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针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖

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病毒学报 2010年第3期26卷 244-248页

作者：陈方园王洪梅杨少华武建明高运东刘晓杨宏军王长法仲跻峰王立群何洪彬东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 山东省农业科学院奶牛研究中心济南250100

本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,brv)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRNA重组慢病毒;重组慢病毒感染MA104细胞24h后继续接种brv,以针... 详细信息

本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,brv)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRNA重组慢病毒;重组慢病毒感染MA104细胞24h后继续接种brv,以针对LacZ基因的shRNA重组慢病毒为对照,48h后与LacZshR-NA对照比较,RNAi-H1-89明显抑制MA104细胞病变;RT-PCR检测结果表明,针对NSP4基因的shRNA可特异性抑制牛轮状病毒NSP4基因表达;病毒滴度测定表明,在转染50%、75%、95%RNAi-H1-89质粒的细胞培养上清液中,病毒滴度分别是对照组的50%、20%和10%。上述实验结果表明,针对NSP4基因的shRNA能高效地沉默NSP4基因,并且能阻断牛轮状病毒增殖。

关键词： brv shRNA NSP4基因

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牛轮状病毒疫苗及被动免疫抗体研究进展

中国兽医学报 2023年第11期43卷 2383-2388页

作者：高敏付山赵绮欢杨霖贺志雄包福祥内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010010 内蒙古呼和浩特市回民区农牧水利局动物疫病防疫检疫中心内蒙古呼和浩特010030

牛轮状病毒(bovine rotavirus,brv)是集约化养殖中犊牛腹泻的重要致病原之一。brv是一种二十面体对称的双链RNA病毒,其基因组含有多种结构蛋白和非结构蛋白,并分为众多血清型,流行型多为G6和G10型,具有较强的致病性。目前,国内brv的商... 详细信息

牛轮状病毒(bovine rotavirus,brv)是集约化养殖中犊牛腹泻的重要致病原之一。brv是一种二十面体对称的双链RNA病毒,其基因组含有多种结构蛋白和非结构蛋白,并分为众多血清型,流行型多为G6和G10型,具有较强的致病性。目前,国内brv的商品化疫苗和针对性治疗产品仍处于市场空白阶段。随着养牛业的蓬勃发展,对于brv的防治已经迫在眉睫。对brv的结构特点、传播途径、以及养牛业发达国家市场上的brv疫苗上市情况和brv卵黄抗体的研究进程进行综述,旨在为下一步疫苗和抗体的研发应用提供一定的参考。

关键词：牛 brv 卵黄抗体犊牛腹泻牛轮状病毒疫苗

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云南部分地区牛腹泻病毒性病原遗传进化分析

云南部分地区牛腹泻病毒性病原遗传进化分析

作者：施徐森云南农业大学

学位级别：硕士

病毒感染是导致牛腹泻的重要因素,而牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine Coronavirus,BCoV)、牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,brv)和牛纽布病毒(Bovine Nebovirus,BNeV)是当前导致牛群发生病毒性腹泻的四种主要病原,常有混合感染,对我国养牛业危害巨大。这四种病毒感染临床症状以腹泻、肠炎为主要特征,临床确诊有赖于实验室病原检测。本研究通过建立了BVDV、BCoV、brv及BNeV的四重RT-PCR检测方法,对2022.6-2023.4月云南牛场腹泻犊牛样品中四种病毒进行检测,在此基础上对brv的VP6、BVDV的5’UTR序列进行遗传进化分析,具体研究如下:1.腹泻牛群brv、BCoV、BVDV、BNeV感染情况调查针对brv的VP6基因、BCoV的NSP2基因、BVDV的5’UTR及BNeV的RDRP基因分别设计特异性引物,目的片段分别为380 bp、330 bp、260 bp、120 bp。经过对退火温度、引物浓度进行并进行优化后,brv、BCoV、BVDV、BNeV的最佳退火温度均为58℃,四种检测方法的最佳引物浓度brv为0.4μmol/L、其它三种为0.8μmol/L。特异性试验结果显示,仅四种靶病毒检测呈阳性,而对牛群常见病毒BNV、BKV、BNOV不能检出,四种病毒单一RT-PCR特异性良好。敏感性试验结果显示,对brv、BNeV、BCoV、BVDV的最低检测量分别为2.72×10～3 copies/μL、3.32×10～3 copies/μL、3.86×10～3 copies/μL、1.06×10～3 copies/μL,敏感性好。应用所建立四种病毒的PCR检测方法,对云南部分地区的322份临床样品进行检测。结果brv检出率为40.37%(130/322)、BCoV检出率为13.04%(42/322)、BVDV检出率为10.87%(35/322)、BNEV检出率为1.24%(4/322),两个混合感染的brv+BCoV检出率为9.94%(32/322),brv+BVDV检出率为4.66%(15/322),BCoV+BVDV检出率为1.24%(4/322)。***、BCoV、BVDV、BNeV四重PCR检测技术的建立为了提高检测效率,本研究对应用上述4对引物建立四重PCR检测法进行了尝试。PCR扩增条件优化结果,四重RT-PCR的最佳退火温度为58℃,brv、BNeV、BCoV、BVDV的最佳引物浓度分别为0.4μmol/L、0.4μmol/L、0.4μmol/L、0.4μmol/L,brv、BNeV、BCoV、BVDV的最低检测量分别为2.72×10～3 copies/μL、3.32×10～3 copies/μL、3.86×10～3 copies/μL、1.06×10～3 copies/μL与BEV、BKV、BNOV无交叉反应,且4次重复试验条带清晰正确且一致,从而建立了四重RT-PCR检测法,具有特异性好、灵敏度高、重复性好的优点。对部分临床样品的检测结果,与单一PCR检测结果一致,说明本法可用于临床样品的检测。***的VP6、BVDV的5’UTR序列测定及进化分析为了进一步掌握云南流行株的遗传进化情况,在brv和BVDV在扩增片段测序的基础上,对有代表性的brv的VP6、BVDV的5’UTR序列测定及进化分析。选择brv、BVDV优势流行毒株,对brv VP6及BVDV的5’UTR基因扩增,获得brv VP6基因的4株(命名为brv-VP6 WS、brv-VP6 KM、brv-VP6 QJ、brv-VP6 ZT),VP6基因全长1194 bp,编码397aa。获得3条5’UTR基因(命名为BVDV-5’UTR QJ、BVDV-5’UTR DL和BVDV-5’UTR LC)。每条BVDV 5’UTR基因全长280 bp。基于VP6和5’UTR基因的遗传进化分析显示:云南brv分离株组内核苷酸序列同源性为96%～98.6%;与其他参考毒株比较中,云南分离株与2020年河北分离的HB-BD(登录号:MN047454.1)毒株的同源性为95.4～98.1%,与2022年四川分离的毒株SCMY1(登录号:ON012967.1)同源性为95.7～98.4%,其而与韩国毒株的同源性最低,为75.5～77.5%。因此,云南分离株与我国四川和河北毒株关系更近。云南BVDV分离株组内核苷酸序列同源性为95.3～100%;与其他参考毒株比较中,云南BVDV分离株与2015年墨西哥分离的62-MGL(登录号:LC043220.1)毒株的同源性为93.6～94.9%;而与巴西毒株的同源性最低,为67.7～6

关键词： brv BCoV BVDV BNeV 多重RT-PCR 遗传进化分析

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牛鼻病毒的分离及其性状

畜牧兽医科技 1987年第2期 42-44页

作者：邓力拱北动植物检疫所

1975年至1981年间,从有呼吸道症状的病牛鼻汁中,分离到38株相同理化性状的牛鼻病毒(brv)。其中有32株与brv—1型相类似,其余6株属于同一血清型,且与brv—1和brv—2均不相同,是一种新的血清型。根据对发生呼吸道病牛群的病牛采取双份血... 详细信息

1975年至1981年间,从有呼吸道症状的病牛鼻汁中,分离到38株相同理化性状的牛鼻病毒(brv)。其中有32株与brv—1型相类似,其余6株属于同一血清型,且与brv—1和brv—2均不相同,是一种新的血清型。根据对发生呼吸道病牛群的病牛采取双份血清进行抗体调查的结果,表明brv—1和新的brv血清型与大部分的病牛有关。关于牛鼻病毒(brv)的分离,KUROGI氏和SHIMISU氏等人均报道从表现呼吸道症状的病牛鼻汁中分离到病毒。作者也由有呼吸道症状的病牛鼻汁中分离到38株brv,现就其病毒分离及其性状报告如下。

关键词： brv 病牛呼吸道症状免疫血清抗体价牛群

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新发现的肠道致病因子

中国兽医杂志 1988年第7期 47-49页

作者：武坚李成中国农科院哈尔滨兽医研究所新疆石河子农学院中心实验室

腹泻疾病现在已引起人们的日益关注,它不仅在畜牧业生产上造成严重的经济损失,而且给人们的身心健康带来巨大的威胁。肠道致病因子除已知的轮状病毒、腺病毒、细小病毒、肠道病毒、冠状病毒、嵌杯样因子(Calicivirus-like agent)、类冠... 详细信息

腹泻疾病现在已引起人们的日益关注,它不仅在畜牧业生产上造成严重的经济损失,而且给人们的身心健康带来巨大的威胁。肠道致病因子除已知的轮状病毒、腺病毒、细小病毒、肠道病毒、冠状病毒、嵌杯样因子(Calicivirus-like agent)、类冠状病毒(Coronavirus-like)、星状病毒

关键词： brv 抗原性核衣壳膜粒纤突病毒体病毒粒子囊膜犊牛腹泻 BEV 致病因子

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凸隆病毒科——一类引起腹泻的新病毒

中国人兽共患病学报 1987年第5期 50-52页

作者：陆承平徐为燕南京农业大学兽医系

1982年Woode等在美国爱俄华州Breda市腹泻的犊牛粪中发现一种新的传染性的致病因子,它具有病毒形态,能凝结大鼠红细胞,并能在所接种的悉生犊或普通犊体内复制。它有两个血清型,但它与已知的病毒如牛冠状病毒(BCV)、副流感Ⅲ型病毒、牛... 详细信息

1982年Woode等在美国爱俄华州Breda市腹泻的犊牛粪中发现一种新的传染性的致病因子,它具有病毒形态,能凝结大鼠红细胞,并能在所接种的悉生犊或普通犊体内复制。它有两个血清型,但它与已知的病毒如牛冠状病毒(BCV)、副流感Ⅲ型病毒、牛轮状病毒、牛细小病毒及引起牛病毒性腹泻的粘膜病病毒(BVD-MD)均不相同,将此种未分类的新病毒暂定名为Breda因子或Breda病毒,简称brv[9]。此后不久在美国俄亥俄州的犊牛群中再次发现,其血清学反应属Ⅱ型brv。1983年法国Moussa等在里昂的牛群中也发现一种引致腹泻的病毒,称之为Lyon病毒,简称LYV,随后证实LYV与brv抗原性一致[1]。

关键词：新病毒囊膜 brv 纤突膜粒中和抗体病毒颗粒核衣壳犊牛抗原性中和试验病毒科

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猪和牛轮状病毒的分离和鉴定

病毒学报 1985年第1期 84-85+100页

作者：倪亚炜中国兽药监察所

我国对动物轮状病毒的研究报道尚少。用细胞培养法分离轮状病毒又比较困难。本文报道用非洲罗猴胎肾细胞MA-104,结合胰酶处理及旋转培养技术,从北京地区腹泻仔猪和犊牛的粪便中成功地分离到6株猪轮状病毒(暂名为PRV1,PRV2,PRV8,PRY11,PR... 详细信息

我国对动物轮状病毒的研究报道尚少。用细胞培养法分离轮状病毒又比较困难。本文报道用非洲罗猴胎肾细胞MA-104,结合胰酶处理及旋转培养技术,从北京地区腹泻仔猪和犊牛的粪便中成功地分离到6株猪轮状病毒(暂名为PRV1,PRV2,PRV8,PRY11,PRV15和PRV17)和4株牛轮状病毒(暂名为brv6555,brv6551,brv6571和brv6576)及其初步鉴定结果。

关键词：牛轮状病毒 MA brv PRV

英国式的坚持战后英国(英联邦)滩头机械化保障车辆

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坦克装甲车辆 2017年第1期 39-42页

作者：夜牧人

拿破仑指出:"战争的才能就是运动的才能。"恩格斯补充说"行动的迅速可以弥补军队的不足",对善于以少胜多、以快制快的两栖作战部队来说,速度就是生命,速度就是胜利。两栖作战是一种风险较高的军事行动,在枪林弹雨中强攻敌军的海滩,部队... 详细信息

拿破仑指出:"战争的才能就是运动的才能。"恩格斯补充说"行动的迅速可以弥补军队的不足",对善于以少胜多、以快制快的两栖作战部队来说,速度就是生命,速度就是胜利。两栖作战是一种风险较高的军事行动,在枪林弹雨中强攻敌军的海滩,部队往往面临严峻的考验,他们唯一的退路只有大海,因此,稍有差错就会招致灭顶之灾。即便如此,两栖作战仍是机械化战争时代远程投放兵力最为有效的方法之一。从第二次世界

关键词：滩头英军 brv 两栖部队特种部队两栖作战两栖战两栖船坞登陆舰队长谢尔曼底盘登陆作战英联邦格兰特海军陆战队主战坦克战斗坦克英国大不列颠及北爱尔兰联合王国

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国内外科技

黑龙江畜牧兽医 1986年第8期 49-50页

原作者从有发热、咳嗽、流鼻涕及呼吸急促等的呼吸器官症状的19群牛的鼻汁中,用组织培养法分离出38株病毒。这些病毒接种于初代牛肾培养细胞和MDBK细胞后,出现的CPE与牛鼻病毒(brv—1和brv—2)的CPE是一致的。38株分离病毒的特性是:病毒... 详细信息

原作者从有发热、咳嗽、流鼻涕及呼吸急促等的呼吸器官症状的19群牛的鼻汁中,用组织培养法分离出38株病毒。这些病毒接种于初代牛肾培养细胞和MDBK细胞后,出现的CPE与牛鼻病毒(brv—1和brv—2)的CPE是一致的。38株分离病毒的特性是:病毒在IUDR条件下继续增殖,证明了分离病毒是RNA型的,有抗乙醚性,对酸易感性,经56℃

关键词： brv 培养细胞呼吸器官隐性乳房炎乳区奶牛场牛肾