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bgt杀虫基因的原核表达、抗体制备及在转基因白桦中表达的初步研究

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BGT杀虫基因的原核表达、抗体制备及在转基因白桦中表达的初步研究

作者：孙冬东北林业大学

学位级别：硕士

近年来植物基因工程的研究进展十分迅速,人们利用植物基因工程技术,培育出抗病毒,抗虫害,抗除草剂及抗盐,抗旱等抗逆性植物。然而,转基因植物能否长期稳定的表现出某一特定的性状,以及外源基因在转基因植物中的表达特性等问题,都需要进... 详细信息

近年来植物基因工程的研究进展十分迅速,人们利用植物基因工程技术,培育出抗病毒,抗虫害,抗除草剂及抗盐,抗旱等抗逆性植物。然而,转基因植物能否长期稳定的表现出某一特定的性状,以及外源基因在转基因植物中的表达特性等问题,都需要进行详细的研究。并且,随着环境生态安全问题,日益受到人们的关注,针对一种外源蛋白,建立一种快速的检测方法是必要的。针对上述问题,本文以转基因白桦（Betula platyphylla Suk.）中蜘蛛杀虫肽与Bt-toxin C肽融合蛋白（bgt）基因的表达产物为研究目标,采用原核表达及纯化出融合蛋白His-bgt作为抗原,并制备出特异性的抗体。初步建立起快速酶联免疫检测技术,并对bgt基因在转基因白桦中的表达特性进行了初步的研究。本文的主要研究结果具体概述如下:1成功构建了bgt杀虫基因原核表达载体pET28a-bgt,在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高效的表达,并利用金属螯合亲和层析的方法对其进行纯化,纯度可达90%以上。2利用纯化的融合蛋白His-bgt作为抗原进行兔免疫,得到相应的抗血清,采用ELISA法检测效价在1:10 000以上,并对抗血清进行了免疫亲和层析,获得了高纯度的IgG,Western blot检测具有较好的特异性。采用过碘酸钠法将抗体标记辣根过氧化物酶（HRP）,得到第二抗体即酶标抗体,标记率在85%以上。3建立了抗体-抗原-酶标抗体的抗体夹心ELISA法,并对方法进行了初步的优化。确定的抗体的最佳包被浓度为2.0μg/ml,HRP酶标抗体最适工作浓度为1:200。绘制标准曲线,对数据进行回归分析,得到了回归方程y=0.0015x-0.0694,R=0.99,该方法最低检测限为40.0 ng/ml。初步建立起检测bgt杀虫蛋白的快速、灵敏的方法。4应用建立的检测方法,检测了5月份不同转基因白桦中bgt蛋白含量占叶片可溶性总蛋白含量的0.05～0.3%,并利用Western blot验证了方法是可靠的;同时进行了转基因白桦中bgt表达的时空性变化的检测,5～9月,大部分转基因株系叶片中bgt蛋白的含量是随着植株的生着发育呈现规律性的变化;在空间上,没有明显的规律,基本上与单株目的蛋白表达量一致。针对三种害虫舞毒蛾幼虫、天幕毛虫幼虫、分月扇舟蛾幼虫,转基因白桦均表现出抗性,对舞毒蛾幼虫的抗虫效果最强。

关键词：白桦(Betula platyphylla Suk.) 转基因 bgt 原核表达 ELISA

电子技术在丝织工业中的应用——第八讲脉冲飞行式光电探纬bgt—5型

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丝绸 1976年第7期 36-38页

(一)工作原理: 脉冲飞行式光电探纬是在梭子与纡管上各开一个能够横向(或纵向)透光的小孔,使处于梭子一侧的光源发出的光线可以通过小孔而投射到处于梭子另一侧的光电池上。当梭子来回飞行时,光电池上不断接收亮暗信号。满纡梭子飞行时... 详细信息

(一)工作原理: 脉冲飞行式光电探纬是在梭子与纡管上各开一个能够横向(或纵向)透光的小孔,使处于梭子一侧的光源发出的光线可以通过小孔而投射到处于梭子另一侧的光电池上。当梭子来回飞行时,光电池上不断接收亮暗信号。满纡梭子飞行时,纡管上的小孔由于被纬纱遮住,光电池上接到的信号是两个短暗(梭子两次飞过光电池而遮光,每次持续

关键词：梭子纺织机械零部件探纬 bgt 光电池逻辑电路开关电路逻辑装置飞行航空运动电子轻子

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bgt公司对导弹预警系统进行飞行试验

航空兵器 2002年第3期 7-7页

作者：余豫西

据报道,2001年9月德国博登湖仪器公司(bgt)计划开始对机载平台进行一种新型被动红外导弹来袭预警系统的飞行试验。该系统被称为PIMA-WS,以欧洲战斗机工程为目标,自1997年已经以巨额的公司投资,按德国国防部合同进行研究发展,并将延续到2... 详细信息

据报道,2001年9月德国博登湖仪器公司(bgt)计划开始对机载平台进行一种新型被动红外导弹来袭预警系统的飞行试验。该系统被称为PIMA-WS,以欧洲战斗机工程为目标,自1997年已经以巨额的公司投资,按德国国防部合同进行研究发展,并将延续到2003年。

关键词：导弹预警系统 bgt 飞行试验试飞

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bgt公司的IRIS空空导弹

航空兵器 1993年第2期 8-8页

作者：姜继庆

波登湖技术仪器公司(bgt)在范堡罗航展上首次展出了它的 IRIS 空空导弹。此弹是该公司 AIM-9L/I 响尾蛇的改进型。这种新导弹具有 AIM-9M 的性能及电子抗干扰能力。IRIS 红外成像导引头是 bgt 公司 TELL 先进空空导弹导引头计划的成果,... 详细信息

波登湖技术仪器公司(bgt)在范堡罗航展上首次展出了它的 IRIS 空空导弹。此弹是该公司 AIM-9L/I 响尾蛇的改进型。这种新导弹具有 AIM-9M 的性能及电子抗干扰能力。IRIS 红外成像导引头是 bgt 公司 TELL 先进空空导弹导引头计划的成果,已提供给英国国防部用于参加对皇家空军ASRAAM 的竞争,但

关键词：空空导弹空对空导弹 IRIS bgt

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bgt公司研制抗激光干扰的红外导引头

飞航导弹 2001年第9期 1-1页

作者：周军

德国博登湖仪器技术公司(bgt)开发了一种方法使红外寻的导弹抗激光干扰能力更强并申请了专利.尽管前几代红外干扰机采用宽波束红外调制源来迷惑红外导引头,特别是传统的非成像型红外导引头,但现在激光被视为是干扰红外成像导引头的一种... 详细信息

德国博登湖仪器技术公司(bgt)开发了一种方法使红外寻的导弹抗激光干扰能力更强并申请了专利.尽管前几代红外干扰机采用宽波束红外调制源来迷惑红外导引头,特别是传统的非成像型红外导引头,但现在激光被视为是干扰红外成像导引头的一种方法,可以迷惑甚至破坏红外探测器.

关键词：抗激光干扰红外导引头导弹研制德国博登湖仪器技术公司 bgt

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bgt公司考虑研制地射型Iris-T

航空兵器 2003年第3期 28-28页

作者：范丽京李红民

德国博登湖仪器公司(bgt)正在考虑研制Iris-T近距空空导弹的地射型。据主运营官透露,德国工业设备有限公司(IABG)进行的对比研究评估结果表明,Iris-T用于地空作战时,将具有良好的性能。

关键词：防空系统德国导弹防御系统红外成像导引头 Iris-T bgt

Positional cloning of PmCH1357 reveals the origin and allelic variation of the Pm2 gene for powdery mildew resistance in wheat

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The Crop Journal 2019年第6期7卷 771-783页

作者： Fang Chen Haiyan Jia Xiaojun Zhang Linyi Qiao Xin Li Jun Zheng Huijuan Guo Carol Powers Liuling Yan Zhijian Chang College of Life Science Shanxi UniversityTaiyuan 030006ShanxiChina The Shanxi Province Key Laboratory of Crop Genetics and Gene Improvement Institute of Crop ScienceShanxi Academy of Agricultural SciencesTaiyuan 030031ShanxiChina Department of Plant and Soil Sciences Oklahoma State UniversityStillwaterOK 74078USA The Applied Plant Genomics Laboratory of Crop Genomics and Bioinformatics Centre Nanjing Agricultural UniversityNanjing 210095JiangsuChina Institute of Wheat Research Shanxi Academy of Agricultural SciencesLinfen 041000ShanxiChina

Powdery mildew, caused by the biotrophic fungus Blumeria graminis f. sp. tritici(bgt), is a prevalent disease in common wheat(Triticum aestivum L.) and causes serious yield losses worldwide. We used a map-based approach to clone the major broad-spectrum powdery mildew resistance gene Pm CH1357 from wheat breeding line CH1357. Pm CH1357 was mapped to a 526 kb region containing only Traes CS5 D01 G044600. The Traes CS5 D01 G044600 sequence of the susceptibility allele in Taichung 29(TC29) was identical to that in Chinese Spring, whereas the sequence of the resistance allele in CH1357 was identical to Pm2a previously cloned from the germplasm Ulka/*8Cc. The susceptibility allele in TC29 contained a 7 bp deletion in exon 1, resulting in loss of 856 of the 1277 amino acids in the predicted nucleotide-binding domain leucine-rich repeat containing Pm2a *** CH1357/Pm2a sequence was also isolated from the Chinese wheat landraces and cultivars that were previously reported to possess the resistance gene Pm2b, Pm2c,PmLX66, or PmND399. The Pm CH1357/Pm2a resistance allele was present in 10 of 495 accessions in core germplasm and contemporary cultivars from China and the USA. A newly developed diagnostic marker for the 7 bp In Del in the resistance gene can be used to eliminate the susceptibility allele in wheat breeding programs.

关键词： Map-based cloning Natural variation bgt isolate E09 Triticum aestivum Molecular breeding

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The study of proteomics of interaction between wheat and Blumeria graminis *** and Puccinia striiformis *** as well as the functional verification of the related resistant proteins

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The study of proteomics of interaction between wheat and Blu...