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bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的临床特点

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实用儿科临床杂志 2006年第15期21卷 977-978页

作者：王彬吴敏媛李志刚周翾谢静首都医科大学附属北京儿童医院血液病中心北京100045

目的总结bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿临床特点,探讨其治疗及预后的相关因素。方法对经巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcr/abl融合基因阳性ALL患儿临床表现、治疗、预后进行回顾性分析。结果bcr/abl融合基... 详细信息

目的总结bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿临床特点,探讨其治疗及预后的相关因素。方法对经巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcr/abl融合基因阳性ALL患儿临床表现、治疗、预后进行回顾性分析。结果bcr/abl融合基因阳性ALL患儿20例。中位年龄9岁,普通B细胞型ALL 19例(95%);治疗d33骨髓完全缓解率为66.7%,16例中7例复发(45%),持续缓解时间2年以上6例;5例接受造血干细胞移植(HSCT),均骨髓复发;6例存活患者中均为单纯化疗,bcr/abl融合基因已转阴。1例T细胞表型患儿于化疗缓解3个月骨髓复发,接受移植术后1个月骨髓再次复发。结论bcr/abl融合基因阳性ALL患儿化疗效果差,难缓解,复发率高,预后差,T细胞表型预后更差。部分对化疗敏感的患儿bcr/abl融合基因持续阴性。异基因HSCT复发率也较高。

关键词： bcr/abl融合基因白血病淋巴细胞急性儿童临床表现治疗预后

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作者：蒲莲芳安徽医科大学

学位级别：硕士

背景Micro RNAs(mi RNAs)是长度为20-22个核苷酸的单链非编码小分子RNA,在真核生物细胞中广泛表达,通过与靶基因m RNA结合诱导其降解或阻遏翻译过程以调控靶基因表达。mi RNA在细胞生长发育过程起着重要的作用,参与细胞的增殖、分化、... 详细信息

背景Micro RNAs(mi RNAs)是长度为20-22个核苷酸的单链非编码小分子RNA,在真核生物细胞中广泛表达,通过与靶基因m RNA结合诱导其降解或阻遏翻译过程以调控靶基因表达。mi RNA在细胞生长发育过程起着重要的作用,参与细胞的增殖、分化、凋亡等过程。mi RNA还可以通过不同的调节途径参与肿瘤的形成,其异常表达与人类肿瘤的发生、发展密切相关。近年来研究也表明,mi RNA不仅在调节造血干/祖细胞增殖、分化及凋亡过程中起着重要作用,还参与了白血病的发生与发展。急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia,ALL)是起源于淋巴细胞系(前体B、T或成熟B淋巴细胞)的恶性克隆性疾病,是血液系统常见的恶性肿瘤之一。儿童急性白血病中ALL约占80%,高发年龄段是2-5岁,成人急性白血病中ALL约占20%,高发年龄段是50岁以后,85%的儿童ALL与75%的成人ALL是B-ALL。随着治疗方案的不断改善,B-ALL的缓解率大大提高,儿童患者多数可以达到完全缓解。bcr/abl融合基因是由9号染色体上的原癌基因abl,易位至22号染色体的bcr区,形成t(9;22)(q34;q11),即bcr/abl融合基因。它是B-ALL染色体异常的一种类型,称为bcr/abl融合基因阳性的B-ALL。尽管随着新技术和新药物等诊断和治疗方法应用于临床,使得B-ALL的早期诊断和预后有了很大提高,但bcr/abl融合基因阳性的B-ALL患者完全缓解困难或完全缓解后易复发,该类患者预后差,死亡率高的情况仍未改善,3-5年的无病生存期(disease-free survival,DFS)bcr/abl融合基因阳性B-ALL致病机制进行进一步深入研究,对其诊疗、预后判断,甚至对靶向治疗药物的设计均有重要意义。虽然已有文献报道参与bcr/abl融合基因阳性的B-ALL的发生发展的重要基因和通路,但大多数集中于编码基因编码蛋白质的分子网络研究,对于非编码基因mi RNAs参与该类B-ALL的作用研究鲜见。目的通过高通量深度测序及荧光定量PCR技术分析和发现bcr/abl阳性B-ALL相关或特异mi RNAs,初步明确其对该类高危急性白血病的作用性质;生物信息学分析和寻找这些mi RNAs关系密切的靶基因,为bcr/abl阳性B-ALL发生发展的致病机制研究,以及诊断、治疗、预后分析提供理论基础和新的思路。方法共收集139例住院患者的骨髓标本,其中初诊B-ALL患者68例为实验组;初诊CML患者7例,初诊APL患者11例为疾病对照组;正常对照组患者53例。通过多重巢式PCR结合细胞学、免疫学及细胞遗传学技术确诊bcr/abl阳性或阴性B-ALL及其他白血病;流式细胞分选bcr/abl阳性及阴性B-ALL白血病细胞;提取总RNA,行mi RNAs深度基因测序,筛选差异表达mi RNAs;荧光定量PCR进行大临床样本的进一步验证和发现bcr/abl阳性B-ALL相关mi RNAs;选取部分bcr/abl阳性B-ALL相关mi RNAs,电转染其模拟物至bcr/abl阳性及阴性B-ALL白血病细胞株,CCK-8检测这些相关mi RNAs对bcr/abl阳性B-ALL白血病细胞生长的影响,明确其初步的生物学功能;生物信息学分析和寻找这些相关mi RNAs的靶基因,分析和探讨其与bcr/abl融合基因及其他基因的调控作用和结合位点。结果***/abl阳性B-ALL中存在差异性表达的mi RNAs,这些mi RNAs在正常对照组及正常核型B-ALL中的表达水平亦存在差异。***/abl阳性B-ALL中差异性表达的mi RNAs在不同类型的白血病中的表达水平也存在差异。*** R-183、4485、5008、5582等相关mi RNAs在bcr/abl阳性及阴性B-ALL细胞株中也存在差异性表达。*** R-183,4485、5008、5582等bcr/abl阳性B-ALL相关mi RNAs在bcr/abl阳性B-ALL细胞株中的过表达可抑制bcr/abl阳性B-ALL细胞增殖。***/abl阳性B-ALL相关mi RNAs在bcr、abl及bcr/abl融合基因中可能存在直接作用靶点,从而直接或间接参与bcr/abl阳性B-ALL的发生发展。结论bcr/abl阳性B-ALL存在低水平表达的mi R-183、4485、5008、5582等mi RNAs,这些bcr/abl阳性B-ALL相关的mi RNAs可负性调控bcr/abl阳性B-ALL细胞的生长,进而可能参与该类B-ALL的发生、发展过程;此外,这些mi RNAs在bcr、abl特别是bcr/abl融合基因中可能存在直接作用靶点,从而

关键词：急性白血病 B-ALL bcr/abl融合基因微小RNA 作用机制

新型比率型电化学生物传感器的构建及对bcr/abl融合基因的检测

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分析化学 2022年第5期50卷 692-704页

作者：陈美君刘雅兰王颖戈芷琪张修华王升富何汉平湖北大学化学化工学院湖北大学省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室

采用普鲁士蓝(PB)和硫堇(Thi)两种电化学信号物质，同时引入核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)辅助目标循环和杂交链式反应(HCR)两种信号放大策略，构建了一种超灵敏比率型电化学生物传感器，用于bcr/abl融合基因的检测。首先，通过恒电位沉积法在玻... 详细信息

采用普鲁士蓝(PB)和硫堇(Thi)两种电化学信号物质，同时引入核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)辅助目标循环和杂交链式反应(HCR)两种信号放大策略，构建了一种超灵敏比率型电化学生物传感器，用于bcr/abl融合基因的检测。首先，通过恒电位沉积法在玻碳电极表面形成一层普鲁士蓝(PB)薄膜，在其上固定捕获DNA。然后，将发夹DNA(H1)与目标DNA杂交配对，在ExoⅢ作用下，目标DNA被释放，可进入下一次循环，同时释放出发夹DNA的部分单链片段(Trigger-DNA),此单链可被PB膜和辅助DNA修饰电极捕获，继而在此修饰电极表面进行HCR反应，形成典型的Y形线性DNA串联体。此时，PB的电化学信号降低；另一方面，形成的串联体与Thi通过静电作用结合后，呈现高的Thi电化学响应。Thi和PB的电流响应信号比值(IT/IP)的对数与目标DNA的浓度对数在1 pmol/L～100 nmol/L范围内具有良好的线性关系，线性方程为lg(IT/IP)=1.094×lgC+0.156,检出限为0.19 pmol/L。本方法对bcr/abl融合基因具有较高的选择性。此比率型电化学生物传感器为慢性粒细胞白血病(CML)的诊断和预后提供了一种简单可行的策略。

关键词：比率型电化学生物传感器 bcr/abl融合基因核酸外切酶Ⅲ辅助目标循环杂交链式反应慢性粒细胞白血病

两例Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病患者具有少见型bcr/abl融合基因

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中华血液学杂志 2004年第7期25卷 409-412页

作者：秦亚溱刘艳荣李金兰王卉常艳付家瑜阮国瑞史惠琳丘镜滢陆道培陈珊珊北京大学人民医院血液病研究所 100044

目的　研究 2例Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病慢性期 (CML CP)患者异常的bcr/abl融合基因结构。方法　分别采用常规的M 及 μ 型bcr/abl融合转录子特异性引物进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,对RT PCR扩增产物测序进行序列同源性分... 详细信息

目的　研究 2例Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病慢性期 (CML CP)患者异常的bcr/abl融合基因结构。方法　分别采用常规的M 及 μ 型bcr/abl融合转录子特异性引物进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,对RT PCR扩增产物测序进行序列同源性分析 ,以确定扩增产物的成分及bcr/abl融合转录子类型 ,其中 1例根据测序结果设计引物并通过PCR研究其DNA水平bcr与abl基因融合方式。结果　 2例患者临床表现均符合典型CML CP特征 ,RT PCR扩增后均未见典型的M 及 μ 型扩增带 ,而分别出现一条异常的条带 ,产物大小分别介于M 及 μ bcr/abl之间及小于M bcr/abl。经序列分析证明RT PCR产物均含有bcr及abl基因序列 ,例 1的bcr基因断裂发生在第 18外显子 (e18)内部 ,abl基因融合位点为常见的外显子 2 (a2 )处 ,它们之间插入了 4 0bp的部分abl基因内含子 1b序列 ,为一种新型的符合阅读框架结构的bcr/abl融合转录子e18 int a2。经PCR证明该融合发生在DNA水平。例 2的融合转录子中缺失典型M bcr/abl(b2a2 )融合基因中abl基因外显子 2 (a2 ) ,为e13a3(b2a3)型。结论　少见型bcr/abl融合基因可见于典型Ph染色体阳性CML患者并产生异常的RT PCR扩增带。

关键词： Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病 bcr/abl融合基因 CML-CP 逆转录聚合酶链反应

二氢青蒿素对K562细胞bcr／abl融合基因表达的影响及意义

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中华医学遗传学杂志 2012年第1期29卷 19-22页

作者：高加良丁显平李启杰夏增亮夏庆杰四川大学生命科学学院遗传医学研究所生物资源与生态环境教育部重点实验室（高加良、丁显平、李启杰、夏增亮、夏庆杰）；成都市血液中心（高加良）成都610064

目的探讨二氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）对白血病细胞K562bcr／abl融合基因表达的影响及意义。方法采用噻唑蓝比色方法检测不同浓度的DHA对于K562细胞的增殖抑制作用，并计算不同培养时间点的抑制率。用逆转录PCR检测K562细胞... 详细信息

目的探讨二氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）对白血病细胞K562bcr／abl融合基因表达的影响及意义。方法采用噻唑蓝比色方法检测不同浓度的DHA对于K562细胞的增殖抑制作用，并计算不同培养时间点的抑制率。用逆转录PCR检测K562细胞处理前后bcr／abl融合基因的表达变化，流式细胞仪检测K562细胞的凋亡情况。结果DHA（10-160μmol／L）能抑制K562细胞的增殖，随着浓度增加抑制作用明显增强，培养24h后抑制率从52．76％增加到94．65％；用浓度为20μmol／L的DHA对K562细胞作用12-48h后，逆转录PCR检测bcr／abl融合基因表达，△Ct值为4．45±0．25和5．23±0．21。与对照组（4．23±0．21）相比，差异有统计学意义（P〈O．05）。结论DHA可通过影响bcr／abl融合基因的表达抑制K562细胞的增殖。这可能是导致K562细胞凋亡的原因之一。

关键词：二氢青蒿素白血病 K562细胞 bcr/abl融合基因

CML患者循环内皮细胞中bcr/abl融合基因表达水平及其临床意义的研究

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中国实验血液学杂志 2014年第4期22卷 927-931页

作者：吴静怡黄亮周剑峰裴仁治马俊霞张丕胜刘旭辉杜小红陈冬沙科娅李双月曹俊杰浙江省宁波市鄞州人民医院血液内科浙江宁波315000 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科湖北武汉430030

越来越多的证据显示,肿瘤组织的血管内皮细胞有着与正常血管内皮细胞不同的特征。这些肿瘤血管内皮系统与肿瘤的发生发展密切相关。本研究分离慢性髓系白血病(CML)患者外周血中的循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CEC),研究... 详细信息

越来越多的证据显示,肿瘤组织的血管内皮细胞有着与正常血管内皮细胞不同的特征。这些肿瘤血管内皮系统与肿瘤的发生发展密切相关。本研究分离慢性髓系白血病(CML)患者外周血中的循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CEC),研究其生物学特性及增殖潜能,并测定其CD133及bcr/abl融合基因的表达水平,探讨CEC在CML自然病程中的重要作用。用淋巴细胞分离液分离CML患者外周血中的单个核细胞,应用免疫磁珠分选CD45-及CD146+的细胞,在相差显微镜下观察其形态,进行体外培养并绘制其生长曲线;采用免疫荧光染色法测定CEC表面CD31、CD34、VWF及CD133的表达情况;利用FISH技术检测bcr/abl融合基因的阳性率。结果表明,CML患者外周血中分离的CEC具有典型血管内皮细胞形态,表达血管内皮细胞表面抗原CD31、CD34、VWF,增殖能力明显强于健康对照组,12名CML患者CEC中CD133表达的阳性率为31.29%,与健康对照组相比有显著性差异(Pbcr/abl融合基因阳性率为10.77%,与疾病进程呈现正性相关的趋势。结论:CML患者的CEC是肿瘤侵袭发展的重要组成部分,与疾病的传播和扩散有关。

关键词：慢性粒细胞白血病 bcr/abl融合基因循环内皮细胞

慢性粒细胞白血病Ph^1染色体和bcr/abl融合基因检测的意义

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吉林大学学报（医学版） 2005年第1期31卷 108-110页

作者：张福明袁长吉张淑芹赖增新王冠军吉林大学第一医院血液科吉林长春130021 吉林大学再生医学研究所细胞生物学研究室吉林长春130021 吉林省人民医院血库吉林长春130021

目的 :探讨 Ph1染色体和 bcr/ abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。方法 :选择 95例慢性粒细胞白血病患者和 2 0例缺铁性贫血患者作为研究对象 ,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT- PCR法分析 bcr/ abl融合基因。... 详细信息

目的 :探讨 Ph1染色体和 bcr/ abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。方法 :选择 95例慢性粒细胞白血病患者和 2 0例缺铁性贫血患者作为研究对象 ,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT- PCR法分析 bcr/ abl融合基因。结果 :95例慢性粒细胞白血病患者中 ,Ph1染色体阳性者 83例 (87.4 % ) ,bcr/ abl阳性阳性者 90例 (94 .7% ) ,Ph1和 bcr/ abl均阳性 83例 (94 .7% ) ,Ph1阴性、bcr/ abl阳性 7例 (7.4 % ) ,Ph1 和 bcr/ abl均阴性 5例 (5 .3% )。 2 0例缺铁性贫血患者 Ph1 和 bcr/ abl均阴性。结论 :Ph1 染色体、 bcr/ abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断。

关键词：白血病,髓性,慢性/诊断 Ph^1染色体 bcr/abl融合基因诊断,鉴别

双色双融合荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因的临床意义

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中华肿瘤杂志 2002年第4期24卷 364-364页

作者：吴彬周淑芸刘晓力宋兰林第一军医大学南方医院血液科广州510515

目的　检测bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病 (CML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)和真性红细胞增多症 (PV)中的表达 ,以了解其临床意义。方法　采用双色标记双融合bcr/abl探针进行荧光原位杂交 (D FISH) ,检测了 6 7例患者骨髓中期和 (... 详细信息

目的　检测bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病 (CML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)和真性红细胞增多症 (PV)中的表达 ,以了解其临床意义。方法　采用双色标记双融合bcr/abl探针进行荧光原位杂交 (D FISH) ,检测了 6 7例患者骨髓中期和 (或 )间期细胞。结果　 38例CML患者中 ,bcr/abl阳性为 34例 ,占 89.5 % ,其中 1例患者发病时 ,细胞遗传学显示典型的t(9;2 2 ) ,应用干扰素治疗 38个月后 ,bcr/abl基因转为阴性 ;1例异基因外周血造血干细胞移植术后 6 0d的患者 ,细胞形态学及细胞遗传学均显示完全缓解 ,但FISH检测仍有 3.0 %的细胞为bcr/abl基因阳性。 2 4例ALL患者中 ,6例bcr/abl阳性 ,占 2 5 .0 %。 2例PV患者bcr/abl阴性。 3例CML待排的患者bcr/abl均阴性 ,其中1例确诊为原发性血小板增多症 ;1例进一步检测ETO/AML1基因后诊断为M2a;1例仍未能明确诊断。 3例bcr/abl阴性的CML中 ,难治性白血病 2例 ;6例bcr/abl阳性的ALL中 ,难治性白血病 5例。结论　用双色双融合bcr/abl探针进行FISH杂交 ,可准确地检测出bcr/abl融合基因 ,是临床诊断、判定预后及微小残留病的有效监测指标。

关键词：临床意义 bcr/abl融合基因 AML ALL 双色双融合荧光原位杂交白血病

双色双融合与额外信号探针在bcr/abl融合基因检测中的比较及其意义

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中华医学遗传学杂志 2011年第2期28卷 220-222页

作者：杜庆华应逸陈晓燕李庆山王顺清莫文健广州市第一人民医院血液科 510180

目的探讨DCCF（dual color dual fusion）探针与ES（extra signal）探针在bcr/abl融合基因检测中信号表现的特点,并明确其信号特征与染色体核型的相互关系.方法对初治65例慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia,CML）及50例... 详细信息

目的探讨DCCF（dual color dual fusion）探针与ES（extra signal）探针在bcr/abl融合基因检测中信号表现的特点,并明确其信号特征与染色体核型的相互关系.方法对初治65例慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia,CML）及50例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患者骨髓标本进行bcr/abl的DCDF探针的荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测,FISH阳性标本则使用ES探针再次进行荧光原位杂交进行bcr断裂点的检测,同时对其中47例CML和40例ALL进行了核型分析.结果 FISH结果示65例CML均为bcr/abl阳性,DCDFFISH中有17例为非典型信号表现,ES-FISH有12例为非典型信号表现;50例ALL中7例bcr/abl阳性,ES探针显示5例bcr断裂点位于m-bcr,2例位于M-bcr.核型分析CML检出Ph阳性98%（43/44）,ALL检出Ph阳性22%（7/32）.结论 DCDF-FISH、ES-FISH以及核型分析各有其特性.根据每种方法的特性,对实验结果进行综合分析可对遗传学特征作出更准确判断.

关键词：慢性粒细胞白血病 bcr/abl融合基因荧光原位杂交 ES探针 DCDF探针费城染色体