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bre基因在膀胱癌中的作用及机制的研究

BRE基因在膀胱癌中的作用及机制的研究

作者：张勇青岛大学

学位级别：硕士

研究目的:在泌尿系统肿瘤中,膀胱癌以其高发病率及高死亡率一直以来都是人们研究的热点,但是临床上一直缺乏一种较为有效的膀胱癌的治疗方法。bre(The brain and reproductive expression),又称BRCC45(BRCA1-BRCA2-containing complex s... 详细信息

研究目的:在泌尿系统肿瘤中,膀胱癌以其高发病率及高死亡率一直以来都是人们研究的热点,但是临床上一直缺乏一种较为有效的膀胱癌的治疗方法。bre(The brain and reproductive expression),又称BRCC45(BRCA1-BRCA2-containing complex subunit 45),是一种死亡受体相关的抗凋亡蛋白,与体内肿瘤的生长密切相关。一些研究证明bre在很多肿瘤以及其他疾病中都扮演着非常重要的角色,为了进一步研究抗凋亡蛋白bre在膀胱癌发病中的作用,了解其在膀胱癌发生发展中发挥功能的分子机制,我们对此进行了研究。研究方法:通过使用QPCR和western blotting的方法,我们分析了bre在膀胱癌四种细胞系EJ,T24,BIU,5637以及正常膀胱细胞HCV29中的表达量。而且,我们还对6对膀胱癌及癌旁组织进行了分析,进一步验证bre基因的表达量。另外,通过慢病毒介导的shRNA干扰技术,我们分析了bre在膀胱癌的细胞周期及细胞增值中的作用。在体内和体外实验中,通过沉默bre的表达来研究bre的各种生物学功能。结果:利用QRT-PCR和western blotting的方法,我们得知,与正常膀胱细胞HCV29细胞相比,四种膀胱癌细胞系EJ,T24,BIU,5637中bre的表达含量不管是在mRNA水平上还是在蛋白水平上均较高。我们用此方法同样检测了6对膀胱癌及癌旁组织中bre的表达量,结果进一步证实了膀胱癌组织中bre的表达量不管是在mRNA水平上还是在蛋白水平上均明显高于癌旁组织。然后我们利用[3H]-TdR掺入法分析了在沉默bre表达后,膀胱癌细胞系T24,EJ的增值情况,结果显示,转染shbre的EJ和T24细胞,与对照组相比,细胞的增值活性均明显降低。并且在一定程度上影响了细胞周期中的G2/S期。然后,我们用western blotting的方法分析了细胞周期相关蛋白Cyclin B1和CDK1的表达,结果显示,与对照组相比,沉默bre的EJ和T24细胞,Cyclin B1和CDK1的蛋白表达量均明显减少。采用BrdU染色技术来分析bre基因敲除的患者细胞的增值过程。研究结果显示,沉默bre基因的细胞,与对照组相比较,其增值过程中S期缩短,而G0-G1和G2-M期延长。我们还用Ki67染色技术分析了患者细胞的增殖期的变化。我们观察到沉默bre基因的细胞,与对照组相比较,其增值过程中G0期延长,而非G0期缩短。在DDP IC50药物抑制试验中,我们发现与对照组比较,bre沉默的膀胱癌细胞系EJ,T24,BIU,5637以及膀胱癌患者的细胞,在抑制其增殖中所用的DDP IC50剂量明显较少。我们用QPCR,western blotting以及免疫荧光技术分析得出,在CD133+细胞和ALDH+细胞中,bre的表达含量均明显高于CD133-细胞和ALDH-细胞。在体内实验中,相同数量的沉默bre的膀胱癌细胞和对照组相比,成瘤率明显较低,并且小鼠在到达相同的无肿瘤生存期时,所需要的bre基因沉默的EJ或者T24细胞的数量明显较多。结论及意义:bre基因能够促进膀胱癌细胞的生长,在膀胱癌的肿瘤形成和发展中扮演了非常重要的角色,因此,针对bre的靶向治疗对于膀胱癌患者来说也许是一种很好的治疗方式。

关键词：膀胱癌 bre 凋亡细胞增值

抗凋亡蛋白bre、TNFR1和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达及Reversine对其的影响

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广东医学 2011年第15期32卷 1941-1944页

作者：李莲莲陈若翰陈淑珍甄永苏古维立蔡冬青崔耀隆李嘉豪暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 广东省广州市第一人民医院肝胆外科 510180 香港中文大学病理化学系香港中文大学生物医学学院

目的研究抗凋亡蛋白bre、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 m... 详细信息

目的研究抗凋亡蛋白bre、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 mL CCl4/oil4,8 h后处死;第4组皮下注射0.1 mL CCl4/oil,每周2次,连续注射6周,停止用药后15 d处死;第56、组方法同第4组,停止注射CCl4后分别用Reversine 501、00mg/(kg.d)皮下注射15 d,15 d后进行免疫组织化学检测,对bre、TNFR1和Beclin1 3种蛋白的表达进行分析。结果免疫组化结果发现bre、TNFR1和Beclin1 3种蛋白在CCl4诱肝纤维化过程中的表达明显上升,而经过纤维化抑制剂Reversine的处理后3种蛋白的表达下降至正常小鼠肝的水平。结论 bre、TNFR1和Beclin1 3种应激反应分子可能在肝纤维化与肝炎发病中起重要作用,它们有可能成为肝病诊断标志物和治疗肝脏疾病的重要靶点。

关键词： bre TNFR1 Beclin1 肝纤维化 Reversine

抗凋亡蛋白bre和多功能受体ANX-Ⅱ在肝癌的高表达

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广东医学 2010年第9期31卷 1108-1110页

作者：张林林陈若翰蒋光愉崔耀隆李嘉豪陈淑珍蔡冬青暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学附属第一医院病理科广州510630 香港中文大学化学病理系香港中文大学解剖学系中国医学科学院医药生物技术研究所北京100050

目的研究抗凋亡蛋白bre和多功能性受体annexinⅡ(ANX-Ⅱ)在人的正常肝组织、肝非肿瘤组织以及肝肿瘤组织中的表达情况。方法对5例正常肝组织、23例肝非肿瘤组织和56例肝肿瘤组织,使用免疫组化的方法检测bre和ANX-Ⅱ抗体在肝组织中表达... 详细信息

目的研究抗凋亡蛋白bre和多功能性受体annexinⅡ(ANX-Ⅱ)在人的正常肝组织、肝非肿瘤组织以及肝肿瘤组织中的表达情况。方法对5例正常肝组织、23例肝非肿瘤组织和56例肝肿瘤组织,使用免疫组化的方法检测bre和ANX-Ⅱ抗体在肝组织中表达情况。结果 5例肝正常组织bre和ANX-Ⅱ的表达为阴性,bre的表达在肝非肿瘤组织中57%为弱阳性,43%为阳性;在肝肿瘤中,25%为弱阳性,64%为阳性,11%为强阳性。ANX-Ⅱ的表达在肝非肿瘤组织中,61%为弱阳性,35%为阳性,4%为阴性;在肝肿瘤中,21%为弱阳性,63%为阳性,16%为强阳性。结论 bre在肝肿瘤中高表达是癌细胞抑制凋亡信号途径所产生的调节,ANX-Ⅱ的高表达是肝癌细胞入侵组织和转移的机制表现,因而bre和ANX-Ⅱ不但可以成为新的肝肿瘤标志物,更有可能成为新的治疗靶点。

关键词： bre ANX-Ⅱ 肝肿瘤免疫组化高表达

食管癌细胞的蛋白质组学分析与bre蛋白的初步研究

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食管癌细胞的蛋白质组学分析与BRE蛋白的初步研究

作者：潘可汕头大学

学位级别：硕士

一、食管癌细胞可溶性亚细胞组分的蛋白质组学研究目的肿瘤作为一种体细胞遗传病，其发生涉及多种相关基因的变异，包括癌基因的活化和（或）抑癌基因的失活。食管癌在我国的发病率和死亡率均居于恶性肿瘤的前列，但病因学与... 详细信息

一、食管癌细胞可溶性亚细胞组分的蛋白质组学研究目的肿瘤作为一种体细胞遗传病，其发生涉及多种相关基因的变异，包括癌基因的活化和（或）抑癌基因的失活。食管癌在我国的发病率和死亡率均居于恶性肿瘤的前列，但病因学与发病机制至今不甚明了。食管癌的发生演进是一个多层次、多因素导致的复杂过程，其产生发展涉及多种基因与蛋白的协同作用。近年来有关食管癌的研究主要集中在癌基因／抑癌基因的改变与食管癌的相互关系，如myc、ras、EGFR、Cyclin D1、p53、Rb等。蛋白质组学技术已越来越广泛的应用于致癌机制的研究以及肿瘤相关蛋白的鉴定，我们从永生化食管上皮细胞系SHEE（Shantou Human Esophageal Epithelial cell line）以及由之恶性转化而来的食管癌细胞系SHEEC（Shantou Human Embryonic Esophageal Carcinoma cell line）出发，运用蛋白质组学技术寻找与食管癌密切相关的蛋白基因，进而研究其在肿瘤发生演进过程中的作用机制。材料与方法SHEE与SHEEC细胞在DMEM+F12培养基中正常培养传代，收集贴壁生长的细胞，PBS清洗、离心、裂解，试剂盒分级提取可溶性亚细胞组分蛋白。通过双向凝胶电泳与银染技术分别获得各亚细胞组分的蛋白表达图谱，凝胶图象扫描后进行PDQuest软件分析，比对表达量具有显著差异性的蛋白质点，将这些点取出进行胶内原位酶切，回收酶切片断，采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析两种细胞系的肽质量指纹图谱，进行Swiss-Prot蛋白数据库检索以鉴定差异表达蛋白。对其中几种肿瘤发生相关蛋白进行Western Blot分析以及RT-PCR分析，验证其在蛋白以及基因水平的差异表达。结果 1．通过MALDI-TOF质谱分析以及蛋白质数据库查询，确定在SHEEC食管癌细胞系中的6种胞浆蛋白表达升高，分别为Cyclin A1，Collagenase 3前体，p56-LCK，Gemin 6，激活信号整合辅助因子1亚基1，Cytochrome P450 2D6;6种胞浆蛋白表达降低，包括PDI，类ADP核糖基化因子10，SDS3蛋白同系物，AmphiphysinⅡ，EF手区包含蛋白1，锌指蛋白ZPR1（倍数≥1.5，匹配度分数＞10~5）。 2．7种膜蛋白在SHEEC细胞中表达升高，分别为Bcl-W，Prohibitin，ATP合酶β链，保守低聚物高尔基体组分7，HSP76，Hsp60，Peroxin19;表达降低的10种膜蛋白则包括GAS-1，TNF-α，TNFRSF1，RBBP-9，GAS-6，镁离子转运体MRS2L，PDI A3前体，γ-2tubulin，G21蛋白，CD87抗原（倍数≥1.5，匹配度分数＞10~5）。其中TNF-α在两种细胞系中的表达有明显差异（倍数=2.6，匹配度分数＞10~6）。 3．10种核蛋白在SHEEC细胞中表达升高，包括bre，Cyclin A，Prohibitin，PML，β-Pix，AIP22，泛素蛋白连接酶E3C，TFⅢC63，锌指蛋白306，Copine-8;而另外10种表达降低的核蛋白则包括PMS2，Max蛋白，HSP76，P53诱导蛋白10，含EF手区蛋白1，NIP3样蛋白X，鸟苷酸结合蛋白αq，SIR2样蛋白2，细胞分裂蛋白激酶6，26S蛋白酶调节亚基6A（倍数≥1.5，匹配度分数＞10~5）。其中Cyclin A，Prohibitin，PML与PMS2（倍数＞1.5，匹配度分数＞10~6），bre（倍数=2.3，匹配度分数＞10~8）。 *** Blot分析验证差异显著蛋白在SHEE与SHEEC细胞中的表达，bre，Cyclin A，Prohibitin，PML在SHEEC细胞中的表达量高于SHEE细胞（P＜0.05），TNF-α，PMS2在SHEEC细胞中的表达量低于在SHEE细胞中的表达量（P＜0.05），验证了蛋白质组学部分实验结果;另外，p53在SHEEC中表达下降（P＜0.01）而TNF-R1上升（P＜0.01）。 ***-PCR分析差异表达蛋白的转录水平差异，SHEEC细胞中bre，Cyclin A，Prohibitin的mRNA水平升高（P＜0.05），TNF-α，PMS2的mRNA水平无显著变化（P＞0.05）;另外，p53在SHEEC中转录下降（P＜0.01）而TNF-R1上升（P＜0.01）。结论 1．系统鉴定出各亚细胞组分的肿瘤相关性标记物，包括6种在SHEEC细胞表达升高与6种表达降低的胞浆蛋白，

关键词：食管癌 bre 比较蛋白质组学 siRNA 人

抗凋亡蛋白bre及相关蛋白在癌症和药物反应中的功能研究

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抗凋亡蛋白BRE及相关蛋白在癌症和药物反应中的功能研究

作者：张林林暨南大学

学位级别：硕士

目的：目前癌症的检验与治疗仍是一个世界性难题,其机理和分子途径有待进一步阐明,本研究关注抗凋亡蛋白bre及其相关蛋白ANXⅡ和TNFR1在不同肿瘤组织中的表达情况,探讨这些蛋白在不同肿瘤中发挥的作用,在肿瘤的发生与发展过程中这些蛋... 详细信息

目的：目前癌症的检验与治疗仍是一个世界性难题,其机理和分子途径有待进一步阐明,本研究关注抗凋亡蛋白bre及其相关蛋白ANXⅡ和TNFR1在不同肿瘤组织中的表达情况,探讨这些蛋白在不同肿瘤中发挥的作用,在肿瘤的发生与发展过程中这些蛋白与肿瘤之间的相互关系及其功能。同时也探讨PML蛋白与肌联蛋白Titin的相互作用及其对抗肿瘤药物LDM的反应。方法与结果：(1)用免疫组织化学的方法检测bre, ANXⅡ和TNFR1在肝脏组织(84例),鼻咽癌(5例),胃癌(5例),肾癌(5例),卵巢癌(5例)和脑胶质瘤(5例)中的表达情况。bre蛋白在肝正常组织中(5／5例)表达大部分呈阴性,在肝癌(42／56例)中,过表达明显,但是在不同的WHO分级中,bre表达并没有明显不同。在鼻咽癌中bre表达3例为阳性,在鼻咽癌的癌旁细胞中可见其表达呈现弱阳性(1例)。bre在3例胃癌组织中表达呈阳性。在肾癌的颗粒细胞癌和透明细胞癌中,bre表达较高(5例)。卵巢癌中bre表达也较高,3例呈阳性。在星形细胞瘤和胶质母细胞瘤中,bre过表达明显(4例)。ANXⅡ在肝癌(44／56例)中高表达,在正常肝细胞中表达呈阴性(5／5例),在鼻咽癌的癌旁上皮组织表达呈阳性(1例),3例组织中ANXⅡ表达呈阳性。在胃癌表达呈下调状态,有4例表达呈阳性。在肾癌中表达较弱,有4例呈阳性表达。在卵巢癌中4例表达呈阳性,在透明细胞癌中表达较强(1例)。在胶质瘤中表达阳性组织为4例。TNFR1在肝癌(33／56例)中过表达,在鼻咽癌中表达呈弱阳性(4例),在胃癌中表达阳性组织为4例,在肾癌中为3例,在卵巢癌中表达阳性组织3例,在胶质瘤中表达较弱,表达阳性组织为4例。(2)用免疫荧光的方法检测PML和Titin蛋白在结肠癌Lovo细胞株的共定位情况,发现两者在Lovo细胞核内很好的重合。(3)用MTT的方法检测成纤维细胞PML++和PML--对药物LDM的反应,24h后,LDM浓度为10(-10)mol/L细胞已开始出现凋亡。结论：(1)bre在肝癌,胃癌,肾癌,卵巢癌,脑胶质瘤中过表达,在鼻咽癌中表达较弱。ANXⅡ在肝癌,卵巢癌,胶质瘤中过表达,在鼻咽癌,胃癌,肾癌中表达较弱。TNFR1在肝癌中过表达,在鼻咽癌中表达呈弱阳性,在胃癌,肾癌,卵巢癌,胶质瘤中表达呈明显阳性。(2)PML和Titin蛋白在Lovo细胞核中共定位。(3)成纤维细胞PML++和PML--细胞对药物LDM反应没有明显不同。bre在肿瘤中的高表达是肿瘤细胞对凋亡信号途径所产生的调节,ANX-II的高表达使得肿瘤细胞能进一步入侵组织和转移,而TNFR1能增强细胞对促炎症因子TNF的反应,诱导细胞生长。转录激活因子PML和肌肉蛋白Titin之间的相互作用提示,这个过程可能包括信号从肌小节转移至核内并激活新的基因进行组织修复。PML野生型和基因敲除细胞对抗癌药物LDM的反应提示正常细胞和癌细胞对抗肿瘤药物反应过程中PML蛋白不是唯一的途径。

关键词： bre ANXⅡ TNFR1 PML 癌表达

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肝细胞中bre基因功能的初步研究

肝细胞中BRE基因功能的初步研究

作者：刘冠军汕头大学

学位级别：硕士

背景和目的： “Brain and Reproductive Organ-Expressed”（bre）基因，首次发现于1995年。最初的研究发现bre基因在小鼠的大脑、睾丸、卵巢中高表达，故命名之。随后研究发现，bre基因广泛表达;其功能涉及到应激反应、凋亡... 详细信息

背景和目的： “Brain and Reproductive Organ-Expressed”（bre）基因，首次发现于1995年。最初的研究发现bre基因在小鼠的大脑、睾丸、卵巢中高表达，故命名之。随后研究发现，bre基因广泛表达;其功能涉及到应激反应、凋亡、肿瘤生长和类固醇激素合成等方面。目前，bre基因具体作用机制尚不清楚。本研究首先利用RNAi技术，探讨bre基因在肝细胞系中的功能;进一步以bre转基因小鼠肝脏为研究对象，利用蛋白质组学技术探讨bre蛋白与其他蛋白质之间的关系，旨在研究bre蛋白在机体中的作用机制。材料和方法：（1） RNAi抑制人正常肝细胞系-Chang细胞bre基因表达，相差显微镜观察活细胞形态、MTT法和BrdU掺入法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡情况的改变。（2）以bre转基因小鼠和其对照小鼠肝脏为对象，HE染色后测量肝细胞和细胞核的周长及面积;利用蛋白质组学方法研究bre基因对小鼠肝脏蛋白质谱的影响。（3）以bre转基因小鼠以及bre基因干扰后的Chang细胞为材料，RT-PCR方法从正反两方面印证蛋白质组学实验结果。（4）实验数据用SPSS13.0统计软件进行分析处理。结果：（1） bre基因在bre转基因小鼠和ctl-siRNA处理的Chang细胞中高表达。（2） bre转基因小鼠与其对照组小鼠肝细胞、RNAi处理前后Chang细胞的形态学分析显示其形态没有差别;RNAi处理后Chang细胞的MTT实验结果及RNAi处理后Chang细胞的BrdU实验结果显示细胞在bre基因干扰前后的增殖没有差异;RNAi处理后Chang细胞凋亡减少。（3）成功建立了bre转基因小鼠和其对照组小鼠的肝脏蛋白质双向凝胶电泳图谱，多数蛋白集中于pH 5～7、分子量20～80KDa范围。对照组和bre转基因组电泳图谱的平均蛋白质点数分别为804±154、798±144;对照组与实验组平均匹配率为89.75％。对比发现多个蛋白质点表达有差异，经数据库查询鉴定出15个差异蛋白质。（4） RT-PCR检测HSP70-1、HSP70-2、Ubi-d4和G21在bre转基因小鼠肝脏和ctl-siRNA处理的Chang细胞中高表达，α-烯醇化酶在对照组小鼠肝脏组织和bre-siRNA处理的Chang细胞中高表达。结论：（1）高重复性的2-DE凝胶图和MALD-TOF-MS结果表明蛋白质组学结果是可靠的。（2） bre基因不能改变肝细胞的形态;bre基因对Chang细胞的增殖没有影响;bre基因可以促进Chang细胞凋亡。（3） bre基因可以上调HSP70-1和HSP70-2的表达，或许通过HSP70在应激反应中发挥作用及促进细胞凋亡。（4） bre基因可以调节α-烯醇化酶、Ubi-d4和G21的表达，可能在能量生成、肿瘤生成等方面中起作用。

关键词： bre 蛋白质组学 RNAi 热休克蛋白凋亡

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bre基因的研究进展

解剖学研究 2007年第3期29卷 222-224页

作者：潘可陈海滨汕头大学医学院组织与胚胎学教研室广东汕头515041

bre基因是一种应激反应调节基因,其表达产物广泛分布于不同种属的各种生物以及生物体的多种器官中。它所编码的高度保守的蛋白产物,定位于细胞质与细胞核中,具有调控细胞周期、调节细胞凋亡的功能。因而bre基因在细胞的生存、增殖、凋... 详细信息

bre基因是一种应激反应调节基因,其表达产物广泛分布于不同种属的各种生物以及生物体的多种器官中。它所编码的高度保守的蛋白产物,定位于细胞质与细胞核中,具有调控细胞周期、调节细胞凋亡的功能。因而bre基因在细胞的生存、增殖、凋亡与分化过程中发挥极其重要的作用,可能与某些肿瘤的发生演进有关。

关键词： bre 应激反应调控作用

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AmE和bre部分助动词用法比较

九江师专学报 1990年第3期9卷 30-34,52页

作者：廉洁

美国英语(American English, 下称AmE)和英国英语(British English, 下称bre)是当今世界使用得最为广泛的两种英语变体。我国编写或引进的英语教材或读物,大都属于这两种变体之一。尽管同英语的其它变体一样,AmE和bre包含着一个共同的内... 详细信息

美国英语(American English, 下称AmE)和英国英语(British English, 下称bre)是当今世界使用得最为广泛的两种英语变体。我国编写或引进的英语教材或读物,大都属于这两种变体之一。尽管同英语的其它变体一样,AmE和bre包含着一个共同的内核,即有一套在所有英语变体中都存在的语法体系和其它特征;

关键词：美国英语英国英语情态词比较研究 AmE bre 助动词用法

贵安生态创新模式的探索实践——bre中国区总裁杰亚·斯甘达穆斯先生专访

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动感（生态城市与绿色建筑） 2015年第2期 16-20页

作者：本刊编辑部

Gui’an Innovation Park is the first park under the partnership of bre and *** is also China’s first Innovation Park with the theme of ecological *** Skandamoorthy,Director of bre China,accepted our interview at his busy schedule between China and UK,and dived into the details of Gui’an Innovation Park.贵安生态文明创新园(以下简称"贵安创新园")是英国建筑研究院(Building Research Establishment Limited,以下简称bre)在中国落地的首个创新园项目,也是中国第一个以生态文明为主题的创新园。负责此项目的

关键词：创新园 bre 生态文明 interview Director details schedule p