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bgj398对猪孤雌胚胎发育及滋养层发育潜能相关基因表达的影响

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BGJ398对猪孤雌胚胎发育及滋养层发育潜能相关基因表达的影响

作者：邓彬广西大学

学位级别：硕士

胚胎由一个全能的受精卵分裂形成多个发育潜力几乎相同的卵裂球,随着胚胎的形态的不断变化,形成一个空腔,此时,卵裂球随之分化形成内细胞团(Inner cell mass,ICM),后续发育成为胎体和部分胎盘组织,和外层的滋养层细胞(Trophoblast,TE),... 详细信息

胚胎由一个全能的受精卵分裂形成多个发育潜力几乎相同的卵裂球,随着胚胎的形态的不断变化,形成一个空腔,此时,卵裂球随之分化形成内细胞团(Inner cell mass,ICM),后续发育成为胎体和部分胎盘组织,和外层的滋养层细胞(Trophoblast,TE),其后发育成为胎盘部分。TE在胚胎植入和妊娠维持中起重要作用。前人研究表明抑制水牛早期囊胚内FGF信号通路能够提高囊胚整体的细胞数,而且细胞数的增加主要来自滋养层。另外在猪的研究也表明,抑制FGF信号通路可以在不影响胚胎正常发育和相关多能性基因的表达的前提下,显著提高滋养层标志基因CDX2的表达量,然而激活FGF信号通路可以使得CDX2的表达量明显下降。虽然机理暂时不明,但是这有可能成为一个极其有前景的研究方向。目前对猪早期胚胎内滋养层的研究甚少,对于在早期胚胎内滋养层的发育情况,并没有一个衡量其发育潜力的标准。通常都以滋养层标志基因CDX2的表达量作为滋养层细胞发育情况的标准。基于滋养层在胚胎在子宫中的定位、附着、侵入过程中的重要地位,建立一个衡量其发育潜力的标准以及提高其细胞数和相关标志/功能基因的表达,为提高后续的胚胎移植效率提供了一种非常有实际意义的探讨。本研究主要内容如下:对成熟卵细胞进行孤雌激活(Parthenogenetic activation,PA)后,分别添加浓度为5μM、10μM、15μM、20μM的FGF信号通路抑制剂bgj-398到基础培养基内培养168h收集囊胚,与DMSO对照组对比囊胚率、囊胚内滋养层细胞数和相关基因表达量进行比较。结果发现:1.在基础培养基内添加bgj398并不影响囊胚的形成和正常发育,但是与DMSO对照组相比,5μM组囊胚率有显著提高(29.64%vs 22.97%,P0.05)。当浓度增加到15μM、20μM时,囊胚率降低,说明浓度过高对囊胚的形成起到抑制作用。对囊胚进行Hoechst染色细胞手动计数,与对照组相比,5μM组囊胚细胞数有显著提高(54.2±7.92vs45.16±8.75,P0.05),15μM、20μM组囊胚平均细胞数均少于对照组。选取最优浓度实验组5μM对囊胚多能性相关基因表达量进行检测。结果表明相对于对照组,处理组的多能性相关基因KLF4的表达量显著提高了 6.28倍(P0.05),差异不显著;原始外胚层标志基因SOX2的表达量显著提高了 3.45倍(P398促进以猪PA囊胚滋养层相关标志基因的表达。通过PCR检测我们发现:GATA3,TEAD4,CCDX2,OCT4,TERT,OEMES,FGFR2在囊胚中均有表达。但是PPARγ,HAND1,MMP2,MMP9以及ELF5,CYP11A1,HSD17B1没有检测到表达。上述结果提示GATA3,TEAD4,CDX2,OCT4,TERT,OEMES,FGFR2可以作为后续实验中滋养层细胞检测的评价基因。选取5μM处理组和有报道过的10μM处理组的囊胚对筛选出的滋养层标志物表达量进行定量分析,研究结果发现,与对照组相比,调控滋养层形成与分化的CDX2的上游基因GATA3表达量在5μM组和10μM组分别提高了 1.49倍和2.14倍(P>0.05),但差异不显著;端粒酶活性基因TERT的表达得到了显著提高,与对照组相比分别提高了 3.03倍和1.70倍(P0.05)。上述实验结果说明bgj398能够促进滋养层细胞功能相关基因GATA3,TEAD4 CDX2,OCT4,TERT,OEES表达量的显著提高,推测 BJG398能够提高滋养层细胞发育潜力,从而可能间接提高胚胎着床能力。综上所述,在猪胚胎培养基添加5μMbgj398,能够促进PA囊胚率以及囊胚细胞数,同时促进多能性相关基因以及与囊胚滋养层细胞发育潜力相关标志基因的表达,为下一步探讨提高猪胚胎移植成功率奠定基础。

关键词：猪孤雌囊胚 FGF信号通路 bgj398 滋养层标志基因

成纤维细胞生长因子受体抑制剂bgj398对胶质瘤生物学特性的影响

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中华神经医学杂志 2017年第6期16卷 541-546页

作者：李潇王昀陈韬亮陈建生黄敏池雅杰杨远韬柯以铨国家临床重点专科广州510282 教育部工程技术研究中心广州510282 广东省脑功能修复与再生重点实验室广州510282 南方医科大学珠江医院神经外科广州510282

目的探究成纤维细胞生长因子受体（FGVR）抑制剂bgj398对胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。方法（1）将体外常规培养的U87和U251细胞分为bgj398组和对照组．分别加入含10μmol／Lbgj398的完全培养基和单纯的完全培养基处理，用CC... 详细信息

目的探究成纤维细胞生长因子受体（FGVR）抑制剂bgj398对胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。方法（1）将体外常规培养的U87和U251细胞分为bgj398组和对照组．分别加入含10μmol／Lbgj398的完全培养基和单纯的完全培养基处理，用CCK-8和克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力；处理2d后用划痕实验、Transwell迁移实验分别检测2组13251细胞、U87细胞的迁移能力；Transwell侵袭实验检测2组细胞的侵袭能力，Westernblotting检测2组细胞磷酸化（p）FGFR和Vimentin蛋白的表达；（2）将200μLU87细胞（1×10^7个）注入8只BALB／c裸鼠腹部两侧皮下并将裸鼠按随机数字表法分为bgj398组（n=4）和对照组（n=4）。bgj398组裸鼠每天口服bgj398生理盐水溶液（20mg／kg），对照组裸鼠口服等量生理盐水。连续服用15d后比较2组小鼠移植瘤的质量；免疫组化染色检测移植瘤组织Vimentin的表达。结果（1）培养3、4、5d时bgj398组U87细胞的吸光度值低于对照组：培养2、3、4、5d时bgj398组U251细胞的吸光度值低于对照组；培养10d后bgj398组U87细胞和U251细胞形成克隆的数量明显少于对照组；划痕后48hbgj398组U251细胞的迁移距离比对照组明显减少；培养24h后bgj398组迁移的U87细胞数较对照组明显减少；培养48h后bgj398组穿过孔膜的U87细胞和U251细胞较对照组明显减少：bgj398组U87细胞和U251细胞中pFGFR和Vimentin蛋白的含量明显少于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）bgj398组裸鼠皮下肿瘤的质量[（0，186±0．064）鲥较对照组[（0．450±0．106）g]明显减轻；bgj398组裸鼠皮下移植瘤Vimentin的表达（2．503±0．359）较对照组（4．125±1．155）明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论体内外实验均证实bgj398可以抑制胶质瘤细胞的生长、迁移和侵袭，提示FGFR是治疗胶质瘤的有效靶点之一。

关键词：神经胶质瘤成纤维细胞生长因子受体 bgj398 酪氨酸激酶抑制剂

bgj398联合雷帕霉素对卵巢癌细胞SKOV3增殖凋亡的影响

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BGJ398联合雷帕霉素对卵巢癌细胞SKOV3增殖凋亡的影响

作者：齐凯旋锦州医科大学

学位级别：硕士

目的探讨联合使用成纤维细胞生长因子受体的抑制剂bgj398和m TOR的抑制剂雷帕霉素共同抑制FGFR途径和m TOR途径后对卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法通过体外培养卵巢癌SKOV3细胞,实验组分别采用连续浓度的bgj398、雷帕... 详细信息

目的探讨联合使用成纤维细胞生长因子受体的抑制剂bgj398和m TOR的抑制剂雷帕霉素共同抑制FGFR途径和m TOR途径后对卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法通过体外培养卵巢癌SKOV3细胞,实验组分别采用连续浓度的bgj398、雷帕霉素、及1:1比例混合的bgj398和雷帕霉素两种抑制剂混合物处理卵巢癌细胞SKOV3,剂量范围为0.125-8×IC50。Cy Quant细胞增殖检测试剂盒评估上述药物对卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖、生长的影响;流式细胞仪检测对卵巢癌细胞SKOV3的细胞凋亡和细胞周期分布的影响。结果bgj398单独及联合雷帕霉素使用均可以显著抑制SKOV3细胞的增殖,其作用以剂量依赖性的方式表现出显著增强抑制细胞增值的效果,且两药联合应用时对细胞增殖的抑制作用显著增强,明显高于单独用药组（P＜0.05）,显示两药联合使用时在抑制SKOV3细胞增殖上有协同作用;流式细胞仪检测显示bgj398单独及联合雷帕霉素使用均可以更明显诱导G0/G1期停滞,S期及G2/M期细胞数目明显减少,同时显著促进细胞凋亡（P＜0.05）,且两药联合应用时诱导细胞周期停滞和细胞凋亡都呈现协同效应。结论1、卵巢癌SKOV3细胞对bgj398和雷帕霉素共抑制敏感。2、bgj398联合雷帕霉素使用可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡,两药联合应用时呈现明显的协同作用。

关键词：卵巢癌细胞SKOV3 雷帕霉素 bgj398 细胞周期细胞凋亡

bgj398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌He La细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其机制研究

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中国医刊 2019年第3期54卷 303-309页

作者：宋前燕毛熙光西南医科大学附属医院妇产科四川泸州646000

目的探讨成纤维细胞生长因子受体抑制剂bgj398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及可能的作用机制。方法培养宫颈癌HeLa细胞,分别用不同浓度的bgj398(0、10、20、30、40μmol/L)和顺铂(0、10、20、30、40、50... 详细信息

目的探讨成纤维细胞生长因子受体抑制剂bgj398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及可能的作用机制。方法培养宫颈癌HeLa细胞,分别用不同浓度的bgj398(0、10、20、30、40μmol/L)和顺铂(0、10、20、30、40、50μmol/L)处理24、48、72h。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,根据结果选择12.5μmol/L作为实验药物浓度,将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(无bgj398和顺铂的培养基)、bgj398组(含有12.5μmol/L bgj398的培养基)、顺铂组(含有12.5μmol/L顺铂的培养基)、联合组(同时含有12.5μmol/L bgj398和12.5μmol/L顺铂的培养基),进行后续实验,再次用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力,采用Westernblotting法检测细胞增殖、凋亡、侵袭相关蛋白的表达以及PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路蛋白的表达。结果 bgj398组、顺铂组、联合组的细胞增殖抑制率高于对照组,联合组的细胞增殖抑制率高于bgj398组、顺铂组,差异均有显著性(Pbgj398组、顺铂组、联合组的细胞凋亡率高于对照组,联合组的细胞凋亡率高于bgj398组、顺铂组,差异均有显著性(Pbgj398组、顺铂组、联合组穿膜细胞个数低于对照组,联合组的穿膜细胞数低于bgj398组、顺铂组,差异均有显著性(Pbgj398组、顺铂组、联合组细胞的PCNA、MMP-2表达量低于对照组,Bax、E-cadeherin表达量高于对照组,差异均有显著性(Pbgj398组、顺铂组,Bax、E-cadeherin表达量高于bgj398组、顺铂组,差异均有显著性(Pbgj398组p-ERK1/2、p-AKT表达量低于对照组(P0.05)。结论 bgj398与顺铂单独或联合作用均能抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制p-AKT、p-ERK1/2、PCNA、MMP-2蛋白表达及促进Bax、E-cadeherin蛋白表达有关。

关键词：宫颈癌成纤维细胞生长因子受体 bgj398

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bgj398治疗FGFR改变晚期胆管癌

实用肿瘤学杂志 2017年第6期31卷 563-563页

对于一线吉西他滨治疗失败的胆管癌患者尚无标准治疗方法。FGFR融合/易位约在13%~17%肝内胆管癌中出现。bgj398是一种口服的选择性pan-FGFR酶抑制剂,在临床前实验中对FGFR改变肿瘤具有治疗效果。JCO近期发表了一篇文章,研究bgj398治疗F... 详细信息

对于一线吉西他滨治疗失败的胆管癌患者尚无标准治疗方法。FGFR融合/易位约在13%~17%肝内胆管癌中出现。bgj398是一种口服的选择性pan-FGFR酶抑制剂,在临床前实验中对FGFR改变肿瘤具有治疗效果。JCO近期发表了一篇文章,研究bgj398治疗FGFR改变胆管癌患者的临床疗效。研究纳入的患者为接受过治疗且疾病出现进展的晚期或转移性含有FGFR2融合或其他FGFR改变的晚期或转移性胆管癌患者,评估bgj398在这些患者中的抗肿瘤活性。

关键词：胆管癌 bgj398

靶向成纤维细胞生长因子受体抑制胶质瘤中血管生成拟态的生成

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实用医学杂志 2017年第11期33卷 1735-1738页

作者：李潇王昀陈韬亮黄敏柯以铨国家临床重点专科教育部工程技术研究中心广东省脑功能修复与再生重点实验室南方医科大学珠江医院神经外科广州市510282

目的:探索成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂bgj398对胶质瘤细胞形成血管生成拟态(VM)的影响。方法:运用Western blot检测bgj398处理后人胶质瘤细胞株U87MG和U251MG中磷酸化成纤维细胞生长因子受体(p FGFR)的数量,以及基质金属蛋白酶2... 详细信息

目的:探索成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂bgj398对胶质瘤细胞形成血管生成拟态(VM)的影响。方法:运用Western blot检测bgj398处理后人胶质瘤细胞株U87MG和U251MG中磷酸化成纤维细胞生长因子受体(p FGFR)的数量,以及基质金属蛋白酶2和14(MMP2和MMP14)的表达量;在体外应用小管形成实验观察U87MG细胞形成小管的能力;用CD34/PAS免疫组化双染法计数皮下胶质瘤模型中VM的数量;用免疫组织化学染色检测皮下移植瘤中MMP2和MMP14的表达量。结果:Western blot显示bgj398实验组中p FGFR的数量较对照组显著减少,差异有统计学意义(Pbgj398通过抑制FGFR的激活可以抑制胶质瘤细胞形成VM,提示FGFR信号通路具有调节VM形成的作用。

关键词：胶质瘤成纤维细胞生长因子受体 bgj398 血管生成拟态

T-ALL来源的骨髓基质细胞通过FGF2-FGFR2通路促进T-ALL增殖

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天津医药 2024年

作者：杨健李敏李越洋田晨青岛市中心(肿瘤)医院肿瘤外科天津医科大学肿瘤医院血液科国家恶性肿瘤临床医学研究中心天津市恶性肿瘤临床医学研究中心天津市肿瘤防治重点实验室

目的探究骨髓基质细胞（BM-MSCs）对急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）影响的作用机制，寻找靶向BMMSCs的有效治疗策略。方法构建Notch-1过表达诱导的T-ALL小鼠模型，分选T-ALL中BM-MSCs，与T-ALL细胞系建立体外共培养系统，检测共培养后T... 详细信息

目的探究骨髓基质细胞（BM-MSCs）对急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）影响的作用机制，寻找靶向BMMSCs的有效治疗策略。方法构建Notch-1过表达诱导的T-ALL小鼠模型，分选T-ALL中BM-MSCs，与T-ALL细胞系建立体外共培养系统，检测共培养后T-ALL增殖能力变化。运用RNA测序技术寻找不同来源MSCs的差异表达基因，并用PCR验证。在小鼠体内注射bgj398，检测肿瘤生长情况。结果与T-ALL来源的MSCs共培养后，T-ALL细胞的增殖能力显著增加。RNA测序结果显示，T-ALL来源的MSCs成纤维细胞生长因子2(FGF2)分泌增加，与TALL细胞上的成纤维细胞生长因子2受体（FGFR2）结合可激活T-ALL细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路。加入bgj398阻断FGF2和FGFR2之间的相互作用可以抑制小鼠T-ALL肿瘤的生长。结论 BM-MSCs可通过FGF2/FGFR2通路促进T-ALL肿瘤生长，阻断FGF2/FGFR2通路是克服BM-MSCs介导T-ALL进展的有效策略。

关键词：前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤成纤维细胞生长因子2 细胞增殖骨髓基质细胞 bgj398