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多发性硬化和视神经脊髓炎患者外周血单个核细胞中Beclin 1与LC3的表达及其意义

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中华医学杂志 2014年第39期94卷 3052-3055页

作者：郑丽云薛群倪健强郭四平董万利苏州大学附属第一医院神经内科 215006

目的检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3在多发性硬化（MS）和视神经脊髓炎（NMO）患者急性期治疗前、后及复发型急性期间外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平并探讨其意义.方法所有研究对象均为2012年10月至2014年4月在苏州大学附属第... 详细信息

目的检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3在多发性硬化（MS）和视神经脊髓炎（NMO）患者急性期治疗前、后及复发型急性期间外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平并探讨其意义.方法所有研究对象均为2012年10月至2014年4月在苏州大学附属第一医院住院、门诊患者及健康体检者,采用密度-梯度离心法分离MS、NMO急性期患者（治疗前、后）与正常对照组的外周血中PBMC,应用Western印迹技术检测Beclin 1和LC3的表达水平.同时,分别随访复发缓解型MS（RRMS）和复发型NMO（RNMO）患者,对比两次急性期Beclin 1和LC3的表达变化情况.结果（1）与对照组相比,急性期MS和NMO患者外周血PBMC中Beclin 1的表达降低,LC3表达增高（P＜0.01）.（2）MS、NMO患者经过治疗后对比治疗前Beclin 1表达明显增高,LC3表达则明显降低（P＜0.01）.（3）然而随访发现RRMS和RNMO患者复发期较前次发作期Beclin 1的表达水平降低与LC3的表达增高均更加显著（P＜0.01）.结论急性期MS和NMO患者外周血PBMC中自噬水平增高,经治疗后自噬水平下降;然而在RRMS和RNMO患者复发期自噬水平进一步增高.这表明自噬水平的高低可能与MS和NMO的发生及复发相关。

关键词：多发性硬化视神经脊髓炎微管相关蛋白轻链3 Beclin 1

Beclin 1基因过表达对人乳腺癌细胞BT-549裸鼠皮下成瘤生长影响研究

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中华肿瘤防治杂志 2017年第21期24卷 1495-1500页

作者：冯少博吴爱国王梦川纪术峰邵国利张健陈丹珣雷姗姗赵侃侃王子祥南方医科大学附属珠江医院普通外科广东广州510282

目的人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响。方法... 详细信息

目的人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响。方法以重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin 1感染BT549细胞为实验组(6只),以对照慢病毒颗粒(pLenO-GTP-Vecto)感染BT549细胞为阴性对照组(6只),不做处理BT549细胞(缺失Beclin 1基因)为空白对照组(6只)。3组转染细胞分别接种至裸鼠皮下,构建人乳腺癌BT549细胞裸鼠皮下成瘤模型。观察记录裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线。裸鼠饲养28d后脱臼法处理,剥离瘤体,测定肿瘤体积和质量。用RT-PCR法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测皮下成瘤中Beclin 1基因表达情况。结果慢病毒载体构建成功,裸鼠接种各组细胞后在第7天均有肿瘤形成,实验组的瘤体平均体积为(79.66±42.52)mm3,肿瘤生长速度明显慢于阴性对照组的(358.62±58.83)mm3和空白对照组的(400.40±121.45)mm3,差异有统计学意义,F=27.34,PBeclin 1 mRNA的相对表达量为31.11±12.77,明显高于阴性对照组的0.66±0.02和空白组的1.00±0.07,差异有统计学意义,F=16.86,PBeclin 1蛋白表达量为0.212±0.078,明显高于阴性对照组的0.044±0.006和空白对照组的0.043±0.009,差异有统计学意义,F=27.418,PBeclin 1蛋白的阳性表达率为46.7%,明显高于阴性对照组的10.0%和空白对照组的16.7%,差异有统计学意义,χ2=12.34,PBeclin 1基因过表达能够明显抑制裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤的生长,Beclin 1的表达量与肿瘤成长呈负相关。

关键词：乳腺癌 Beclin 1基因皮下成瘤 BT-549细胞

微小RNA-1290靶向Beclin 1对食管癌增殖、凋亡和迁移的影响

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中华实验外科杂志 2020年第10期37卷 1901-1903页

作者：高飞曹志坤姚文健杨军峰朱晓明魏立河南省人民医院郑州大学人民医院胸外科450003

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-1290靶向Beclin 1对食管癌增殖、凋亡和迁移的影响及其分子机制。方法:收集2016年12月到2019年6月河南省人民医院收治的98例食管癌组织和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-1290表达;采用慢... 详细信息

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-1290靶向Beclin 1对食管癌增殖、凋亡和迁移的影响及其分子机制。方法:收集2016年12月到2019年6月河南省人民医院收治的98例食管癌组织和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-1290表达;采用慢病毒感染Eca-109食管癌细胞,建立miR-1290敲降细胞系和对照细胞系,分别为实验组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡能力;采用Transwell分析细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-1290的靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-1290靶蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果:与癌旁组织(1.23±0.19)比较,食管癌组织miR-1290表达水平(3.01±0.22)显著增加,差异有统计学意义(t=2.091,PBeclin 1是miR-1290的靶基因。与癌旁组织(1.09±0.19)比较,食管癌组织中Beclin 1蛋白表达水平(0.41±0.15)显著下降,差异有统计学意义(t=3.001,PBeclin 1蛋白表达水平(0.98±0.20)显著增加,差异有统计学意义(t=2.018,PBeclin 1的表达促进食管癌细胞增殖、凋亡和迁移。

关键词：微小RNA-1290 Beclin 1 食管癌增殖迁移凋亡

Beclin-1通过调节喉癌细胞上皮间充质化来影响喉癌侵袭和转移的研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第8期 0001-0007页

作者：李京鲲李仕晟欧阳磊湖南省人民医院·湖南师范大学附属第一医院耳鼻喉科湖南长沙410011 湘雅附二医院耳鼻喉科湖南长沙410000 湖南省肿瘤医院耳鼻喉科湖南长沙410000

目的上皮-间充质转化(EMT)在喉癌的转移中起着重要作用。Beclin 1已在多种人类肿瘤中作为一种肿瘤抑制基因被报道。在本文中我们证明Beclin 1通过调节EMT过程导致转移。方法对94例患者的LSCC标本进行免疫组化分析,并进行随访。此外,使... 详细信息

目的上皮-间充质转化(EMT)在喉癌的转移中起着重要作用。Beclin 1已在多种人类肿瘤中作为一种肿瘤抑制基因被报道。在本文中我们证明Beclin 1通过调节EMT过程导致转移。方法对94例患者的LSCC标本进行免疫组化分析,并进行随访。此外,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分析测定LSCC肿瘤组织癌盘组织中Beclin 1的表达水平。在LSCC细胞系Hep-2中,下调Beclin 1。通过Transwell和划痕试验检测其侵袭和迁移能力。western blot检测间充质标志物N钙粘蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白和SLUGand TWIST的表达。结果Beclin 1在喉鳞状细胞癌中的表达明显低于癌旁组织。低Beclin 1水平与预后不良相关。RNA干扰显著抑制Beclin 1的表达。Hep2细胞的伤口愈合能力和细胞侵袭能力也受到抑制。此外,Beclin-1下调显著增加Hep2细胞中波形蛋白和N-钙粘蛋白的表达、β-catenin和SLUG的表达。结论Beclin 1可以通过诱导EMT来促进喉鳞状细胞癌的侵袭。

关键词： Beclin 1 喉鳞状细胞癌上皮间充质化侵袭转移

自噬相关蛋白Beclin 1在肝脏缺血再灌注损伤模型中的作用

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世界华人消化杂志 2016年第2期24卷 209-214页

作者：徐玉彬张培建刘谦毛旭南王超臣扬州大学第二临床医学院普通外科研究室江苏省扬州市225002

手术切除是原发性肝癌的最佳治疗方法,手术治疗往往面临肝脏储备功能衰退、残肝缺血再灌注损伤等弊端,这些因素明显增加了肝癌手术治疗或肝移植的难度和风险.自噬是肝脏缺血再灌注后细胞程序性死亡方式之一,其在缺血再灌注伤损中的作用... 详细信息

手术切除是原发性肝癌的最佳治疗方法,手术治疗往往面临肝脏储备功能衰退、残肝缺血再灌注损伤等弊端,这些因素明显增加了肝癌手术治疗或肝移植的难度和风险.自噬是肝脏缺血再灌注后细胞程序性死亡方式之一,其在缺血再灌注伤损中的作用是近年来研究的热点.在模拟肝脏缺血再灌注损伤的实验研究时,常检测到自噬相关蛋白Beclin 1的变化,并以此代表自噬活动变化.目前已发现多种预处理方法可降低肝脏缺血再灌注损伤模型中Beclin 1蛋白的含量并且减轻肝损伤.现就Beclin 1在肝脏缺血再灌注损伤模型中的研究进展作一综述.

关键词：自噬 Beclin 1 缺血再灌注肝脏

电离辐射对Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型细胞自噬和凋亡的影响及其调控机制

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吉林大学学报（医学版） 2015年第6期41卷 1139-1143页

作者：张晶赵大力谢忠伟刘彦军李志君李岩龚守良齐亚莉北华大学公共卫生学院流行病学教研室吉林吉林132011 吉林(市)出入境检验检疫局吉林吉林132012 吉林省长春市人民医院肿瘤治疗科吉林长春130051 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室吉林长春130021

目的:建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,检测4Gy照射后细胞自噬和凋亡的变化,探讨Beclin 1的分子调控作用机制。方法:实验分为MCF-7组、MCF-7+4Gy组、MCF-7-Beclin1+4Gy组和MCF-7-Belin1RNAi+4 Gy组。利用分子生物学方法构建Bec... 详细信息

目的:建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,检测4Gy照射后细胞自噬和凋亡的变化,探讨Beclin 1的分子调控作用机制。方法:实验分为MCF-7组、MCF-7+4Gy组、MCF-7-Beclin1+4Gy组和MCF-7-Belin1RNAi+4 Gy组。利用分子生物学方法构建Beclin 1过表达载体pcDNA3.1-Beclin 1,并建立Beclin 1过表达和低表达细胞模型。细胞经4 Gy照射后,采用MDC染色荧光显微镜观察自噬细胞百分比,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测凋亡细胞百分比,Western blotting法检测Beclin 1、P53、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与MCF-7组比较,MCF-7+4Gy组、MCF-7-Beclin 1+4Gy组和MCF-7-Beclin 1RNAi+4Gy组自噬和凋亡细胞百分比均明显升高(PBeclin 1+4Gy组升高最明显,且高于MCF-7+4Gy组(PBeclin 1组细胞中Beclin 1、P53和Bax蛋白表达水平均升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,且以MCF-7-Beclin 1组最为明显。结论:成功建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,电离辐射能够诱导其细胞自噬和凋亡,且对Beclin 1过表达细胞作用更明显。Beclin1通过激活P53,进而抑制Bcl-2和激活Bax,从而形成以P53为中心的自噬与凋亡分子调控机制。

关键词：自噬细胞凋亡电离辐射 Beclin 1 P53

Beclin 1蛋白增强三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的研究

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肿瘤防治研究 2015年第5期42卷 436-441页

作者：范旭龙吴爱国朱大江焦庆丽郑临海邵国利王梦川纪术峰南方医科大学附属佛山妇幼保健院乳腺疾病防治中心佛山528000 南方医科大学珠江医院普外科广州510280

目的探讨Beclin 1蛋白与三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的关系。方法应用慢病毒介导p Len O-GTP-BECN1表达载体稳定转染至BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞,设立对照组。使用不同浓度5-Fu处理各组细胞,MTT法比较细胞对5-Fu的敏感度;流式... 详细信息

目的探讨Beclin 1蛋白与三阴性乳腺癌细胞对5-Fu敏感度的关系。方法应用慢病毒介导p Len O-GTP-BECN1表达载体稳定转染至BT-549细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞,设立对照组。使用不同浓度5-Fu处理各组细胞,MTT法比较细胞对5-Fu的敏感度;流式细胞术和Hoechst33342实验检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8表达情况。结果成功构建稳定表达Beclin 1蛋白的BT-549细胞株。p Len O-GTP-BECN1组对5-Fu敏感度显著高于其他两组;5-Fu作用48 h后,p Len O-GTP-BECN1组的IC50为(3.54±0.20)μg/ml,显著低于空白载体p Len O-GTP组(14.45±1.81)μg/ml和空白组(79.40±8.34)μg/ml(F=207.902;PBeclin 1显著提高三阴性乳腺癌细胞对5-Fu的敏感度,其中促进凋亡发生可能是重要机制之一。

关键词： Beclin 1 三阴性乳腺癌 5-氟尿嘧啶凋亡

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Beclin 1在凋亡和自噬中的调节作用

中国生物化学与分子生物学报 2015年第4期31卷 331-338页

作者：张雨晴张丽慧魏尔清杨怡杭州师范大学医学院药理教研室杭州310036 浙江大学医学院药理学系杭州310058

Beclin 1是自噬关键调控蛋白之一,参与自噬体膜形成.近期,大量研究结果指出,Beclin 1是caspase家族蛋白酶的全新底物,可被caspase剪切.剪切后的Beclin 1失去自噬调节功能,转而加剧凋亡进程.因而,Beclin 1对细胞凋亡和自噬起着重要的调... 详细信息

Beclin 1是自噬关键调控蛋白之一,参与自噬体膜形成.近期,大量研究结果指出,Beclin 1是caspase家族蛋白酶的全新底物,可被caspase剪切.剪切后的Beclin 1失去自噬调节功能,转而加剧凋亡进程.因而,Beclin 1对细胞凋亡和自噬起着重要的调控作用.本文主要对细胞凋亡和自噬的相关性,以及Beclin 1在两通路中的调控作用进行了回顾与总结.在此基础上,进一步讨论了Beclin 1与人类疾病如肿瘤、神经系统退行性疾病的关联.最后,简要介绍了实验室常用于Beclin 1研究的工具.

关键词： Beclin 1 自噬凋亡肿瘤神经系统退行性疾病

RNA干扰抑制Beclin1基因对裸鼹鼠成纤维细胞增殖与凋亡的影响

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中国实验动物学报 2015年第6期23卷 557-561,566页

作者：赵善民肖邦林丽芳宫晨王运慧程继帅余琛琳丛薇汤球孙伟崔淑芳第二军医大学实验动物中心上海200433

目的应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H_2O_2刺激等处理后Beclin 1的表达,然后采... 详细信息

目的应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H_2O_2刺激等处理后Beclin 1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞。采用real-time PCR及Western blot法检测沉默效果后,采用CCK-1实验检测沉默后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,然后采用Western blot检测相关基因蛋白表达水平。结果饥饿与H_2O_2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变。采用gene expresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90%以上,real-time PCR及Western blot结果显示所设计的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表达。Beclin 1基因沉默后,裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组,细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高,同时p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、m TOR等表达量下降。结论 Beclin 1在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H_2O_2刺激等过程中表达量显著变化,同时抑制Beclin 1的表达,可抑制裸鼹鼠细胞增殖,促进其凋亡,这提示Beclin 1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用。

关键词：裸鼹鼠成纤维细胞 Beclin 1 RNA干扰增殖凋亡