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MicroRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导bel-7402/5-fu细胞凋亡的影响

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MicroRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

作者：虞佳南华大学

学位级别：硕士

目的：探讨microRNA-122对5-fu诱导bel-7402/5-fu细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：MicroRNA芯片检测bel-7402和bel-7402/5-fu细胞间miRNA表达差异;将绿色荧光蛋白(GFP)重组的Pre-miR-122(TM) (miR-122)质粒瞬时转染至bel-7402/5-fu细胞;倒置荧光显微镜和实时定量RT-PCR (Q-RT-PCR)检测转染效率;MTT检测细胞的活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8, caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果：MicroRNA芯片检测结果显示：bel-7402/5-fu比bel-7402上调两倍的miRNA有：miR-18和miR-224;bel-7402/5-fu比bel-7402下调两倍的miRNA有：miR-122, miR-195, miR-199a, miR-125a等;倒置荧光显微镜和Q-RT-PCR结果显示：miR-122转染的bel-7402/5-fu细胞中miR-122表达水平明显升高;MTT结果显示：分别以0.1、1、10、100μmol/ml 5-fu处理bel-7402/5-fu细胞24小时,与未转染组和阴性对照组比较,miR-122转染组能明显抑制细胞增殖,miR-122提高bel-7402/5-fu细胞对5-fu的药物敏感性;流式细胞术检测结果显示：仅用miR-122处理bel-7402/5-fu细胞时,与未转染组和阴性对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加;用10μmol/ml 5-fu作用bel-7402／5-fu细胞24小时后,与未转染组和阴性对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;Western blot结果显示：与未转染组和阴性对照组比较,转染了miRNA-122的bel-7402/5-fu细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论：1、miR-122能促进5-fu诱导的bel-7402/5-fu细胞凋亡,增加bel-7402/5-fu细胞对5-fu的敏感性。2、miR-122能够下调bel-7402/5-fu细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达。

关键词： miR-122 bel-7402/5-fu 5-fu 耐药

Artemis影响人肝癌细胞bel-7402/5-fu化疗药物敏感性的研究（英文）

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遵义医学院学报 2018年第3期41卷 264-271页

作者：李宇婷张雪范芳李大玉余春波陈佳瑜刘云李长福遵义医学院生物化学教研室贵州遵义563099 遵义医学院医学与生物学研究中心贵州遵义563099

目的探讨Artemis对人肝癌耐药细胞株bel-7402/5-fu化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法将p SGU6/GFP/Neo/sh Artemis干扰质粒转染人肝癌耐药细胞bel-7402/5-fu(sh Artemis组),通过Real-time PCR法检测P-gp基因表达水平变化;MTT法检测sh Artemis组细胞对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素及索拉菲尼的IC50值和RI值;利用Western-blot法检测p-Artemis和ATM蛋白水平表达变化;使用ATM抑制剂KU55933联合丝裂霉素作用细胞48 h,Westernblot法观察ATM、γ-H2AX和Artemis蛋白水平表达变化。结果与对照组比较,sh Artemis组的P-gp mRNA表达水平下降(P5),且对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和索拉菲尼的敏感性增加,IC50值和RI值均降低(P5)。sh Artemis组的pArtemis与ATM蛋白表达水平降低(P5);KU55933联合丝裂霉素作用细胞后,有效减少ATM蛋白的表达(P5),同时γ-H2AX蛋白表达量增加(P5),但Artemis蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论靶向干扰Artemis的表达能够增强细胞bel-7402/5-fu对化疗药物的敏感性。此效应可能与Artemis作为bel-7402/5-fu DNA损伤修复的分子开关,进而通过影响ATM参与DNA损伤修复有关。

关键词： Artemis 化疗敏感性 ATM bel-7402/5-fu 肝癌

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导bel-7402/5-fu细胞凋亡的影响

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中南医学科学杂志 2015年第2期43卷 137-140页

作者：虞佳唐正午杨晓燕殷杰向琼雷小勇南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001 南华大学附属第一医院骨科

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-fu)诱导bel-7402/5-fu细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至bel-7402/5-fu细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理bel-7402/5-fu细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-fu作用bel-7402/5-fu细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的bel-7402/5-fu细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调bel-7402/5-fu细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-fu诱导的bel-7402/5-fu细胞凋亡。

关键词：微小RNA-122 bel-7402/5-fu 5-氟尿嘧啶细胞凋亡

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞bel-7402/5-fu增殖及机制的研究

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贵州医药 2016年第2期40卷 131-134页

作者：李大玉余春波束波生欣李长福范芳遵义医学院生物化学教研室贵州遵义563099

目的检测DNA-PKcs对肝癌耐药细胞bel-7402/5-fu增殖的影响及其相关机制,探讨DNA-PKcs在肝癌多药耐药的发生发展中的作用。方法采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs转染bel-7402/5-fu细胞,cck-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期;... 详细信息

目的检测DNA-PKcs对肝癌耐药细胞bel-7402/5-fu增殖的影响及其相关机制,探讨DNA-PKcs在肝癌多药耐药的发生发展中的作用。方法采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs转染bel-7402/5-fu细胞,cck-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期;Western blot检测DNA-PKcs、TS蛋白的表达情况。结果实验组与对照组比较,细胞增殖减少(P5);实验组S期细胞与对照组比较,细胞数减少(P5);DNA-PKcs、TS蛋白表达结果显示,实验组相比对照组蛋白表达下调,差异有统计学意义(P5)。结论 DNA-PKcs的表达沉默能抑制肝癌耐药细胞bel-7402/5-fu的细胞增殖;其机制可能与沉默DNA-PKcs蛋白表达后,TS蛋白表达下调有关。

关键词： DNA依赖蛋白激酶催化亚基 bel-7402/5-fu 细胞增殖机制

水翁花逆转肝癌多药耐药的有效成分及分子机制

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水翁花逆转肝癌多药耐药的有效成分及分子机制

作者：黄海涯华东理工大学

学位级别：硕士

肿瘤多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时,对结构和作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性,是许多癌症化疗失败的主要原因。因此,寻找肿瘤多药耐药逆转剂,阐明其作用机制,提高化疗效果,成为该领域研究热点。... 详细信息

肿瘤多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时,对结构和作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性,是许多癌症化疗失败的主要原因。因此,寻找肿瘤多药耐药逆转剂,阐明其作用机制,提高化疗效果,成为该领域研究热点。2’,4’-Dihydroxy-6’-methoxy-3’,5’-dimethylchalcone (DMC),是一种从桃金娘科植物水翁[Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. et Perry]的花蕾中分离得到的查耳酮类化合物。本论文重点研究了DMC对肝癌多药耐药细胞bel-7402/5-fu的体内、外逆转效果及作用机制。体外细胞水平研究发现,DMC能增强耐药细胞株bel-7402/5-fu细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的敏感性,逆转其耐药性,与未加DMC相比,最大逆转倍数分别为4.7倍和2.3倍。荧光染色Hoechst 33258和流式细胞检测显示,DMC可以增加细胞的凋亡,凋亡率最大可达53.36±1.98%。HPLC分析显示,DMC处理后的bel-7402/5-fu细胞,其胞内5-fu的含量明显增加,8μM DMC作用后,胞内5-fu含量为未加DMC组的2.13倍。RT-PCR检测显示,DMC作用后,可下调多药耐药相关基因MRP1和GST-π基因的转录,8μM处理bel-7402/5-fu细胞后,MRP1和GST-π的转录水平降到对照组的54%和58%。Western-blot结果表明,DMC作用下可以降低MRP1蛋白的表达,从而达到逆转效果。利用裸鼠异种移植瘤模型,对DMC在体内对bel-7402/5-fu的MDR逆转效果进行了研究,结果表明,5-fu (20mg/kg)和DMC (40mg/kg)联合用药,与5-fu (20mg/kg)单独用药相比,肿瘤抑制率为72.2%。20mg/kg和40mg/kgDMC与5-fu分别联合作用后,与无DMC作用的对照组比较,肿瘤组织内5-fu的含量分别为对照组的1.58倍和1.8倍。同时,荧光酶标法检测显示,DMC增加了凋亡蛋白酶Caspase-3蛋白的活性,与无DMC作用的对照组相比,联合作用组其酶活率最大为对照组的289%。此外,TUNEL检测显示,与5-fu单独用药相比,联合治疗可以增加肿瘤的凋亡,凋亡率最大可达62.09±7.31%。H.E染色显示,联合治疗能增加肿瘤组织坏死效果。研究结果显示,DMC能在体内外有效地逆转bel-7402/5-fu细胞对5-fu的耐药性,机制包括增加凋亡、Caspase-3蛋白酶活性,增加胞内抗癌药物含量,以及下调多药耐药基因、蛋白等。

关键词： MDR DMC bel-7402/5-fu