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Genes & Diseases 2024年第2期11卷 701-710页

作者： Minjie Wu Heng Dong Chao Xu Mengqing Sun Haojin Gao Fangtian Bu Jianxiang Chen College of Pharmacy and Department of Hepatology Institute of Hepatology and Metabolic DiseasesThe Affiliated Hospital of Hangzhou Normal UniversityHangzhou Normal UniversityHangzhouZhejiang 311121China Laboratory of Cancer Genomics Division of Cellular and Molecular ResearchNational Cancer CentreSingapore 169610Singapore Key Laboratory of Elemene Class Anti-Cancer Chinese Medicines Engineering Laboratory of Development and Application of Traditional Chinese MedicinesCollaborative Innovation Center of Traditional Chinese Medicines of Zhejiang ProvinceHangzhou Normal UniversityHangzhouZhejiang 311121China

B-cell CLL/lymphoma 9(bcl9)is considered a key developmental regulator and a well-established oncogenic driver in multiple cancer types,mainly through potentiating the Wnt/β-catenin ***,increasing evidences indicate that bcl9 also plays multiple Wnt-independent ***,we summarized the updates of the canonical and non-canonical functions of bcl9 in cellular,physiological,or pathological ***,we also concluded that the targeted inhibitors disrupt the interaction ofβ-catenin with bcl9 reported recently.

关键词： bcl9 Development Immunity Multifaceted functions Therapeutic target Tumorigenesis

bcl9在阿立哌唑抑制结肠癌中的作用及其机制研究

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BCL9在阿立哌唑抑制结肠癌中的作用及其机制研究

作者：黄秋明西南大学

学位级别：硕士

背景与目的:结肠癌(Colon cancer),是一种较常见的恶性肿瘤,其发生率和死亡率都居于高位。目前,由于大多数抗肿瘤药物存在化疗毒性和耐药性威胁,安全有效治疗结肠癌的药物缺乏。近年来,诸多抗精神病药物被证实有抗肿瘤应用价值。阿立哌... 详细信息

背景与目的:结肠癌(Colon cancer),是一种较常见的恶性肿瘤,其发生率和死亡率都居于高位。目前,由于大多数抗肿瘤药物存在化疗毒性和耐药性威胁,安全有效治疗结肠癌的药物缺乏。近年来,诸多抗精神病药物被证实有抗肿瘤应用价值。阿立哌唑(Aripiprazole,Ari)作为第三代抗精神病药物也表现出抑制肿瘤增殖的作用,但其机制尚不清楚。已有研究发现,WNT-β-catenin通路的过度激活是结肠癌发生的主要原因。bcl9(B-cell lymphoma 9)作为β-catenin的转录因子,是WNT-β-catenin通路激活的关键因子,在结肠癌的发生发展中有重要作用。本课题旨在探究阿立哌唑对结肠癌细胞增殖的影响,并探寻bcl9在其中的作用及可能机制,为临床治疗结肠癌药物的开发和利用提供新思路。方法与结果:1.阿立哌唑对结肠癌细胞增殖、周期与成瘤能力的影响(1)用0μM、6μM、12μM、24μM的Ari分别处理A549非小细胞肺癌细胞、Hep G2肝癌细胞、SK-N-SH神经母细胞瘤细胞、FHC正常肠细胞、HCT116和HT29结肠癌细胞,作用24 h、48 h和72 h后进行MTT检测,结果显示,Ari对HT29结肠癌细胞的增殖抑制作用最显著(P9参与阿立哌唑阻滞结肠癌细胞周期(1)生物信息学方法分析TCGA-COAD相关转录谱数据以及荷瘤转录组数据,成功富集到了与WNT通路激活密切相关的基因bcl9。利用GO分析和KEGG分析,富集到了细胞周期和线粒体相关通路。流式细胞仪检测发现,Ari干预后结肠癌细胞周期在G0/G1期阻滞(Pbcl9m RNA表达量显著低于对照组(Pbcl9、β-catenin及Cyc D1在蛋白水平的表达量显著低于对照组(P9细胞24 h后,q PCR和WB实验结果显示,给药组bcl9m RNA表达量显著低于对照组(Pbcl9、β-catenin及Cyc D1和蛋白水平表达量显著低于对照组(Pbcl9,结果显示结肠癌细胞的增殖能力减弱,β-catenin及Cyc D1蛋白表达量降低;敲低bcl9和Ari药物处理的共同作用下,bcl9、β-catenin及Cyc D1蛋白水平表达量下降极显著(Pbcl9抑制结肠癌细胞周期阻滞的机制(1)Discovery Studio分子对接实验发现Ari会抑制bcl9和β-catenin的结合。CO-IP实验证实Ari处理结肠癌细胞后,减弱了bcl9与β-catenin的结合。进一步通过免疫荧光实验验证了Ari处理后,β-catenin的入核减少。上述结果表明,Ari通过影响bcl9与β-catenin的结合,减少β-catenin入核,抑制下游通路激活,阻滞了细胞周期。(2)小鼠荷瘤转录组分析显示,Ari给药组中与线粒体活性密切相关的COX-2、COX-4的表达相较于对照组显著降低。线粒体膜电位检测实验发现,12μM的Ari处理细胞9 h后,线粒体遭到破坏,WB实验验证COX-2、COX-4蛋白水平表达量减少。q PCR和WB实验结果表明,Ari会下调bcl9的转录激活因子HIF-1α(缺氧诱导因子)的表达。双荧光素酶实验结果显示,12μM、24μM的Ari分别作用结肠癌细胞24 h后,HIF-1α与bcl9启动子的结合能力均显著减弱(Pbcl9的表达。结论:本研究证实Ari影响了细胞周期进程及线粒体调控,bcl9在其抑制结肠癌过程中起到了重要作用。Ari通过破坏线粒体,介导HIF-1α下调bcl9的表达,影响bcl9与β-catenin的结合,从而抑制了WNT-β-catenin通路的激活,最终导致细胞周期阻滞,结肠癌细胞增殖被抑制。

关键词：阿立哌唑结肠癌 bcl9 β-catenin HIF-1α

bcl9靶向抑制剂的发现及其抗肝癌活性研究

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BCL9靶向抑制剂的发现及其抗肝癌活性研究

作者：张林林四川大学

学位级别：硕士

背景肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率与死亡率常年位居恶性肿瘤前列。绝大多数患者被确诊为肝癌时已到中晚期,在早期肝癌患者中疗效较好的手术切除、肝移植等方式,对晚期患者并不适用。目前,针对晚期肝癌患者以靶向治疗为主,但经FD... 详细信息

背景肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率与死亡率常年位居恶性肿瘤前列。绝大多数患者被确诊为肝癌时已到中晚期,在早期肝癌患者中疗效较好的手术切除、肝移植等方式,对晚期患者并不适用。目前,针对晚期肝癌患者以靶向治疗为主,但经FDA批准用于临床治疗的一线药物仅有索拉非尼和乐伐替尼,且存在药效有限、副作用大、易产生耐药性等问题,故寻找新的肝癌靶向治疗策略至关重要。microRNA(miRNA)是一类单链小非编码RNA,其在肿瘤中的表达普遍下调,与肿瘤发生发展密切相关。我们前期研究发现,肝癌中由于癌基因ERK和Pin1的激活,导致前体mi RNA(precursor mi RNA)转运蛋白XPO5被磷酸化及异构化,削弱了XPO5核质转运pre-mi RNAs的能力,引起成熟mi RNA表达下调,促进肝癌发展。其中,mi R-122是正常肝细胞中丰度最高的mi RNA(约占所有mi RNA的70%),能通过调控靶基因m RNA稳定性、抑制蛋白质翻译等机制,发挥重要的抑癌功能。mi R-122的表达下调是肝癌演进过程中的关键分子事件。最新研究表明,B细胞淋巴瘤因子9(bcl9)是mi R-122的重要靶蛋白之一。mi R-122能与bcl9的m RNA编码区结合并引起bcl9表达沉默,从而维持正常肝细胞中bcl9的低水平。但肝癌中mi R-122的下调活化了bcl9表达,bcl9进而与β-catenin结合激活Wnt信号通路,促进肝癌的生长与转移。因此,bcl9是肝癌演进过程中的关键效应蛋白,有望成为肝癌靶向治疗的候选靶标。本论文将开展基于bcl9的抗肝癌靶向抑制剂研究,力争为肝癌靶向治疗提供新思路、新策略。研究方法***9的异常表达与肝癌的临床相关性:1)结合TCGA/GEO数据库,分析bcl9在肝癌及正常组织中的差异表达;2)利用UALCAN工具及KaplanMeier生存分析,研究bcl9丰度与肝癌临床分级和患者生存预后间的临床相关性;3)收集肝癌临床样本,通过Western blot实验验证bcl9在肝癌中是否异常表达。***9在肝癌中的生物学功能:1)利用慢病毒感染系统,构建敲低和过表达bcl9的肝癌细胞株;2)通过MTT实验及克隆形成实验,研究敲低或过表达bcl9对肝癌细胞增殖能力的影响;3)通过伤口愈合实验及Transwell小室迁移实验,研究bcl9敲低或过表达后对肝癌细胞迁移能力的影响。***9靶向抑制剂的发现:1)基于bcl9与β-catenin复合体的三维结构,通过Discovery Studio计算机辅助设计软件,构建分子对接虚拟筛选模型,并对已有的化合物库进行筛选并打分,其中GOLDscore得分较高的化合物将作为重点对象用于后续研究;2)运用MTT细胞增殖实验,对候选化合物进行生物活性筛选,获得具有较强抗肝癌活性的候选化合物;3)利用bcl9敲低的肝癌细胞,对化合物进行MTT实验,筛选得到具有bcl9依赖性的小分子化合物。***9抑制剂与bcl9蛋白的相互作用:1)构建bcl9(347-392 aa)蛋白表达载体,通过大肠杆菌系统,重组表达并纯化该区域蛋白;2)采用表面等离子共振(SPR)的方法,检测bcl9抑制剂与bcl9蛋白的体外蛋白质-小分子相互作用。***9抑制剂抗肝癌活性及其对bcl9的靶向性:1)通过MTT实验、克隆形成实验、伤口愈合试验及Transwell小室迁移实验测定bcl9抑制剂对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响(索拉非尼为对照);2)在bcl9敲低及过表达细胞株中开展上述实验,测定所得抑制剂对肝癌生物学特性的影响是否依赖bcl9。***9抑制剂对小鼠肿瘤生长的影响:1)将肝癌细胞接种到裸鼠皮下,建立皮下异源移植瘤模型;2)用bcl9抑制剂进行给药处理,索拉非尼作为对照,在不同时间点测定肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;3)收集裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器,通过HE染色检测该抑制剂是否具有毒副作用。研究结果***/GEO数据库及肝癌临床样本Western blot实验结果证实,bcl9在肝癌中较正常组织表达量高;使用UALCAN工具分析发现bcl9表达量越高,肝癌临床分期越接近晚期;Kaplan-Meier生存分析结果表示,bcl9表达量越高,肝癌患者预后越差;成功构建了敲低和过表达bcl9的稳定细胞株,证实bcl9能够促进肝癌细胞的增殖及迁移,确认了bcl9有作为肝癌治疗靶标的潜力。2.基于bcl9的晶体结构,我们通过计算机辅助虚拟筛选,从自建化合物库及商业化合物库中,筛选得到与bcl9有较高亲和力的97个候选分子;通过MTT实验,发现了具有抑制肝癌细胞活性的候选分子(69号化合物);成功获得bcl9(347-392 aa)蛋白,并通过表面等离子共振实验,证实了69号化

关键词：肝癌 bcl9 小分子抑制剂

MicroRNA-218通过负调控bcl9的表达影响非小细胞肺癌的恶性表型

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MicroRNA-218通过负调控BCL9的表达影响非小细胞肺癌的恶性表型

作者：赵一宁中国医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨miR-218(microRNA-218)通过负调控bcl9的表达影响非小细胞肺癌的恶性表型,为临床病理研究提供理论基础。方法:本实验选用人非小细胞癌细胞系H460、A549、HBE、SK、H1299进行细胞培养,通过qPCR检测5种非小细胞肺癌细胞系中miR-... 详细信息

目的:探讨miR-218(microRNA-218)通过负调控bcl9的表达影响非小细胞肺癌的恶性表型,为临床病理研究提供理论基础。方法:本实验选用人非小细胞癌细胞系H460、A549、HBE、SK、H1299进行细胞培养,通过qPCR检测5种非小细胞肺癌细胞系中miR-218表达选择高表达的细胞系。用lipo3000分别在非小细胞肺癌系H1299和A549中转染miRNA-218类似物(miRNA mimic)及抑制剂(miRNA inhibitor)于6孔板中去除miR218基因。最终通过Western blot检测细胞系中靶蛋白bcl9蛋白的表达水平。随机抽取74例2014年至2018年诊断为肺腺癌的病例通过免疫组化试剂盒的检测组织中bcl9蛋白在程度。实验结果:***-218在非小细胞肺癌细胞系A549和H1299中存在明显的表达差异,具有统计学意义(P9和H1299细胞系中分别转染miR-218的抑制剂(miRNA inhibitor)和类似物(miRNA mimic)后:miR-218-inhibitor显著上调A549细胞bcl9蛋白表达水平;miR-218-mimic显著下调H1299细胞bcl9蛋白表达水平。差异具有统计学意义(Pbcl9的表达明显高于周边正常肺组织(Pbcl9的表达程度与该病人的主要病理亚型密切相关(Pbcl9的表达。***9在非小细胞肺癌的癌组织中高表达并且与临床病理因素有关。

关键词：非小细胞肺癌 microRNA-218 bcl9 负调控

结直肠组织bcl9和VEGF的表达与临床意义

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结直肠组织BCL9和VEGF的表达与临床意义

作者：吴帅重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨结直肠癌中B细胞淋巴瘤因子9（B-cell lymphoma 9,bcl9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达与临床病理的关系及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC染色法和Western-Blotting方法,检... 详细信息

目的:探讨结直肠癌中B细胞淋巴瘤因子9（B-cell lymphoma 9,bcl9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达与临床病理的关系及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC染色法和Western-Blotting方法,检测83例结直肠癌组织和10例癌旁正常组织中bcl9及VEGF蛋白的表达情况,并且分析其与临床病理特征的关系。结果:bcl9和VEGF在癌组织中表达率分别为67.47%（56/83）和69.88%（58/83）,而癌旁正常组织中均不表达。bcl9在结直肠癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、有无淋巴结转移相关（p＜0.05）。VEGF在结直肠癌中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度无关,而与肿瘤Dukes分期、有无淋巴结转移密切相关（p＜0.01）。结直肠癌中VEGF的表达随bcl9表达的升高而升高（p＜0.01）。结论:bcl9、VEGF可能在结肠癌的发生发展过程中起重要作用。bcl9可能通过上调VEGF的表达,促进肿瘤浸润和转移。

关键词：结直肠肿瘤 bcl9 VEGF 治疗新靶点

缺氧诱导bcl9促进结肠癌细胞的增殖与迁移

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中华结直肠疾病电子杂志 2019年第4期8卷 358-362页

作者：臧佳谢亚运李新星张言言胡志前上海长征医院普外一科

目的探索缺氧对B-淋巴细胞瘤蛋白9(bcl9)的调控关系及bcl9对结肠癌细胞的生物学作用。方法收取20例结肠癌标本及同一患者的正常结肠标本,利用免疫组化技术、实时荧光定量PCR技术检测bcl9的表达;利用常氧或缺氧培养HCT116细胞,实时荧光定... 详细信息

目的探索缺氧对B-淋巴细胞瘤蛋白9(bcl9)的调控关系及bcl9对结肠癌细胞的生物学作用。方法收取20例结肠癌标本及同一患者的正常结肠标本,利用免疫组化技术、实时荧光定量PCR技术检测bcl9的表达;利用常氧或缺氧培养HCT116细胞,实时荧光定量PCR及蛋白印迹法(western-blot)检测bcl9的表达;构建包含bcl9启动子序列的荧光素酶报告载体,通过缺氧处理或过表达HIF1α,检测荧光素酶活性变化;通过过表达质粒或siRNA干扰bcl9的表达,随后检测HCT116细胞的增殖活性及迁移能力。结果免疫组化及实时荧光定量PCR检测显示肿瘤组织中bcl9表达明显高于正常组织[(3.25±0.53)vs.(1.03±0.12),P bcl9的表达显著提高,[(6.71±0.83)vs.(1.54±0.21),P 96±0.15),(4.83±0.62)vs.(1.02±0.14);P bcl9的表达抑制HCT116细胞的增殖及迁移能力[(1.23±0.12)vs.(1.87±0.15),P bcl9表达能促进HCT116细胞的增殖及迁移能力[(2.43±0.16)vs.(1.81±0.14),P bcl9在结肠癌中高表达,并通过bcl9促进结肠癌细胞增殖、迁移。

关键词：结肠肿瘤 bcl9 缺氧 HIF1α 增殖

B-cell CLL/lymphoma 9基因对小鼠皮层神经元电生理特性的影响研究

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B-cell CLL/lymphoma 9基因对小鼠皮层神经元电生理特性的影响研究

作者：刘芙蓉上海交通大学

学位级别：硕士

B细胞CLL/淋巴瘤9(bcl9)基因位于人体1号染色体,小鼠的3号染色体上。bcl9蛋白存在于经典的Wnt信号传导途径中,与Wnt信号通路中TCF结合调控下游基因的表达。研究发现bcl9基因的异常与精神分裂症、双相情感障碍和自闭症等精神疾病有关,但... 详细信息

B细胞CLL/淋巴瘤9(bcl9)基因位于人体1号染色体,小鼠的3号染色体上。bcl9蛋白存在于经典的Wnt信号传导途径中,与Wnt信号通路中TCF结合调控下游基因的表达。研究发现bcl9基因的异常与精神分裂症、双相情感障碍和自闭症等精神疾病有关,但机制并不明确。为了探究bcl9在脑内的功能,本实验采用全细胞膜片钳技术探究了bcl9对神经元电学特性的影响。首先,我们探究了新生小鼠动作电位的发放模式。研究发现新生皮层神经元存在三种动作电位发放模式:强直发放、阶段性发放和单个发放。对比不同动作电位发放模式在神经元电学特性发现:1)不同发放模式的神经元在电压依赖性内向电流和外向电流上存在显著差异。强直发放幅值最高,其次是阶段性发放,单个发放最弱。2)强直发放神经元的去极化电流阈值低于单个发放神经元。3)对动作电位的表型分析发现,三种动作电位发放模式在上升时间和宽度上存在显著差异。4)三种动作电位发放模式在神经元的被动特性上没有显著差异。结果表明在新生小鼠皮层神经元中,三种动作电位发放模式在神经元电压依赖性内向电流、动作电位发放数量及动作电位形态上存在显著差异。敲减bcl9对新生小鼠皮层神经元电学特性的影响研究中发现:1)敲减bcl9显著增加了神经元电压依赖性瞬时内向电流,对电压依赖性外向电流没有显著影响;2)改变了动作电位的发放模式,使动作电位发放数量显著降低;3)缩短了动作电位的上升时间;4)对神经元的兴奋性突触后电流的发放及神经元膜被动特性没有显著影响。结果表明在出生3天的小鼠中,敲减bcl9增加了电压依赖性钠电流,使神经元兴奋性增强。在bcl9敲除对成年小鼠皮层神经元电生理特性的影响研究中,我们发现:1)bcl9敲除显著增加了电压依赖性瞬时内向电流和持续外向电流。2)降低了动作电位的发放数量。3)对神经元的动作电位形态及神经元膜被动特性没有显著影响。结果表明,bcl9敲除显著增加了电压依赖性钠电流和钾电流。bcl9蛋白对维持新生小鼠皮层神经元离子通道的正常功能及动作电位的正常发放上起到重要作用,并参与成年鼠皮层神经元的电压依赖性钠电流和持续钾电流的发放。本实验采用全细胞膜片钳技术首次探究了bcl9对神经元电生理特性的影响,这对进一步探究bcl9在脑内的功能,及bcl9参与精神疾病的发生机制具有重要意义。

关键词： bcl9 新生神经元动作电位发放模式电压依赖性钠电流

肝细胞肝癌组织中B细胞淋巴瘤因子9的表达及临床意义

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南通大学学报（医学版） 2015年第1期35卷 45-47页

作者：薛亚峰仇松江苏省如皋港人民医院内科如皋226532 南通市第三人民医院消化内科

目的 :探讨B细胞淋巴瘤因子9(B-cell lymphoma 9,bcl9)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法:采用Western Blot法检测8对新鲜冰冻HCC和对应癌旁组织中bcl9的蛋白表达;采用免疫组织化学法检测100... 详细信息

目的 :探讨B细胞淋巴瘤因子9(B-cell lymphoma 9,bcl9)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法:采用Western Blot法检测8对新鲜冰冻HCC和对应癌旁组织中bcl9的蛋白表达;采用免疫组织化学法检测100例HCC和对应癌旁组织石蜡切片中bcl9的表达情况,并分析HCC中bcl9的表达与临床病理参数之间的关系。结果:Western Blot结果显示bcl9在HCC中的表达显著高于对应癌旁组织;免疫组化结果显示bcl9在HCC中主要定位于细胞核和细胞质,呈高表达,而在对应癌旁组织中主要定位于细胞质,表达较低或缺失;bcl9在HCC中的表达与肿瘤的分化程度和淋巴侵犯相关(P0.05)。结论:bcl9在HCC中高表达,可能参与了HCC的发生、发展及转移。

关键词：肝细胞肝癌 bcl9 转移免疫组织化学法