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终末期肾病患者血清对内皮细胞凋亡的影响及黄芪总黄酮的干预作用

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中国实验方剂学杂志 2014年第21期20卷 229-233页

作者：郭晓超苏筠霞李侃李建华兰州大学第一医院兰州730000

目的:探讨终末期肾病患者血清对内皮细胞凋亡的影响及黄芪总黄酮的干预作用。方法:收集22例健康志愿者和25例终末期肾病规律血液透析患者的血清,在体外模拟终末期肾病患者内环境,以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endotheli... 详细信息

目的:探讨终末期肾病患者血清对内皮细胞凋亡的影响及黄芪总黄酮的干预作用。方法:收集22例健康志愿者和25例终末期肾病规律血液透析患者的血清,在体外模拟终末期肾病患者内环境,以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEcs)为对象,分为空白对照组(10%胎牛血清),正常对照组(10%健康人血清),终末期肾病组(10%终末期肾病患者血清),低剂量(TFA1),中剂量(TFA2),高剂量(TFA3)组(在终末期肾病组基础上分别加入0.5,1.0,2.0 g·L-1黄芪总黄酮),培养24 h后光镜下观察血管内皮细胞形态,MTT法检测细胞生存率,免疫组化法检测c/ebp同源蛋白(cHOP)的表达,ELISA法检测4-羟基壬烯醛(4-HNE)的含量,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:与正常对照组相比,终末期肾病患者组细胞生存率降低(PcHOP和4-HNE升高(Pcs生存率提高(PcHOP的表达降低(PcHOP与4-HNE的含量呈正相关(Pcs凋亡,其机制部分与内质网应激诱导的细胞凋亡通路相关,黄芪总黄酮可通过减轻内质网应激从而抑制终末期肾病患者血清诱导的内皮细胞凋亡。

关键词：黄芪总黄酮终末期肾病 c/ebp同源蛋白 4-羟基壬烯醛凋亡

芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠内质网应激相关凋亡分子表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2012年第11期18卷 162-166页

作者：王盛飞陈利国屈援颜亮唐海兰陈明义王华强暨南大学广州510632 南方医科大学广州510515

目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(cRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响。方法:2.5%腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型。分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g.kg-1.d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.***.kg-1.d-1),每组10... 详细信息

目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(cRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响。方法:2.5%腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型。分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g.kg-1.d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.***.kg-1.d-1),每组10只。造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测cHOP(c/ebp-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)肾内表达水平。结果:模型组BUN(17.21±4.63)mmol.L-1,Scr(67.00±25.62)μmol.L-1较对照组BUN(4.19±0.77)mmol.L-1,Scr(15.89±2.62)μmol.L-1明显升高(PcHOP,caspase-12表达显著增强(PcHOP,caspase-12表达(与模型组相比较PcHOP,caspase-12高表达有关。

关键词：芪泽汤慢性肾功能衰竭内质网应激凋亡 c/ebp同源蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12

实时定量PcR检测低剂量X射线对小鼠睾丸中cHOP和caspase-12 mRNA表达的影响

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中国实验诊断学 2011年第8期15卷 1279-1281页

作者：姜铁超韩宏志孔宁吉林大学中日联谊医院心血管内科吉林长春130033 吉林大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室吉林大学基因组医学研究中心吉林长春130033 吉林大学学报(医学版)编辑部药学院医用生物材料教研室吉林长春130033

目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中cHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量(0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy)照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间(0、... 详细信息

目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中cHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量(0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy)照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间(0、3、6、12和24 h),应用实时定量PcR(real time quantitative PcR)检测小鼠睾丸中c/ebp同源蛋白(c/ebp homologous protein,cHOP)和胱天蛋白酶-12(caspase-12)mRNA表达剂量与时程效应关系。结果 0-0.200 Gy X射线照射后12 h,小鼠睾丸中cHOP mRNA表达随剂量逐渐增高并一直维持较高水平,其中0.050和0.100 Gy组较0 Gy显著增高(Pcaspase-12 mRNA表达随剂量逐渐增高,0.075和0.100 Gy组较0 Gy组显著增高(PcHOP mRNA表达随时间延长逐渐增高,在24 h到达峰值,较0 h显著增高(Pcaspase-12 mRNA表达在3和6 h稍有降低后,12 h到达峰值,较0 h显著增高(PcHOP和caspase-12 mRNA表达具有剂量-时程-效应规律性,二者可能参与低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的调控。

关键词： X射线睾丸胱天蛋白酶12 c/ebp同源蛋白

高氧暴露下A549细胞内质网应激相关因子的表达及胰岛素样生长因子...

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作者：祁海峰延边大学

学位级别：硕士

目的:暴露在高氧条件下蝴市组织会发生损伤,在这个过程中内质网应激发挥了重要的作用,本次实验研究IGF-Ⅰ对暴露在高氧条件下的A549细胞中内质网画钳目关因子cHOP、 caspase-3表达以及细胞形态变化的影响。方法:将复苏、传了培养的A54... 详细信息

目的:暴露在高氧条件下蝴市组织会发生损伤,在这个过程中内质网应激发挥了重要的作用,本次实验研究IGF-Ⅰ对暴露在高氧条件下的A549细胞中内质网画钳目关因子cHOP、 caspase-3表达以及细胞形态变化的影响。方法:将复苏、传了培养的A549细胞株分为五组:Ⅰ组:正常空气组,Ⅱ组:高氰暴露组,Ⅲ现:高氧．+IGF-Ⅰ (1ng/ml)剂量组,Ⅳ组:高氧+IGF-Ⅰ (10ng/ml)剂量组,Ⅴ组:高氧+[GF-Ⅰ(100ng/ml)剂量组。习射新中于培养皿中的各组A549细胞,放入cOz恒温细胞培养箱内进行培养,待次日通过倒置显微镜观察各组细胞动态生长状况,当细胞汇合至50％左右时,加入不同药物浓度IGF-Ⅰ渊予下预。其中,Ⅰ组(正常空气组):将含有A549细胞的培养皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培养液,并放入5%cO2、37℃细胞培养箱内培养;Ⅱ组(高氧暴露组):将含有A549细胞的培养皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培养液,为重入3L/min含5%cO2、5%N2和90%氧气的高氧混合气体lh后,为维持高氧环境持续给予低流量的上述混合气体,并置于37℃培养箱内培养24h;药物干预组:将经不同剂量IGF-Ⅰ处理后峋Ⅲ,Ⅳ、Ⅴ组细胞与高氧组一样的方法提供的高氧环境,置于37℃培养箱内培养24h;通过倒置显微镜观察细胞凋亡、形态变化清况;采用MTT测定正常空气组、高氧暴露组和不同浓度IGF-Ⅰ干预组间的细胞存活率;采用JDAPI3走光染色观察各组间的细胞核凋亡情况;应用、Western-blot险测内质网应激相关因子cHOP、caspase-3的表达清况。结果:倒置显微镜观察细胞形态学显示高氧暴露Ⅱ组与正常Ⅰ组市目比存活的细胞明显变少,细胞发生收缩变小、变圆,与周围细胞分离等典型的凋亡现象;经不同剂IGF-Ⅰ处理后,细胞也出现了凋亡现象,但存活的细月断目对较多,以高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)组最显著。细胞存活率测定显示各组间细胞的存活率有明显不同,经高氧处理后的细胞存活率低,而经不同剂量IGF-Ⅰ干预后的A549细胞的存活率呈增高趋势,其中高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)组细胞存活率最高。DAPI萤光染色结果表明高氧处理后经荧光标记出的细胞核较多,经不同剂量[GF-Ⅰ处理后被荧瑙示细胞核逐渐减少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异显著。Western-blot:结果显示cHOP、caspase-3凋亡因子的表达在高滓兀组,中显著增加,经不同剂量IGF-Ⅰ干预后,cHOP的表达均有减少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异最明显(Pcaspase-3的表达均有减少趋势,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异最明显(PcHOP、caspase-3:表达增高;4、IGF-Ⅰ能够对高氧暴露条件下的A549细胞中的凋亡因子cHOP和caspase-3表达降低,起到了抗凋亡的作用。

关键词：胰岛素样生长因子-Ⅰ 内质网应激细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶-3 c/ebp同源蛋白

ccK-8降低LPS诱导的小鼠单核细胞RAW264.7 cHOP/caspase-11/caspase-1的表达

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基础医学与临床 2015年第2期35卷 178-182页

作者：刘威段林许光明于峰张晓静宋宁河北省胸科医院骨科河北石家庄050041 河北医科大学第二医院呼吸内科河北石家庄050000 河北医科大学基础医学院法医学系河北石家庄050017

目的探讨ccK-8对LPS激活RAW264.7细胞cHOP/caspase-11/caspase-1信号通路的影响。方法用LPS和(或)ccK-8和(或)ccK-8的1受体阻滞剂孵育RAW 264.7细胞,用Western blot法检测cHOP、caspase-11蛋白表达,用试剂盒检测caspase-1活性,用ELISA技术检测细胞培养上清中IL-1β水平。结果与对照组相比,LPS组cHOP、caspase-11表达水平均显著升高(PccK-8可有效抑制LPS诱导的cHOP、caspase-11表达升高(PccK-8的1受体阻滞剂可明显抑制ccK-8的作用。caspase-1活性变化、IL-1β含量变化趋势均与cHOP、caspase-11表达水平变化趋势一致(PccK-8通过受体1抑制cHOP/caspase-11/caspase-1表达,减少LPS诱导IL-1β的生成,发挥抗炎作用。

关键词：胆囊收缩素脂多糖 c/ebp同源蛋白 caspase-11 caspase-1

探讨GLP-1对高糖诱导的HRMc内质网应激和凋亡的影响机制-cHOP信号通路

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探讨GLP-1对高糖诱导的HRMC内质网应激和凋亡的影响机制-CHOP信号...

作者：张建双天津医科大学

学位级别：硕士

目的:1.体外培养人肾小球系膜细胞系(human renal mesangial cells,HRMc)。2.观察持续高糖和波动性高糖培养对HRMc细胞生长的影响,观察其细胞增殖率、凋亡率的变化。3.探究cHOP信号通路在HRMc发生凋亡过程中的作用机制和GLP-1受体激动... 详细信息

目的:1.体外培养人肾小球系膜细胞系(human renal mesangial cells,HRMc)。2.观察持续高糖和波动性高糖培养对HRMc细胞生长的影响,观察其细胞增殖率、凋亡率的变化。3.探究cHOP信号通路在HRMc发生凋亡过程中的作用机制和GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽在减轻持续高糖和波动性高糖诱导的细胞凋亡过程中所起的作用。4.证实GLP-1受体激动剂艾塞那肽对HRMc具有保护作用,探讨其可能的机制,为GLP-1受体激动剂对糖尿病肾病所起的保护作用提供理论依据,使其更好的应用于临床。方法:1.体外培养人肾小球系膜细胞细胞系,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。2.将培养的HRMc随机分为6组:N组:正常糖浓度(5.6mmol/L)培养基培养组、H组:高糖浓度(30mmol/L)培养基培养组、F组:波动血糖培养组(先用高糖浓度培养基培养3h,再用正常糖浓度培养基培养2h,一天中重复3次,然后低糖培养基过夜)、N+G组:在正常糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、H+G组:在高糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、F+G组:在波动糖浓度培养基培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽。6组分别干预24h。倒置显微镜观察6组细胞形态学变化,并拍照记录;MTT法测定6组细胞的增殖率;流式细胞仪测定6组细胞的凋亡率;Western blot法测定各组细胞cHOP蛋白的相对表达量;RT-PcR法测定各组细胞cHOP m RNA的相对表达量。结果:1.人肾小球系膜细胞体外传代培养生长状态良好。2.倒置显微镜观察细胞形态,结果显示波动性高糖培养细胞24h后细胞形态发生明显变化,细胞变短,细胞边界不清,数量明显减少。3.MTT法测定细胞增殖率,结果表明H组细胞增殖率大于N组,差异有统计学意义(p﹤0.05);F组细胞增殖率小于N组,差异亦有统计学意义(p﹤0.05)。加用艾塞那肽干预后,H+G组细胞增殖率比H组下降,差异有统计学意义(p﹤0.05);F+G组细胞增殖率比F组细胞增殖率升高,差异亦有统计学意义(p﹤0.05)。4.流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,结果显示细胞凋亡率F组﹥H组﹥N组,差异有统计学意义(p﹤0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞凋亡率小于F组(p﹤0.05);H+G组细胞凋亡率小于H组(p﹤0.05);差异都有统计学意义。5.RT-PcR法测定各组细胞cHOP m RNA相对表达量,结果表明相对表达量是F组﹥H组﹥N组,差异有统计学意义(p﹤0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞chop m RNA相对表达量小于F组(p﹤0.05);H+G组细胞chop m RNA相对表达量小于H组(p﹤0.05);差异均有统计学意义。6.Western blot法测定各组细胞cHOP蛋白相对表达量,其结果与chop m RNA相对表达量一致,也是F组﹥H组﹥N组,差异有统计学意义(p﹤0.05);加用艾塞那肽干预后,F+G组细胞cHOP蛋白相对表达量小于F组(p﹤0.05);H+G组细胞cHOP蛋白相对表达量小于H组(p﹤0.05);差异均有统计学意义。结论:持续性高糖培养会刺激肾小球系膜细胞增殖,波动性高糖培养会抑制肾小球系膜细胞增殖。持续高糖培养和波动性高糖培养都会引起肾小球系膜细胞发生凋亡,而且波动血糖诱发凋亡的程度更大。持续高糖培养和波动性高糖培养可能会通过诱发cHOP信号通路介导的内质网应激凋亡通路进而引起系膜细胞发生凋亡,GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽可能会通过下调cHOP的表达减轻细胞凋亡的程度,从而发挥肾功能保护作用,因此能够预防和控制糖尿病肾病的发生和发展。

关键词：人肾小球系膜细胞内质网应激细胞凋亡波动血糖胰高血糖素样肽-1 艾塞那肽 c/ebp同源蛋白

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全氟化碳对动脉硬化大鼠内质网应激的影响

全氟化碳对动脉硬化大鼠内质网应激的影响

作者：张静静青岛大学

学位级别：硕士

目的:通过观察腹腔注射不同剂量的全氟化碳(perfluorocarbon,PFc)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠主动脉组织内质网应激相关蛋白(GRP78、PERK、cHO P、caspase-12)水平的表达和相关脂质(TG、LDL、HDL)指标测定的影响,及主动脉... 详细信息

目的:通过观察腹腔注射不同剂量的全氟化碳(perfluorocarbon,PFc)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠主动脉组织内质网应激相关蛋白(GRP78、PERK、cHO P、caspase-12)水平的表达和相关脂质(TG、LDL、HDL)指标测定的影响,及主动脉组织的病理变化,初步探讨PFc对动脉硬化大鼠脂质代谢、内质网应激的影响及对内皮细胞的可能的保护作用,为抗AS治疗提供新的选择。方法:选用Wistar雄性大鼠40只,根据数字表法随机等量分为空白对照组,模型对照组、PFc低剂量治疗组、PFc高剂量治疗组。适应性喂养1周后,空白对照组仍采用普通饲料喂养,其余3组均采用高脂饮食,于造模前3天给予VD3灌胃(总剂量为70万U/kg),诱导大鼠动脉硬化模型的建立。自实验第2周起,采用每周2次进行药物干预,空白对照组及模型对照组腹腔注射生理盐水(5ml/kg),PFc低剂量治疗组和PFc高剂量治疗组腹腔注射不同剂量的PFc(PFc低剂量组2.5ml/kg,PFc高剂量组5ml/kg),各组均自由饮水。喂养12周后,于模型对照组中随机取2只大鼠解剖后取主动脉组织行HE染色,观察主动脉组织的病理变化,以确保动脉硬化造模成功。同时对比各组主动脉组织的病理变化情况,采用Elisa法测定各组血清中脂蛋白(TG、LDL、HDL)的含量,并采用免疫组化法检测主动脉组织中GRP78、PERK、cHOP、caspase12的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组中TG、LDL水平显著升高,HDL水平显著降低,差异有显著性(Pc低剂量治疗组及PFc高剂量治疗组中HDL水平显著升高(Pc HOP、caspase-12的表达水平均显著升高(Pc治疗组中PERK、cHOP和caspase-12的表达水平显著降低(Pc高剂量治疗组与PFc低剂量治疗组相比GRP78的表达水平显著降低(PcHOP、casepase12的表达水平无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,模型对照组中主动脉组织AS明显,可见泡沫细胞。与模型对照组相比,PFc低剂量治疗组中主动脉组织AS病变减轻,而PFc高剂量治疗组中主动脉组织AS病变减轻程度更明显,病变程度接近于空白对照组。结论:一定剂量的PFc可能会通过改善脂质代谢,降低AS发生的危险因素;通过干扰内质网应激相关蛋白的表达水平,而起到保护内皮细胞和防治AS的作用。

关键词：全氟化碳(PFc) 动脉粥样硬化内质网应激蛋白激酶样内质网激酶 c/ebp同源蛋白

槲皮素抑制巨噬细胞RAW264.7内质网应激凋亡途径的机制研究

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槲皮素抑制巨噬细胞RAW264.7内质网应激凋亡途径的机制研究

作者：岳雯泰山医学院

学位级别：硕士

目的观察槲皮素(Quercetin, Que)对毒胡萝卜素(thapsigargin, TG)诱导的巨噬细胞RAW264.7增殖、凋亡及葡萄糖调节蛋白质78(glucose regulating protein78, GRP78)和c/ebp同源蛋白(c/ebp homologous protein, cHOP)表达的调节作用，以及小凹蛋白-1(caveolin-1, cav-1)和PI3K信号通路活性对槲皮素调节作用的影响，探讨槲皮素对RAW264.7细胞内质网应激凋亡的调节作用及相关机制，以期为槲皮素抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的机制研究拓展新的思路。方法 1.建立巨噬细胞RAW264.7内质网应激模型：分别以0.3、1、3μmol/L三个浓度的TG与RAW264.7细胞共同培养，于12、24、36、48h四个时间点检测细胞存活率，以存活率c/PI双染法在流式细胞仪(flow cytometry, FcM)上检测各组细胞凋亡率、在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞凋亡形态变化;Fluo-3/AM法在流式细胞仪上检测各组细胞胞内ca浓度(intracellular caconcentration,[ca]i)的变化;免疫印迹法(western blotting)检测各组细胞中GRP78和cHOP表达水平的变化;使用终浓度为15nmol/L的PI3K抑制剂-LY294002阻断PI3K信号通路后，观察槲皮素对TG诱导的GRP78和cHOP蛋白表达的作用，从而确定槲皮素是否通过PI3K信号通路调节RAW264.7细胞的内质网应激反应。 3.为确定cav-1是否参与槲皮素对RAW264.7细胞内质网应激的调节作用，采用不同处理浓度和时间的TG诱导RAW264.7细胞，western blotting法检测细胞在内质网应激过程中cav-1表达的变化;2.5μg/mL的filipin(III)预处理30min阻断cav-1的表达后，与槲皮素(160μmol/L)共同处理RAW264.7细胞24h，采用Annexin V-FITc/PI双染法分别用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测TG诱导的细胞凋亡水平变化，western blotting法检测cHOP表达水平，观察cav-1是否参与调节TG诱导的细胞凋亡以及cav-1是否影响槲皮素对RAW264.7细胞内质网应激的调节作用。结果 1.巨噬细胞内质网应激模型的建立：1μmol/L的TG与RAW264.7细胞共同培养24h，细胞存活率为41.07±3.35%，根据存活率ca]i降低(PcHOP表达减少(PcHOP表达上调(Pcav-1的表达呈山峰状改变，TG作用早期cav-1的表达升高，随着TG作用浓度和时间的增加，cav-1的表达降低;filipin(III)预处理RAW264.7细胞可阻断TG诱导的cav-1表达上调(PcHOP表达水平增加(PcHOP表达水平的抑制作用。结论 1.槲皮素可抑制TG诱导的RAW264.7细胞内质网应激凋亡途径，该保护作用可能与其抑制PI3K信号通路有关;2. cav-1可在TG诱导的RAW264.7细胞内质网应激早期表达升高，抑制TG诱导的凋亡损伤的同时，可促进槲皮素对RAW264.7细胞内质网应激的抑制作用。

关键词：小凹蛋白-1 槲皮素磷脂酰肌醇3激酶葡萄糖调节蛋白质78 c/ebp同源蛋白内质网应激凋亡巨噬细胞动脉粥样硬化

基于AEcⅡs内质网应激的经典中药复方治疗肺纤维化的实验研究

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基于AECⅡs内质网应激的经典中药复方治疗肺纤维化的实验研究

作者：申萌萌北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种慢性、进行性、不可逆的终末期肺部疾病,其患病率呈逐年上升趋势,预后较差。目前临床上很少有专门针对纤维化发病机制的治疗策略,因此寻找一种能够有效改善肺纤维化的药物迫在眉睫。肺纤... 详细信息

研究目的肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种慢性、进行性、不可逆的终末期肺部疾病,其患病率呈逐年上升趋势,预后较差。目前临床上很少有专门针对纤维化发病机制的治疗策略,因此寻找一种能够有效改善肺纤维化的药物迫在眉睫。肺纤维化发病机制目前并不清楚,但近年来许多研究表明,内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在PF的发生发展中起重要作用。现有研究表明,ERS可使Ⅱ型肺泡上皮细胞(TypeⅡ alveolar epithelial cells,AEcⅡ s)受损,PF 对 ERS 更敏感,更易出现 AEcⅡs上皮修复及加工异常,加速肺纤维化的发生发展。随着近年来中医对肺纤维化认识不断深入,并在运用中药复方治疗肺纤维化上取得一些进展。基于本课题组前期研究成果,麦门冬汤和甘草干姜汤均具有一定的抗肺纤维化作用,本实验以麦门冬汤早晚两次灌胃作为对照组,观察麦门冬汤与甘草干姜汤这两个中药复方合用的药效是否优于单用麦门冬汤,从而选出治疗BLM所致肺纤维化效果较好的中药复方,并从AEcⅡ s内质网应激的角度观察经典中药复方对肺纤维化大鼠的影响并初步探讨其机制,为探索新的肺纤维化治疗靶点提供实验依据,为研发新的治疗肺纤维化的药物提供研究基础。研究方法1.检测各组大鼠肺功能相关指标:用力肺活量(FVc)、肺动态顺应性(cdyn)、吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re)、0.4秒率(FEV0.4/FVc%);2.称量脏器质量、计算脏器系数;3.HE、Masson染色观察各组大鼠肺组织病理变化;4.羟脯氨酸(HYP)酸解法检测各组大鼠肺组织HYP含量;5.免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GRP78、cHOP、表面活性蛋白-c(SP-c)等蛋白在肺组织中的定位及表达情况;6.Western blott ing观察各组大鼠肺组织中α-SMA、GRP78、cHOP、SP-c等蛋白表达情况;7.Tunnel染色观察各组大鼠肺组织中细胞凋亡情况。研究结果实验一HE、Masson染色:与正常组相比,模型组可见肺泡间隔明显增厚,肺泡间隔中的平滑肌细胞增生肥大,肺间隔中染成青蓝色呈条索状的胶原增多;与模型组相比,麦门冬汤组、麦门冬汤+甘草干姜汤组均能减轻肺泡间隔的厚度、降低胸膜下以及纤维化肺组织实变区胶原的沉积,但麦门冬汤+甘草干姜汤抑制胶原沉积的效果不如麦门冬汤组。实验二1.肺功能分析:与正常组相比,模型组大鼠的FVc明显下降,而0.4秒率显著升高,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组均能明显改善FVc、增加cdyn、减少吸气阻力(Ri)。2.肺脏质量和脏器系数分析:气管内雾化BLM所致的大鼠肺纤维化,模型组与正常组大鼠相比,模型组大鼠肺脏质量、肺系数增加显著(PcHOP阳性染色增多。与模型组比,麦门冬汤1、2组大鼠肺组织纤维化实变区GRP78、cHOP的表达均相对减少,其中麦门冬汤2组GRP78、cHOP的表达呈弱阳性。正常组中,AEc Ⅱ s合成分泌的SP-c均匀地分布在肺泡表面,着色较浅,呈浅棕色;模型组大鼠肺组织合成的SP-c主要存在于AEcⅡ s中。与模型组相比,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组AEcⅡs中无功能的SP-c表达减少,其中,麦门冬汤2组减少明显减少。2.western blotting结果:灌胃麦门冬汤后,相对于模型组,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组肺组织表达的GRP78和cHOP均减少,其中麦门冬汤2组显著减少(PcⅡ s分泌有功能的SP-c明显减少(PcⅡ s分泌有功能的SP-c(Pc Ⅱ s。

关键词：麦门冬汤内质网应激 Ⅱ型肺泡上皮细胞葡萄糖调节蛋白78 c/ebp同源蛋白