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中国普通外科杂志 2020年第7期29卷 849-856页

作者：刘佳玲黄林生张朔祁莎莎鲍阳李飞湖北医药学院药学院药理学系湖北十堰442000 湖北省十堰市太和医院肝胆胰外科湖北十堰442000 武当特色中药研究湖北省重点实验室湖北十堰442000

背景与目的:已有研究显示,bcl-2转录抑制因子1(Bit1)在多种肿瘤中异常表达并在肿瘤进展中发挥重要作用,Bit1在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及临床意义值得探讨。本研究通过检测Bit1在HCC组织中的表达,分析其与HCC患者临床病理特征及预后... 详细信息

背景与目的:已有研究显示,bcl-2转录抑制因子1(Bit1)在多种肿瘤中异常表达并在肿瘤进展中发挥重要作用,Bit1在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及临床意义值得探讨。本研究通过检测Bit1在HCC组织中的表达,分析其与HCC患者临床病理特征及预后的关系,从而探讨Bit1在HCC中的临床意义。方法:采用q RT-PCR、Westernblot检测34例HCC患者手术切除癌组织及对应癌旁组织Bit1m RNA及蛋白表达情况,用免疫组化法检测组织芯片中90例HCC患者癌组织与对应癌旁组织Bit1蛋白表达情况并分析其表达与HCC患者临床病理参数及预后的关系。结果:q RT-PCR与Westernblot检测结果显示,与癌旁组织比较,Bit1在HCC组织中的m RNA及蛋白表达水平均明显上调(P1蛋白定位于细胞质,其在癌组织中的高表达率明显高于癌旁组织(P1在HCC组织中的表达与HCC患者肿瘤的复发及病理分级明显有关(均P1蛋白高表达患者总生存率和无病生存率低于Bit1蛋白低表达患者,但差异均未达统计学意义(P=0.547、0.414)。结论:Bit1在HCC组织中高表达,且Bit1表达与肿瘤的复发及病理分级密切相关,提示Bit1可能是影响肿瘤进展的重要分子,其有望成为HCC患者个体化治疗靶点。

关键词：癌,肝细胞 bcl-2转录抑制因子1 生物标记,肿瘤

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bcl-2转录抑制因子1在胃癌中的表达及其生物学功能

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中国普通外科杂志 2022年第4期31卷 481-489页

作者：赵馨旭黄林生刘佳玲韩俊祥余惠凡李飞湖北医药学院药学院湖北十堰442000 湖北医药学院附属太和医院肝胆胰外科湖北十堰442000

背景与目的:失巢凋亡效应分子bcl-2转录抑制因子1(Bit1)在胃癌组织中存在异常表达,Bit1在胃癌中功能及作用机制如何值得研究。本研究旨在进一步观察Bit1在胃癌组织中的表达,并初步分析其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:用Western blo... 详细信息

背景与目的:失巢凋亡效应分子bcl-2转录抑制因子1(Bit1)在胃癌组织中存在异常表达,Bit1在胃癌中功能及作用机制如何值得研究。本研究旨在进一步观察Bit1在胃癌组织中的表达,并初步分析其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:用Western blot检测20例原发性胃癌患者癌组织及癌旁组织手术标本中Bit1蛋白的表达;将胃癌BGC-803细胞分别转染Bit1 shRNA慢病毒载体或空病毒载体后,以无处理的野生型BGC-803细胞为空白对照,用细胞免疫荧光实验验证转染效率与Bit1沉默效果,并分别用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞增殖实验及TUNEL实验检测细胞侵袭、迁移、增殖及凋亡情况。结果:Western blot结果显示,与对应癌旁组织比较,Bit1在胃癌组织中蛋白表达水平明显上调(P转染成功且Bit1被有效沉默。细胞行为学实验显示,与空白对照细胞比较,转染Bit1 shRNA后的BGC-803细胞的划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数量明显减少、细胞增殖活性明显减弱、晚期凋亡细胞数明显增加(均P转染空载体的BGC-803细胞以上细胞行为学指标与空白对照细胞间的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:Bit1在胃癌中表达上调,并与胃癌细胞的恶性生物学行为密切相关,其有可能是与胃癌发生、发展、预后相关联的生物标志物及潜在治疗靶点。

关键词：胃肿瘤 bcl-2转录抑制因子1 肿瘤侵润细胞凋亡

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失巢凋亡效应分子bcl-2转录抑制因子1的研究进展

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肿瘤研究与临床 2020年第2期32卷 133-136页

作者：刘佳玲黄林生叶星宇周洁李飞湖北医药学院药学院十堰442000 湖北省十堰市太和医院肝胆胰外科 442000

bcl-2转录抑制因子1(Bit1)是失巢凋亡效应分子,可通过下调bcl-2表达发挥非caspase依赖型促凋亡功能。已有研究发现,Bit1可通过Erk、FAK-PI3K-Akt-NF-κB等通路影响细胞生存与凋亡。Bit1在各肿瘤中表达水平呈现显著肿瘤特异性,并与肿瘤TN... 详细信息

bcl-2转录抑制因子1(Bit1)是失巢凋亡效应分子,可通过下调bcl-2表达发挥非caspase依赖型促凋亡功能。已有研究发现,Bit1可通过Erk、FAK-PI3K-Akt-NF-κB等通路影响细胞生存与凋亡。Bit1在各肿瘤中表达水平呈现显著肿瘤特异性,并与肿瘤TNM分期、分化程度及预后密切相关。文章将对Bit1在不同肿瘤中的表达情况、主要作用机制及其意义进行综述。

关键词：细胞凋亡肿瘤 bcl-2转录抑制因子1

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Bit1在胃癌中的生物学功能及其影响胃癌进展机制初步探讨

Bit1在胃癌中的生物学功能及其影响胃癌进展机制初步探讨

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作者：赵馨旭湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:2018年《CA:A Cancer Journal for Clinicians》杂志报道的全球最新癌症数据显示:恶性肿瘤中,胃癌发生率列第5位,病死率列第3位。胃癌易发生远端转移。因此,寻求新的胃癌生物标志物,探究其潜在分子机制,对早期胃癌诊断、改善患者... 详细信息

背景:2018年《CA:A Cancer Journal for Clinicians》杂志报道的全球最新癌症数据显示:恶性肿瘤中,胃癌发生率列第5位,病死率列第3位。胃癌易发生远端转移。因此,寻求新的胃癌生物标志物,探究其潜在分子机制,对早期胃癌诊断、改善患者预后有重要意义。失巢凋亡效应分子Bit1在多种肿瘤中表达异常,可发挥抑癌或促癌两种相反的作用。已有研究通过免疫组化法初步显示:Bit1在正常胃组织中低表达,而在胃癌组织、非典型增生组织中表达增强,提示Bit1可能参与胃癌发生发展。但目前为止,尚无Bit1对胃癌细胞生物学功能影响及其在胃癌中具体机制的相关研究。目的:本课题旨在探究Bit1在胃癌组织中的表达及临床意义,首次阐明Bit1在胃癌中的生物学功能,初步探讨Bit1高表达胃癌中Bit1影响胃癌进展的潜在作用机制,为探索以Bit1为靶点的胃癌相关研究提供新思路。方法:1.通过Western blot、WES、RT-q PCR、组织芯片免疫组化法、生物信息学方法明确胃癌组织中Bit1的表达情况与临床意义。*** blot实验筛选内源性高表达Bit1的胃癌细胞系BGC-803;通过慢病毒转染BGC-803细胞,干预其内源性Bit1表达;通过细胞划痕、Transwell实验分析不同Bit1表达水平对胃癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过CCK-8细胞增殖实验分析沉默Bit1对胃癌细胞增殖能力的影响;TUNEL实验及流式细胞术分析不同Bit1表达水平对胃癌细胞凋亡的影响;透射电镜观察不同Bit1表达水平对胃癌细胞线粒体形态、结构的影响。阐明Bit1在胃癌细胞中的生物学功能。3.生物信息学分析结果提示,胃癌组织中高表达的Bit1可能与EMT存在一定关联。我们通过Western blot及细胞免疫荧光法检测不同Bit1表达水平对胃癌细胞增殖、凋亡相关分子及EMT标志蛋白表达的影响,探究Bit1是否通过作用EMT影响胃癌进展。4.生物信息学分析结果提示,胃癌组织中高表达的Bit1可能与MMPs及integrinβ1具有一定相关性。通过Western blot验证不同Bit1表达水平对胃癌细胞中MMP-2、MMP-9及integrinβ1表达的影响,提示Bit1高表达胃癌中Bit1可能通过调节MMPs的表达,促进ECM降解进而影响胃癌进程。结果:1.胃癌组织中Bit1表达水平及临床意义通过WES、Western blot、RT-q PCR检测原发性胃癌患者癌组织与对应癌旁组织中Bit1蛋白及m RNA表达水平,结果表明胃癌组织中Bit1蛋白及m RNA表达水平均显著高于其对应癌旁组织;组织芯片免疫组化结果表明Bit1在胃癌组织中表达与胃癌患者肿瘤病理分级、淋巴侵袭密切相关;生物信息学分析结果显示:PTRH2在胃癌中高表达,且PTRH2的表达水平与GC患者肿瘤分期、淋巴结转移、患者性别、幽门螺杆菌感染及TP53突变等具有相关性;STRING数据库分析发现PTRH2可能与CDH1、CDH2、VIM、TJP1、MMP2、MMP9、ITGB1、VEGFC、FIGF、KDR、FLT1、FLT4等基因存在一定关联;通过RStudio软件进行KEGG富集分析发现PTRH2与细胞外基质受体等相关通路呈负相关,与胆固醇代谢等通路呈正相关。2.不同Bit1表达水平对胃癌细胞生物学功能的影响Western blot筛选出Bit1高表达胃癌细胞系BGC-803,通过Bit1 sh RNA慢病毒转染BGC-803,下调其内源性Bit1表达。通过Western blot及细胞免疫荧光实验对慢病毒转染成功的5个靶点进行验证,选择对BGC-803细胞内源性Bit1表达有较好干预效果的靶点Bit1 sh RNA1、Bit1 sh RNA5,用于进一步分析不同Bit1表达水平对胃癌细胞生物学功能的影响。细胞划痕实验结果显示,与WT、Vector组比较,24 h及48 h Bit1 sh RNA1、Bit1 sh RNA5组细胞划痕愈合率均显著降低,表明Bit1下调能抑制胃癌细胞迁移能力（P＜0.01）;Transwell实验结果显示,与WT、Vector组比较,Bit1 sh RNA1、Bit1 sh RNA5组小室上表面侵袭至下表面的细胞数量明显减少,即Bit1下调能明显抑制胃癌细胞侵袭能力;CCK-8实验检测72 h内WT、Vector、Bit1 sh RNA1、Bit1 sh RNA5组细胞活力,结果表明,Bit1下调可显著抑制胃癌细胞增殖能力;流式细胞术及TUNEL法检测不同Bit1表达水平对细胞凋亡的影响,下调胃癌细胞中Bit1表达水平可显著增加胃癌细胞晚期凋亡数量及总凋亡率,促进胃癌细胞凋亡;电镜结果显示:Bit1下调可导致胃癌细胞线粒体重度肿胀,嵴

关键词：胃癌 bcl-2转录抑制因子1 上皮间质转化侵袭迁移细胞外基质

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西妥昔单抗通过调控EGFR/integrin β1/Bit1轴抑制EMT进程阻碍Bit1高表达肝癌进展

西妥昔单抗通过调控EGFR/integrin β1/Bit1轴抑制EMT进程阻碍Bit...

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作者：刘佳玲湖北医药学院

学位级别：硕士

目的:原发性肝细胞癌是全球第六大常见癌症,死亡率位居癌症相关死亡第四位。由于其肝内及远处转移高发,患者预后不容乐观,因此早发现、早治疗是改善肝癌患者预后的关键因素。进一步探究肝癌侵袭、转移和复发的分子机制,以寻求新的早期... 详细信息

目的:原发性肝细胞癌是全球第六大常见癌症,死亡率位居癌症相关死亡第四位。由于其肝内及远处转移高发,患者预后不容乐观,因此早发现、早治疗是改善肝癌患者预后的关键因素。进一步探究肝癌侵袭、转移和复发的分子机制,以寻求新的早期生物标志物或治疗靶点,对改善患者预后至关重要。Bit1是一种失巢凋亡效应分子,参与多种肿瘤发生发展,可能成为肿瘤的诊断标志物或治疗靶点。已有的研究发现Bit1表达情况呈肿瘤特异性,且影响肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等,从而在不同肿瘤中发挥促癌或抑癌两种截然相反的作用。目前为止,尚无Bit1与肝癌关系的相关研究。本研究旨在探究Bit1在肝癌组织中的表达情况及临床意义,阐释Bit1在肝癌中的生物学功能及作用机制,揭示西妥昔单抗通过干预Bit1从而阻碍Bit1高表达肝癌进展的分子机制,为探索以Bit1为靶点的肝癌相关研究提供新的思路和依据,为Bit1高表达肝癌患者提供以西妥昔单抗为主的个体化联合用药治疗方案,拓展西妥昔单抗在癌症治疗领域的适应症。方法:1.通过RT-qPCR、Western blot、组织芯片免疫组化技术、生物信息学技术探究Bit1在肝癌组织中的表达情况、临床意义和Bit1相关信号通路及可能存在相互关联的分子。2.通过Western blot筛选Bit1内源性高表达的肝癌细胞系,构建Bit1 shRNA的干扰质粒和慢病毒载体,通过慢病毒转染实验干预肝癌细胞内源性Bit1表达;通过细胞划痕实验、Transwell实验分析不同Bit1表达水平对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响;CCK-8细胞增殖实验、流式细胞术、TUNEL实验分析不同Bit1表达水平对肝癌细胞增殖、凋亡的影响;透射电镜观察不同Bit1表达水平对肝癌细胞线粒体形态结构的影响,从而阐释Bit1在肝癌细胞中的生物学功能。3.通过Western blot、细胞免疫荧光法检测不同Bit1表达水平肝癌细胞中ZO-1、N-cadherin、Vimentin、PCNA、Ki67、Bax、bcl-2蛋白表达,揭示肝癌中Bit1与EMT及增殖、凋亡相关分子的关系。4.根据生物信息学分析结果提示肝癌组织中Bit1与EGFR可能存在一定关联,进一步选用EGFR抑制剂西妥昔单抗干预肝癌细胞,用CCK-8法进行药物细胞毒性试验,根据药物IC值确定合适给药浓度范围,根据预实验结果选择药物最佳干预时间,用西妥昔单抗干预Bit1、EGFR均高表达的肝癌细胞LM3,抑制肝癌细胞EGFR,Western blot检测Bit1表达水平,明确肝癌中Bit1与EGFR的关系;检测integrinβ1、MMP-2、MMP-9表达情况,明确肝癌中Bit1与细胞外基质受体相关通路中的关键分子之间的关系;检测ZO-1、E-cadherin、Vimentin等EMT标志分子及PCNA、Bax、bcl-2蛋白表达情况,分析比较西妥昔单抗通过干预Bit1表达水平对肝癌细胞EMT进程及增殖、凋亡相关分子的影响。结果:***1在肝癌组织中的表达情况及临床意义检测Bit1在肝癌组织中的m RNA及蛋白表达水平,结果显示:Bit1在肝癌组织中的表达水平显著高于对应癌旁组织。其中Western blot显示:肝癌组织中Bit1蛋白水平与肿瘤组织病理分级呈正相关;组织芯片免疫组化技术显示:Bit1在肝癌组织中的表达水平与HCC患者的肿瘤病理分级与复发密切相关,且与HCC患者术后生存期呈负相关;生物信息学分析结果显示:PTRH2在肝癌中高表达,且PTRH2表达与HCC患者肿瘤分期呈正相关,与HCC患者总生存期呈负相关,且与HCC患者术后发生转移性复发密切相关,String数据库分析发现PTRH2可能与CDH1,CDH2,VIM,TJP1等编码EMT相关蛋白的基因可能存在一定关联,并与EGFR存在一定关联,KEGG通路数据库分析发现PTRH2与细胞外基质受体等相关通路呈负相关,与核糖体等通路呈正相关。***1表达水平对肝癌细胞生物学功能的影响Western blot筛选出Bit1高表达的肝癌细胞系MHCC-97H、LM3进行Bit1shRNA慢病毒转染实验,下调其细胞内源性Bit1表达,分析不同Bit1表达水平对肝癌细胞生物学功能的影响。细胞划痕实验检测24 h、48 h划痕愈合率,其中,24 h愈合率分别为:WT=39.4%,Vector=40.2%,Bit1 shRNA1=19.4%,Bit1shRNA2=16.5%,48 h愈合率分别为:WT=60.9%,Vector=60.9%,Bit1 shRNA1=27.5%,Bit1 shRNA2=18.5%,说明Bit1下调可明显抑制肝癌细胞迁移能力;Transwell实验检测48 h后侵袭到小室下表面的细胞数量,发现Bit1下调可明显抑制肝癌细胞侵袭能力

关键词： bcl-2转录抑制因子1 肝细胞癌表皮因子生长受体西妥昔单抗上皮间质转化

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