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人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究

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中国癌症杂志 2015年第3期25卷 167-172页

作者：平娟赵娜王保全申智慧阴明星庞晓斌陈传波河南大学淮河临床学院河南开封475001 郑州大学附属肿瘤医院血液科河南郑州450009 河南大学药学院化学生物学实验室河南开封475004

背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细... 详细信息

背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细胞白血病（chronic myelogenou leukemia，CML）bcr-abl融合基因mRNA的反义寡核苷酸，探讨bcr-abl反义寡核苷酸对K562细胞凋亡的诱导作用。方法：以bcr-abl融合基因mRNA翻译起始点融合前区19个寡核苷酸为作用靶点，设计反义寡核苷酸，以其反义寡核苷酸序列转染人慢性粒细胞K562细胞，采用Hoechst染色法观察不同浓度寡核苷酸对K562细胞株的凋亡情况，采用蛋白[质]印迹法（Western blot）检测自噬凋亡蛋白LC3-Ⅱ的表达情况，采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测细胞周期变化，采用JEM-4000EX电镜术检测细胞凋亡形态变化，通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡情况。结果：Hoechst染色结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸能显著促进K562细胞的凋亡，且呈现一定的浓度依赖性。Western blot检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸各浓度组凋亡自噬蛋白LC3-Ⅱ表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。FCM检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸作用于K562细胞后，细胞周期阻滞于G0/G1期。各组G0/G1期、S期细胞数量与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0.05）。在JEM-4000EX电镜下可见明显的新月型凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳显示，10、30μmol/mL bcr-abl反义寡核苷酸组可以明显观察到以180~200 bp碱基对整倍数出现明暗间隔的DNA梯状条带。结论：bcr-abl反义寡核苷酸可显著诱导K562细胞凋亡，为临床上基因治疗人CML提供一定的参考。

关键词：人慢性粒细胞白血病 bcr-abl基因反义寡核苷酸 K562细胞凋亡诱导

慢性粒细胞性白血病不同病期bcr-abl基因P_(53)基因突变研究

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兰州大学学报（自然科学版） 2002年第1期38卷 96-99页

作者：李红玲王超美甘肃省人民医院甘肃兰州730000

探讨 bcr- abl融合基因、P53 基因对 CML不同病期演变的作用 .采取 CML2 6例不同分期共30份标本 ,应用逆转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)技术检测 bcr- abl融合基因 ,应用多聚酶变 .结果显示 2 4例 CML慢性期中 2 2例 bcr- abl基因 (+ ) ,... 详细信息

探讨 bcr- abl融合基因、P53 基因对 CML不同病期演变的作用 .采取 CML2 6例不同分期共30份标本 ,应用逆转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)技术检测 bcr- abl融合基因 ,应用多聚酶变 .结果显示 2 4例 CML慢性期中 2 2例 bcr- abl基因 (+ ) ,6例急变期中 5例 bcr- abl基因 (+ ) ;CML慢性期未发现 P53 基因突变 (0 / 2 4 ) ,急变期发现 2例突变 (2 / 6 ) .2例 P53 基因突变中 ,1例 bcr- abl基因(+ ) ,1例 bcr- abl基因 (- ) .由此可得 P53 基因突变在 CML慢性期少见 ;P53 基因突变对部分

关键词：慢性粒细胞性白血病 bcr-abl基因 P53基因基因突变 RT-PCR技术多变期急变机制

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bcr—abl基因应用研究的进展

国外医学（输血及血液学分册） 2002年第4期25卷 356-358页

作者：姚利顾庆礼陈子兴 215006 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所

bcr-abl基因在白血病中的发病机理已渐为人们所熟知。近年来,随着检测技术的日趋成熟,bcr-abl基因检测在白血病MRD、移植物净化以及干细胞移植术中的作用愈来愈受到人们的重视和应用。本文对bcr-abl近年来的一些应用研究作一综述。

关键词： bcr-abl基因白血病微小残留病聚合酶链反应干细胞移植术研究进展

RT-PCR检测慢性粒细胞性白血病不同病期bcr-abl基因及临床意义

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临床荟萃 2001年第10期16卷 467-468页

作者：李红玲任守义甘肃省人民医院普内科兰州730000

bcr-abl基因是t(9;22)染色体易位产物，见于90％以上慢性粒细胞性白血病(CML)及10％～25％的成人急性淋巴细胞性白血病(以下称急淋)。bcr-abl基因重排是CML最重要的分子生物学特征。检测该基因对CML的诊断、鉴别诊断及预后判断具有重要... 详细信息

bcr-abl基因是t(9;22)染色体易位产物，见于90％以上慢性粒细胞性白血病(CML)及10％～25％的成人急性淋巴细胞性白血病(以下称急淋)。bcr-abl基因重排是CML最重要的分子生物学特征。检测该基因对CML的诊断、鉴别诊断及预后判断具有重要意义。我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CML患者骨髓及(或)外周血bcr-abl基因，为临床诊断、鉴别诊断、预后判断提供依据。

关键词：慢性粒细胞性白血病 bcr-abl基因 RT-PCR

慢性粒细胞白血病bcr-abl基因检测及临床意义

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临床血液学杂志 1998年第1期11卷 24-25页

作者：李慧玉陈燕李崇渔杨年兰向直富张红雨同济医科大学附属协和医院血液病研究所武汉430022

慢性粒细胞性白血病患者bcr-abl基因、P53基因动态监测的临床意义

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甘肃科技 2001年第1期17卷 40-40,45页

作者：李红玲郭湘云任守义刘静沈世林甘肃省人民医院兰州医学院

CML是一个包含了2至3个监床阶段的骨髓多能干细胞克隆失常症,先后出现慢性期(CP)、加速期(AP)和急变期(BC).慢性粒细胞性白血病(CML)治疗虽有不少进展,但患者的生存期并无明显延长.大部分患者最终发生慢粒急变,病人一旦出现急变,预后极... 详细信息

CML是一个包含了2至3个监床阶段的骨髓多能干细胞克隆失常症,先后出现慢性期(CP)、加速期(AP)和急变期(BC).慢性粒细胞性白血病(CML)治疗虽有不少进展,但患者的生存期并无明显延长.大部分患者最终发生慢粒急变,病人一旦出现急变,预后极差,这是70%以上慢粒病人死亡的主要原因.慢粒突变机制十分复杂,涉及到多种癌基因,抑癌基因的异常.我们应用PCR分析技术检测慢粒患者bcr-abl融合基因及P53基因突变,旨在探讨他们与慢粒病程进展的关系,为临床治疗,预后判断提供依据.

关键词：慢性粒细胞性白血病 bcr-abl基因 P53基因动态监测基因突变

慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义核酸的初步研究

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天津医药 1999年第11期27卷 665-667页

作者：靳卫东高宏伟马月霞刁世勇张丽艳姜学英许静宋增璇中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室 300020

探讨用逆转录病毒表达载体携带反义核酸进入ＣＭＬ细胞并作用于ｂｃｒ－ａｂ１基因的方法。方法：反义序列用ＲＴ－ＰＣＲ法，取自Ｋ５６２细胞系，使之成功地构建了正反义ＲＮＡ的逆转录病毒表达载体。结果：与正义链相比，反义ｂｃ... 详细信息

探讨用逆转录病毒表达载体携带反义核酸进入ＣＭＬ细胞并作用于ｂｃｒ－ａｂ１基因的方法。方法：反义序列用ＲＴ－ＰＣＲ法，取自Ｋ５６２细胞系，使之成功地构建了正反义ＲＮＡ的逆转录病毒表达载体。结果：与正义链相比，反义ｂｃｒ－ａｂ１序列显著抑制Ｋ５６２及ＣＭＬ细胞生长，其抑制程度与剂量呈正相关，其细胞形态学改变支持其进入凋亡进程。结论：此反义核酸是探索ＣＭＬ基因治疗的重要材料。

关键词：白血病 bcr-abl基因 CML 反义核酸

bcr-abl和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用

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中华肿瘤杂志 2007年第2期29卷 93-95页

作者：季明春姜扬文刘伟管俊钱莉龚卫娟扬州大学医学院免疫学教研室 225001 扬州大学临床医学院血液科

目的探讨小鼠白介素-7（IL-7）基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响。方法采用pVbcr-abl／mIL-7质粒免疫BALB／c小鼠，检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。以转染bcr-abl融合基因片段的SF2／0细胞为靶细胞，用LDH释放... 详细信息

目的探讨小鼠白介素-7（IL-7）基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响。方法采用pVbcr-abl／mIL-7质粒免疫BALB／c小鼠，检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。以转染bcr-abl融合基因片段的SF2／0细胞为靶细胞，用LDH释放实验检测免疫小鼠脾细胞特异性细胞毒活性。结果pVbcr-abl／mIL-7质粒能诱导小鼠产生血清特异性抗bcr-abl抗体，pVbcr-abl／mIL-7免疫组的血清特异性抗体滴度高于pVbcr-abl免疫组，脾细胞杀伤SP2／0／bcr-abl靶细胞的细胞毒活性明显增强。结论共表达bcr-abl和mIL-7的基因疫苗能在小鼠体内诱导较高的特异性体液免疫和细胞免疫水平，为慢性粒细胞白血病基因疫苗的临床前实验研究提供了依据。

关键词： IL-7基因 bcr-abl基因基因疫苗保护作用

应用筑巢式RT-PCR检测bcr-abl融合基因的探讨

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临床检验杂志 1997年第2期15卷 80-82页

作者：沈群南京医科大学第二附属医院血液科

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴... 详细信息

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。

关键词：白血病 CML RT-PCR 诊断 bcr-abl基因