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Long acting carmustine loaded natural extracellular matrix hydrogel for inhibition of glioblastoma recurrence after tumor resection

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Frontiers of Chemical Science and Engineering 2022年第4期16卷 536-545页

作者： Sunhui Chen Qiujun Qiu Dongdong Wang Dejun She Bo Yin Meihong Chai Huining He Dong Nyoung Heo Jianxin Wang Department of Pharmaceutics School of PharmacyFudan University&Key Laboratory of Smart Drug DeliveryMinistry of EducationShanghai 201203China Department of Radiology Huashan HospitalFudan UniversityShanghai 200040China Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics School of PharmacyTianjin Medical UniversityTianjin 300070China Department of Dental Materials School of DentistryKyung Hee UniversitySeoul 02447Republic of Korea

Many scientific efforts have been made to penetrate the blood-brain barrier and target glioblastoma cells,but the outcomes have been limited.More attention should be given to local inhibition of recurrence after glioblastoma resection to meet real medical needs.A biodegradable wafer containing the chemotherapeutics carmustine(1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea,BCNU)was the only local drug delivery system approved for clinical glioblastoma treatment,but with a prolonged survival time of only two months and frequent side effects.In this study,to improve the sustained release and prolonged therapeutic effect of drugs for inhibiting tumor recurrence after tumor resection,both free BCNU and BCNU-poly(lactic-co-glycolic acid)(the ratio of lactic acid groups to glycolic acid groups is 75/25)nanoparticles were simultaneously loaded into natural extracellular matrix hydrogel from pigskin to prepare BCNU gels.The hydrogel was injected into the resection cavity of a glioblastoma tumor immediately after tumor removal in a fully characterized resection rat model.Free drugs were released instantly to kill the residual tumor cells,while drugs in nanoparticles were continuously released to achieve a continuous and effective inhibition of the residual tumor cells for 30 days.These combined actions effectively restricted tumor growth in rats.Thus,this strategy of local drug implantation and delivery may provide a reliable method to inhibit the recurrence of glioblastoma after tumor resection in vivo.

关键词： BCNU glioblastoma recurrence tumor resection nanoparticles hydrogel

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Clk1基因表达下调通过糖酵解逆转增强胶质瘤细胞对化疗药物的耐受性

Clk1基因表达下调通过糖酵解逆转增强胶质瘤细胞对化疗药物的耐受...

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作者：张荔苏州大学

学位级别：硕士

神经胶质瘤是最常见的神经系统原发性肿瘤,具有恶性度高、预后性差的特点。产生药物耐受性是胶质瘤患者临床治疗的主要障碍,而线粒体基因突变在许多恶性肿瘤的化疗药物耐受中发挥重要作用。线粒体基因Clk1编码辅酶Q(Co Q)生物合成关键酶... 详细信息

神经胶质瘤是最常见的神经系统原发性肿瘤,具有恶性度高、预后性差的特点。产生药物耐受性是胶质瘤患者临床治疗的主要障碍,而线粒体基因突变在许多恶性肿瘤的化疗药物耐受中发挥重要作用。线粒体基因Clk1编码辅酶Q(Co Q)生物合成关键酶,在本实验中,我们探讨了Clk1基因在胶质瘤细胞产生药物耐受过程中的作用。研究发现,Clk1基因高表达的GL261细胞对抗肿瘤药物具有较高的敏感性,而在BCNU耐受的胶质瘤细胞如U251、U87MG、T98G中Clk1基因的表达量较少。沉默Clk1基因不影响GL261细胞的增殖活力,却能显著减低BCNU或DDP诱导的细胞凋亡。此外,沉默Clk1基因的GL261细胞中细胞耐药性相关基因如MDR1、MGMT、GSTP1的表达量无明显变化。进一步的机制研究结果表明,Clk1基因沉默的GL261细胞有氧糖酵解活性显著增强,具体表现在葡萄糖消耗量增加、乳酸生成量增加、糖酵解相关酶表达量增加。采用抑制剂或si RNA干扰抑制糖酵解通路可以增强sh Clk1-GL261细胞对化疗药物的敏感性。另外,GL261细胞中沉默Clk1基因诱导AMPK/m TOR信号通路介导的HIF-1α表达量升高,激活AMPK(metaformine)或抑制m TOR(rapamycine)可以抑制HIF-1α表达。在GL261细胞或人源胶质瘤细胞中过表达Clk1基因可以增强细胞对BCNU的敏感性。上述结果证实了胶质瘤细胞中线粒体Clk1基因通过AMPK/m TOR/HIF-1α信号通路介导的糖酵解途径增强细胞对化疗药物的耐受性。

关键词： Clk1 胶质瘤细胞药物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信号通路

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BCNU对人脑肿瘤干细胞增殖及细胞周期的影响

BCNU对人脑肿瘤干细胞增殖及细胞周期的影响

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作者：黄晓斌昆明医学院

学位级别：硕士

[目的] 探讨BCNU对人脑肿瘤干细胞的生长抑制作用,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,初步了解其作用机制,旨在为BCNU在临床治疗脑肿瘤的应用进一步提供一定的实验依据。 [方法] 术中取新鲜人脑室管膜瘤标本一例,制备为单细胞,接种于无... 详细信息

[目的] 探讨BCNU对人脑肿瘤干细胞的生长抑制作用,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化,初步了解其作用机制,旨在为BCNU在临床治疗脑肿瘤的应用进一步提供一定的实验依据。 [方法] 术中取新鲜人脑室管膜瘤标本一例,制备为单细胞,接种于无血清培养基中获得脑肿瘤干细胞和接种于含血清培养基中获得肿瘤细胞,7d时,利用免疫细胞化学染色的方法鉴定两组细胞中干细胞标志物CD133和nestin的表达,并用培养7d的细胞进行以下实验:1、MTT法检测药物敏感性:将两组细胞接种于96孔,将BCNU稀释为1ug/ml、0.1ug/ml、0.01ug/ml、0.001ug/ml、0.001ug/ml五个不同的浓度,作用于细胞72h后,MTT法测OD值,分别计算抑制率(IR)及半数抑制率(IC50);2、细胞周期检测:将细胞接种于6孔板中,以0.01ug/ml浓度的BCNU作用细胞6h、12h和24h,设不加药组为空白对照组,记为Oh,流式细胞仪检测细胞周期变化。 [结果] 1.细胞在无血清培养基中呈悬浮克隆球样生长,免疫细胞化学染色鉴定表达干细胞标志物CD133和nestin;细胞在含血清培养基中贴壁生长,不表达CD133和nestin。 2.BCNU对人脑肿瘤干细胞及脑肿瘤细胞均有明显的抑制作用(IC50＜10μg/mL),呈浓度依赖性,其对肿瘤干细胞(IC50=0.157μg/mL)的抑制低于肿瘤细胞(IC50=0.072μg/mL),有统计学差异(P＜0.05)。 3.与阴性对照比较,两类细胞均表现为随药物作用时间的延长,S期细胞比例增高,并伴有凋亡细胞的增多,但肿瘤干细胞的改变(24h)出现晚于肿瘤细胞(6h) [结论] 1.本实验初步证实人脑室管膜瘤瘤中存在有脑肿瘤干细胞,可通过无血清培养法获得,可能为室管膜瘤的起源细胞,该现象符合脑肿瘤干细胞学说。 2.神经干细胞的标志物CD133和nestin也可以作为脑肿瘤干细胞的标志物使用。 3.在体外实验中,BCNU对人脑肿瘤干细胞有明显的生长抑制作用,其抑制作用与药物浓度成正比例关系。 4.流式细胞仪检测显示,药物作用于脑肿瘤干细胞后细胞周期的改变表现为S期细胞比例增多,并伴有凋亡细胞的增多,提示BCNU对脑肿瘤干细胞的作用可能为作用于细胞的S期,干扰DNA的合成起抑制细胞生长的作用。 5.通过脑肿瘤干细胞与脑肿瘤细胞进行比较,发现脑肿瘤干细胞的药物敏感性低于脑肿瘤细胞,并且药物作用后脑肿瘤干细胞在细胞周期上的改变也晚于脑肿瘤细胞,两者均提示较脑肿瘤细胞而言,脑肿瘤干细胞对BCNU具有一定的耐药性。

关键词：脑肿瘤干细胞 BCNU MTT 细胞周期

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In vitro release of 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea sustained-release microspheres and the distribution in rat brain tissues

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Neural Regeneration Research 2006年第9期1卷 793-796页

作者： Xia Li1, Liping Guo2, Qin Li3 1Central Pharmacy, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China 2Department of Pharmaceutics, Zhengzhou Central Hospital, Zhengzhou 450007, Henan Province, China 3Teda International Cardiovascular Hospital, Tianjin 300457, China Central Pharmacy General Hospital of Chinese People's Armed Police Forces Beijing 100039 China Department of Pharmaceutics Zhengzhou Central Hospital Zhengzhou 450007 Henan ProvinceChina Teda International Cardiovascular Hospital Tianjin 300457 China

BACKGROUND: The implantation of released chemotherapeutic drugs, which takes biodegradable polymer as vector, into the tumor site can get high concentration and release the drug for a long time, it can directly act on the tumor cells, and reduce the general toxicity. OBJECTIVE: To explore the in vitro and in vivo course of 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (BCNU) sustained-release from BCNU-loaded polylactide (PLA) microspheres (MS) and location in rat brain tissue. DESIGN: A repetitive measurement. SETTING:Central Pharmacy, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces. MATERIALS: Thirty male SD rats were used. PLA (Mr5000, batch number: KSL8377) was produced by Wako Pure Chemical Inc.,Ltd. (Japan); BCNU (batch number: 021121) by Tianjin Jinyao Amino Acid Co., Ltd.; BCNU-PLA-MS was prepared by the method of solvent evaporation and pressed into tablets (10 mg/tablet). High-performance liquid chromatography (HPLC) Agilent 1100 (USA); LS9800 liquid-scintillation radiometric apparatus (Beckman). Chromatographic conditions: Elite Hypersil ODS2 C18 chromatographic column (5 μm, 4.6 mm×150 mm); Mobile phase: methanol: water (50:50), flow rate was 1.0 mL per minute, wave length of ultraviolet detection was 237 nm, and the inlet amount of samples was 10 μL. METHODS: The experiments were carried out in the experimental animal center of the General Hospital of Chinese Armed Police from May 2004 to July 2005. ① In vitro BCNU-PLA-MS release test: BCNU-PLA-MS was prepared by the method of solvent evaporation, then placed in 0.1 mol/L phosphate buffered solution (PBS, pH 7.4, 37 ℃), part of MS were taken out at 1, 2, 3, 7, 10 and 15 days respectively, and the rest amount of BCNU in MS was determined by HPLC, then the curve of BCNU-PLA-MS release was drawn. ②In vivo BCNU-PLA-MS release and distribution test: The rats were anesthetized, then BCNU-PLA-MS were implanted to the site 1 mm inferior to the cortex of frontal lobe. Five rats were killed postoperatively at 4 hours, 1, 2, 3, 7 and 15 days, the residual MS wa

关键词： BCNU MS PLA nitrosourea sustained-release microspheres and the distribution in rat brain tissues chloroethyl

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TV/O～6-BG与BCNU联合应用对小鼠乳腺癌细胞的抑制作用

TV/O～6-BG与BCNU联合应用对小鼠乳腺癌细胞的抑制作用

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作者：张翠曲阜师范大学

学位级别：硕士

背景:据世界卫生组织统计,癌症居各类常见死因的前列,而乳腺癌又是人类最常见的恶性肿瘤之一。近年来乳腺癌的发病率呈上升趋势,且临床治愈率不高,寻找有效杀伤乳腺癌细胞的化疗药物及其增效剂将是癌症工作者当前的主要任务之一。卡莫司... 详细信息

背景:据世界卫生组织统计,癌症居各类常见死因的前列,而乳腺癌又是人类最常见的恶性肿瘤之一。近年来乳腺癌的发病率呈上升趋势,且临床治愈率不高,寻找有效杀伤乳腺癌细胞的化疗药物及其增效剂将是癌症工作者当前的主要任务之一。卡莫司汀(BCNU)是临床应用比较广泛的一类抗癌药物,我们的研究发现它对体外培养的小鼠乳腺癌C127细胞有很明显的抑制作用。6-苄基鸟嘌呤(O-BG)是烷化剂的增效剂,可以增强肿瘤细胞对BCNU的敏感性,使其更有效的杀伤癌细胞。最近,有研究者发现四唑紫罗兰(TV)能非常有效的抑制多种肿瘤细胞生长,同时可以增加肿瘤细胞对BCNU的敏感性,但是其功能和作用机制仍需要进一步研究。很多化疗药物是通过影响肿瘤细胞周期和诱导细胞凋亡来达到抑制肿瘤细胞增殖的目的的,增效剂则可以通过不同方式增强这种作用,此类研究可以为肿瘤生物学及肿瘤化疗提供一些理论依据。目的:观察新型抗癌药物TV、传统抗癌药物BCNU和增效剂O-BG的单独或联合作用时,对体外培养的小鼠乳腺癌细胞系C-127生长抑制作用及其作用机制,以期在细胞水平上为治疗乳腺癌提供相关的理论依据。方法: 对C-127体外增殖的影响:采用形态学观察、台盼蓝染色法、MTT法检测不同药物浓度作用下,C127细胞形态及细胞存活率的变化;对C-127细胞凋亡的影响:用Hoechst33258染色法,在荧光显微镜下观察细胞核的形态变化和凋亡小体的出现;通过测定培养液中LDH的含量来检测细胞膜完整性;p53蛋白表达测定:免疫荧光结合激光共聚焦扫描显微技术测定细胞中p53的表达情况;对细胞周期的影响:流式细胞术测定体外培养的C-127细胞在不同药物处理之后细胞周期的变化;谷胱甘肽硫转移酶的活性检测:将不同药物处理过的细胞用超声波破碎后测定其GSTs的含量。

关键词：肿瘤细胞细胞增殖细胞周期细胞凋亡抗肿瘤药物增效 p53 LDH DST TV BCNU O6-BG

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BCNU缓释微球体内外释放与分布

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临床神经外科杂志 2007年第1期4卷 27-30页

作者：章文斌马晓东张岩松刘宏毅常义周定标南京医科大学附属脑科医院神经外科 210029 中国人民解放军总医院神经外科

目的探讨自制卡氮芥（BCNU）聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）缓释微球的体内外药物释放过程以及在大鼠脑组织的分布与其生物相容性。方法应用高效液相色谱法检测BCNU在磷酸盐缓冲溶液和脑组织内自聚乳酸．羟基乙酸缓释微球释放的药物含量；应... 详细信息

目的探讨自制卡氮芥（BCNU）聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）缓释微球的体内外药物释放过程以及在大鼠脑组织的分布与其生物相容性。方法应用高效液相色谱法检测BCNU在磷酸盐缓冲溶液和脑组织内自聚乳酸．羟基乙酸缓释微球释放的药物含量；应用3H标记BCNU，检测3H—BCNU缓释微球在正常大鼠脑组织及血清中的分布；BCNU缓释微球植入大鼠脑组织，常规HE染色，光镜下观察其生物相容性。结果BCNU-PLGA-MS在PBS和大鼠脑组织中均可持续释放药物2周以上；缓释剂植入侧脑组织药物浓度比对侧高6．70倍；大鼠脑组织表现为小胶质细胞反应。结论BCNU—PLGA缓释微球具有良好的缓释功能，而且安全性、生物相容性较好。

关键词： BCNU PLGA 释放动力学分布生物相容性

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高效液相色谱法测定BCNU缓释微球的载药量

高效液相色谱法测定BCNU缓释微球的载药量

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中国医师协会神经外科医师分会首届全国代表大会

作者：马晓东李芹章文斌周定标中国人民解放军总医院神经外科中国海洋大学海洋药物与食品研究所中国人民解放军总医院神经外科中国人民解放军总医院神经外科

目的建立体外磷酸盐缓冲溶液（PBS）聚乳酸/羟基乙酸（PLGA）缓释卡氮芥（BCNU）微球药物浓度的高效液相色谱分析方法（HPLC）,并用此法研究了缓释微球的体外释放动力学特征。方法采用依利特Hypersil ODS2 C18色谱柱5μm,4.6×150mm),... 详细信息

目的建立体外磷酸盐缓冲溶液（PBS）聚乳酸/羟基乙酸（PLGA）缓释卡氮芥（BCNU）微球药物浓度的高效液相色谱分析方法（HPLC）,并用此法研究了缓释微球的体外释放动力学特征。方法采用依利特Hypersil ODS2 C18色谱柱5μm,4.6×150mm),以甲醇:水（50:50）为流动相,流速1.0ml/min,紫外检测波长237nm。结果BCNU在0.005—0.35μmol/ml范围内呈线性,r=0.9992, 最低检测限0.005 μmol/ml。低、中、高浓度（0.03,0.1,0.3 μmol/ml）的方法回收率分别为103.33%、101.43%和102.04%,日间及日内RSD分别＜4%和＜1%。体外药物释放动力学研究表明,PLGA缓释BCNU时间达到3周以上。结论本法准确可靠,操作简便,适用于缓释BCNU微球的体外药物释放动力学研究。

关键词： PLGA BCNU 高效液相色谱法药物释放动力学

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血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀（BCNU）治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀（BCNU）治疗G422胶质母...

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作者：万曙浙江大学

学位级别：硕士

目的：评价血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀(BCNU)治疗G422胶质母细胞瘤的可行性，并分析TNP-470的作用机制。方法：取昆明种小鼠72只，于每只小鼠右腿内侧皮下接种0.1ml(1×10只)G422细胞，荷瘤4天后随机分为4组——TNP—... 详细信息

目的：评价血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀(BCNU)治疗G422胶质母细胞瘤的可行性，并分析TNP-470的作用机制。方法：取昆明种小鼠72只，于每只小鼠右腿内侧皮下接种0.1ml(1×10只)G422细胞，荷瘤4天后随机分为4组——TNP—470治疗组、TNP—470+BCNU治疗组、BCIW治疗组、对照组。TNP—470治疗组于荷瘤第4天起，用微量注射器在荷瘤小鼠左腿皮下注射0.2mlTNP—470溶剂(相当于30mg／kg)，隔天一次，共8次。TNP—470+BCNU治疗组的TNP—470用法同TNP-470治疗组，于荷瘤第7天起，用微量注射器腹腔注射BCNU溶液20mg,／kg(0.4ml/只)，隔天一次，共3次。BCNU治疗组的BCNU用法同TNP—470+BCNL治疗组。对照组用等量3％酒精·5％阿拉伯胶／生理盐水混合液替代TNP—470溶剂，治疗方式同TNP—470治疗组。观察各组小鼠皮下肿瘤的生长情况，隔天称重每只小鼠，并测量每只荷瘤小鼠的肿瘤大小，肿瘤体积用ab／2表示(a，b分别为肿瘤的长短径)。当荷瘤小鼠的肿瘤体积达到5OOmm时予以处死，记录荷瘤生长时间(天);切取肿瘤标本分成两份，一份作石蜡病理切片;另一份液氮急冻后置于-80℃冰箱中保存。随机抽取7例TNP-470治疗组的肿瘤组织冰冻标本及5例对照组的肿瘤组织冰冻标本，抽提肿瘤组织总RNA并行mVEGFmRNA定量RT-PCR检测。晰江大学阿士学位论义随机抽取TNP470治疗组和对照组的肿瘤组织石蜡病理切片各6例，采J！IBoehringer Mannheim公司的原位末端标记法(TUNEL)染色试6lJ盒，检测肿瘤细胞凋亡悄况。随机抽取TNP－470治疗组和对照组的肿瘤组织石蜡病理切片各6例，采m PCNA免疫组化染色试剂盒，免疫组化SABC法检测肿瘤细胞增殖情况。统计分析采用SPSS10．0 forwindows统计软件包。分别用单因素方差分析(LSD法)、 t检验及卡方检验。结果：动物实验发现，各组问荷瘤生长时间(大)分别为：TN P．47O治疗织，25＊士4．5;TN卜470十B＊NU治疗组，46．3土5．2;＊＊NU治疗组，43．1土4．8：对照组(＊＊mr。1)， 20．口士4厂。两两比较显示，所有两组间荷瘤生长时间比较差别均有显著性意义(＊＜0刀5)。在用药的整个过程中，给予TNP470治疗的小鼠活动良好，除个别小鼠注射局部有脱毛外，未见其他不良反应。TIP470治疗组与对照组之间在荷瘤 14大时的小鼠体重分别为27．3土1．ig、27石士1．4g，两组间比较差别无显著性意义(卜o＊26，卜＞0刀5)。TN卜470 ＋BCNU治疗组与BCNU治疗组在荷瘤34大时的小鼠体重分别为27．9上1．gg、28．3土2．og，两者之间差别无显著性意义(1—0．501，P＞0刀5)。定量RT－PCR检测结果显示：TNP－470治疗组及对照组的肿瘤组织mVEGF，。。InRNA表达水平(比值)分别为1l 士0刀7、口石9土0．10，两者之问比较差别有极显著性意义(t—8．80， P＜0刀01)。肿瘤组织KM免疫组化染色显示：州卜470治疗组及对照组的肿捆细胞增殖抬数分别为56S士4．3％、56刀士3．9％，两者之间比较差别无显著性意义(P＞0刀5)。肿瘤组织几贴卜染色显示：TNP－470治疗组及对照组的肿瘤细胞凋亡指数分别为 5．7土 1．5％、二．5土 1刀％，两者之间比较差别有非常显著性意义(P＜0．01)。结论：1．TNI，－470能够明显抑制小鼠体hJ G422 M质毋细胞瘤细胞的生LC，其对 G422 胜质母细胞瘤血管生成的抑制作川可能是迎过抑制肿瘤细胞的：nVEGF mRNA表达而实现的。常规治疗剂量(30mghg)hP－470对G422 ＆质母细胞瘤生长的抑制作川可能是通过抑制肿瘤的血管生成，诱发肿瘤细胞凋亡而实现的。2．TNP

关键词：血管生成抑制剂 TNP－470 BCNU 联合治疗 G422 胶质母细胞瘤

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间质内缓释BCNU治疗恶性脑胶质瘤进展

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临床神经外科杂志 2010年第4期7卷 223-224页

作者：朱侗明章文斌南京医科大学附属脑科医院神经外科 210029

脑胶质瘤是颅内发生率最高的恶性肿瘤，约占45％左右。胶质母细胞瘤常常在手术切除边缘2cm范围内复发，并且在肿瘤边缘4cm内出现侵袭性病灶，手术后的治疗就集中到杀灭瘤腔周围残存的肿瘤细胞上。

关键词：恶性脑胶质瘤 BCNU 治疗间质内缓释胶质母细胞瘤恶性肿瘤手术切除

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脑胶质瘤化疗进展

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中国处方药 2007年第12期6卷 66-69页

作者：申文江李洪振秋雨（编译）北京大学第一医院不详

高分级脑胶质瘤（恶性星形细胞瘤，胶质母细胞瘤）化疗传统观念上认为化疗对于高分级脑胶质瘤术后治疗价值有限。1980年Walker等对高分级脑胶质瘤术后进行随机分组研究，分别行单纯BCNU化疗、单纯放射治疗、放疗联合BCNU化疗三种治疗方... 详细信息

高分级脑胶质瘤（恶性星形细胞瘤，胶质母细胞瘤）化疗传统观念上认为化疗对于高分级脑胶质瘤术后治疗价值有限。1980年Walker等对高分级脑胶质瘤术后进行随机分组研究，分别行单纯BCNU化疗、单纯放射治疗、放疗联合BCNU化疗三种治疗方法，结果表明，18个月总生存率，放疗＋BCNU化疗组略优于单纯放疗组，

关键词：高分级脑胶质瘤化疗进展胶质母细胞瘤单纯放射治疗单纯放疗 BCNU 星形细胞瘤术后治疗

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