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肾素-血管紧张素系统2条通路在油酸致大鼠brl-3a细胞非酒精性脂肪肝中的作用

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南京农业大学学报 2020年第5期43卷 910-918页

作者：王换换刘颖李帅何晟朱斌张源淑南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]通过建立油酸诱导的大鼠肝脏间质brl-3a细胞非酒精性脂肪肝(NAFLD)损伤模型,探讨brl-3a细胞中RAS的ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang-1-7/Mas这2条通路相互负向调节与NAFLD细胞损伤的关系。[方法]采用不同浓度油酸(0.025、0.05、0.1和0.2... 详细信息

[目的]通过建立油酸诱导的大鼠肝脏间质brl-3a细胞非酒精性脂肪肝(NAFLD)损伤模型,探讨brl-3a细胞中RAS的ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang-1-7/Mas这2条通路相互负向调节与NAFLD细胞损伤的关系。[方法]采用不同浓度油酸(0.025、0.05、0.1和0.2 mmol·L^-1)处理brl-3a细胞24 h,通过检测细胞活力、细胞内甘油三酯(TG)含量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及油红染色确立NAFLD细胞模型条件,然后选取低、中、高3个浓度(0.025、0.1和0.2 mmol·L^-1)油酸作用于细胞24 h,用ELISA法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)水平;Western blot分析细胞内血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)、Mas受体(MasR)蛋白水平;斯皮尔曼相关分析法分析油酸浓度与细胞内ACE、ACE2表达水平的相关性。[结果]1)用0.1 mmol·L^-1油酸处理brl-3a细胞24 h,成功建立brl-3a细胞NAFLD模型。2)油酸处理24 h后,brl-3a细胞出现脂滴沉积,在0.025 mmol·L^-1油酸(低浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平有升高趋势,AngⅡ水平与AT1R表达水平下降,ACE/ACE2值下降;0.1 mmol·L^-1油酸(中浓度)组ACE、AT1R表达水平显著升高,其他RAS成员变化不明显;0.2 mmol·L^-1油酸(高浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平下降,AngⅡ水平和ACE、AT1R表达水平及ACE/ACE2值升高。3)斯皮尔曼相关分析显示,油酸浓度、血液相关生化指标(TG含量、AST和ALT活性)和脂滴数及脂滴面积与ACE2表达水平和Ang1-7水平负相关,而与ACE表达水平和AngⅡ水平正相关。[结论]brl-3a细胞中的2条轴共同参与了油酸致brl-3a细胞NAFLD损伤的发生和发展过程。低浓度油酸时,ACE2介导的Ang1-7/MasR通路占优势;高浓度油酸处理细胞损伤加重,ACE介导的AngⅡ/AT1R通路占主导地位。ACE2与油酸致细胞炎性损伤的程度呈显著负相关关系。

关键词：血管紧张素系统(RAS) brl-3a细胞非酒精性脂肪肝病(NAFLD)细胞模型

乙酸钠对油酸诱导的brl-3a细胞脂肪变性的影响及机制分析

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畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4450-4460页

作者：李林宫彬彬王广力赵梅张源淑邢台学院生物科学与工程学院邢台054001 河北医科大学附属邢台人民医院病理科邢台054031 南京农业大学动物医学院农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

通过向油酸诱导的大鼠肝成纤维细胞(brl-3a)脂肪变性模型中添加不同浓度(2、4、8 mmol·L^(-1))的乙酸钠,探讨其对脂肪变性细胞模型脂代谢的调控机理及细胞损伤的修复作用。试验方法:1)用不同浓度的油酸(0、0.03、0.06、0.12、0.24、0.4... 详细信息

通过向油酸诱导的大鼠肝成纤维细胞(brl-3a)脂肪变性模型中添加不同浓度(2、4、8 mmol·L^(-1))的乙酸钠,探讨其对脂肪变性细胞模型脂代谢的调控机理及细胞损伤的修复作用。试验方法:1)用不同浓度的油酸(0、0.03、0.06、0.12、0.24、0.48)mmol·L^(-1)刺激brl-3a细胞24 h后,分别检测细胞相对活力、总脂滴面积、三酰甘油(TG)含量、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,建立脂肪变性细胞模型;2)向brl-3a细胞中添加不同浓度的乙酸钠,通过流式细胞术检测细胞凋亡率;3)用不同浓度的乙酸钠和0.12 mmol·L^(-1)油酸共同孵育brl-3a细胞,试验分为4组,分别为油酸处理组、2 mmol·L^(-1)乙酸钠+油酸处理组、4 mmol·L^(-1)乙酸钠+油酸处理组和8 mmol·L^(-1)乙酸钠+油酸处理组,分别对细胞脂滴、TG含量、AST、ALT活性、AMPK信号通路蛋白以及脂代谢关键基因进行检测。结果显示:1)用0.12 mmol·L^(-1)油酸处理brl-3a细胞24 h,成功建立brl-3a细胞脂肪变性模型。2)不同浓度的乙酸钠对brl-3a细胞凋亡率没有影响;3)4、8 mmol·L^(-1)乙酸钠处理脂肪变性细胞模型后,与油酸处理组相比,细胞总脂滴面积、每平方毫米脂滴数、TG含量、AST和ALT活性均显著(P细胞脂质蓄积,并且对油酸诱导的brl-3a细胞脂肪变性模型的损伤具有一定缓解作用。

关键词： brl-3a细胞乙酸钠脂肪变性细胞模型脂代谢

H_2O_2诱导brl-3a细胞模拟大鼠肝脏氧化应激损伤的研究

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 445-449页

作者：臧琳郭景茹郭爽王慧计红甄莉汪志杨焕民黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 天津嘉立荷牧业有限公司天津300402

动物冷暴露过程中,肝脏因发生氧化应激而受损。利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用brl-3a细胞,根据细胞存活率确定500μmol/L H2O2作用细胞3h为施加条件,然后通过检测蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和... 详细信息

动物冷暴露过程中,肝脏因发生氧化应激而受损。利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用brl-3a细胞,根据细胞存活率确定500μmol/L H2O2作用细胞3h为施加条件,然后通过检测蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性,探讨在细胞水平上建立冷暴露大鼠肝脏损伤模型。结果显示,H2O2处理组细胞存活率下降,蛋白质羰基含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性均降低。与对照组相比,其存活率、细胞内蛋白质羰基含量和CAT活性,均差异极显著(P细胞内SOD和GSH-Px活性,差异显著(Pbrl-3a细胞可导致氧化应激的发生,其相关指标与大鼠冷暴露后肝脏受损指标改变趋势类似,利用brl-3a细胞建立冷暴露引起的肝脏氧化损伤模型,为进一步探讨冷应激对肝脏损伤的机制奠定基础。

关键词：过氧化氢 brl-3a细胞冷暴露肝脏氧化应激

大鼠肝细胞系brl-3a细胞Hsp70过表达条件的优化

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黑龙江畜牧兽医 2014年第3期 34-38,209页

作者：计红薛琳琳耿仁德郭景茹臧琳王建发孔凡志齐艳萍杨焕民郭丽蒲丽君黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江职业学院黑龙江双城150111 黑龙江省农垦总局建三江分局勤得力农场第六管理区黑龙江同江156426

为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在brl-3a细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染brl-3a细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×107,2×107,1×107,0.5×107,0.25×107p... 详细信息

为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在brl-3a细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染brl-3a细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×107,2×107,1×107,0.5×107,0.25×107pfu/mL)和时间(24 h和48 h)感染brl-3a细胞,优化Hsp70重组腺病毒感染brl-3a细胞的条件,并应用荧光定量RT-PCR和免疫蛋白印记方法检测Hsp70的mRNA和蛋白表达量。结果表明:当用1×107pfu/mL病毒AdCMV-Hsp70按照最佳感染条件的感染复数(MOI)=20感染brl-3a细胞48 h时,能使Hsp70表达量比病毒空载体感染细胞和无病毒的对照组细胞极显著升高(P<0.01)。

关键词：热休克蛋白70(Hsp70) brl-3a细胞大鼠过表达腺病毒

三丁基锡对brl-3a细胞活力以及凋亡的影响

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毒理学杂志 2006年第1期20卷 25-26页

作者：朱欣傅文宇王晓峰徐立红浙江大学劳动卫生环境卫生研究所浙江杭州310031

三丁基锡（tributyltin，TBT），已经广泛应用于农业杀虫、材料防腐和海洋船体涂料等。由于TBT可以从涂料释放到水中造成污染，不仅毒害水生生物，破坏生态环境，而且不可忽视的是它们都在食用水生生物机体内富集，这些生物被食用可造... 详细信息

三丁基锡（tributyltin，TBT），已经广泛应用于农业杀虫、材料防腐和海洋船体涂料等。由于TBT可以从涂料释放到水中造成污染，不仅毒害水生生物，破坏生态环境，而且不可忽视的是它们都在食用水生生物机体内富集，这些生物被食用可造成对人体的危害，因此引起了研究者们的关注。国外已有很多文献报道了TBT诱导凋亡的事实，但是国内在此领域的研究较少，本实验采用正常大鼠肝细胞（brl-3a细胞），研究TBT对其细胞活力的影响和凋亡的诱导作用。

关键词：三丁基锡 brl-3a细胞细胞活力细胞凋亡

山楂酸对H2O2诱导的brl-3a细胞氧化损伤及p38和Nrf2/HO-1通路的影响

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中国细胞生物学学报 2020年第3期42卷 453-460页

作者：李桂兰郑开丰秦韶刚陈磊岳彩霞郭永琪山西农业大学动物科技学院晋中030801

该文研究了山楂酸对H2O2诱导的brl-3a肝细胞氧化损伤的保护作用及其机制。采用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针法测定细胞的ROS水平,微量酶标法测定细胞LDH、SOD、CAT的活力和GSH、MDA含量;反转录PCR测定细胞Nrf2、HO-1和p38的mRNA... 详细信息

该文研究了山楂酸对H2O2诱导的brl-3a肝细胞氧化损伤的保护作用及其机制。采用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针法测定细胞的ROS水平,微量酶标法测定细胞LDH、SOD、CAT的活力和GSH、MDA含量;反转录PCR测定细胞Nrf2、HO-1和p38的mRNA表达水平;Western blot检测Nrf2、HO-1和p-p38的蛋白表达水平。结果显示,山楂酸可改善H2O2导致的brl-3a细胞活力下降,降低ROS水平和LDH渗漏,提高SOD、CAT的活性和GSH含量,降低MDA的水平。此外,山楂酸可促进Nrf2的核转位,提高HO-1的mRNA和蛋白表达水平,抑制p38的磷酸化水平。这些结果表明,山楂酸对H2O2诱导的brl-3a细胞的氧化损伤有保护作用,其机制与促进Nrf2的核转位、上调HO-1的表达和抑制p38的磷酸化水平可能相关。

关键词：山楂酸 brl-3a细胞 p38 核因子E2相关因子2 血红素氧化酶-1

紫杉醇、多西紫杉醇对大鼠肝细胞株brl-3a细胞缝隙连接功能的影响

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山东医药 2016年第23期56卷 31-33页

作者：汤南万洁陈博张媛陈鸿鹏广东医科大学药学院广东东莞523808 广东医科大学基础学院暨南大学附属第一医院广东医科大学信息工程学院

目的观察紫杉醇、多西紫杉醇对大鼠肝细胞株brl-3a细胞缝隙连接(GJ)功能的影响。方法采用磺酰罗丹明B比色法筛选紫杉醇和多西紫杉醇不影响brl-3a细胞生长的作用浓度。采用细胞接种荧光示踪法与划痕标记染料示踪技术检测紫杉醇与多西紫... 详细信息

目的观察紫杉醇、多西紫杉醇对大鼠肝细胞株brl-3a细胞缝隙连接(GJ)功能的影响。方法采用磺酰罗丹明B比色法筛选紫杉醇和多西紫杉醇不影响brl-3a细胞生长的作用浓度。采用细胞接种荧光示踪法与划痕标记染料示踪技术检测紫杉醇与多西紫杉醇作用brl-3a后细胞GJ功能。结果筛选出的紫杉醇、多西紫杉醇药物浓度均为0.01、0.1、0.5、1.0μmol/L。与溶剂对照组相比,0.01、0.1、0.5、1.0μmol/L紫杉醇处理的brl-3a细胞Calcein荧光传递率降低(P均brl-3a细胞Calcein荧光传递率无明显变化。与溶剂对照组相比,紫杉醇作用细胞后LY向邻近细胞传递距离缩短,多西紫杉醇作用细胞后LY向邻近细胞传递距离无明显变化。结论紫杉醇可显著抑制大鼠肝细胞株brl-3a细胞GJ功能,而多西紫杉醇则不影响GJ功能。

关键词：紫杉醇多西紫杉醇细胞缝隙链接肝细胞株 brl-3a细胞

毛蕊异黄酮葡糖苷对TAA致brl-3a细胞氧化应激的保护作用研究

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毛蕊异黄酮葡糖苷对TAA致BRL-3A细胞氧化应激的保护作用研究

作者：林欣福建农林大学

学位级别：硕士

目的:探讨毛蕊异黄酮葡糖苷(Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside,CG)对硫代乙酰胺(TAA)致brl-3a细胞氧化应激的保护作用。方法:以brl-3a细胞为研究对象,通过TAA(0.18mol/L)损伤brl-3a细胞2h建立氧化应激模型。用不同浓度的CG对细胞进... 详细信息

目的:探讨毛蕊异黄酮葡糖苷(Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside,CG)对硫代乙酰胺(TAA)致brl-3a细胞氧化应激的保护作用。方法:以brl-3a细胞为研究对象,通过TAA(0.18mol/L)损伤brl-3a细胞2h建立氧化应激模型。用不同浓度的CG对细胞进行预处理(TAA损伤前12h加药),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,试验设定空白对照组(N组)、氧化损伤组(TAA)组、低浓度(1Omg/L)CG组(C1组)、中浓度(20mg/L)CG组(C2组)、高浓度(40mg/L)CG组(C3组)、联苯双酯(DDB)阳性对照组(PC组)。微板法检测细胞上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)活力;微板法、比色法检测细胞内总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量;荧光显微镜观察并使用荧光酶标仪和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化;紫外分光光度计法检测肝微粒体(microsome)中CYP450和细胞色素b5含量以及CYP2E1活性;Real-time PCR法检测细胞CYP2E1 mRNA的相对表达量;Western Blot法检测细胞CYP2E1蛋白表达情况。结果:当TAA浓度为0.18mol/L时,brl-3a细胞存活率约为50%。TAA诱导的氧化应激导致brl-3a细胞存活率、抗氧化能力的降低,转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1mRNA的相对表达量和蛋白表达量升高。与TAA组相比,CG预处理组(10mg/L、20mg/L、40mg/L)不同程度地升高细胞存活率、抗氧化能力,降低转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1 mRNA的相对表达量和蛋白表达量。其中,以CG浓度为40mg/L时,保护效果最佳。结论:CG对TAA致brl-3a细胞的氧化应激具有保护作用,使TAA致细胞氧化应激状态得到显著缓解。

关键词：毛蕊异黄酮葡糖苷(CG) TAA brl-3a细胞氧化应激保护作用

骨桥蛋白OPN对brl-3a细胞生长的作用研究

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骨桥蛋白OPN对BRL-3A细胞生长的作用研究

作者：李晓芳河南师范大学

学位级别：硕士

肝脏是唯一具有强大再生能力的器官,然而肝脏作为最大的消化腺,容易受到各种各样的由代谢物、毒性物质、微生物、切除等损伤,因而需要启动肝再生(liver regeneration,LR)恢复受损肝脏在结构和功能上的完整性。骨桥蛋白(osteopontin,OPN... 详细信息

肝脏是唯一具有强大再生能力的器官,然而肝脏作为最大的消化腺,容易受到各种各样的由代谢物、毒性物质、微生物、切除等损伤,因而需要启动肝再生(liver regeneration,LR)恢复受损肝脏在结构和功能上的完整性。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)作为一种分泌性磷酸化糖蛋白,在多种组织、细胞及体液中广泛分布。大量研究表明,肝再生与炎症反应、细胞活化和增殖等活动密切相关,而OPN作为急性期蛋白、炎症反应调节因子,除与肝脏疾病的发生关系密切外,可能也参与肝再生,促进受损肝脏细胞的自我修复。我们前期的体内实验显示OPN具有明显的促肝再生作用,而肝细胞是肝再生中动员的主要细胞,因此,OPN能否有效地作用于肝细胞,进而影响肝再生尚不清楚。因此,本文通过内源性改变大鼠正常肝细胞系brl-3a细胞中OPN的表达,研究其对brl-3a细胞功能的影响,以阐明OPN对再生肝中肝细胞增殖的调控机理。首先通过慢病毒介导的转基因技术使细胞稳定过表达OPN,然后用小RNA干扰方法下调brl-3a细胞中OPN的表达,结果表明细胞中OPN的表达有效增加和降低。然后通过MTT、BrdU掺入法、流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot方法研究OPN对brl-3a细胞功能和靶基因表达的影响,结果发现,brl-3a细胞中OPN过表达后,与对照相比,其细胞活性增加,S期和G2/M期细胞比例增加,ERK1/2,AKT1和STAT3等信号通路上关键蛋白MAPK,AKT1,STAT3和NFKB1表达上调,靶蛋白BAX减少,BCl-2和CCND1却增加;brl-3a细胞OPN的表达被干涉后,细胞活力及增殖率降低,S期和G2/M期细胞比例下降,信号通路关键蛋白MAPK,AKT1,STAT3和NFKB1和表达明显降低,且靶蛋白BAX表达增加,但BCL-2和CCND1表达减少。结论:OPN可能通过JAK/STAT3,ERK1/2,PI3K/AKT和NF-κB途径调控靶基因CCND1,BCL-2和BAX的表达,从而促进肝细胞的增殖。

关键词：骨桥蛋白 brl-3a细胞慢病毒小干扰RNA