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咀嚼负荷对幼兔髁突软骨细胞brdu标记影响的研究

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口腔医学 2015年第4期35卷 250-253,286页

作者：刘晨燕冯剑颖谷志远浙江中医药大学口腔医学院正畸科浙江杭州310053 浙江中医药大学口腔医学院口腔颌面外科浙江杭州310053

目的探讨咀嚼负荷对幼兔髁突软骨发育及软骨细胞中brdu标记的影响。方法出生10 d龄的32只幼兔,随机分为喂食固体硬饲料组和喂食粉末软饲料组。连续2周每天每只腹腔注射brdu(50 mg/kg),在2、4、6、8周时每组处死4只幼兔,HE观察组织形态... 详细信息

目的探讨咀嚼负荷对幼兔髁突软骨发育及软骨细胞中brdu标记的影响。方法出生10 d龄的32只幼兔,随机分为喂食固体硬饲料组和喂食粉末软饲料组。连续2周每天每只腹腔注射brdu(50 mg/kg),在2、4、6、8周时每组处死4只幼兔,HE观察组织形态学变化测量软硬组髁突厚度变化,免疫组化检测brdu表达。结果髁突软骨前部厚度硬食组明显高于软食组,在中部无明显差异,髁突软骨后部厚度软食组高于硬食组。brdu免疫组化染色显示,发育期髁突软骨各层及软骨下骨骨髓腔内均有brdu阳性标记,前部的增殖层表达最显著。第2周,硬食组在前、中、后3个部位的brdu阳性率都高于软食组;第6周,软食组的中、后部位的阳性率高于硬食组;第8周,软硬组均检测不到阳性细胞。结论软食组在低咀嚼力刺激下,幼兔髁突软骨细胞增殖启动较慢。适当的咀嚼压力能促进髁突软骨细胞的增殖,同时幼兔发育期的髁突生长还受到基因等内环境因素影响。

关键词：髁突软骨咀嚼力 brdu标记增殖兔

brdu和PCNA标记观察丹参酮对癌细胞增殖的影响

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华西医科大学学报 1996年第4期27卷 388-391页

作者：王修杰袁淑兰黄韧敏宋毅华西医科大学肿瘤所四川成都

为了解丹参酮的抗癌作用并探索其机理，用丹参酮处理人肝癌细胞株和白血病细胞株，Ｂｒｄｕ掺入标记和ＰＣＮＡ免疫组化染色检测癌细胞增殖动力学指标。结果：丹参酮处理人肝癌细胞和白血病细胞株后，Ｂｒｄｕ标记率分别为８．９５％，... 详细信息

为了解丹参酮的抗癌作用并探索其机理，用丹参酮处理人肝癌细胞株和白血病细胞株，Ｂｒｄｕ掺入标记和ＰＣＮＡ免疫组化染色检测癌细胞增殖动力学指标。结果：丹参酮处理人肝癌细胞和白血病细胞株后，Ｂｒｄｕ标记率分别为８．９５％，１９．０１％，均显著低于对照组（２８．０％，２５．５７％，Ｐ＜０．０１）；ＰＣＮＡ阳性率分别为５７．０％，３０．３２％，均显著低于对照组（７４．３％，４７．０５％，Ｐ＜０．０１）。结果表明，Ｂｒｄｕ标记和ＰＣＮＡ检测在研究肿瘤细胞增殖及影响因素等方面有重要应用价值，丹参酮抑制癌细胞增殖与抑制癌细胞ＤＮＡ合成、ＰＣＮＡ表达及ＤＮＡ多聚酶δ活性等有关。

关键词：丹参酮抗癌作用 brdu标记增殖细胞核抗原

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兔组织工程肌的构建与研究

中国修复重建外科杂志 2005年第5期19卷 364-368页

作者：孙天威杨志明解慧琪邓力罗静聪邱琳四川大学生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的　探讨用同种异体兔成肌细胞和小肠黏膜下层( small instestinel submucosa,SIS)复合,体外培养构建兔组织工程肌。　方法　取出生7d内幼兔四肢肌组织,经多步酶消化法与差速贴壁法获得足量、纯净成肌细胞,用Brd U标记,与SIS体外复合... 详细信息

目的　探讨用同种异体兔成肌细胞和小肠黏膜下层( small instestinel submucosa,SIS)复合,体外培养构建兔组织工程肌。　方法　取出生7d内幼兔四肢肌组织,经多步酶消化法与差速贴壁法获得足量、纯净成肌细胞,用Brd U标记,与SIS体外复合培养构建组织工程肌,植入15只异体兔体内修复腓肠肌1.5 cm×1.0 cm大小的骨骼肌缺损作为实验组;用单纯SIS修复对侧同样骨骼肌缺损作为对照组。术后4、6和8周各处死5只动物取材,行大体和组织学观察、局部细胞免疫定量分析和免疫组织化学检测。　结果　体外培养成肌细胞与SIS均复合良好,体内植入4周见材料与周围肌组织接合紧密,周围炎性反应明显;6周和8周材料开始部分降解,炎性反应逐渐减轻。局部细胞免疫定量分析显示实验组和对照组4、6周评分与8周评分比较有统计学意义( P<0 .0 5 )。实验组4、6和8周均可见材料周围新生肌组织形成,Brd U及肌球蛋白免疫组织化学染色阳性,对照组染色结果呈阴性。　结论　成肌细胞与SIS复合构建的组织工程肌,植入体内可存活。

关键词：免疫组织化学检测免疫组织化学染色成肌细胞小肠黏膜下层 brdu标记构建组织工程体外复合培养体外培养定量分析细胞免疫炎性反应组织学观察 SIS 肌组织实验组对照组同种异体酶消化法体内植入评分比较组织形成

人骨髓间充质干细胞与汗腺细胞共同培养诱导细胞表型转化的初步研究

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中华医学杂志 2005年第27期85卷 1885-1889页

作者：李海红付小兵周岗费沛陈伟白晓东蔡存良孙同柱解放军总医院三○四临床部全军创伤修复重点实验室

目的研究人骨髓间充质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSCs)在体外与损伤的人汗腺细胞(humansweatglandcells,hSGCs)共培养时的转化情况。方法体外分别分离培养和扩增hMSCs和hSGCs,用二步免疫细胞化学法检测hMSCs和hSGCs抗原表达情... 详细信息

目的研究人骨髓间充质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMSCs)在体外与损伤的人汗腺细胞(humansweatglandcells,hSGCs)共培养时的转化情况。方法体外分别分离培养和扩增hMSCs和hSGCs,用二步免疫细胞化学法检测hMSCs和hSGCs抗原表达情况。用5μmol/L的5溴2脱氧尿苷(brdu)对培养的hMSCs进行连续培养标记。待原代培养的hSGCs达70%融合后,给予47℃高温处理40min造成热损伤体外模型,37℃冷却12h,然后加入(12)×105brdu标记的hMSCs共同培养,2周后,以抗癌胚抗原(CEA)和抗brdu单克隆抗体作为一抗,采用免疫细胞化学双染法检测共培养的细胞。结果hMSCs和hSGCs均呈克隆样生长,hMSCs表达CD44和CD105,不表达CD34和CEA;hSGCs表达CK7、CK8、CK19、CEA。用brdu标记hMSCs阳性率可达90%,hSGCs经高温损伤后,大多数细胞的细胞间连接消失。共培养2周后,部分细胞同时表达CEA和brdu,并有多核现象。细胞染色示双染细胞可达1%～5%,多核细胞且核染色不同的细胞约为0.01%～0.05%,多核细胞与其他双染细胞相比,细胞明显的宽大扁平。结论在损伤的微环境下,hMSCs可以向hSGCs转化,其机制可能是细胞分化、细胞融合甚至是核融合。

关键词：人骨髓间充质干细胞共同培养汗腺细胞细胞表型转化步研究癌胚抗原(CEA) hMSCs brdu标记免疫细胞化学法 cells 多核细胞 mol/L 单克隆抗体抗brdu 培养的细胞 CD105 细胞间连接表达情况 Cs抗原连续培养脱氧尿苷

荜茇提取物对大鼠骨髓间质干细胞MSC的增殖作用及与化学官能团的关系

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中药材 2005年第7期28卷 570-574页

作者：李熙灿周健洪黎晖杜少辉李伊为黄玲陈东风广州中医药大学广州510405

目的:观察荜茇挥发油和水溶性部分对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)体外增殖的影响,并进一步探讨了与分子中化学官能团的关系。方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,经brdu标记和CD44染色及两者双重染... 详细信息

目的:观察荜茇挥发油和水溶性部分对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)体外增殖的影响,并进一步探讨了与分子中化学官能团的关系。方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,经brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度荜茇挥发油及其水溶性部分的条件下MSC的生长变化。应用形态学、MTT法和5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,brdu)、增殖细胞核抗原(Proliferationcellnuclearantigen,PCNA)免疫细胞化学方法测定细胞增殖活性。结果:荜茇挥发油以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较有显著性(P<0.05)。经GC-MS检测,荜茇挥发油含C=C(50.66%)、-OH(27.02%)、多种官能团(5.05%)等;而荜茇水提物对MSC无增殖作用。结论:荜茇挥发油明显促进MSC的增殖,这种作用可能与分子中C=C、-OH等官能团有关。

关键词：骨髓间质干细胞增殖作用 MSC 官能团大鼠提取物荜茇挥发油 5-溴脱氧尿嘧啶免疫细胞化学方法增殖细胞核抗原水溶性部分 brdu标记细胞增殖活性 cells 密度梯度法体外增殖体外培养染色鉴定 CD44 生长变化不同浓度

局灶性脑缺血后老年大鼠室管膜下区和颗粒下层细胞增殖与分化的实验研究

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解剖学报 2006年第2期37卷 140-144页

作者：刘俊华晋光荣李云涛徐汉荣杨鹏东南大学医学院解剖学与组织胚胎学系南京210009 南京医科大学第二附属医院神经内科南京210003

目的观察老年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区(SVZ)和颗粒下层(SGZ)神经干细胞的增殖与分化。方法取老年大鼠制作大脑中动脉梗塞模型。用5-溴脱氧尿核苷(brdu)脉冲标记结合免疫组织化学单标记技术,观察正常组、假手术组、脑缺血后3、71、4... 详细信息

目的观察老年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区(SVZ)和颗粒下层(SGZ)神经干细胞的增殖与分化。方法取老年大鼠制作大脑中动脉梗塞模型。用5-溴脱氧尿核苷(brdu)脉冲标记结合免疫组织化学单标记技术,观察正常组、假手术组、脑缺血后3、71、4、212、8 d组SVZ和SGZ区brdu阳性细胞的变化;用brdu累积标记结合免疫组织化学双标技术,观察脑缺血14 d后SVZ和SGZ区brdu/NeuN和brdu/GFAP双标阳性细胞的数量。结果在正常组、假手术组及各脑缺血组大鼠的双侧SVZ和SGZ均可观察到brdu阳性细胞。与正常组和假手术组相比,脑缺血后SVZ和SGZ区brdu阳性细胞明显增加。缺血组SVZ区brdu阳性细胞在脑缺血后7 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平;SGZ区brdu阳性细胞在脑缺血后14 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平。通过brdu累积标记和免疫组织化学双标发现:脑缺血14 d后,老年大鼠SVZ区有部分细胞显示brdu/NeuN(0.98%)或brdu/GFAP(12.56%)双标阳性,而SGZ区未见双标细胞。结论局灶性脑缺血可激活老年大鼠室管膜下区和颗粒下层的神经干细胞明显增殖,并且室管膜下区有部分增殖细胞可分化为神经元或神经胶质。

关键词：局灶性脑缺血室管膜下区颗粒下层免疫组织化学 brdu标记老年大鼠

成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓细胞增殖的研究

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解剖学报 2008年第2期39卷 160-164页

作者：管英俊于丽岳炳德高海玲陈燕春张皓云潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261042

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行brdu注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓... 详细信息

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行brdu注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓的中央管、灰质、白质均可检测到brdu阳性细胞,经常可检测到形状相似、成对出现的细胞。在灰质内,brdu阳性细胞主要分布于脊髓前角。在白质内,brdu阳性细胞散在分布。前角ALS鼠脊髓内brdu阳性细胞数量较野生型鼠多。brdu末次注射后1d、14d均可检测到brdu阳性细胞,但细胞数量逐渐减少,28d ALS鼠脊髓内仍可检测到少量brdu阳性细胞,主要分布于中央管部位。增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的分布和变化规律与brdu阳性细胞一致。在95d龄ALS鼠(brdu末次注射1d后),脊髓中Nestin阳性细胞较野生型鼠多,多数Nestin阳性细胞分布于脊髓前角,某些细胞呈brdu/Nestin双标阳性。在brdu注射后14d、28d脊髓中,未检测到brdu/Nestin双标阳性细胞。结论神经退行性病变可激活ALS转基因鼠脊髓的细胞增殖,且细胞存活可达28d。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症脊髓细胞增殖 brdu标记免疫荧光染色转基因鼠

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环境中微生物原位检测方法研究进展

生物技术通报 2017年第10期33卷 26-32页

作者：宋伟凤李明聪高峥山东农业大学生命科学学院作物生物学国家重点实验室泰安271000

微生物是生态系统物质循环和能量流动的主要参与者,在生态系统中起着重要的作用。但在现有技术条件下可培养微生物所占比例极小,限制了微生物资源的开发利用。目前有许多方法,可以避开微生物不可培养的问题,直接对微生物进行原位检测。... 详细信息

微生物是生态系统物质循环和能量流动的主要参与者,在生态系统中起着重要的作用。但在现有技术条件下可培养微生物所占比例极小,限制了微生物资源的开发利用。目前有许多方法,可以避开微生物不可培养的问题,直接对微生物进行原位检测。对此,将前人关于微生物生态的原位检测研究方法进行了综述,方便以后对这些方法的合理应用。分别从DNA水平、RNA水平和蛋白质水平,介绍了对应的原位微生物检测方法(如Brd U标记、DNA-SIP、FISH和环境转录物组等),比较了它们的优缺点,并介绍了如何将这些方法与目前流行的高通量测序、单细胞测序等技术相结合来捕获原位活性微生物组等。同时,还对这些方法的特点进行了比较,使得人们可以更清楚地了解在不同场景下对不同方法的选择。这些经过改进的新兴方法及其与其它方法的结合使用将有助于解决微生物生态学研究中出现过或即将出现的很多问题。地球上的各种生态系统复杂而庞大,包含的微生物种群也各有差异。各种原位检测方法对微生物生理生态做出了更加真实有效的描述,必将成为研究微生物生态的有力手段。

关键词：微生物原位检测 brdu标记 DNA-SIP 荧光原位杂交宏基因组转录物组生物正交反应

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移

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中华小儿外科杂志 2005年第5期26卷 260-263页

作者：屈素清栾佐闫凤青尹国才郭万里胡晓红吴南海北京海军总医院儿科第一军医大学在职研究生100037

目的观察新生鼠缺氧缺血损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移。方法制成新生鼠缺氧缺血脑损伤模型,采用单、双标免疫组织化学方法检测5溴脱氧尿苷(brdu)和巢蛋白(Nestin)的表达。brdu标记增殖的新生细胞,Nestin标记神经干细胞。结果正... 详细信息

目的观察新生鼠缺氧缺血损伤后内源性神经干细胞的增殖及迁移。方法制成新生鼠缺氧缺血脑损伤模型,采用单、双标免疫组织化学方法检测5溴脱氧尿苷(brdu)和巢蛋白(Nestin)的表达。brdu标记增殖的新生细胞,Nestin标记神经干细胞。结果正常新生鼠生后保持较短一段时间的增殖活跃,生后3d达高峰,7d后逐渐减弱,生后21d后形成与成年动物相似的发生模式。缺氧缺血损伤后,细胞增殖恢复活跃,brdu阳性细胞数于伤后4d达高峰,皮层、纹状体、海马可见散在阳性细胞,大多数brdu阳性细胞集中位于室管膜下区的背外侧角及外侧壁处,伤后7d后逐渐减少,21d更多的brdu阳性细胞迁移至损伤区;损伤后Nestin阳性细胞数增加,同时一定数量的Nestin阳性细胞由G0期进入增殖周期。结论缺氧缺血脑损伤可刺激新生鼠内源性神经干细胞的增殖及迁移。

关键词：内源性神经干细胞新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 Nestin 免疫组织化学方法缺氧缺血损伤 5-溴脱氧尿苷缺氧缺血脑损伤 brdu标记阳性细胞脑损伤模型室管膜下区细胞增殖细胞迁移增殖周期细胞数巢蛋白生后纹状体