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bi2536靶向阻断PLK1活性对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响

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BI2536靶向阻断PLK1活性对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响

作者：李钊郑州大学

学位级别：硕士

目的应用PLKl特异性抑制剂bi2536作用于人前列腺癌PC-3细胞,检测不同浓度的bi2536对前列腺癌PC-3细胞中PLK1蛋白表达、活性及细胞增殖的影响,探讨PLK1作为新的抗肿瘤靶点以及bi2536作为新的抗前列腺癌药物的有效性和可行性。方法取处于... 详细信息

目的应用PLKl特异性抑制剂bi2536作用于人前列腺癌PC-3细胞,检测不同浓度的bi2536对前列腺癌PC-3细胞中PLK1蛋白表达、活性及细胞增殖的影响,探讨PLK1作为新的抗肿瘤靶点以及bi2536作为新的抗前列腺癌药物的有效性和可行性。方法取处于指数生长期,铺满培养瓶瓶底约40%的人前列腺癌PC-3细胞作为研究对象,分别向其加入bi2536, bi2536的终浓度分别为20nmol/L、60nmol/L、100nmol/L,以不加药物者为空白对照,均置于37℃,5%CO2的细胞培养箱中分别培养48h和72h后,在光学显微镜下观察细胞增殖情况,采用Western-blot(蛋白印迹)检测plkl蛋白表达的变化,采用Flow Cytometry(流式细胞术,FCM)检测细胞凋亡情况,统计分析上述结果之间的差异性,以确定不同浓度、不同作用时间的bi2536对前列腺癌PC-3细胞的影响。结果1.20nmol/L、60nmol/L、100nmol/L三种终浓度bi2536作用人前列腺癌PC-3细胞48h、72h后行Western-blot检测显示PLK1蛋白表达均明显下降,与对应空白对照比较差异具有统计学意义。2.20nmol/L、60nmol/L、100nmol/L三种终浓度bi2536作用人前列腺癌PC-3细胞24h、48h、72h后观察细胞密度及形态变化可见随药物浓度及作用时间增加,细胞增殖减慢,生长受限;取浓度为20nmol/L、60nmol/L培养48h的细胞与空白对照细胞分别行流式细胞术检测细胞周期后显示随着药物浓度的增加,细胞处于G2/M期比例增加,细胞有丝分裂受限,差异具有统计学意义。结论1. PLK1在前列腺癌细胞株及组织中异常高表达,可能参与了前列腺癌细胞的恶性增殖过程,与前列腺癌的发生发展呈因果关系。2. PLK1可能参与人前列腺癌PC-3细胞细胞周期的整个过程,主要在细胞周期的G2/M期发挥作用,具体作用机制尚需要进一步研究。3. bi2536作为一种特异性的PLK1抑制剂,对其有高效的亲和力,并且对体外培养的前列腺癌细胞增殖具有良好的抑制作用,但对于前列腺癌患者的安全性和有效性尚需要进一步研究。

关键词：前列腺癌 PLK1 bi2536

PLK1抑制剂bi2536治疗三阴性乳腺癌的机制研究

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PLK1抑制剂BI2536治疗三阴性乳腺癌的机制研究

作者：武佳琦天津大学

学位级别：硕士

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种好发于年轻女性并且死亡率很高的侵袭性乳腺肿瘤。由于TNBC容易发生复发和转移,并且缺乏靶向治疗的生物标志物,TNBC患者死亡率较高,目前以传统化疗为主,但是TNBC患者对化疗不敏感,疗效不佳,因而寻找TNBC的有... 详细信息

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种好发于年轻女性并且死亡率很高的侵袭性乳腺肿瘤。由于TNBC容易发生复发和转移,并且缺乏靶向治疗的生物标志物,TNBC患者死亡率较高,目前以传统化疗为主,但是TNBC患者对化疗不敏感,疗效不佳,因而寻找TNBC的有效治疗靶点仍然是乳腺癌研究领域的热点。PLK1是一类在细胞有丝分裂过程中起调控作用的重要蛋白激酶之一。已有研究表明PLK1在包括三阴性乳腺癌在内的多种癌症中高表达,抑制PLK1肿瘤细胞的生长受到明显抑制但是并不影响正常细胞的状态。近年来已经开发出了一系列PLK1激酶抑制剂,其中bi2536、bi6727等已经进入临床研究阶段。体内外研究已经表明,PLK1的分子抑制剂bi2536能够通过引起肿瘤细胞周期阻滞和诱导凋亡进而抑制肿瘤生长,但是单药治疗疗效不佳,其单药疗效不佳的原因尚不明确。本研究用bi2536处理三阴性乳腺癌细胞Hs578T,通过MTT实验、流式细胞术、Western Blot、肿瘤细胞迁移实验、克隆形成实验证实了bi2536能够抑制Hs578T细胞增殖能力、抑制肿瘤细胞的转移潜能以及克隆形成能力,其机制与促进细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞及抑制PI3K/AKT和MAPK信号转导通路有关,为了进一步探讨临床bi2536单药治疗效果不明显的机制,我们采用浓度梯度递增法筛选得到了耐bi2536的Hs578T细胞株（bi-resistant Hs578T）,RNAseq分析发现耐药细胞株的PI3K/AKT和MAPK信号转导通路异常活化,提示PI3K/AKT和MAPK信号转导通路的负反馈激活是三阴性乳腺癌细胞Hs578T产生耐药性的主要原因之一。进而我们研究了PI3K/AKT和MAPK通路的抑制剂对bi-resistant Hs578T的影响,研究结果显示PI3K/AKT和MAPK通路的抑制剂（LY294002,U0126）能够抑制bi-resistant Hs578T细胞生长及克隆形成能力,且双药联合的抗肿瘤效果优于单药。综上所述,本论文深入研究了PLK1抑制剂bi2536治疗三阴性乳腺癌的机制,并重点研究了细胞耐药的机制,初步确定了联合用药的疗效,为进一步优化三阴性乳腺癌的治疗奠定了的理论基础。

关键词： PLK1 三阴性乳腺癌 bi2536

bi2536对三阴性乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制研究

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中国地方病防治 2018年第2期33卷 128-130页

作者：宋旋杨湘山武佳琦梁伟姿许继伟杨英天津大学生命科学学院天津300072 吉林大学公共卫生学院

目的研究Polo样激酶1(PLK1)抑制剂bi2536对雌激素受体阳性(estrogen receptor,ER)和三阴性乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测0~10 nmol·L^(-1)bi2536对HCC1806细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术分析bi2536对细胞周期... 详细信息

目的研究Polo样激酶1(PLK1)抑制剂bi2536对雌激素受体阳性(estrogen receptor,ER)和三阴性乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测0~10 nmol·L^(-1)bi2536对HCC1806细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术分析bi2536对细胞周期进程的影响;采用Western Blotting技术检测bi2536对PI3K和MAPK信号传导通路的影响;软琼脂实验检测bi2536对细胞克隆形成能力的影响。结果 bi2536通过诱导HCC1806细胞发生G2-M期阻滞,同时抑制磷酸化AKT(p AKT)和磷酸化ERK(pERK)表达进而抑制细胞生长;bi2536可明显抑制HCC1806细胞的克隆形成能力,提示bi2536可抑制肿瘤的增殖和转移。结论 bi2536可以抑制三阴性乳腺癌细胞HCC1806的生长和转移,其机制与调控细胞周期阻滞、下调PI3K和MAPK信号通路有关,提示bi2536有望成为三阴性乳腺癌的靶向治疗药物。

关键词： bi2536 三阴性乳腺癌细胞周期肿瘤转移

PLK1调控PI3K/AKT通路调控软组织肉瘤增殖、凋亡机制的初步研究

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PLK1调控PI3K/AKT通路调控软组织肉瘤增殖、凋亡机制的初步研究

作者：美尔·吐合塔米什石河子大学

学位级别：硕士

目的:初步探索PLK1靶向调控PI3K/AKT通路诱导软组织肉瘤增殖、凋亡机制及药物敏感性的影响,为后续的研究奠定一定基础。方法:选取经病理组织学观察和免疫组织化学证实的软组织石蜡组织样本81例,应用免疫组化En Vision法检测PLK1、PI3K、... 详细信息

目的:初步探索PLK1靶向调控PI3K/AKT通路诱导软组织肉瘤增殖、凋亡机制及药物敏感性的影响,为后续的研究奠定一定基础。方法:选取经病理组织学观察和免疫组织化学证实的软组织石蜡组织样本81例,应用免疫组化En Vision法检测PLK1、PI3K、Akt、m TOR、Bax、Bcl2蛋白的表达。在3株肿瘤细胞(RH-30、PLA-802人横纹肌肉瘤细胞系、SW982人滑膜肉瘤细胞系)中实验,检测药物bi2536、BEZ235单独及联用后的抑瘤效果。CCK8检测瘤细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测瘤细胞迁移及侵袭能力。运用连续性矫正卡方检验,Logistic单因素和多因素回归分析,P5cm组的表达高于bi2536与PI3K通路抑制剂BEZ235都能明显抑制肿瘤生长,与对照组相比均有统计学差异(Pbi2536效果最好,其次为两药联用,PLA-802、RH-30细胞中单用bi2536及BEZ235效果较好。结论:***1/PI3K/Akt通路相关蛋白在不同STS中高表达且与临床分期和患者预后密切相关。***1/PI3K/Akt通路相关蛋白在不同STS中的表达与凋亡相关蛋白Bax及B

关键词：软组织肉瘤 PLK1 PI3K Akt bi2536 Bez235 凋亡侵袭转移

PLK1抑制剂通过mTOR去磷酸化作用诱导急性髓细胞白血病细胞自噬的抗肿瘤研究

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PLK1抑制剂通过mTOR去磷酸化作用诱导急性髓细胞白血病细胞自噬的...

作者：吴云苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究PLK1抑制剂在急性髓细胞白血病自噬调控中的作用,探讨PLK1抑制剂在急性髓细胞白血病自噬调控中的机制,初步分析PLK1在儿童AML中的临床价值。方法:采用 polo-like kinase 1(PLK1)抑制剂 RO3280 和 bi2536 处理 AML 细胞。用69... 详细信息

目的:研究PLK1抑制剂在急性髓细胞白血病自噬调控中的作用,探讨PLK1抑制剂在急性髓细胞白血病自噬调控中的机制,初步分析PLK1在儿童AML中的临床价值。方法:采用 polo-like kinase 1(PLK1)抑制剂 RO3280 和 bi2536 处理 AML 细胞。用69种抑制剂筛选过表达微管相关蛋白1轻链3-绿色荧光蛋白的AML NB4细胞,分析其诱导细胞自噬的活性。Western blot检测自噬过程中裂解的LC3(LC3-Ⅱ)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶和Unc-51样激酶1的磷酸化。用透射电镜检测自噬体。细胞凋亡检测采用BD Annexin V染色试剂盒手工操作。用ImageJ软件分析了 p-mTOR/mTOR的相对表达。采用实时荧光定量PCR技术检测140例AML病人样本中PLK1基因的表达水平。结果:与正常祖细胞相比,PLK1在大多数急性髓细胞白血病患者的样本中始终高表达。为了证实PLK1抑制剂诱导细胞自噬的作用,我们在分析前分别用200和500 nM RO3280或bi2536处理NB4细胞4小时,发现细胞自噬活性水平明显增加,PLK1抑制剂诱导AML细胞自噬。LC3在自噬过程中从非活性形式(LC3-Ⅰ)转化为裂解形式(LC3-Ⅱ),使LC3成为检测自噬的特异性标记。在RO3280和bi2536处理的NB4 细胞中,Western blotting 显示更多的 LC3-Ⅱ。在 100-500 nM 的 RO3280 组和200-500 nM的bi2536组中发现更多的LC3-Ⅱ。在PLK1抑制剂治疗组也观察到Beclin-1上调和SQSTM1/p62下调。透射电镜观察了 RO3280处理细胞的自噬体。与DMSO对照组相比,经RO3280处理的NB4细胞中有更多的自噬体。这些结果与LC3-GFP自噬活性分析一致。RNA干扰抑制PLK1的表达也可以诱导AML细胞发生自噬,PLK1抑制通过mTOR去磷酸化诱导AML细胞自噬。PLK1是小儿急性髓系白血病的优良抗癌靶点。结果表明,PLK1表达与FAB亚型及微小残留病(MRD)有关;Kaplan-Meier生存分析显示肿瘤中PLK1高表达患者生存期较短(p=0.007;)。多因素分析显示,PLK1表达是儿童AML患者近独立的预后因素。结论:抑制PLK1可以诱导AML细胞发生自噬,并且该作用与mTOR的脱磷酸化有关。PLK1抑制可诱导AML细胞的凋亡和增殖抑制;PLK1是儿童AML中潜在的抗癌靶点。

关键词： bi2536 RO3280 自噬 mTOR磷酸化小儿急性髓细胞白血病 polo样激酶1

三阴性乳腺癌耐药中ANGPTL4基因的作用及机制探讨

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三阴性乳腺癌耐药中ANGPTL4基因的作用及机制探讨

作者：徐金歌天津大学

学位级别：硕士

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,具有高度侵袭性。TNBC患者远期复发率与预后较差。目前TNBC的主要治疗方法仍是化疗。但是TNBC患者对化疗不敏感,因此寻找有效的TNBC治疗靶点至关重要。与细胞有丝分裂相关的蛋白Polo样激酶1(Plk1... 详细信息

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,具有高度侵袭性。TNBC患者远期复发率与预后较差。目前TNBC的主要治疗方法仍是化疗。但是TNBC患者对化疗不敏感,因此寻找有效的TNBC治疗靶点至关重要。与细胞有丝分裂相关的蛋白Polo样激酶1(Plk1)被认为是有潜力的TNBC治疗靶标之一。众多的研究提示小分子Plk1抑制剂bi2536能够有效抑制乳腺癌的生长及转移。然而也有研究显示bi2536单药给药疗效不佳,易产生耐药性,因此研究乳腺癌对bi2536的耐药机制,寻找可能的耐药靶点对于bi2536更进一步应用到临床具有重要的意义。肿瘤耐药是肿瘤治疗失败的原因之一,常引起肿瘤复发或转移。已有研究表明,肿瘤的复发与转移和肿瘤血管生成相关。因此本研究重点探讨了耐药TNBC细胞中肿瘤血管生成相关因子与肿瘤生长和转移的关系及其机制。为了探究bi2536的耐药机制,本课题用耐受bi2536的TNBC细胞bi-Hs578T,采用RNAseq方法比较耐药细胞与正常Hs578T细胞之间的差异表达基因,随后经过筛选得到了bi2536抗性相关基因ANGPTL4。本研究分别采用基因过表达和基因沉默技术验证ANGPTL4对细胞生长的作用,即在Hs578T细胞中过表达ANGPTL4,在bi-Hs578T细胞中沉默ANGPTL4基因。结果显示过表达ANGPTL4可以诱导TNBC细胞产生对于bi2536的耐药性;沉默ANGPTL4增强了抗性细胞对bi2536的敏感性,并抑制了细胞迁移。鉴于乏氧对细胞增殖与ANGPTL4表达的影响,本研究进行细胞乏氧诱导探讨乏氧条件下ANGPTL4对细胞bi2536抗性的影响。细胞增殖实验证明在肿瘤乏氧的条件下,ANGPTL4仍可调控Hs578T与bi-Hs578T细胞对bi2536的抗性。而本研究发现随着ANGPTL4的敲低,乏氧诱导因子1α(HIF1α)的表达同样受到抑制,推测其可能与ANGPTL4诱导的bi2536耐药性相关。此外,本课题选用HIF1α抑制剂2ME2(2-Methoxyestradiol)进行bi2536抗性细胞给药治疗。结果显示,2ME2能够很好地抑制bi-Hs578T细胞的增殖、转移与克隆形成;与正常Hs578T细胞相比,bi2536耐药细胞对2ME2的抑制作用更敏感,提示了2ME2与bi2536联合给药可有效抑制TNBC的生长。综上所述,本论文探讨了ANGPTL4在TNBC细胞bi2536抗性中的作用,并确定了2ME2对于bi2536抗性细胞的抑制作用,为TNBC治疗提供了新思路。

关键词：三阴性乳腺癌 bi2536 ANGPTL4 2ME2

PLK1特异性抑制剂对肾上腺皮质癌细胞SW13增殖的影响

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PLK1特异性抑制剂对肾上腺皮质癌细胞SW13增殖的影响

作者：赵世明郑州大学

学位级别：硕士

目的采用免疫组化的方法检测P1k1在肾上腺皮质肿瘤中的表达情况,通过不同浓度P1k1靶向分子抑制剂bi2536对肾上腺皮质癌SW13细胞株体外培养进行干预,探讨bi2536对SW13细胞增殖的影响,探讨将P1k1作为肾上腺皮质癌新治疗靶点的可能。 ... 详细信息

目的采用免疫组化的方法检测P1k1在肾上腺皮质肿瘤中的表达情况,通过不同浓度P1k1靶向分子抑制剂bi2536对肾上腺皮质癌SW13细胞株体外培养进行干预,探讨bi2536对SW13细胞增殖的影响,探讨将P1k1作为肾上腺皮质癌新治疗靶点的可能。材料和方法收集郑州大学第一附属医院1990年10月到2010年10月来手术获取的肾上腺皮质肿瘤石蜡标本56例,其中肾上腺皮质癌15例,肾上腺皮质腺瘤41例,免疫组化检测P1k1的表达情况。对肾上腺皮质癌细胞株SW13进行体外培养,待细胞生长进入对数期后,在细胞培养液中加入不同浓度bi2536,使药物终浓度分别为5,10,20,40,60μg/L,在药物作用48小时后,倒置显微镜观察药物干预后SW13细胞生长及形态变化,MTT细胞增殖检测的方法测定吸光度后计算bi2536对SW13细胞生长的抑制率。结果 1.P1k1在肾上腺皮质癌中的阳性表达率（73.11%）高于肾上腺皮质腺瘤（29.27%）,两者阳性表达率之间差异具有统计学意义（P＜0.05） ***抑制剂bi2536能够有效抑制肾上腺皮质癌SW13细胞株的增殖,光镜下可见当bi2536浓度达到201μg/L及以上时,肾上腺皮质癌SW13细胞株细胞密度较对照组明显下降,部分癌细胞变圆、形态失常或悬浮于培养液中,视野中多核细胞比例增高,且bi2536浓度达到40、60μg/L时上述表现更加明显。 3.在5,10,20,40,60gg/L浓度下的bi2536作用48h后,SW13细胞的生长抑制率分别为13.3±2.1%,25.4±2.9%,35.3±3.0%,47.3±1.9%,45.8±2.8%,同对照组相比差异均具有统计学差异,提示bi2536对SW13细胞的生长具有一定的抑制作用,并在一定药物浓度范围内bi2536浓度越高,细胞生长抑制越明显。结论 1.P1k1在良恶性肾上腺皮质肿瘤中的表达存在明显差异,其在肾上腺皮质癌中高表达。 2.P1k1在SW13细胞的增殖中起着重要作用,新型靶向P1k1抑制剂bi2536在体外能够使SW13细胞发生生长抑制和周期阻滞,从而有效地抑制SW13细胞在体外的增殖。 ***2536对SW13细胞增殖的抑制作用存在着一定程度的药物浓度依赖性。 4.P1k1可能是抑制肾上腺皮质癌增殖的理想分子靶点,bi2536有望成为治疗肾上腺皮质癌的新靶向药物;bi2536在体内环境中对肾上腺皮质癌细胞增殖和周期的影响,有待我们去进一步研究。

关键词：肾上腺皮质癌 SW13细胞株 bi2536 P1k1