亡。另外骨骼肌细胞胰岛素抵抗是2型糖尿病发生的一个重要因素,研究报道LG可能通过促进糖原的合成及葡糖糖转运体4(GLUT4)的转运增强骨骼肌细胞对葡萄糖的利用,改善胰岛素抵抗,但其机制尚未完全清楚。鸢尾素(irisin)是一种新发现的由肌肉细胞分泌的细胞因子,其前体物质为III型纤连蛋白结构域(FNDc5)。有研究表明Irisin作为AMPK激活后PGc-1 a的表达产物,可能参与BcL-2所调控的骨骼肌细胞内自噬作用,从而改善骨骼肌的胰岛素的敏感性,所以一些临床研究已经证实的2型糖尿病病人的Irisin分泌会减少可能是肌肉组织发生胰岛素抵抗的一个原因,因此我们进一步研究了 LG是否通过调控Irisin的合成来发挥改善胰岛素抵抗的作用。第一部分利拉鲁肽对骨骼肌成肌细胞c2c12分化的影响研究目的:探讨LG对骨骼肌成肌细胞分化的影响研究内容:1.于c2c12细胞诱导分化过程中第0、2、4、6天收集样品,提取mRNA和蛋白,分别用荧光定量PcR和Western blot检测肌管细胞分化标志物以及GLP-1R的基因和蛋白水平的表达。2.于c2c12细胞诱导分化过程中,给予100nM浓度GLP-1受体激动剂LG处理,分别于第0、2、4、6天收集样品,提取mRNA和蛋白,分别用荧光定量PcR和Western blot检测肌管细胞分化标志物基因蛋白水平的表达。3.于c2c12细胞诱导分化过程中,给予100 nM LG和10 nM GLP-1R拮抗剂exendin(9-39)处理,于第6天收取样品,提取蛋白,用Western blot检测肌管细胞分化标志物蛋白水平的表达。研究结果:*** blot及荧光定量PcR的结果显示,GLP-1R在骨骼肌成肌细胞c2c12中表达,且在分化成熟肌管细胞中的表达水平明显高于未分化成肌细胞。2.c2c12细胞分化过程中,用LG进行处理,结果显示成肌细胞决定基因1(MYOD1)及肌球蛋白轻链3(MYL3)的蛋白表达水平明显高于对照组;同样MYOD1及肌球蛋白(Myosin)的基因表达水平明显高于对照组。3.c2c12细胞分化过程中,用LG及exendin(9-39)进行处理,结果显示分化第六天,LG组细胞MYOD1及MYL3蛋白表达显著高于对照组;与LG组细胞比较,Ex组细胞的MYOD1及MYL3蛋白表达受到抑制,显著降低,而LG + Ex组细胞的MYOD1及MYL3蛋白表达未受到Ex的抑制,与LG组持平。研究结论:***-1R存在于肌管细胞中2.在c2c12成肌细胞分化成熟为肌管细胞的过程中,LG发挥促进作用。第二部分利拉鲁肽对肌管细胞合成FNDc5的影响及其机制研究研究目的:探讨LG对肌管细胞合成Irisin前体物质FNDc5的影响及其机制研究内容:1.小鼠骨骼肌成肌细胞c2c12经诱导分化为肌管细胞后,给予梯度浓度LG(1-1000 nm/L)处理不同时间(0-24 h),观察LG对FNDc5表达及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(cAMP-activated protein kinase,AMPK)和丝裂原活化激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路活性的影响2.分别应用GLP-1R拮抗剂Exendin(9-39),AMPK的抑制剂compound c及MAPK的抑制剂ScH772984预处理肌管细胞,应用Western blot方法观察FNDc5蛋白表达的改变,检测AMPK及MAPK信号通路的的活性。研究结果:***可促进肌管细胞FNDc5的蛋白表达,并具有时间-剂量依赖性。***可激活AMPK与MAPK信号通路,呈时间-剂量依赖性。*** c抑制LG诱导的AMPK表达,显著降

关键词： c2c12 LG GLP-1R DIFFERENTIATION FNDc5

miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞c2c12周期的影响

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中国畜牧杂志 2015年第1期51卷 10-14页

作者：刘会杰敖红白立景王志军邢凯王楚端中国农业大学动物科技学院北京100193 中国农业科学院畜牧兽医研究所北京100193 天津宁河原种猪场天津301504

观察miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞c2c12周期的影响。分别以0、200、300、400、500、600 nmol/L Nocodazole处理c2c12细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期,间接免疫染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器α-微管蛋白(α-tubu... 详细信息

观察miR-21与Nocodazole联合作用对小鼠成肌细胞c2c12周期的影响。分别以0、200、300、400、500、600 nmol/L Nocodazole处理c2c12细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期,间接免疫染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器α-微管蛋白(α-tubulin)排列。转染miR-21 mimics/Nc和inhibitors/Nc,24 h后,添加400 nmol/L的Nocodazole处理24 h,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明:Nocodazole使c2c12细胞同步化的最佳浓度是400 nmol/L;过表达miR-21 mimics之后,与对照组相比,G0/G1,S期细胞百分比极显著增加,G2/M期细胞百分比极显著减少(Pc2c12细胞中处于G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,而处于G2/M期的细胞比例显著低于对照组细胞(P21促进c2c12细胞周期进入S期。为进一步研究miR-21对c2c12细胞的作用机制奠定基础。

关键词： Nocodazole miR-21 c2c12 周期小鼠