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Human INO80/YY1 chromatin remodeling complex transcriptionally regulates the BRCA2-and CDKNIA-interacting protein （bccip） in cells

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Protein & Cell 2016年第10期7卷 749-760页

作者： Jiaming Su Yi Sui Jian Ding Fuqiang Li Shuang Shen Yang Yang Zeming Lu Fei Wang Lingling Cao Xiaoxia Liu Jingji Jin Yong Cai School of Life Sciences Jilin University 2699 Qianjin Street Changchun 130012 China Department of Gynecologic Oncology The First Clinical Hospital JJilin University 71 Xinmin Street Changchun 130021 China National Engineering Laboratory for AIDS Vaccine Jilin University 2699 Qianjin Street Changchun 130012 China Key Laboratory for Molecular Enzymology and Engineering The Ministry of Education Jilin University 2699 Qianjin Street Changchun 130012 China The first Hospital and Institute of Epigenetic Medicine Jilin University Changchun 130061 China

The bccip （BRCA2. and CDKNIA-interacting protein） is an important cofactor for BRCA2 in tumor suppression. Although the low expression of BCClP is observed in multiple clinically diagnosed primary tumor tissues such as ovarian cancer, renal cell carcinoma and col- orectal carcinoma, the mechanism of how bccip is regulated in cells is still unclear. The human INO80/YY1 chromatin remodeling complex composed of 15 sub- units catalyzes ATP-dependent sliding of nucleosomes along DNA. Here, we first report that BCClP is a novel target gene of the INO80/YY1 complex by presenting a series of experimental evidence. Gene expression studies combined with siRNA knockdown data locked candidate genes including bccip of the INO80/YY1 complex. Silencing or over-expressing the subunits of the INO80/YY1 complex regulates the expression level of bccip both in mRNA and proteins in cells. Also, the functions of INO80/YY1 complex in regulating the transactivation of bccip were confirmed by luciferase reporter assays. Chromatin immunoprecipitation （CHIP） experiments clarify the enrichment of INO80 and YY1 at ＋0.17 kb downstream of the BCClP transcriptional start site. However, this enrichment is significantly inhibited by either knocking down INO80 or YY1, suggesting the existence of both INO80 and YY1 is required for recruiting the INO80/YY1 complex to BCClP promoter region. Our findings strongly indicate that BCClP is a potential target gene of the INO80/YY1 complex.

关键词： bccip human INO80 chromatinremodeling complex

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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白与bccip蛋白相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 341-345页

作者：尹曼曼郭东伟刘琴芳张枫张利杰李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用。为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆。经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与bccip(BRCA2 and CDKN1A interactingprotein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致。经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与bccip之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与bccip共定位于细胞核和细胞浆中。本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白bccip,bccip是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 bccip 相互作用

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降低bccip基因表达对秀丽隐杆线虫应激抗性的影响

降低BCCIP基因表达对秀丽隐杆线虫应激抗性的影响

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作者：栾雅琨吉林大学

学位级别：硕士

应激反应是机体对环境中的各种紧张性刺激物（应激源）所产生的非特异性反应。适当强度的应激源可以通过神经反射使机体产生“应激反应”,进而发挥自我防御作用。但是,如果应激反应过于强烈或者持久,则会对机体产生“身心疾病”,导致患... 详细信息

应激反应是机体对环境中的各种紧张性刺激物（应激源）所产生的非特异性反应。适当强度的应激源可以通过神经反射使机体产生“应激反应”,进而发挥自我防御作用。但是,如果应激反应过于强烈或者持久,则会对机体产生“身心疾病”,导致患者焦虑、紧张、抑郁、免疫力低下,甚至诱发多种疾病。因此,近年来针对生物抗应激的预防及治疗的研究越来越受到重视。秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans,***）具有生命周期短、体积小、易操作、通体透明、易于观察以及繁殖能力强等特点,基因组测序结果分析证实,秀丽隐杆线虫在进化上具有高度保守性,与人类基因组的同源性高达60%～80%。因此,秀丽隐杆线虫在发育生物学和分子生物学研究领域中早已成为一类重要的模式生物,尤其是在抗应激反应机制研究中广为采用。bccip（BRCA2 and CDKN1A Interacting Protein）是一个与乳腺癌易感基因2（Breast Cancer Susceptibility Gene 2,BRCA2）和p21（Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1 A,CDKN1A）相互作用的蛋白质,在多种肿瘤组织（包括卵巢癌、肾癌和结直肠癌）中表达低下,提示其在肿瘤发生发展过程中的作用。另外,已有研究报道,bccip在细胞周期进程、DNA损伤修复以及胞质分裂等方面都发挥着重要的作用。但是,到目前为止,有关bccip抗应激反应能力的研究鲜有报道。bccip在不同物种间高度保守,目前已经从酿酒酵母、秀丽隐杆线虫以及小鼠中分离出与人类同源的bccip基因。基因序列分析提示线虫bccip基因与人类bccip-β基因同源,其蛋白质的三级结构极其相似,推测两者的生物学功能以及作用机制也具有相似之处。所以,研究bccip基因对线虫抗应激反应能力的影响,有助于我们推测和了解其在人类细胞中可能的作用机制。在本论文中,我们以秀丽隐杆线虫作为研究对象,通过干扰bccip基因的转录表达,探讨了bccip对线虫不同应激抗性的影响及其抗应激反应的作用机制。首先,为了研究bccip对秀丽隐杆线虫应激反应能力的影响,我们利用L4440线虫基因干扰载体构建了能够干扰线虫bccip基因表达的RNA质粒,IPTG诱导形成Gene-ds RNA后通过饲喂法将其导入秀丽隐杆线虫,并利用Western Blot和RT-q PCR方法分别在蛋白水平和m RNA水平证实所构建质粒能够有效干扰bccip表达;其次,利用成功构建的L4440-bccip质粒干扰线虫bccip基因表达后,观察了bccip表达缺失对线虫寿命和自产卵能力影响。实验结果表明,bccip基因表达水平并不影响线虫的寿命和自产卵总数,但是会推迟线虫的初始产卵时间,说明bccip可能在线虫卵子的早期发育和成熟过程中发挥作用;第三,在应激反应实验中,我们发现bccip对线虫不同应激刺激的影响不同。如,敲低bccip增强了秀丽隐杆线虫对热应激的抵抗性,但是却降低了对紫外线辐射应激以及氧化应激的抵抗能力;第四,目前研究认为与哺乳动物FOXO蛋白同源的DAF-16转录因子（与胰岛素信号通路有关）、热休克转录因子HSF-1以及与哺乳动物Nrf2蛋白同源的SKN-1转录因子是参与线虫应激反应调控和寿命延长的关键因子。为了弄清bccip对线虫热应激抗性的作用机理,我们探讨了干扰bccip表达对秀丽隐杆线虫热应激抵抗相关信号通路的影响。实验结果表明,缺失bccip可以导致与热应激抵抗信号通路相关基因DAF-16和HSF-1表达量的显著上升,同时,两个转录因子下游靶基因hsp-12.6、hsp-70以及hsp-16.2的表达量也明显升高,提示bccip可能通过调控DAF-16和HSF-1信号通路来影响秀丽隐杆线虫对热应激的抵抗性。但是,热应激并没有激活SKN-1。提示三种转录因子对不同应激调控的侧重点有所不同。综上所述,本论文以秀丽隐杆线虫作为模式生物,研究了降低bccip表达对秀丽隐杆线虫的寿命、生殖、抗应激能力的影响以及抗热应激的作用机制。本实验数据为后续深入研究bccip的抗应激、抗衰老及其作用机制的研究提供了理论和实验依据。

关键词： RNA干扰 bccip 应激反应秀丽隐杆线虫

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hINO80/YY1染色质重塑复合物对bccip基因转录激活的研究

hINO80/YY1染色质重塑复合物对BCCIP基因转录激活的研究

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作者：沈双吉林大学

学位级别：硕士

INO80染色质重塑酶是SWI/SNF染色质重塑酶超家族的一员,其在序列上包含一段ATPase结构域,并可作为核心亚基参与INO80染色质重塑复合物的组成。在有ATP提供能量的情况下,INO80染色质重塑复合物能使核小体在DNA上滑动,从而改变核小体的疏... 详细信息

INO80染色质重塑酶是SWI/SNF染色质重塑酶超家族的一员,其在序列上包含一段ATPase结构域,并可作为核心亚基参与INO80染色质重塑复合物的组成。在有ATP提供能量的情况下,INO80染色质重塑复合物能使核小体在DNA上滑动,从而改变核小体的疏密程度和DNA的可接近性;此外,INO80染色质重塑复合物还可通过置换核小体中的组蛋白变体进而影响染色质的结构。YY1是一个作用范围广泛的转录因子,在细胞内具有结合启动子并且调控基因表达的功能。同时,YY1作为INO80染色质重塑复合物的一个重要亚基,参与了INO80染色质重塑复合物在靶位点的募集以及对染色质结构的调控。在真核细胞中,DNA被包裹在染色质内,染色质结构的存在阻碍了DNA与其结合因子的相互作用,进而抑制了DNA相关的生物学进程。INO80/YY1染色质重塑复合物可以通过调节染色质的结构从而改变DNA的可接近性,因此在DNA复制、损伤修复、基因转录调控等过程中发挥了重要的作用。bccip(BRCA2 and CDKN1A interacting protein)是一个与乳腺癌易感基因2(breast cancer susceptibility gene 2,BRCA2)和p21(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)相互作用的蛋白质。bccip在细胞中具有两种变体,bccipα和bccipβ,并且两者只在C末端可变结构域不同。通过与p21及BRCA2相互作用,bccip参与了多种重要的细胞进程。例如,bccip可以帮助维持p53的转录活性,上调p21的表达从而调控细胞周期的进程;bccip能通过与BRCA2相互作用参与调控同源重组修复,并维持基因组的稳定性和染色质的完整性;作为肿瘤抑制因子,bccip还能抑制乳腺癌的发生。现有研究表明bccip在多种肿瘤组织中呈现低表达水平,然而细胞内对bccip的具体调控机制依然不明确,还需要进一步的探索。本实验室在前期研究中发现INO80敲低会引起bccip表达水平的显著下降;同时,另有研究显示bccip的启动子区可能存在YY1的结合位点。因此我们推测INO80/YY1染色质重塑复合物能与bccip的启动子区相互作用并转录激活bccip的表达;利用荧光素酶报告基因系统,我们发现YY1以及INO80染色质重塑复合物的其它亚基能通过bccip启动子区的顺式元件相互作用从而激活bccip的转录,并且上调bccip蛋白的表达。该研究揭示了INO80/YY1染色质重塑复合物对bccip转录活性的调控作用,并为阐明bccip在肿瘤发生过程中的作用及其机理奠定了基础。

关键词： hINO80/YY1染色质重塑复合物 bccip 转录激活

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人bccip蛋白表达纯化与过表达细胞系构建

人BCCIP蛋白表达纯化与过表达细胞系构建

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作者：李富强吉林大学

学位级别：硕士

bccip是一个与p21和乳腺癌易感基因2相互作用的蛋白质。本研究论文采用大肠杆菌融合型表达系统,表达纯化bccip蛋白并免疫小鼠制备bccip抗体。并且以乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,构建可诱导过表达bccip的稳转细胞系。过表达bccip细胞通过... 详细信息

bccip是一个与p21和乳腺癌易感基因2相互作用的蛋白质。本研究论文采用大肠杆菌融合型表达系统,表达纯化bccip蛋白并免疫小鼠制备bccip抗体。并且以乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,构建可诱导过表达bccip的稳转细胞系。过表达bccip细胞通过PCR、Western Blot方法验证其诱导表达情况,并研究过表达bccip对乳腺癌细胞生长增殖的影响。实验结果:***蛋白表达纯化(1)构建了p GEX-6P-1-bccipα、β重组质粒;(2)诱导表达GST-bccipα、GST-bccipβ重组蛋白,确定了最适诱导表达条件;(3)分离纯化出纯度较高的GST-bccipα、GST-bccipβ重组蛋白,Pre Scission Protease酶切获得大量bccipα和bccipβ蛋白;(4)bccip蛋白免疫小鼠制备bccip抗体,并用HCT116、Hela、293T细胞蛋白样品验证了bccip抗体的效价和特异性;***-7 Tet on细胞系构建及验证(1)在MCF-7细胞系中确定了G418的有效浓度,为后续实验提供基础;(2)验证了四环素可诱导表达系统适用于乳腺癌细胞MCF-7;(3)在MCF-7细胞中瞬转p Tet on质粒,G418成功筛选出MCF-7 Tet on稳转细胞系;3.过表达bccip乳腺癌细胞系构建及验证(1)成功构建p TRE2-puro-myc-bccipα和p TRE2-puro-myc-bccipβ重组质粒;(2)MCF-7 Tet on稳转细胞的基础上成功筛选出可诱导表达bccip蛋白的稳转细胞系;(3)对可诱导表达bccipα和bccipβ的细胞克隆进行验证,成功筛选出诱导效果明显的细胞系;(4)利用MCF-7 bccipαTet on 2号细胞克隆确定了dox最低有效诱导蛋白表达浓度为2ug/ml,最适诱导时间为48小时;(5)诱导表达bccipα和bccipβ细胞数显著少于对照组,说明bccip抑制MCF-7细胞生长增殖;结论:1.构建了原核表达载体p GEX-6P-1-bccipα/β,在原核生物大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白GST-bccipα/β,Pre Scission Protease酶切获得大量bccipα和bccipβ蛋白,并成功制备bccip抗体;2.在MCF-7细胞中构建过表达bccip细胞系,发现dox诱导bccip高表达时能有效抑制细胞生长增殖,证明bccip能抑制乳腺癌细胞生长。

关键词： bccip 过表达细胞系蛋白纯化诱导表达 Tet on

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bccip在卵巢癌中表达以及价值研究

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当代医学 2013年第5期19卷 50-51页

作者：孙春旭河南省漯河市中心医院病理科 462000

目的探讨bccip在正常卵巢组织与卵巢癌组织中表达差异以及价值。方法免疫组化检测并分析bccip在40例正常卵巢组织与40例卵巢癌组织中表达差异以及不同分期卵巢癌组织中表达差异。结果免疫组化结果显示,正常组中bccip阳性率(80%)明显高... 详细信息

目的探讨bccip在正常卵巢组织与卵巢癌组织中表达差异以及价值。方法免疫组化检测并分析bccip在40例正常卵巢组织与40例卵巢癌组织中表达差异以及不同分期卵巢癌组织中表达差异。结果免疫组化结果显示,正常组中bccip阳性率(80%)明显高于于卵巢癌组中阳性率(50%),差异有统计学意义,(Pbccip阳性率(60.00%)高于ⅡB～Ⅳ期阳性率(26.67%)(Pbccip在正常卵巢组织与卵巢癌组织中具有表达差异,且与卵巢癌临床病理分期有关。

关键词：卵巢癌 bccip 免疫组化检测

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53BP1缺失补偿DNA同源重组修复增强bccip阴性乳腺癌细胞放疗抗性

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激光生物学报 2021年第3期30卷 207-216页

作者：罗婉蓉余佳刘冲金晓旎欧阳钰沭童星刘宁昂苏州大学医学部放射医学与防护学院放射医学与辐射防护国家重点实验室江苏省高校放射医学协同创新中心苏州215123 苏州大学医学部实验中心苏州215123

三阴性乳腺癌作为预后较差的乳腺癌亚型,高辐射抗性及分子靶点不明确是影响其放疗效果的主要原因。本研究从一条新的途径,即bccip/53BP1途径,研究三阴性乳腺癌高辐射抗性的机制。首先,利用高通量染色体精确分析系统检测X射线照射后53BP... 详细信息

三阴性乳腺癌作为预后较差的乳腺癌亚型,高辐射抗性及分子靶点不明确是影响其放疗效果的主要原因。本研究从一条新的途径,即bccip/53BP1途径,研究三阴性乳腺癌高辐射抗性的机制。首先,利用高通量染色体精确分析系统检测X射线照射后53BP1缺失对bccip阴性小鼠乳腺癌细胞染色体畸变率的影响,并以免疫荧光染色和蛋白质印迹(Western blot)方法检测53BP1缺失对bccip阴性乳腺癌细胞DNA双链断裂损伤恢复效率的影响;随后,采用DR-GFP荧光报告系统和姐妹染色体互换试验检测53BP1对bccip阴性乳腺癌细胞同源重组修复效率的调节作用;最后,通过克隆形成试验检测X射线照射后53BP1和bccip的共同缺失对乳腺癌细胞存活率的调控效果。结果表明:53BP1缺失下调bccip阴性小鼠乳腺癌细胞X射线照射后染色体畸变率的发生;53BP1/bccip双缺失乳腺癌细胞受照后,DNA双链断裂标志物γH2AX水平和焦点数量均低于bccip单缺失细胞;下调53BP1表达时,受照bccip阴性乳腺癌细胞的同源重组修复效率得到明显恢复,并且细胞辐射抗性得到明显增强。综上所述,53BP1缺失通过解除对同源重组修复的抑制,增加了bccip阴性乳腺癌细胞DNA双链断裂的修复效率,从而提高了细胞的辐射抗性。研究结果为阐明bccip/53BP1通过调控同源重组修复途径影响bccip阴性乳腺癌细胞辐射敏感性的作用机制,揭示三阴性乳腺癌放疗抗性的分子机制,以及发现新的放疗增敏靶点,提供了理论依据。

关键词：放射治疗辐射敏感性乳腺癌 bccip 53BP1

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关于bccip与P53相互作用的研究

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科技风 2020年第14期 22-22,24页

作者：刘昱彤吉林大学生命科学学院吉林长春130012

bccip是一个与BRCA2和p21相互作用的蛋白质,在众多细胞进程中具有重要作用。p53是一种重要的肿瘤抑制基因,也是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因。本文通过引入P53基因来研究bccip抑制肿瘤的生物学功能,验证bccip与P53之间的蛋白相... 详细信息

bccip是一个与BRCA2和p21相互作用的蛋白质,在众多细胞进程中具有重要作用。p53是一种重要的肿瘤抑制基因,也是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因。本文通过引入P53基因来研究bccip抑制肿瘤的生物学功能,验证bccip与P53之间的蛋白相互作用关系。

关键词：转录调控 bccip P53 抑癌基因蛋白质与蛋白质相互作用表观遗传学

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肿瘤抑制因子bccip作用研究进展

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中华实用诊断与治疗杂志 2019年第6期33卷 622-624页

作者：隋毅金景姬蔡勇吉林大学生命科学学院

bccip(BRCA2 and CDKN1A interacting protein)是一个与BRCA2和CDKN1A(p21)相互作用的蛋白,其多个结构域在进化上高度保守,提示bccip生物学功能的重要性。bccip在细胞内通过与BRCA2和RAD51相互作用参与DNA损伤修复并维持基因组稳定性;... 详细信息

bccip(BRCA2 and CDKN1A interacting protein)是一个与BRCA2和CDKN1A(p21)相互作用的蛋白,其多个结构域在进化上高度保守,提示bccip生物学功能的重要性。bccip在细胞内通过与BRCA2和RAD51相互作用参与DNA损伤修复并维持基因组稳定性;通过和p21相互作用使细胞阻滞于G1/S期;通过参与微管和纺锤体形成而影响细胞分裂等;在bccip敲除小鼠的乳腺中可形成良性肿瘤或恶性肿瘤,提示bccip是一个重要的抑癌基因,可能成为相关肿瘤的诊断标志物和治疗靶点。本文就肿瘤抑制因子bccip作用的研究进展作一综述。

关键词：肿瘤 bccip 抑癌基因

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