检索结果-南通市图书馆

高糖诱导视网膜色素上皮细胞bag5表达在促血管生成中的作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

高糖诱导视网膜色素上皮细胞BAG5表达在促血管生成中的作用

作者：刘鸿中国医科大学

学位级别：硕士

目的:糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见、致盲风险最高的微血管并发症,也是24-64岁人群视力障碍和失明的主要因素。随着全球糖尿病患者人数的增加,DR已经成为严重威胁人类视觉健康的原因之一。DR是一种前期... 详细信息

目的:糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最常见、致盲风险最高的微血管并发症,也是24-64岁人群视力障碍和失明的主要因素。随着全球糖尿病患者人数的增加,DR已经成为严重威胁人类视觉健康的原因之一。DR是一种前期没有明显视力下降的糖尿病并发症,随着时间的推移,慢性高血糖会引起血-视网膜屏障(blood-retina barrier,BRB)的破损,加重神经视网膜损伤,导致视力浑浊或模糊,同时视网膜内新生血管增多,血管渗透性增强导致出血以及黄斑水肿,最终导致失明。因此,研究糖尿病视网膜病变发生发展的分子机制,尤其是血-视网膜屏障破损和血管新生的诱发机制,对于发现有效的诊断和治疗新方法至关重要。bag5是Bcl-2相关永生基因(Bcl-2-associated athanogene,bag)抗凋亡基因家族成员,是唯一含有多个bag结构域且不含其他结构域的家族成员,由5个bag结构域构成了整个蛋白。bag5与热休克蛋白HSP70/HCP70之间的相互作用具有双重效果。在正常生理状态下bag5能够加速HSP70/HSC70介导的蛋白质重折叠。然而在病理状态下bag5过表达可能会抑制HSP70伴侣蛋白作用,干扰蛋白质重折叠过程。在帕金森病中,bag5既能发挥神经保护作用,也能促进神经元的损伤以及神经退行性疾病的发生发展。而在肿瘤中,bag5既能发挥促癌作用,又能发挥抑癌作用。尽管bag5的作用具有不确定性和矛盾性,但是bag5参与调控细胞增殖,细胞迁移和侵袭,肿瘤生长及化疗耐药等生物学过程。近年来bag5的相关研究主要集中于肿瘤和神经退行性疾病,其与糖尿病视网膜病变的关系尚未见报道。本实验前期研究发现在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)中高糖诱导bag5蛋白表达上调,其具体原因及作用机制有待阐明。本文旨在探究高糖诱导bag5表达上调的原因,及其调控RPE细胞发生上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及发挥促血管生成中的作用。研究方法:1、对单细胞测序数据进行分析,寻找差异表达基因和PROGENy(Pathway Resp Onsive GENes for activity inference)通路富集分析,并利用差异表达基因对细胞进行分群后为细胞信号通路活性打分。2、通过Western blot实验检测高糖培养和常糖培养ARPE19细胞中bag5的蛋白表达水平。3、通过RT-q PCR检测高糖培养和常糖培养ARPE19细胞中bag5的基因转录水平。4、利用慢病毒感染细胞,构建稳定敲低bag5的ARPE19细胞系。5、构建bag5同义突变质粒和CK2α质粒,分别转染bag5敲低ARPE19细胞。6、通过Transwell实验检测高糖和常糖培养ARPE19细胞系的迁移能力。7、通过小管形成实验检测高糖和常糖培养ARPE19细胞系的促血管生成能力。8、通过Western blot实验检测高糖和常糖培养ARPE19细胞系中EMT标志物的表达水平。9、通过RT-q PCR实验检测高糖和常糖培养ARPE19细胞系中VEGFA的表达水平。10、通过放线菌酮实验检测bag5敲低ARPE19细胞中CK2α蛋白稳定性的变化。11、构建含bag5启动子区域的荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶报告基因实验检测bag5启动子活性。12、通过RT-q PCR实验检测高糖和常糖培养ARPE19细胞中转录因子Tcf7l2 Trp53 Nr3c1的表达水平。结果:1、表达bag5的视网膜细胞和RPE细胞中EMT相关通路和VEGF相关通路的活性更高。2、高糖诱导能提高ARPE19细胞的迁移能力和促血管形成能力。3、bag5在高糖诱导的ARPE19细胞中表达上调。4、在ARPE19细胞中,敲低bag5降低其迁移能力和促血管形成能力。5、在敲低bag5的ARPE19细胞中回补bag5,细胞迁移能力和促血管形成能力得到恢复。6、bag5通过提高CK2α蛋白稳定性使CK2α表达上调,提高ARPE19细胞迁移和促血管生成能力。7、高糖诱导下bag5启动子-1500～-1000区转录激活导致bag5表达上调。结论:bag5在高糖培养的ARPE19细胞中表达上调,并且bag5高表达与增强的细胞迁移能力和促血管形成能力密切相关。本文提示bag5通过调控CK2α蛋白稳定性,促进RPE发生EMT以及发挥促血管生成的作用。

关键词： bag5 CK2α DR 血管形成 EMT

bag5蛋白与帕金森病相关蛋白Parkin的相互作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中南大学学报（医学版） 2010年第11期35卷 1156-1161页

作者：王雪晶郭纪锋江泓沈璐唐北沙中南大学湘雅医院神经内科长沙410008

目的:探讨bag5(BCL2-associated athanogene5)蛋白与帕金森病相关蛋白Parkin之间是否存在相互作用,以及bag5对Parkin蛋白水平的调控机制。方法:本研究首先运用GST pull-down技术及免疫共沉淀技术验证bag5蛋白与Parkin蛋白在体内及体外... 详细信息

目的:探讨bag5(BCL2-associated athanogene5)蛋白与帕金森病相关蛋白Parkin之间是否存在相互作用,以及bag5对Parkin蛋白水平的调控机制。方法:本研究首先运用GST pull-down技术及免疫共沉淀技术验证bag5蛋白与Parkin蛋白在体内及体外是否存在相互作用;进一步构建bag5的不同截短型,运用GST pull-down技术验证bag5与Parkin的相互结合结构域;进而运用chase time技术验证bag5对Parkin蛋白降解水平的调控;最后运用免疫共沉淀技术验证bag5对Parkin降解水平的调控是通过何种机制进行的。结果:bag5蛋白与Parkin蛋白体内及体外均可以相互结合,且bag5与Parkin的相互结合结构域存在于全长的4段bag区域内;bag5可以通过减少Parkin的降解而稳定细胞内Parkin蛋白的水平,且bag5是通过减少Parkin通过泛素蛋白酶体降解系统(ubiquitin proteasome system,UPS)的降解从而增加Parkin蛋白的稳定性。结论:bag5蛋白与Parkin蛋白可以相互结合,且bag5蛋白可以通过UPS对Parkin的水平进行调节。

关键词： bag5 Parkin 泛素蛋白酶体系统免疫共沉淀

PINK1基因R492X突变型PD患者皮肤组织中bag5蛋白低表达及其反馈调控作用

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PINK1基因R492X突变型PD患者皮肤组织中BAG5蛋白低表达及其反馈调...

作者：刘懿河南大学

学位级别：硕士

背景帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,常见于中老年人,近年来有中青年起病的趋势,约15%PD患者有家族史,其典型症状主要表现为静止性震颤、肌强直、运动僵硬迟缓及姿势平衡障碍。迄今多种遗传性PD的相关基因位点... 详细信息

背景帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,常见于中老年人,近年来有中青年起病的趋势,约15%PD患者有家族史,其典型症状主要表现为静止性震颤、肌强直、运动僵硬迟缓及姿势平衡障碍。迄今多种遗传性PD的相关基因位点已被发现,其中PINK1(PTEN-induced putative kinase 1)基因R492X突变已被证实与常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征(autosomal recessive early-onset parkinsonism,AREP)发病相关。bag(BCL2-associated athanogene,bag)蛋白家族可以与抗凋亡蛋白Bcl-2相互作用,bag5蛋白唯一包含多个bag结构域,有研究发现其在动物的大脑皮质、海马、黑质中均有表达。PINK1蛋白的降解主要通过泛素蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)来完成。PINK1基因的突变可能导致泛素蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)功能障碍,诱导PD的发生。既往有关PD的实验多以细胞模型、动物模型为主要的研究对象,而关于早发型PD患者在体组织中与PD发病相关的突变型蛋白异常调控的研究报道甚少。目的运用皮肤活检术对PINK1PD患者进行皮肤取材,分别检测bag5蛋白以及泛素相关标记物Ub在PINK1PD患者皮肤中表达的变化,并在此基础上从真核细胞水平初步探讨bag5蛋白在早发型帕金森病发病机制及神经病理学中的可能作用。方法1.收集PINK1PD家系患者的临床资料,采用Hoehn&Yahr分级量表对PINK1PD患者的症状进行评分。收集6例PINK1PD患者及6例健康对照组的皮肤,运用皮肤活检术采集皮肤标本。分别采用免疫荧光法、免疫组化法和western-blot技术分别检测皮肤组织中bag5及Ub的表达水平。2.将EGFP-bag5和HA-PINK1共同转染HEK-293细胞,采用免疫荧光共定位检测PINK1蛋白和bag5蛋白的亚细胞共定位;采用脂质体过表达、RNA干扰及追踪实验技术检测bag5蛋白对PINK1蛋白降解的影响。3.统计分析:数据采用SPSS17.0软件进行分析,结果以均值±标准差(x±s)表示。P5被认为有显著差异,具有统计学意义。结果1.与健康对照组相比,PINK1PD组皮肤组织中bag5及Ub的表达水平均明显下调(P5)。2.PINK1和bag5在细胞质中存在亚细胞共定位。3.过表达bag5蛋白使PINK1的表达水平下调(P5),干扰bag5蛋白使PINK1的表达水平上调(Pbag5蛋白促进PINK1蛋白的降解。结论1.PINK1PD患者皮肤组织中bag5及泛素的表达明显下调,bag5可能通过泛素蛋白酶体系统调控PINK1,参与早发型PD的发病机制。2.bag5的表达水平改变可能作为早发型PD的早期诊断指标之一。

关键词：早发型帕金森病皮肤活检 PINK1R492X bag5 泛素蛋白酶体系统

雷沙吉兰对bag2及bag5蛋白的作用与多巴胺能神经元保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

雷沙吉兰对BAG2及BAG5蛋白的作用与多巴胺能神经元保护作用

作者：贺爽中南大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是最常见的神经退行性疾病之一,其发病率仅次于阿尔茨海默症。典型的临床表现为静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓、姿势步态异常等。以黑质致密区多巴胺能神经元丢失及多巴胺能神经递质缺乏为主要病... 详细信息

帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是最常见的神经退行性疾病之一,其发病率仅次于阿尔茨海默症。典型的临床表现为静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓、姿势步态异常等。以黑质致密区多巴胺能神经元丢失及多巴胺能神经递质缺乏为主要病理表现。此外在存活的神经元中发现嗜酸性蛋白的沉积,形成Lewy小体也是其突出病理改变之一。大多数PD患者为散发病例,仅10%左右的PD患者有家族聚集现象。对PD的发病机制研究较多,但至今仍不完全明确,多认为环境及遗传易感性相互作用导致了PD的发病。在PD动物模型及PD病人尸检中发现了氧化应激、线粒体功能障碍、泛素蛋白降解系统异常、内环境钙失衡及炎症的相关证据,提示这些变化参与了PD的发病。形态学研究显示PD患者的神经元丢失主要有以下几种形式：凋亡、坏死、自噬。超微结构观察PD患者的黑质区神经元内发现有凋亡及自噬发生的证据。 bag (Bcl-2associated athanogene)蛋白家族是在研究Bcl-2促进细胞存活过程中的协同作用蛋白时发现,故而得名。该家族蛋白是一类进化相对保守的家族蛋白,其各成员蛋白分子的C-末端至少含有一个保守的bag结构域。该家族成员蛋白的功能多样化,能参与执行多种生理功能,包括凋亡、肿瘤发生、神经分化、应激及细胞周期。在多种恶性肿瘤疾病中发现bag家族蛋白的表达有上调,促进细胞存活。研究认为bag家族蛋白能通过与Hsc70/Hsp70或bcl-2相互作用起到抗凋亡作用。另外,有研究显示bag2蛋白参与调节tau蛋白的非泛素依赖蛋白酶体降解。Kalia等研究发现bag5蛋白通过Hsp70与CHIP相互作用能调节a-突触核蛋白(a-synuclein)的寡聚化。本课题组前期研究发现bag5蛋白通过调节PINK1能起到稳定线粒体作用提示bag家族蛋白与神经退行性疾病有重要的联系。雷沙吉兰是一种新型治疗PD药物,是一种高效能、不可逆性单胺氧化酶-B选择性抑制剂。可用于早起单独治疗PD或用于晚期患者辅助左旋多巴治疗。与其他抗帕金森病药物有所不同的是,雷沙吉兰在提高多巴胺神经递质的同时,具有保护多巴胺能神经元做用。大量研究认为其神经元保护作用可能通过以下机制：1)稳定线粒体膜电位;2)诱导抗凋亡基因表达如Bcl-2及下调促凋亡基因表达如Bax、Bad;3)诱导神经营养因子BDNF及GDNF表达;4)调节淀粉样前蛋白的酶解加工过程;5)通过激活NF-κB系统抗凋亡。以及其他尚未明确的作用位点及作用机制。目的：探讨bag家族蛋白是否参与到雷沙吉兰对多巴胺能神经元的保护作用的机制中。方法： 1、运用western-blot、免疫荧光技术检测MPTP损伤诱导的PD小鼠模型中bag1、bag2、bag3及bag5蛋白的变化。 2、雷沙吉兰干预MPTP损伤诱导帕金森动物模型后,运用western-blot、免疫荧光技术检测雷沙吉兰干预后小鼠黑质区多巴胺能神经元内bag2及bag5蛋白的变化。结果： 1、在MPTP损伤诱导的PD小鼠模型中,运用尼氏染色发现PD模型组小鼠黑质区神经元较对照组减少;western-blot检测发现PD组小鼠黑质区多巴胺能神经元中bag2及bag5蛋白胶对照组表达增加,bag1、bag3蛋白无明显变化;免疫荧光检测发现PD组小鼠黑质区多巴胺能神经元bag2及bag5染色阳性细胞数较对照组增多。 2、雷沙吉兰干预MPTP损伤诱导PD小鼠模型后运用western-blot检测发现给予雷沙吉兰干预组较对照组小鼠黑质去多巴胺能神经元中bag2及bag5蛋白表达增加,免疫荧光检测发现雷沙吉兰干预组小鼠黑质去bag2及bag5染色阳性细胞数较对照组明显增多。结论： 1、bag2及bag5蛋白参与了PD的发病过程。 2、雷沙吉兰在保护多巴胺能神经元的过程中上调bag2及bag5蛋白。

关键词： bag2 bag5 雷沙吉兰蛋白降解细胞凋亡

斜带石斑鱼bag5在神经坏死病毒感染中的作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

斜带石斑鱼BAG5在神经坏死病毒感染中的作用研究

作者：邹子鸿广东海洋大学

学位级别：硕士

bag(Bcl-2-associated athanogene,bag)蛋白家族是一类Bcl-2的结合蛋白,在调控细胞死亡以及宿主抵御病原感染的过程中发挥着重要作用。bag5是该家族的成员之一,然而目前有关鱼类bag5功能研究的报道很少。本研究对斜带石斑鱼bag5基因进... 详细信息

bag(Bcl-2-associated athanogene,bag)蛋白家族是一类Bcl-2的结合蛋白,在调控细胞死亡以及宿主抵御病原感染的过程中发挥着重要作用。bag5是该家族的成员之一,然而目前有关鱼类bag5功能研究的报道很少。本研究对斜带石斑鱼bag5基因进行了克隆与表达分析,并通过体外转染、荧光定量PCR、荧光素酶报告基因检测等技术分析了该基因在病毒感染过程中的作用,主要研究结果如下:1.斜带石斑鱼bag5(Ec-bag5)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)为1407bp,编码468个氨基酸。网站预测分子量大小为53.2k Da,理论等电点为5.93,该蛋白含有4个保守的bag家族结构域,进化树分析显示斜带石斑鱼bag5与大黄鱼(Larimichthys crocea)该蛋白的亲缘关系最近。2.Ec-bag5在斜带石斑鱼多种组织中均有表达,在外周血淋巴细胞中相对表达量最高,脾脏中表达量最低。赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)和脂多糖(LPS)刺激后,Ec-bag5在石斑鱼脾脏(GS)细胞中表达明显上调。亚细胞定位结果表明,Ec-bag5呈全细胞分布。3.Ec-bag5过表达能抑制病毒增殖以及病毒基因CP(衣壳蛋白)和Rd Rp(RNA依赖性RNA聚合酶)的表达。进一步的分析结果显示,Ec-bag5的过表达显著上调了干扰素通路相关因子和炎症相关因子的表达,包括干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素刺激基因15(ISG15)、干扰素诱导蛋白35(IFP35)、粘病毒抗性基因1(Mx1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)。此外,Ec-bag5过表达显着增强了NF-κB、ISRE和IFN-1启动子的转录活性。

关键词：斜带石斑鱼 bag5 赤点石斑鱼神经坏死病毒干扰素

bag5 interacts with the Parkinson-associated protein PINKl to protect against oxidative mitochondrial damage

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

BAG5 interacts with the Parkinson-associated protein PINKl t...

CLN8P相互作用蛋白靶基因的获取与初步鉴定

中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会

作者： Xue-Jing WANG~1,Ji-Feng GUO~1,Guang-Hui WANG~2,Bei-Sha TANG~(1,3,*) 1 Department of Neurology,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,China 2 Department of Neurobiology,Laboratory of Molecular Neuropathology,School of Life Sciences,University of Science and Technology of China,Heifei,China 3 National Laboratory of Medical Genetics,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha,China

＜正＞Mutations in PTEN-induced kinase 1（PINK1） gene cause PARK6 familial Parkinsonism,and loss the stability of PINK1 may also contribute to sporadic Parkinson’s disease（PD）.Degradation of PINK1 occurs predominantly through the ubiquitin-proteasome pathway,however,to date,few of the proteins have been found to regulate the degradation of PINK1.Using the yeast two-hybrid system and pull-down methods,we identified bcl- 2-associated athanogene 5（bag5）,a bag family member,directly interacted with PINK1.We showed that bag5 stabilized PINK1 by decreasing the ubiquitination of PINK1.Interestingly,bag5 rescued MPP+- and rotenoneinduced mitochondria dysfunction by up-regulating PINK1 in vitro.In PINK1-null mice and MPTP-treated mice, significantly increased in the substantia nigra pars compacta（SNpc） although PINK1 was decreased.Moreover, rasagiline treatment to MPTP-treated mice resulted in further increase of bag5 protein.In summary,we present bag5 as a key protein to stabilize PINK1,thereby proventing mitochondrial dysfunction following oxidative stress.

关键词： Parkinson’s disease bag5 PINKl mitochondrial dysfunction UPS

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

南华大学学报（自然科学版） 2005年第F9期19卷 118-123页

作者：黄保英何淑雅李斌元南华大学生命科学与技术学院湖南衡阳421001

为了获得CLN8P相互作用蛋白靶基因并对其进行初步鉴定,实验经抽提酵母质粒DNA,电转化大肠杆菌,选择性培养基分离质粒,酶切鉴定、测序、生物信息学分析,结果获得了CLN8P相互作用蛋白阳性克隆的一个靶基因bag5;利用酵母双杂交共转化法初... 详细信息

为了获得CLN8P相互作用蛋白靶基因并对其进行初步鉴定,实验经抽提酵母质粒DNA,电转化大肠杆菌,选择性培养基分离质粒,酶切鉴定、测序、生物信息学分析,结果获得了CLN8P相互作用蛋白阳性克隆的一个靶基因bag5;利用酵母双杂交共转化法初步验证,表明bag5蛋白与CLN8P具有相互作用,并可能因此影响到神经细胞的正常生长.这将有利于进一步深入研究CLN8的功能及阐明NCLs发病机制.

关键词：酵母双杂交相互作用蛋白 NCLs CLN8 bag5

拟南芥不同组织细胞对DAPI染色的差异分析

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

激光生物学报 2020年第2期29卷 148-152页

作者：于静芳尹润竹周俊华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所暨激光生命科学教育部重点实验室广州510631

4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)作为一种DNA特异性荧光染料,在荧光显微观察各种生物细胞中得到了广泛应用。然而,植物不同组织细胞响应DAPI染色目前仍缺乏比较系统的表征。本文利用模式植物拟南芥,探究了其各个组织细胞对DAPI染色的差... 详细信息

4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)作为一种DNA特异性荧光染料,在荧光显微观察各种生物细胞中得到了广泛应用。然而,植物不同组织细胞响应DAPI染色目前仍缺乏比较系统的表征。本文利用模式植物拟南芥,探究了其各个组织细胞对DAPI染色的差异。首先我们构建了一个细胞核定位的稳转基因植物UBQ10∶bag5-eYFP。接下来的试验发现在非固定的bag5-eYFP植物活细胞中,只有表皮细胞和叶肉细胞能被DAPI染色。相比于叶绿体,线粒体中的DNA对DAPI染色较为敏感,表现出DAPI荧光和线粒体marker CoxIV-RFP很好的共定位。多聚甲醛固定之后,根部分生区、气孔保卫细胞能被DAPI染色。这些结果表明,拟南芥不同组织细胞对DAPI染色呈现出很大的差异。叶片表皮细胞和叶肉细胞对于探究植物活体细胞核的研究将会是一个很好的模型。

关键词：细胞核 bag5 DAPI 拟南芥