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二甲双胍抑制膀胱癌biu87细胞并增强顺铂化疗敏感性及其机制的研究

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临床医药文献电子杂志 2017年第29期 5701-5701页

作者：汪东内蒙古自治区人民医院泌尿外科

膀胱癌是临床常见的泌尿系统恶性肿瘤,包括肌层浸润性、非肌层浸润性等多种类型,顺铂是临床治疗此类患者的主要化疗药物。二甲双胍属于口服降糖药物,具有一定的的肿瘤抑制效果及顺铂化疗敏感性增强效果。本文将探讨二甲双胍对膀胱癌biu8... 详细信息

膀胱癌是临床常见的泌尿系统恶性肿瘤,包括肌层浸润性、非肌层浸润性等多种类型,顺铂是临床治疗此类患者的主要化疗药物。二甲双胍属于口服降糖药物,具有一定的的肿瘤抑制效果及顺铂化疗敏感性增强效果。本文将探讨二甲双胍对膀胱癌biu87细胞的抑制作用、对顺铂化疗敏感性的增强作用,为今后临床提高膀胱癌疗效提供可靠依据。

关键词：膀胱癌 biu87细胞二甲双胍顺铂化疗敏感性

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系biu87增殖及侵袭活性的影响

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癌症 2006年第5期25卷 555-559页

作者：张建华杨为民周四维陈忠华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北武汉430030

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验... 详细信息

背景与目的:PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedfromchromosome10)是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在多种原发性恶性肿瘤和肿瘤细胞株中均存在有较高频率的缺失或突变,其失活与肿瘤的进程和预后相关。本实验研究外源性PTEN转染后,人膀胱癌细胞系biu87增殖和侵袭活性的改变。方法:将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染biu87细胞(pBp-PTEN-biu87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的biu87细胞(pBp-biu87)和正常biu87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测PTEN基因转染前、后biu87细胞增殖和侵袭活性的变化。结果:pBp-PTEN的酶切鉴定证实含有目的基因PTEN;pBp-PTEN-biu87细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT发现,pBp-PTEN-biu87细胞在第2、3和4天的吸光度(A值)明显低于两对照组(Pbiu87细胞为对照,PTEN基因在第1、2、3、4天的细胞生长抑制率分别为4.27%、18.92%、19.54%、17.69%。细胞侵袭试验显示,各组细胞浸润穿透ECM膜的数目:pBp-PTEN-biu8为39.3±7.7,biu87和pBp-biu87分别为48.1±13.2和48.9±11.0,pBp-PTEN-biu87细胞明显少于两对照组(P细胞的增殖和侵袭活性。

关键词： PTEN基因转染膀胱肿瘤 biu87细胞增殖与侵袭基因治疗

NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及对膀胱癌细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2021年第5期43卷 432-437页

作者：朱西罗生军蒋立唐伟重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床... 详细信息

目的研究NPRL2与膀胱癌患者临床病理特征的相关性及沉默NPRL2对膀胱癌细胞系biu87/RT-4凋亡的影响。方法收集本院泌尿外科2014年1月至2019年1月的131例膀胱癌患者癌组织标本,免疫组化检测膀胱癌组织中NPRL2表达情况,分析其与膀胱癌临床病理特征的相关性;检测CP-H068、biu87和RT-4细胞系中NPRL2的表达,CCK-8法检测沉默NPRL2后细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果NPRL2在膀胱癌组织中高表达,为53.44%,与膀胱癌临床分期、分级存在显著相关性(P细胞系biu87/RT-4中的表达显著高于正常膀胱上皮细胞CP-H068(Pbiu87/RT-4细胞增殖能力下降,凋亡率上升,凋亡相关蛋白JNK、Bax、caspase-9表达量增高,Bcl-2表达受抑制,差异均有统计学意义(P细胞biu87/RT-4中NPRL2的表达,可以有效抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

关键词： NPRL2 膀胱癌 biu87细胞 RT-4细胞凋亡

hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响

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生物技术通报 2011年第8期27卷 167-171,180页

作者：武卫华孔璟叶彬重庆医科大学分子医学与肿瘤中心基础医学院病原生物学教研室重庆400016

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分... 详细信息

旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染biu87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。

关键词： has-mir-373 biu87细胞 E-钙黏蛋白

噬菌体展示技术体内筛选人膀胱癌细胞特异性结合肽

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噬菌体展示技术体内筛选人膀胱癌细胞特异性结合肽

作者：罗俊茜山西医科大学

学位级别：硕士

目的:利用噬菌体展示技术通过体内筛选的方法得到能够和人膀胱移行细胞癌biu87细胞特定结合起来的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌biu87细胞接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤裸鼠模型。经荷瘤裸鼠尾静脉将噬菌体展示环七肽库注入其体... 详细信息

目的:利用噬菌体展示技术通过体内筛选的方法得到能够和人膀胱移行细胞癌biu87细胞特定结合起来的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌biu87细胞接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤裸鼠模型。经荷瘤裸鼠尾静脉将噬菌体展示环七肽库注入其体内,筛选可同膀胱移行细胞癌组织特异性结合的单克隆噬菌体。经过三轮体内筛选后,运用免疫组织化学法显示噬菌体在体内肿瘤及各组织的分布情况,同时随机挑取三十个单克隆噬菌体,运用酶联免疫法观察噬菌体对人膀胱移行细胞癌biu87细胞亲和力大小。将阳性表达的噬菌体DNA提取出来,并进行序列测定,推算出插入多肽的氨基酸序列,通过软件库进行同源性比对分析。多肽通过固相合成法合成,并标记荧光素异硫氰酸成为荧光探针。MTT法检测多肽及荧光探针对biu87细胞的毒性。激光扫描共焦显微镜术和流式细胞术鉴定荧光探针对人膀胱移行细胞癌biu87细胞的亲和性。免疫荧光组织化学法鉴定荧光探针对膀胱肿瘤患者病理组织的特异性。结果:1环七肽库经尾静脉注射入荷瘤裸鼠体内,噬菌体滴度及组化染色结果显示:随着筛选逐轮进行,噬菌体在荷瘤裸鼠的膀胱肿瘤组织中出现明显富集,当筛选到第三轮结束时,回收率是首轮筛选结束后的4.334×102倍;肝脏与肾脏组织因血管丰富、代谢速度快等特点,可以非特异的吸附大量噬菌体肽库,而膀胱、肺与肌肉组织只有少量噬菌体肽库结合。2体内筛选三轮结束后,随机挑取三十个蓝色单克隆噬菌体,利用酶免法初步检测单克隆噬菌体对biu87细胞的亲和力,结果显示:共有二十四个单克隆噬菌体亲和力≥2,是阳性表达的噬菌体克隆,阳性率达80%,其中有十个单克隆噬菌体亲和力≥5,将其扩增并对DNA进行提取、测序、翻译,共获得三条序列:CSSPIGRHC(8/10)、CTMSNLKGC(1/10)及CNNVLSQMC(1/10)。将重复率最高的多肽序列CSSPIGRHC命名为NYZL1,运用Ex PASy/Prot Param、NCBI/BLAST等数据库分析,上述序列之间没有同源性,NYZL1与目前所知的基因和蛋白没有发现同源性,且国内外文献均没有相关报道。3固相合成NYZL1及FITC-NYZL1,并与biu87细胞孵育,PBS作空白对照,观察多肽及荧光探针对biu87细胞的毒性,结果表明多肽及荧光探针在00μmol/L浓度范围内孵育细胞24小时,对biu87细胞的增殖及活性无影响,同时表明荧光标记物FITC不会破坏多肽NYZL1的分子构象。4将FITC-NYZL1及FITC-sv NYZL1与biu87细胞孵育,PBS作空白对照,使用共聚焦显微镜镜下观察其结合情况,结果表明FITC-NYZL1在biu87细胞上有高富集荧光亮点,且均匀结合于细胞质与细胞核中,表明FITC-NYZL1与biu87细胞具有亲和力和特异性。5将FITC-NYZL1及FITC-sv NYZL1与biu87细胞孵育后流式细胞仪观察,结果显示FITC-NYZL1与biu87细胞结合的荧光强度值为53.1925±1.35,FITC-sv NYZL1与biu87细胞结合的荧光强度值为15.17±1.06,PBS空白对照荧光强度值为6.67±0.10,Pbiu87细胞具有亲和力和特异性。6将FITC-NYZL1、FITC-sv NYZL1分别孵育膀胱肿瘤患者病理组织及癌旁正常膀胱组织石蜡切片,荧光显微镜观察结果显示,在膀胱肿瘤组织切片中,FITC-NYZL1组荧光富集度高,平均荧光强度为1974.04±407.57,FITV-sv NYZL1组荧光很弱,平均荧光强度为140.07±178.23,而在癌旁正常膀胱组织切片中,两组荧光显示都很弱,平均荧光强度值分别为349.27±46.29、155.79±143.37,表明FITC-NYZL1能特异性的结合于膀胱肿瘤组织,且亲和力高。结论:本次实验快速有效的构建了biu87细胞荷瘤裸鼠模型,通过体内筛选获得了能够与膀胱肿瘤细胞特定结合的多肽NYZL1,并进一步证实FITC-NYZL1对膀胱尿路癌细胞及组织的特异性,显示人膀胱移行细胞癌biu87细胞表面有多肽NYZL1的特异性结合位点。多肽NYZL1可能成为膀胱癌相关抗原的新配体,为诊断早期膀胱癌和靶向性治疗提供一定的理论依据。

关键词：膀胱癌噬菌体展示技术 biu87细胞