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bkca通道在适度酒精预适应保护脑缺血再灌注损伤中的作用及ROS的调控机制

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第10期30卷 1018-1019页

作者：苏芳朱雨岚郭安臣王拥军王群首都医科大学附属北京天坛医院神经病学中心北京100050 哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科黑龙江哈尔滨150001 脑血管病转化医学北京市重点实验室北京100050 北京脑重大疾病研究院北京100069 国家神经系统疾病临床医学研究中心北京100050

目的探讨bkca通道在酒精预适应(Et OH-PC)保护脑缺血再灌注(I/R)损伤中的作用及调控机制。方法 1.建立原代皮质神经元OGD/R模型,CCK-8检测细胞活性、流式及TUNEL法检测凋亡、Fluo4孵育检测细胞内钙、Western检测凋亡相关蛋白及bkca-α... 详细信息

目的探讨bkca通道在酒精预适应(Et OH-PC)保护脑缺血再灌注(I/R)损伤中的作用及调控机制。方法 1.建立原代皮质神经元OGD/R模型,CCK-8检测细胞活性、流式及TUNEL法检测凋亡、Fluo4孵育检测细胞内钙、Western检测凋亡相关蛋白及bkca-α亚基表达,观察bkca在Et OH-PC中的作用。2.膜片钳单通道记录观察酒精对bkca通道的作用。3.建立大鼠MCAO模型,给予MnTBAP药理干预,再灌注24 h后行为学评分,TTC染色。结果1.与OGD/R组相比,10 mmol·L-1Et OH-PC可提高细胞存活率,降低凋亡细胞比例;Et OH-PC前给予Pax,神经元存活率较酒精组下降;与OGD/R组相比,Et OH-PC降低OGD/R诱导的细胞内钙升高水平及凋亡细胞比例,上调Bcl-2表达,下调Bax表达,而Pax拮抗酒精的作用;OGD/R组bkca-α亚基蛋白表达水平较对照组升高。2.酒精可电压依赖性的增加皮质神经元bkca通道电流及开放概率,激活bkca通道。*** OH-PC与bkca通道激动剂NS11021预适应组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积显著低于I/R组,预适应前给予Mn-TBAP腹腔注射,神经功能评分及脑梗死体积增高。结论 Et OH-PC通过激活bkca通道降低细胞内钙、抑制凋亡而发挥对OGD/R诱导神经元损伤的保护作用;OGD/R诱导bkca通道α亚基表达上调,可能参与了脑缺血再灌注损伤的内源性防御机制。ROS调控了Et OH-PC激活bkca通道发挥对I/R损伤的神经保护作用。

关键词：脑缺血再灌注酒精预适应神经保护 bkca通道 ROS

有氧运动抑制高血压大鼠肠系膜动脉bkca通道蛋白亚基表达上调

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天津体育学院学报 2015年第1期30卷 42-46,65页

作者：张琳张寒梦叶芳石丽君北京体育大学运动生理教研室北京100084

目的：探究有氧运动对高血压大鼠（SHR）肠系膜动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾（bkca）通道α和β1亚基蛋白表达及血管舒缩性的影响.方法：选用12周龄雄性自发性高血压大鼠（SHR,n=24）以及正常血压对照组（WKY,n=12）.将SHR随机分组... 详细信息

目的：探究有氧运动对高血压大鼠（SHR）肠系膜动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾（bkca）通道α和β1亚基蛋白表达及血管舒缩性的影响.方法：选用12周龄雄性自发性高血压大鼠（SHR,n=24）以及正常血压对照组（WKY,n=12）.将SHR随机分组,高血压安静对照组（SHR,n=12）和高血压有氧运动组（SHR-EX,n=12）,各组大鼠先进行1周适应性训练,之后SHR-EX组进行为期8周的跑台训练.9周后,取各组大鼠的肠系膜动脉（2～3级）,进行HE染色,离体微血管张力测定及蛋白免疫印迹分析.结果：（1）SHR组肠系膜动脉的管壁厚度明显高于WKY组（P＜0.01）,但SHR-EX组肠系膜动脉的管壁厚度明显低于SHR组（P＜0.01）;（2）Iberiotoxin（10-7M）作为bkca通道选择性阻断剂可诱发各组血管张力增加,增高幅度为SHR＞SHR-EX＞WKY,NS11021作为bkca通道选择性激动剂可使血管张力下降,下降幅度为SHR＞SHE-EX＞WKY;（3）SHR组bkca通道的α和β1亚基表达上调,且以β1亚基上调更为显著,SHR-EX组的两亚基上调减弱,且以β1亚基变化更为显著.结论：高血压诱导大鼠肠系膜动脉bkca通道功能增强,负反馈调节血管张力增加,但有氧运动可显著抑制高血压伴随的大鼠肠系膜动脉bkca通道的α和β1亚基表达上调,从而改善血管功能.

关键词：有氧运动肠系膜动脉 bkca通道血管张力蛋白表达

慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌细胞bkca通道对膜电位的影响

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中华男科学杂志 2013年第1期19卷 10-14页

作者：张震梁朝朝张贤生郝宗耀樊松刘见辉安徽医科大学第一附属医院泌尿外科安徽合肥230022

目的:探讨慢性非细菌性前列腺炎(CAP)SD大鼠前列腺平滑肌细胞(PSMCs)bkca通道对细胞膜电位的影响及其在CAP中的意义。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为CAP模型组和正常对照组,去势加雌激素注射方法诱导CAP模型,体外组织块贴壁法培养并纯化... 详细信息

目的:探讨慢性非细菌性前列腺炎(CAP)SD大鼠前列腺平滑肌细胞(PSMCs)bkca通道对细胞膜电位的影响及其在CAP中的意义。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为CAP模型组和正常对照组,去势加雌激素注射方法诱导CAP模型,体外组织块贴壁法培养并纯化PSMCs,细胞经膜电位敏感的荧光染料DiBAC4孵育后在激光共聚焦显微镜(LSCM)下动态定量观察激活bkca通道所引起的膜电位变化。结果:细胞外钙离子浓度升高,激活bkca通道使CAP组与正常对照组PSMCs细胞膜均发生超极化,两组效应均能被bkca通道特异性阻滞剂Iberiotoxin(IbTX)阻断而减弱。但CAP组超极化幅度明显减低,两组细胞超极化效应引起的DiBAC4荧光强度变化值分别为18.78±2.92、38.85±7.10(Pbkca通道介导的超极化效应明显减弱,可能导致其对膜电位的调节能力及抑制平滑肌细胞过度收缩能力降低,从而引起CAP盆腔疼痛综合征及下尿路症状。

关键词：慢性非细菌性前列腺炎 bkca通道膜电位 DiBAC4 大鼠

川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉bkca通道的影响

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中药药理与临床 2009年第6期25卷 36-39页

作者：农慧盛庆寿丁胜元闫福曼罗荣敬广西中医学院生理教研室南宁530001 广西中医学院附属瑞康医院南宁530011 广州中医药大学生理教研室广州510405

目的:研究川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉bkca通道影响,从离子通道的角度探讨川芎嗪治疗糖尿病血管并发症的可能机制。方法:用链脲佐菌素大剂量单次腹腔注射法造成大鼠糖尿病模型,大鼠随机分为4组:正常组、糖尿病模型组、川芎嗪低剂量... 详细信息

目的:研究川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉bkca通道影响,从离子通道的角度探讨川芎嗪治疗糖尿病血管并发症的可能机制。方法:用链脲佐菌素大剂量单次腹腔注射法造成大鼠糖尿病模型,大鼠随机分为4组:正常组、糖尿病模型组、川芎嗪低剂量组和川芎嗪高剂量组。采用腹腔注射给药,正常组和模型组腹腔给予射注射用水,川芎嗪低、高剂量组分别按40mg/kg、80mg/kg给药,用药8周后,处死大鼠。酶分离法获取单个胸主动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳技术记录bkca电流,计算平均通道开放概率。结果:糖尿病模型组、川芎嗪低、高剂量组的bkca通道平均开放概率分别是0.20±0.12、0.31±0.24、0.40±0.19高于正常组0.09±0.02(Pbkca通道会代偿性的增加开放概率;川芎嗪可提高早期糖尿病大鼠胸主动脉bkca通道的活性,增加其平均开放概率,可能是其治疗糖尿病血管病变的机制之一。

关键词：川芎嗪糖尿病 bkca通道

有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌bkca通道门控特性的影响

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有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌BKCa通道门控特性的影响

作者：刘佰林北京体育大学

学位级别：硕士

研究目的：研究有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉动脉平滑肌细胞膜上bkca通道门控特性的影响。研究方法：19月龄衰老雄性Wistar大鼠随机分成安静组(O-SED, n=6)和运动组(O-EX, n=6)。O-EX组进行跑台训练(15m/min,60min/天,5天/周,12周)。... 详细信息

研究目的：研究有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉动脉平滑肌细胞膜上bkca通道门控特性的影响。研究方法：19月龄衰老雄性Wistar大鼠随机分成安静组(O-SED, n=6)和运动组(O-EX, n=6)。O-EX组进行跑台训练(15m/min,60min/天,5天/周,12周)。2月龄Wistar大鼠作为青年对照组(Young, n=6)。采用膜片钳内面向外单通道记录技术对用急性酶分离的肠系膜动脉平滑肌细胞膜上的bkca通道的功能活性进行研究。研究结果：(1)Young组大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞膜上bkca单通道斜率电导值为248pS;O-SED、O-EX与Young组电导值相似,没有显著的统计学差异。(2)有氧运动使衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞膜上bkca通道电压敏感性增强,与Young相比,O-EX、O-SED两组(Normalized NPo)-V曲线依次沿着电压轴右移,各组的V1/2分别为43.62±1.49mV,53.30±1.41mV,60.98±2.45mV。(3)有氧运动使衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞膜上bkca通道钙敏感性增强,与Young相比,O-EX、O-SED两组(Normalized NPo)-[Ca2+]i曲线依次右移,各组Kd值分别为1.39±0.14μ M,2.62+0.26μ M,4.95±0.69μ M。(4)Young、 O-EX和O-SED组的肠系膜动脉平滑肌细胞膜上bkca通道开放时间常数(T o)分别为24.5±4.0ms,16.4±2.2ms,10.5±1.2ms,关闭时间常数(τc)分别为30.2±3.6,38.4±4.3ms,60.8±5.6ms;平均开放概率分别是0.48±0.05,0.26±0.03,0.15±0.02。(5)有氧运动增加衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞膜上bkca通道对Tamoxifen的敏感性,1μ M/L Tamoxifen使Young、 O-EX、O-SED三组bkca通道Normalized NPo分别增加4.1±0.5倍,3.0±0.4倍,1.6±0.3倍。研究结论：衰老通过降低β1亚基的功能使bkca通道活性下降,而有氧运动在一定程度可减弱此变化。这可能是有氧运动减弱衰老降低动脉血管舒张功能的分子机制之一。

关键词：有氧运动肠系膜动脉 bkca通道膜片钳

T2DM肾病大鼠肾动脉bkca通道mRNA的表达与肾脏病变相关性研究

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T2DM肾病大鼠肾动脉BKCa通道mRNA的表达与肾脏病变相关性研究

作者：荆文荣西南医科大学

学位级别：硕士

目的:揭示不同病程2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)肾病大鼠肾动脉大电导钙激活钾通道(BK)基因表达变化与肾脏病变之间有无相关性。方法:1.建立模型:适应性喂养一周后,将60只SD大鼠随机分组,对照组(10只)和模型组(50只)。模... 详细信息

目的:揭示不同病程2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)肾病大鼠肾动脉大电导钙激活钾通道(BK)基因表达变化与肾脏病变之间有无相关性。方法:1.建立模型:适应性喂养一周后,将60只SD大鼠随机分组,对照组(10只)和模型组(50只)。模型组进行左肾切除手术,对照组进行左肾切除假手术。模型组喂高脂高糖饲料(主要配料为10%猪油,2.5%胆固醇,20%蔗糖,1%胆酸盐,66.5%常规饲料);对照组仅喂饲普通饲料。第4周时模型组大鼠腹腔注射一次STZ 25mg·kg;对照组仅注射同体积柠檬酸缓冲液。三天后,断尾采血测量空腹血糖筛选出符合空腹血糖≥7.0mmol·L40只大鼠继续喂养,建模时间8周(20只)和12周(20只)。于8周和12周处死大鼠前一天用代谢笼收集24h尿液测量微量尿蛋白。第二天先测空腹血糖,再测量大鼠体重,然后麻醉大鼠腹主动脉采血测血肌酐和血尿素氮,取肾动脉,采集右肾测其重量。2.T2DM肾病模型的鉴定:(1)FBG≥7.0mmol·L,PBG≥11.0mmol·L且伴有胰岛素敏感性(Insulin sensitive index,ISI)降低者;(2)糖尿病肾病早期肾脏肥大;(3)出现微量白蛋白尿,为成模指标。3.肾脏生化指标检测:大鼠麻醉后,打开腹腔,腹主动脉采血离心取血清,用全自动生化分析仪检测血尿素氮、血肌酐和尿蛋白。***染色:喂养8周和12周的大鼠经麻醉和腹主动脉采血处理后,取部分肾组织置于10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋、切片、脱蜡、HE染色、透明、封片等处理,应用光镜观察肾脏组织结构变化。5.电镜观察:另取部分肾组织置于2.5%戊二醛固定,常规脱水、渗透、包埋、切片等处理,应用电镜观察肾脏组织超微结构变化。6.实时荧光定量PCR:大鼠经麻醉和腹主动脉采血后,采集肾动脉测定BK通道的ɑ,β亚单位的表达水平。提取各组总RNA,逆转录成cDNA,用引物和SYBRgreen染料进行扩增。结果:(1)T2DM肾病大鼠模型建立:与对照组比较,(1)8周、12周大鼠的FBG≥7.0mmol·L,2h PBG≥11.0mmol·L且ISI降低(P通道β亚单位的表达量在病程8周,12周降低,且12周降低明显,与肾脏的病变可能存在相关性。

关键词： 2型糖尿病肾脏病变 bkca通道

有氧运动对增龄大鼠动脉平滑肌bkca通道表达的影响

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有氧运动对增龄大鼠动脉平滑肌BKCa通道表达的影响

作者：薛志敏北京体育大学

学位级别：硕士

研究目的：大电导钙激活钾通道(bkca)在血管平滑肌上分布广泛,在调节血管张力方面起重要作用。本研究旨在观察大鼠胸主动脉和肠系膜动脉bkca通道的分布及增龄性变化和有氧运动对bkca通道蛋白表达的影响。研究方法：2月龄雄性Wistar大... 详细信息

研究目的：大电导钙激活钾通道(bkca)在血管平滑肌上分布广泛,在调节血管张力方面起重要作用。本研究旨在观察大鼠胸主动脉和肠系膜动脉bkca通道的分布及增龄性变化和有氧运动对bkca通道蛋白表达的影响。研究方法：2月龄雄性Wistar大鼠12只,随机分为安静组(Y-SED, n=6)和运动组(Y-EX, n=6);13月龄雄性Wistar大鼠12只,随机分为安静组(M-SED,n=6)和运动组(M-EX,n=6);19月龄雄性Wistar大鼠12只,随机分安静组(O-SED,n=6)和运动组(O-EX, n=6)。2月龄雄性Wistar大鼠6只为O-SED组的黄金对照组(Young, n=6)。运动组大鼠进行为期12周的跑台运动(Y-EX和M-EX组：0°slope,20m/min,60min/day,5day/week;O-EX组：0°slope,15m/min,60min/day,5day/week)。12周后,大鼠腹腔麻醉,迅速取出胸主动脉和肠系膜动脉,转入-80℃冰箱保存。免疫组织化学技术检测胸主动脉和肠系膜动脉bkca通道的分布及增龄性变化,蛋白免疫印迹技术检测其bkca通道蛋白的表达。研究结果：1)Y-SED. M-SED和O-SED组大鼠胸主动脉和肠系膜动脉bkca通道a亚基和β1亚基分布于动脉平滑肌,并且随增龄不断减少;β1亚基减少大于a亚基。2)运动使5月龄大鼠胸主动脉和肠系膜动脉β1亚基蛋白上调十分明显(Pbkca通道β1亚基下调,提示运动对bkca通道β1亚基的影响可能是运动改善血管功能的机制之一

关键词： bkca通道有氧运动增龄动脉平滑肌蛋白表达

有氧运动对AKAP150基因特异性敲入小鼠动脉平滑肌bkca通道的影响

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有氧运动对AKAP150基因特异性敲入小鼠动脉平滑肌BKCa通道的影响

作者：刘霜北京体育大学

学位级别：硕士

目的:大电导钙激活钾通道(bkca)在维持血管肌源性张力中发挥重要作用。A型激酶锚定蛋白150(AKAP150)可以时空性协调多种信号分子,使信号转导准确,参与高血压离子通道重构,调控动脉血压和血管张力。为探讨血管平滑肌AKAP150在有氧运动改... 详细信息

目的:大电导钙激活钾通道(bkca)在维持血管肌源性张力中发挥重要作用。A型激酶锚定蛋白150(AKAP150)可以时空性协调多种信号分子,使信号转导准确,参与高血压离子通道重构,调控动脉血压和血管张力。为探讨血管平滑肌AKAP150在有氧运动改善高血压血管功能中的作用,本实验室前期建立了AKAP150基因平滑肌特异性敲入模式鼠(AKAP150 smKI)。基于血管平滑肌AKAP150对bkca通道潜在的双向调节作用,本课题拟探讨血管平滑肌AKAP150对动脉血压的关键性调控作用,并进一步阐释有氧运动诱导高血压动脉平滑肌bkca通道逆重构的血管平滑肌AKAP150机制。方法:(1)采用ES细胞打靶技术建立AKAP150 smKI。(2)3月龄野生型(WT)小鼠和AKAP150 smKI小鼠,随机分为野生型安静对照组(WT-SED)、野生型运动组(WT-EX)、AKAP150 smKI 安静对照组(AKAP150 smKI-SED)和AKAP150 smKI运动组(AKAP150 smKI-EX)。运动组进行12周中等强度有氧跑台训练。(3)有氧运动后,取肠系膜动脉,急性酶解分离获得血管平滑肌细胞,采用单通道内面向外膜片钳记录技术检测bkca通道生物物理学特性。(4)Western Blot技术检测肠系膜动脉AKAP150、bkca通道α和β1亚基的蛋白表达。结果:(1)3月龄AKAP150 smKI小鼠动脉血压(SBP、DBP和MAP)均高于同龄WT小鼠(Pbkca单通道斜率电导无显著差异(P>0.05)。(3)与 WT-SED 组相比,AKAP150 smKI-SED 组 bkca通道[(Normalized NPo)-V]关系曲线右移,V1/2值增大(Pbkca 通道[(Normalized NPo)-Ca2+]关系曲线右移,Kd 值增大(P0.05)。相对于AKAP150 smKI-SED组,AKAP150 smKI-EX组曲线左移,Kd值减小(Pbkca通道 Po 减小(P0.05),Tc 缩短(P0.05)。与WT-SED相比,AKAP150 smKI-SED组的AKAP150表达增加(Pbkca通道β1亚基表达下调,通道功能下降;有氧运动通过抑制血管平滑肌AKAP150有效逆转bkca通道重构,诱导血压下降,以上提示血管平滑肌AKAP150-bkca在有氧运动诱导高血压血管功能改善中发挥关键作用。

关键词：有氧运动 AKAP150 bkca通道动脉平滑肌细胞

慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌细胞bkca通道对膜电位影响及意义

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慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺平滑肌细胞BKca通道对膜电位影响...

作者：张震安徽医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨慢性非细菌性前列腺炎(Chronic Abacterial Prostatitis, CAP) SD大鼠模型炎症组与正常对照组前列腺平滑肌细胞(Prostate Smooth Muscle Cells, PSMCs)大电导钙激活钾离子通道(Big-conductance Ca2+-activated K+Channels, bkca)对细胞膜电位影响及其在CAP中的意义。方法：随机将40只SPF级2月龄雄性SD大鼠分为慢性非细菌性前列腺炎模型组和正常对照组(以下分别简称炎症组和对照组)。炎症组大鼠行去势手术,一周后观察大鼠手术切口愈合良好,皮下注射17β-雌二醇0.25mg/kg,对照组每只大鼠皮下注射生理盐水0.6m1,均为每日1次,连续注射30d后,C02吸入法处死大鼠,无菌条件下迅速取出前列腺组织置入含双抗的DMEM培养液中,小心剔除前列腺包膜及周围脂肪、血管等其他组织,获得较为纯净的前列腺组织一分为二,一部分用于细胞培养,另一部分组织经HE染色、石蜡包埋切片后光镜观察。体外组织块贴壁法培养并纯化PSMCs,运用免疫组化SP法证实培养出的细胞为平滑肌细胞。PSMCs经膜电位敏感的荧光染料DiBAC4孵育后在激光共聚焦显微镜(Laser Confocal Microscopy, LSCM)下动态定量观察激活bkca通道所引起的膜电位变化。结果：炎症组和对照组均于体外成功培养出前列腺平滑肌细胞,光镜下呈梭形或多边形,核大居中,传代纯化后呈条梭状排列,符合平滑肌细胞组织学特征,经免疫组化染色示a-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin, α-SMA)阳性。炎症组前列腺组织经HE染色镜下见腺管管腔及周围间质大量炎性细胞浸润等典型的炎症反应表现,对照组无明显炎症表现。激活bkca通道后炎症组与对照组PSMCs细胞膜均发生超极化,两组效应均能被bkca通道特异性阻滞剂Iberiotoxin (IbTX)阻断而减弱。但炎症组超极化幅度明显减低,两组细胞超极化效应引起的DIBAC4荧光强度变化值分别为18.78±2.92,38.85±7.10(Pbkca通道介导的超极化效应明显减弱,可能导致其对膜电位的调节能力及抑制平滑肌细胞过度收缩能力降低,从而与CAP盆腔疼痛综合症及下尿路症状有关。

关键词：前列腺炎 bkca通道膜电位 DIBAC4