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Ligand-induced dimerization of syndecan-3 at the cell surface

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Advances in Bioscience and Biotechnology 2013年第6期4卷 36-44页

作者： Evgeny Kulesskiy Sarka Tumova Heikki Rauvala Multidisciplinary Cardiovascular Research Centre Institute of Membrane & Systems Biology Leeds UK Neuroscience Center University of Helsinki Helsinki Finland

Syndecan-3 (N-syndecan) is a transmembrane heparan sulfate proteoglycan abundantly expressed in developing brain. In addition to acting as a coreceptor, syndecan-3 acts as a signaling receptor upon binding of its ligand HB-GAM (heparin-binding growth-associated molecule;pleiotrophin), which activates the cortactin-src kinase signaling pathway. This leads to rapid neurite extension in neuronal cells, which makes syndecan-3 as an interesting transmembrane receptor in neuronal development and regeneration. However, little is known about the signaling mechanism of syndecan-3. Here we have analyzed formation of ligand-N-syndecan signaling complexes at the cell surface using fluorescence resonance energy transfer (FRET) and bioluminescence resonance energy transfer (bret). We show that ligand binding leads to dimerization of syndecan-3 at the cell surface. The dimerized syndecan-3 colocalizes with actin in the filopodia of cells. Several amino acid residues (K383, G392 and G396) in the transmembrane domain are shown to be important for the ligand-induced dimerization, whereas the cytosolic domain is not required for the dimerization.

关键词： Syndecan-3 Dimerization HB-GAM Pleiotrophin bret FRET

研究活体小动物中蛋白质-蛋白质之间相互作用的新生物技术

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药物生物技术 2014年第5期21卷 462-466页

作者：何春芹刘路路李丹丹白波陈京曲阜师范大学山东曲阜273165 济宁医学院神经生物学研究所山东济宁272016

在生物反应以及细胞内信号转导过程中,蛋白质-蛋白质之间的相互作用(Protein-protein interactions,PPIs)发挥着重要作用。了解PPIs的特征有助于理解蛋白质分子间的作用机制,理解各种疾病发病的分子机理。该文主要介绍在活体动物中检测... 详细信息

在生物反应以及细胞内信号转导过程中,蛋白质-蛋白质之间的相互作用(Protein-protein interactions,PPIs)发挥着重要作用。了解PPIs的特征有助于理解蛋白质分子间的作用机制,理解各种疾病发病的分子机理。该文主要介绍在活体动物中检测特异性PPIs的新生物技术,它利用非侵入性小动物活体成像系统检测方式,实现了对活体小动物中深层组织高灵敏的成像显示,更有利于在小动物活体水平上理解PPIs的分子机制。

关键词：蛋白质-蛋白质相互作用活体小动物新生物技术 bret bret3 bret6

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基于注意力机制的轨迹预测算法研究

基于注意力机制的轨迹预测算法研究

作者：蔡鑫鹏南京理工大学

学位级别：硕士

时序数据是一种重要的数据类型,社会生活的各个方面可以看到时序数据的身影,如股票数据、气象数据、交通工具的轨迹信息、行人的轨迹信息等等,根据历史信息可以对目标的将来时刻进行预测可以帮助人们了解事物的发展规律,并提前做出应对... 详细信息

时序数据是一种重要的数据类型,社会生活的各个方面可以看到时序数据的身影,如股票数据、气象数据、交通工具的轨迹信息、行人的轨迹信息等等,根据历史信息可以对目标的将来时刻进行预测可以帮助人们了解事物的发展规律,并提前做出应对措施,因此轨迹预测问题具有重要的研究意义。目前针对雷达目标数据的轨迹预测研究较少,高噪声、小样本、非线性的雷达目标数据给传统的轨迹预测方法带来了巨大的挑战。近年来得益于网络和硬件发展,深度学习算法被广泛应用于目标检测、情感分析、图片分类、轨迹预测等问题中,同时注意力机制进一步提高了深度算法的学习能力。本文以雷达目标轨迹的轨迹预测问题为主体,提出了一种基于注意力机制、长短期记忆网络（Long Short-Term Memory,LSTM）以及编码器解码器结构的网络,并将其应用于雷达目标炮位外推问题中。同时本文借鉴了自然语言处理领域（Natural Language Processing,NLP）最先进的研究成果Transformer和双向Transformer编码器（Bidirectional Encoder Representations of Transformer,BERT）,并将其应用于雷达目标轨迹预测问题中。同时构建了一个大型的三维雷达目标轨迹数据集,基于该数据集的大量实验证明,本文提出的方法的性能指标优于传统算法及其他深度学习算法。本文的主要研究工作如下:（1）提出了一种基于注意力机制和编码器解码器网络,用于解决雷达目标轨迹的炮位外推问题。该算法利用双向LSTM（Bidirectional LSTM,Bi-LSTM）网络对输入的轨迹序列进行编码,使用注意力机制对编码的信息进行加权求和,使用LSTM解码器网络进行解码预测。注意力机制可以让编码器解码器网络对时间序列的深层信息进行编码,实验证明,相对于传统的非线性滤波算法,该算法外推时性能指标更好,对雷达目标初始发射状态的适应性更好。（2）针对雷达目标轨迹的轨迹预测问题,借鉴了NLP领域最领先的解决方案Transformer网络和BERT,并将其应用于雷达目标轨迹预测问题。Transformer网络是一种新型的基础网络,相对于LSTM网络,Transformer对时序数据的建模能力更强,而BERT作为Transformer的双层表示网络,更是众多大型NLP任务的首选解决方案。大量的对比实验表明,在样本量充足的情况下,相对于其他算法,Transformer和BERT都表现出了更好的性能指标。（3）设计实现了基于深度学习算法以及传统算法的雷达目标外推系统仿真平台。向该系统中输入一个观测到的雷达目标轨迹,可以选择合适的算法外推出目标轨迹的发射点位置,并生成对应的指标报告。

关键词：轨迹预测 LSTM Transformer bret

GPR120小分子荧光探针及其激动剂的研究

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GPR120小分子荧光探针及其激动剂的研究

作者：刘家翔山东大学

学位级别：硕士

GPR120 受体(G protein-coupled receptor 120)是 G蛋白偶联受体(GPCRs)大家族的一员,广泛地分布于肺、结肠和脂肪等组织中,具有调节GLP-1分泌、胰岛素敏感性、抗炎和抗肥胖等多种生理学功能,且与许多生理疾病存在一定关系,例如2型糖尿... 详细信息

GPR120 受体(G protein-coupled receptor 120)是 G蛋白偶联受体(GPCRs)大家族的一员,广泛地分布于肺、结肠和脂肪等组织中,具有调节GLP-1分泌、胰岛素敏感性、抗炎和抗肥胖等多种生理学功能,且与许多生理疾病存在一定关系,例如2型糖尿病、饮食、肥胖等。因此,采用小分子作为工具进行GPR120受体的系统生理学及病理学研究对于糖尿病和肥胖的发生机制和治疗具有至关重要的意义。本论文主要包括两部分内容:设计评价了七个用于识别GPR120受体的小分子荧光探针;设计并评价了一系列GPR120受体的小分子激动剂。(1)GPR120受体的小分子荧光探针的研究这些年来,具有荧光性质的GPCR配体已经广泛应用于定位受体的分布,并且能够实时监测由配体-受体相互作用触发的过程(例如内化、运输、螯合和回收)。然而,迄今为止还没有关于检测GPR120受体在细胞表面分布的小分子荧光探针的报道。鉴于小分子荧光探针具有高灵敏度,选择性,可视化和快速响应等优点,迫切需要开发一种方便的荧光配体来追踪GPR120,以深入理解GPR120生理学和病理学功能作用。小分子荧光探针一般有3部分构成:荧光团、连接基团以及识别基团。本论文选取GPR120的激动剂GW9508和TUG-891与靶点结合位点的母核结构作为GPR120药效团模型进行结构改造,以萘二酰亚胺、香豆素作为等具有出色光学特性的化合物作为荧光团,并通过烷基链进行化学链接,以期得到高灵敏度、高选择性的GPR120受体小分子荧光探针,从而对GPR120受体的生物学及药理学研究提供一定帮助。最终,我们设计并评价了七个识别GPR120受体的小分子荧光探针。随后对合成的GPR120荧光探针进行了光学特性的测定、bret活性实验、钙离子实验测定、细胞成像研究以及细胞毒性的研究。结果显示,这些荧光探针对GPR120受体表现出优良的生物活性、良好的选择性、可接受的细胞毒性以及成功应用于细胞荧光成像研究。因此,荧光探针可以作为标记GPR120的染色工具,提供详细的GPR120的生理学和病理学功能信息。此外,我们期望这些探针可以用作GPR120配体活性筛选中的荧光竞争性底物,从而构建快速筛选激动剂化合物平台。(2)GPR120受体的小分子激动剂的研究已有报道显示,GPR120激动作用可通过调节脂肪形成、胃肠肽分泌、味道偏好和葡萄糖代谢平衡来改善机体炎症、糖尿病等相关代谢健康。因此,开发GPR120的激动剂将作为一种新的治疗选择,可用于治疗受损的代谢疾病,如肥胖症、2型糖尿病和心血管疾病等。本课题中,合成并筛选了一系列优秀的GPR120芳香酸类小分子激动剂,期望能对GPR120受体相关代谢疾病的治疗提供帮助,如炎症、肥胖症和2型糖尿病等。本课题通过筛选一系列GPR120受体合成的激动剂,化合物A11被鉴定为有效的GPR120激动剂,与阳性药TUG-891表现出相似的分子机制,可导致细胞内钙离子响应,β-arrestin2募集以及受体的快速内在化。此外,我们期望化合物11能够作为一个重要的药理学工具,去探索GPR120受体的相关生物学功能,以达到治疗肥胖症、2型糖尿病及其他其他代谢疾病的目的。综上所述,本课题得到的GPR120小分子荧光探针及其激动剂,将为GPR120受体的相关研究提供新的研究工具,也为今后此类荧光探针或激动剂的进一步结构改造提供理论指导。

关键词： GPR120 GPCR bret 小分子荧光探针激动剂

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磺胺类GPR120小分子荧光探针的研究

磺胺类GPR120小分子荧光探针的研究

作者：刘攀山东大学

学位级别：硕士

GPR120是G蛋白偶联受体家族中的一员,其分布广泛,在组织水平上主要表达于肝脏、肺、肠和脂肪组织,而在细胞水平中则分布于巨噬细胞、味觉细胞、肠内分泌细胞和脂肪细胞中。研究发现,GPR120在治疗2型糖尿病、肺部功能障碍、多种癌症中均... 详细信息

GPR120是G蛋白偶联受体家族中的一员,其分布广泛,在组织水平上主要表达于肝脏、肺、肠和脂肪组织,而在细胞水平中则分布于巨噬细胞、味觉细胞、肠内分泌细胞和脂肪细胞中。研究发现,GPR120在治疗2型糖尿病、肺部功能障碍、多种癌症中均有积极作用。通过使用GPR120配体研究,发现激活GPR120拥有促进GLP-1释放、调节多种激素分泌、介导抗炎症作用、影响脂质形成等多种生理机制。然而,GPR120仍存在一些细节尚不清楚,因此获得一个能够方便灵敏地研究GPR120病理学机制的小分子荧光探针有着重大意义。本课题合成了能够识别GPR120的磺胺类探针,并围绕探针药理性质、GPR120的作用机制、相关配体的筛选方法等方面展开研究。在设计检测GPR120的小分子荧光探针时,本课题区别于之前选用的羧酸结构,设计合成了磺胺类结构的荧光探针。早期在研究GPR120的激动剂时,人们根据内源性脂肪酸设计了多种羧酸类激动剂,他们的分子结构皆含有羧酸基团,但这类激动剂往往对于GPR40也具有选择性。而之后文献报道的磺胺类激动剂对GPR120的选择性较高,对于GPR40几乎没有活性。基于此,我们希望获得非羧酸类GPR120探针,因此选择TUG-1197的母核结构以香豆素类与萘二酰亚胺类作为荧光团得到高选择性的GPR120探针。在对这些探针的光学性质、细胞毒性、对GPR120活性等性质进行评价后,我们运用探针对GPR120受体进行定位研究,并以此观测证明了 GPR120在激活后的内化过程。而通过钙离子内流实验,我们发现这些探针在GPR40中没有选择性,达到了设计初衷。最后,我们使用这些探针构建了关于GPR120配体的活性筛选方法。在比较了使用FP、FI和bret的量化方法后,最终选择使用bret检测的竞争性结合方法构建活性筛选方法,能够快速筛选GPR120的激动剂。综上所述,本课题设计得到了关于GPR120的小分子荧光探针,可以为GPR120受体的相关研究提供全新的研究手段。

关键词： GPR120 磺胺类小分子荧光探针 bret

新型PPARγ激动剂的发现研究和LGR4调节剂筛选模型的建立

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新型PPARγ激动剂的发现研究和LGR4调节剂筛选模型的建立

作者：王罗娜南昌大学

学位级别：硕士

随着生活质量的提高和生活方式的改变,人们对于高糖、高脂等高热量的摄入增加,同时久坐和少运动的生活方式,使人体内能量代谢失衡,从而诱导肥胖和Ⅱ型糖尿病的发生。全世界范围内糖尿病的发生在持续增加,我国糖尿病患者人数已居世界首位... 详细信息

随着生活质量的提高和生活方式的改变,人们对于高糖、高脂等高热量的摄入增加,同时久坐和少运动的生活方式,使人体内能量代谢失衡,从而诱导肥胖和Ⅱ型糖尿病的发生。全世界范围内糖尿病的发生在持续增加,我国糖尿病患者人数已居世界首位,而由糖尿病带来的并发症,严重威胁着人们的健康。本文的目的一方面寻找到新型安全有效的PPARγ部分激动剂,为糖尿病的治疗提供候选药物;另一方面建立LGR4调节剂筛选模型,为LGR4更深层次的研究提供工具,同时为体内代谢和肥胖提供新的治疗策略。本文一方面运用在PPARγ翻译后修饰的研究中Cdk5(细胞周期素依赖蛋白激酶5 Cyclin-dependent Kinase 5)对PPARγSer273位的磷酸化会引起胰岛素抵抗。而Cdk5介导的PPARγSer273位的磷酸化并不会影响脂肪生成的能力的研究基础。通过阻断Cdk5介导的PPARγSer273位的磷酸化来提高胰岛素敏感性,而不改变其它位点的激活,有效的避免了PPARγ全激动带来的副作用如:白色脂肪的增加、大脑控制的摄食增加、体重增加、肾脏的水钠潴留等,实现了部分激动;另一方面通过运用bret和检测Wnt信号的方式建立了LGR4调节剂筛选模型。最终一方面获得了新型PPARγ部分激动剂VSP-51-2,并且在动物模型上验证了低剂量(20 mg/kg)在ob/ob小鼠上可以提高胰岛素敏感性且具降糖作用;高脂饲料诱导胰岛素抵抗DIO小鼠上剂量增加到50 mg/kg可提高体内胰岛素对葡萄糖的敏感性且具降糖作用,不会引起摄食、体脂、心脑比的增加;选择性激活了肝脏和脂肪中PPARγ相关下游基因的表达,同时并未引起脂肪中PPARγ全激动相关基因的转录增加;另一方面成功构建了融合表达蛋白的质粒:Rluc-LGR4-LRR8、RSPO1-EYFP、Rluc-EYFP,应用bret技术建立了模型,确定了基于Wnt信号建立的LGR4调节剂筛选模型,检测到相对稳定的Wnt信号。

关键词： Ⅱ型糖尿病 PPARγ激动剂 LGR4 肥胖 bret Wnt信号

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巯基氧化酶及其相关探针研究

巯基氧化酶及其相关探针研究

作者：胡薇华东理工大学

学位级别：硕士

静息巯基氧化酶QSOX家族成员属于一类FAD结合的巯基氧化酶,它们作为一种二硫键形成酶对细胞内很多蛋白的氧化折叠起到至关重要的作用。本文对人源重组的QSOX蛋白（HsQSOX蛋白）的结构和功能进行了一系列的研究。在对全长蛋白HQSOX（30-... 详细信息

静息巯基氧化酶QSOX家族成员属于一类FAD结合的巯基氧化酶,它们作为一种二硫键形成酶对细胞内很多蛋白的氧化折叠起到至关重要的作用。本文对人源重组的QSOX蛋白（HsQSOX蛋白）的结构和功能进行了一系列的研究。在对全长蛋白HQSOX（30-604）研究的基础上通过参阅文献报道的HsQSOX蛋白的二级结构、氨基酸序列和结构域信息,利用分子生物学的方法进行了一系列截短质粒的构建,并在大肠杆菌中进行了这些截短蛋白的表达纯化和对TCEP、DTT和rRNase三种还原性底物的氧化活性检测,最终确认了对TCEP具有氧化活性的最小结构域蛋白是HQSOX（295-536）,并论证了HsQSOX各结构域缺失对该蛋白的氧化活性的影响。为了检测体内条件下HsQSOX的催化功能,可用挠足虫荧光素酶（gaussia luciferase）Gluc作为其氧化巯基的探针。Gluc蛋白含有9个半胱氨酸,在完全被氧化的情况下能形成四对二硫键,但Gluc蛋白的二硫键只有在被氧化时才有活性,因此,它的活性功能发挥的好坏直接证明了HsQSOX氧化Gluc蛋白的巯基的程度,但在活体中gaussia luciferase蛋白在底物作用下发射出的蓝光不易透过细胞膜,因此需要利用bret和FRET技术将其发出的光转化成易透膜的红光,间接反应出细胞中的发光,从而也反应出HsQSOX蛋白的催化功能。本文利用Gluc、mKO2、mCherry三种蛋白的性质和功能,通过点突变获得发光时间延长的Gluc突变蛋白,并通过构建一系列不同长度linker的融合蛋白质粒,将之转化到大肠杆菌中进行小量表达,在菌体破碎后的上清液中进行bret和FRET现象的研究,最终获得了FRET现象明显的融合蛋白,为体内检测HsQSOX和Gluc蛋白的功能奠定了基础。

关键词： HQSOX蛋白挠足虫荧光素酶 bret FRET

GPR120激动剂的设计、合成和生物活性研究

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GPR120激动剂的设计、合成和生物活性研究

作者：李昂山东大学

学位级别：硕士

自1979年首次发现G蛋白偶联受体(GPCR)以来,被报道的G蛋白偶联受体家族成员已经超过800个。G蛋白偶联受体是涉及跨膜信号传导的具有7次跨膜保守结构的膜受体,同时还可以调控多种酶和离子通道效应系统。GPR120是最近被发现的G蛋白偶联受... 详细信息

自1979年首次发现G蛋白偶联受体(GPCR)以来,被报道的G蛋白偶联受体家族成员已经超过800个。G蛋白偶联受体是涉及跨膜信号传导的具有7次跨膜保守结构的膜受体,同时还可以调控多种酶和离子通道效应系统。GPR120是最近被发现的G蛋白偶联受体,属于GPCRs超家族中的视紫红质样受体家族。据报道,GPR120在人体多种组织中均有表达,其中结肠部位表达水平最高。此外,GPR120在不同种属动物的味蕾细胞、肠内分泌L细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等均有表达,现在有证据表明GPR120受体的表达与人体肥胖以及2型糖尿病患病有密切关系。作为以高血糖为特征的代谢性疾病,糖尿病作为以高血糖为特征的代谢性疾病已经成为了影响全球人类健康的难题。高血糖是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损而引起的,而GLP-1是一种肠道分泌的荷尔蒙,可促进血糖依赖胰岛素的分泌,同时脂肪酸作为能量来源为分泌肠多肽提供重要的条件。已有报道称在小肠中表达很高的GPR120是长链不饱和脂肪酸的受体,而且有实验结果证明长链不饱和脂肪酸刺激GPR120会增加GLP-1的分泌,促进胰岛素的循环。因此,GPR120对于治疗糖尿病和其他饮食失调疾病(例如贪食症)至关重要,研究前景良好。GPR120又被称为ω-3脂肪酸受体(如DHA和EPA)。Oh.等人报道ω-3脂肪酸和小分子激动剂可刺激巨噬细胞上的GPR120,从而产生广泛的抗炎作用,并且该巨噬细胞调节的组织抗炎作用可有效改善糖尿病产生的胰岛素抗性。因此,GPR120是将抗炎和胰岛素敏化反应联系起来的纽带,可以作为治疗胰岛素抗性的新靶点,并具有良好的研究价值。自GPR120发现以来,一直被认为是孤儿受体,直到2005年,Hirasawa等找到了GPR120的内源性配体。他们从1000多种化合物中,用定量流式细胞技术在稳定表达GPR120-EGFP的HEK293细胞中检测内吞的荧光标记受体数量,筛选出GPR120的配体是C14-C18链长的饱和脂肪酸和C16-C22链长的不饱和脂肪酸。随后,非内源性的小分子激动剂也被发现,如GW9508、NCG21、TUG-891等,它们在活化GPR120的效力与内源性长链脂肪酸类似,都可以有效地活化ERK、细胞内Ca2+释放反应和GLP-1的分泌。其中,NCG21是Sun等人在GPR120的同源模型中采用虚拟对接研究得到的,这证明采用计算机辅助设计的方法进行GPR120激动剂研究具有可行性。以上研究表明,GPR120的激动剂是目前为止唯一能提高胰岛素的灵敏度的同时也可以降低代谢产生炎症的物质。而且,GPR120也可以作为治疗CRC的全新靶点。因此,GPR120小分子配体的研究对于治疗糖尿病和炎症具有非常巨大的意义。本项研究在已发表的6个GPR120小分子激动剂构建药效团的基础上,同过计算机辅助药物设计的手段中从SPECS化合物库300,000化合物中选出50个可能有活性的化合物进行活性评价,通过测定胞内信号的变化,12个化合物显示出良好的受体激动活性,并分析了这12个化合物的偏向性。进而,我们以化合物41为先导化合物,筛选出19个衍生物,通过bret测定其活性并总结出芳酸类GPR120小分子激动剂初步构效关系,这为下一步结构改造提供了理论指导。本项研究还设计合成出25个由化合物18为先导化合物衍生物,并待下一步测定活性。

关键词： Ⅱ型糖尿病 GPR120激动剂 bret NFAT 偏向性配体计算机辅助药物设计

靶向p53抗肿瘤吲哚类生物碱小分子化合物的作用机制研究

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靶向p53抗肿瘤吲哚类生物碱小分子化合物的作用机制研究

作者：胡昌亮贵州大学

学位级别：硕士

肿瘤是由于某些情况下,细胞的增殖和凋亡发生异常而形成,主要受细胞中抑癌基因和原癌基因的调控,二者相互联系又相互制约,任何一环节失控都可能会导致细胞癌变。其中,P53作为一种与肿瘤相关性最高的抑制因子,大约50%的肿瘤中发生了P53... 详细信息

肿瘤是由于某些情况下,细胞的增殖和凋亡发生异常而形成,主要受细胞中抑癌基因和原癌基因的调控,二者相互联系又相互制约,任何一环节失控都可能会导致细胞癌变。其中,P53作为一种与肿瘤相关性最高的抑制因子,大约50%的肿瘤中发生了P53基因突变。P53基因是调控保护细胞恶性转移主要通路,具有抑制或阻止细胞的增殖、转化及保护基因组稳定的作用。MDM2是目前研究较多的癌基因,MDM2蛋白能够与P53蛋白的酸性结构域和部分转录激活结构域发生结合,形成p53-MDM2复合物,而抑制P53的正常功能,进而诱导肿瘤的发生。理论上,通过阻止MDM2对P53的相互作用,可以激活肿瘤细胞中p53信号途径。因此抑制p53-MDM2之间的相互作用被认为是抗肿瘤的重要药靶之一,以此为靶点进行药物的发现和筛选。另外,据文献报道,吲哚类生物碱具有较好的抗肿瘤活性,本研究主要探究其是否对p53-MDM2靶点是否具有抑制效果,从而寻找出靶向p53抗肿瘤的新型吲哚类生物碱抑制剂。本研究设计以p53-MDM2为靶点,通过运用生物发光共振能量转移(bioluminescence resonancetransfer,bret)技术,构建p53-MDM2相互作用的模型,将前期课题组合成的活性较好的吲哚类生物碱小分子化合物作用于该模型,进而得出吲哚类生物碱小分子化合物是否对p53-MDM2靶点具有抑制作用,最终筛选出靶向p53抗肿瘤吲哚类生物碱小分子化合物的先导化合物。本研究主要分为以下三个部分:第一部分,课题组前期已用wt P53 A549细胞对合成的40余个吲哚类生物碱小分子化合物体外抗肿瘤活性初步筛选得到了半数抑制率浓度(IC)与所测阳性化合物Nutlin-3进行比较,结果显示,化合物2yy(IC=15.57μM)和3zz(IC=10.84μM)对A549细胞的抑制活性都优于阳性对照化合物Nutlin-3。因此可以初步推测化合物2yy和3zz在细胞活性和靶向p53抗肿瘤选择性上可能具有较好的效果,可继续研究其对p53-MDM2相互作用的影响。第二部分,p53-MDM2相互作用bret模型的构建。首先将P53和MDM2基因分别克隆至含荧光蛋白基因EGFP和荧光素酶基因Rluc的载体上,分别形成融合质粒后,按照一定比例共转HEK293细胞进行融合蛋白表达,加入荧光素酶底物后,检测bret信号,以此可以判断p53-MDM2互作效果及小分子化合物破坏其相互作用的能力。最后,用阳性化合物作对照来验证p53-MDM2互作bret模型,最终结果表明p53-MDM2互作bret模型是构建成功的,可用于前期吲哚类生物碱小分子化合物的作用机制研究。第三部分,具有活性的吲哚类生物碱小分子化合物对p53-MDM2相互作用的机制研究。将前期MTT法筛选出的活性较好的吲哚类生物碱小分子化合物作用于p53-MDM2互作bret模型,研究这些小分子化合物对p53-MDM2互作机制的影响。结果表明,吲哚类生物碱小分子化合物3zz对P53与MDM2相互作用具有较好的抑制效果,可作为靶向p53抗肿瘤药物研发先导化合物进一步研究。

关键词： p53-MDM2靶点体外抗肿瘤吲哚类生物碱小分子化合物 bret 先导化合物