检索结果-南通市图书馆

强化剂量阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者经皮冠脉介入术围手术期b7-h4的影响

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实用医学杂志 2017年第6期33卷 975-978页

作者：吕静徐戈黄琛雷敏张晶晶马冰宁广西医科大学第一附属医院心血管研究所广西南宁530021 广西中医药大学第一附属医院广西玉林537000 广西玉林红十字会医院 537000 湖南益阳医专附属医院 413000 湖南省永州市中心医院 425000

目的:探讨强化剂量阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者经皮冠脉介入术(PCI)围手术期b7-h4的表达的影响。方法:选取2012年10月至2014年10月广西医科大学第一附属医院和广西中医药大学第一附属医院心内科收治的不稳定型心绞痛患者80例,随机... 详细信息

目的:探讨强化剂量阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者经皮冠脉介入术(PCI)围手术期b7-h4的表达的影响。方法:选取2012年10月至2014年10月广西医科大学第一附属医院和广西中医药大学第一附属医院心内科收治的不稳定型心绞痛患者80例,随机分为常规剂量阿托伐他汀组和强化剂量阿托伐他汀组,每组40例,两组患者分别于PCI术前及术后18~24 h采集外周静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清可溶性b7-h4(s b7-h4)、白介素(IL)-4、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)水平,荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测外周血单核细胞(PbMC)b7-h4 m RNA相对表达量。结果:两组患者PCI术后的IL-10、s b7-h4水平和b7-h4 m RNA表达量均较术前升高,其中强化剂量组升高更为显著(Pb7-h4表达,调节炎性因子IL-4、IFN-γ水平,从而抑制不稳定型心绞痛患者PCI术后免疫炎症。

关键词：不稳定型心绞痛 b7-h4 阿托伐他汀经皮冠脉介入术

免疫检查点分子PD-L1和b7-h4在卵巢癌组织中的表达及意义

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代免疫学 2023年第1期43卷 36-41页

作者：凌佳怡谢芳杜婷黄沁张营胡鑫童瞿秋霞苏州大学医学部苏州215006 苏州大学附属第一医院临床免疫学实验室苏州215006 苏州大学病理学教研室苏州215006 苏州大学附属第一医院妇产科苏州215006 苏州大学附属第二医院妇产科苏州215004

为探讨免疫检查点分子PD-L1和b7-h4在卵巢癌组织中的表达特点以及临床意义,收集46例手术切除的卵巢癌组织,通过免疫组化染色技术检测PD-L1和b7-h4分子的表达水平和定位,采用χ2检验分析其与样本临床参数之间的关系,Spearman法分析相关... 详细信息

为探讨免疫检查点分子PD-L1和b7-h4在卵巢癌组织中的表达特点以及临床意义,收集46例手术切除的卵巢癌组织,通过免疫组化染色技术检测PD-L1和b7-h4分子的表达水平和定位,采用χ2检验分析其与样本临床参数之间的关系,Spearman法分析相关性。结果显示,PD-L1和b7-h4分子在卵巢癌组织内中/高表达所占百分比分别为67.4%(31/46)和82.6%(38/46),二者同时中/高表达率为58.7%(27/46)。膜PD-L1中/高表达与病理类型、分化程度有关(Pb7-h4中/高表达与病理类型有关(Pb7-h4的表达有相关性(r=0.553,Pb7-h4的表达有相关性(r=0.429,Pb7-h4分子主要集中在卵巢透明细胞癌亚组,PD-L1与b7-h4在胞膜和胞浆的表达具有相关性,在免疫治疗卵巢癌时需考虑PD-L1和b7-h4抗体联合靶向干预。

关键词：卵巢肿瘤免疫检查点程序性死亡受体配体1 b7-h4

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

b7-h4对肺癌的诊断价值

B7-H4对肺癌的诊断价值

作者：徐速延边大学

学位级别：硕士

目的:比较分析血清b7-h4和常规应用的诊断肺癌的标志物,为临床诊断肺癌提供参考依据。方法:收集2018年4月至2019年1月延边大学附属医院收治的患者,其中肺癌51例,肺良性病变46例,另选择23例健康体检者。应用ELISA法检测120例血清标本b7-h... 详细信息

目的:比较分析血清b7-h4和常规应用的诊断肺癌的标志物,为临床诊断肺癌提供参考依据。方法:收集2018年4月至2019年1月延边大学附属医院收治的患者,其中肺癌51例,肺良性病变46例,另选择23例健康体检者。应用ELISA法检测120例血清标本b7-h4的水平,探讨b7-h4与肺癌的临床病理特征之间的关系以及b7-h4诊断肺癌的价值。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析b7-h4、CEA、CA125、NSE、ProGRP和CYFRA21-1对肺癌的诊断价值及相关性。结果:(1)与肺良性病变组及对照组比较,肺癌组血清b7-h4、CEA、CA125、NSE、ProGRP、CYFRA21-1水平显著增高,均有统计学差异(Pb7-h4肺良性病变组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。(2)b7-h4的ROC曲线下面积(AUC)均值为 0.772(95%CI,0.68-0.87),cut-off 值为 31.88μg/L,灵敏度为 64.70%;CEA(AUC)均值为 0.795(95%CI,0.70-0.89),cut-off 值为 4.21 ng/ml,灵敏度为66.70%;CA125(AUC)均值为 0.744(95%CI,0.65-0.84),cut-off 值为 21.00 U/ml,灵敏度为 68.60%;NSE(AUC)均值为 0.781(95%CI,0.70-0.87),cut-off 值为 12.36ng/ml,灵敏度为 70.60%;ProGRP(AUC)均值 0.694(95%CI,0.60-0.79),cut-off 值为48.09pg/ml,灵敏度为 64.70%;CYFRA21-1(AUC)均值为 0.824(95%CI,0.75-0.90),cut-off值为2.94 ng/ml,灵敏度为62.70%。联合检测灵敏度为89.2%,特异性为94.2%,AUC 均值为 0.902(95%CI,0.841-0.964)。(3)b7-h4 与 CEA、CYFRA21-1 呈正相关.结论:1.血清b7-h4对肺癌诊断能提供一定的参考依据。2.血清b7-h4、CEA、CA125、NSE、ProGRP、CYFRA21-1联合检测诊断肺癌优于单项检测。

关键词： b7-h4 肺癌诊断价值联合检测

b7-h4靶向shRNA干扰小鼠间充质干细胞C3h10T1/2的构建及其生物学功能的初步研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B7-H4靶向shRNA干扰小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的构建及其生物学...

作者：李楠苏州大学

学位级别：硕士

目的：构建小鼠b7-h4靶向shRNA稳定转染的鼠间充质干细胞株C3h10T1/2（以下简称C3h10），通过体内外实验探讨b7-h4分子在C3h10细胞移植治疗EAE中的免疫抑制作用。方法：应用流式细胞仪、Western blot等方法检测C3h10细胞中b7-h4分... 详细信息

目的：构建小鼠b7-h4靶向shRNA稳定转染的鼠间充质干细胞株C3h10T1/2（以下简称C3h10），通过体内外实验探讨b7-h4分子在C3h10细胞移植治疗EAE中的免疫抑制作用。方法：应用流式细胞仪、Western blot等方法检测C3h10细胞中b7-h4分子的表达情况;将装载有小鼠b7-h4分子小片段shRNA的慢病毒颗粒转染C3-h10细胞系（C3h10-shRNA-b7-h4）;利用载体的嘌呤霉素抗性筛选转染的C3-h10细胞，通过荧光显微镜及流式细胞仪（FCM）检测shRNA的转染效率。通过流式细胞仪、RT-PCR及Western blot等方法检测不同序列的特异性shRNA干扰C3-h10细胞后b7-h4分子的mRNA及蛋白表达水平，得到干扰效率较好的一株C3-h10-shRNA-b7-h4细胞，将其与小鼠脾脏淋巴细胞共同培养，用FCM检测其对淋巴细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的作用。建立EAE小鼠模型，分假手术组、造模组、C3h10细胞移植组、C3h10-shRNA-NC细胞移植组、C3h10-shRNA-b7-h4细胞移植组，其中C3h10细胞移植组、C3h10-shRNA-NC细胞（转染了未含靶向分子的对照shRNA的C3h10）移植组、C3h10-shRNA-b7-h4细胞（转染了含靶向分子b7h4shRNA的C3h10）移植组在免疫后第8天分别将C3h10细胞、C3h10-shRNA-NC细胞、C3h10-shRNA-b7-h4细胞注入建立的EAE模型小鼠体内，观察各组小鼠的发病神经功能评分及体重变化情况，与对照组相比较。结果：FCM及Western blot检测显示C3-h10细胞高表达b7-h4分子;荧光显微镜及FCM检测显示shRNA转染C3-h10细胞的效率高达80%以上;通过嘌呤霉素筛选后得到的C3-h10细胞转染效率在95%以上，且能稳定传代;有4对特异性shRNA对b7-h4mRNA及蛋白均有不同程度的下调，其中以shRNA-1对b7-h4的下调作用最强，作为最佳特异性shRNA;C3-h10能明显抑制经PhA激发的小鼠脾脏细胞的活化和增殖，使细胞周期阻滞于G0/G1期，该免疫抑制效应在PhA激发的脾细胞与C3-h10-shRNA-b7-h4细胞共培养组被部分逆转;C3-h10细胞可保护与其共培养的PhA激发的小鼠脾脏淋巴细胞免受AICD，此效应在其与C3-h10-shRNA-b7-h4细胞共培养组被部分逆转。体内实验显示假手术组无发病，C3h10细胞植入组及C3h10-shRNA-NC细胞植入组较造模组发病时间延迟且发病症状较轻，神经功能评分维持在较低水平，体重呈持续增长趋势;而C3h10-shRNA-b7-h4植入组发病时间介于C3h10细胞移植组及造模组之间，发病高峰与造模组同时期，神经功能缺损评分介于C3h10细胞移植组及造模组之间，但发病小鼠转归较造模组好。结论：1、成功构建了小鼠b7-h4靶向shRNA稳定转染的小鼠间充质干细胞株C3h10T1/2，b7-h4分子表达明显下调。 2、体外实验显示b7-h4分子参与了C3h10细胞对小鼠脾脏细胞活化、增殖的免疫抑制作用，使多数细胞细胞周期阻滞于G0/G1期，表达b7-h4的C3h10细胞能够保护经PhA刺激的小鼠淋巴细胞免受AICD。 3、体内实验显示b7-h4分子在C3h10细胞移植治疗小鼠EAE模型的病理过程中发挥了一定作用。

关键词： b7-h4 shRNA C3h10 淋巴细胞细胞周期 AICD

b7-h4分子的抗体制备及其在肿瘤研究中的应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B7-H4分子的抗体制备及其在肿瘤研究中的应用

作者：陶岚浙江大学

学位级别：硕士

背景: b7-h4,又称b7S1或b7x,是共刺激分子b7家族的最新成员,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,编码282个氨基酸。由美国Mayo医学中心于2003年发现,是b7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子。人b7-h4的cDNA长约1.8Kb,位于人的染色体1p11.1... 详细信息

背景: b7-h4,又称b7S1或b7x,是共刺激分子b7家族的最新成员,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,编码282个氨基酸。由美国Mayo医学中心于2003年发现,是b7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子。人b7-h4的cDNA长约1.8Kb,位于人的染色体1p11.1,在基因组上跨越66Kbp。b7-h4的mRNA在淋巴和非淋巴组织中都有表达,但免疫组化显示,b7-h4蛋白仅在部分正常组织中微弱的表达。b7-h4可以在活化的人T细胞、b细胞、巨噬细胞、DC细胞上呈诱导性表达。业已发现,一些肿瘤细胞也呈组成性表达b7-h4,如乳腺癌、卵巢癌和肺癌等。对小鼠组织的Northern blot实验发现,根据组织类型的不同,小鼠的b7-h4共有四种不同的mRNA剪切形式。RT-PCR分析显示,人类的组织至少拥有两个转录本。研究表明,正常外周组织能在翻译水平对b7-h4的表达进行严密的调控。在机体的免疫应答过程中,b7-h4作为重要的共刺激分子,在CD4、CD8T细胞的分化发育、细胞周期进展以及细胞因子的产生等方面发挥广泛的抑制效应。b7-h4对外周组织的细胞免疫应答起着负性调节的作用,且由于其特异性表达于某些肿瘤细胞表面,因而可能在机体的肿瘤免疫逃避机制中起着重要作用。因此,b7-h4分子途径为肿瘤、自身免疫性疾病和抗病毒及移植排斥反应等疾病提供了新的治疗思路。阻断b7-h4与其受体的相互作用,有望成为干预自身免疫性疾病和肿瘤生物治疗的潜在靶点。目的: 为了更深入研究b7-h4与肿瘤免疫的关系,本实验设计并合成了人b7-h4多肽,应用该多肽制备了兔抗人b7-h4多克隆抗体,并应用该抗体研究b7-h4分子在多种肿瘤细胞和肿瘤组织中的表达,并探讨其意义。方法: 1.根据Genbank公布的序列(AAP37283),利用计算机辅助设计,确定并人工合成b7-h4抗原多肽,并用Keyhole Limpet hemocyanin(KLh)交联以增强b7-h4抗原多肽的免疫原性。将交联KLh的b7-h4抗原肽免疫新西兰兔(经初次免疫和四次加强免疫)后获取免疫兔血清,亲和纯化法纯化兔血清中的抗b7-h4抗体。采用直接ELISA法、Western-blot免疫印迹鉴定抗b7-h4抗体的效价、反应的特异性和敏感性;2.免疫组织化学染色检测组织芯片上多种肿瘤组织中人b7-h4蛋白的表达情况;3.根据Genbank公布的序列(NM24626),合成了h b7-h4的PCR引物,应用RT-PCR检测多种肿瘤细胞株中人b7-h4mRNA的表达;***-blot检测多种肿瘤细胞株中人b7-h4蛋白的表达。结果: 1.成功制备了兔抗人b7-h4多克隆抗体;2.免疫组化检测结果显示肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、结肠癌、直肠癌及肾癌等多种肿瘤组织的细胞膜和细胞浆均有b7-h4蛋白的阳性染色,而在各种对照的正常组织中仅表达为阴性至弱阳性;***-PCR结果显示8种肿瘤细胞株在目的条带1200bp左右处均有b7-h4mRNA的表达;***-blot检测9种细胞株中b7-h4蛋白的表达,结果显示A549、MCF-7、SK-bR-3、CaoV3、SK-OV-3、Siha、heLa、hepG2等肿瘤细胞株均表达b7-h4蛋白,而A293细胞株未检测到b7-h4蛋白表达。结论: 1.成功制备了兔抗人b7-h4多克隆抗体;2.肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、结肠癌、直肠癌及肾癌等多种肿瘤组织的细胞膜和细胞浆均有b7-h4蛋白的阳性染色;3.A549、MCF-7、SK-bR-3、CaoV3、SK-OV-3、Siha、heLa、hepG2等肿瘤细胞株均有b7-h4mRNA和b7-h4蛋白的表达

关键词： b7-h4 抗体制备组织芯片

b7-h4在卵巢型子宫内膜异位症和卵巢癌组织中的表达以及内异停方对其在内异症中表达的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B7-H4在卵巢型子宫内膜异位症和卵巢癌组织中的表达以及内异停方...

作者：李晓贻南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨负性协同刺激分子b7同源体4(b7-h4)在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)异位内膜和非粘液性卵巢上皮性癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)组织中的表达情况以及内异停方对其在内异症中表达的影响。方法:1.选取2015年01月至... 详细信息

目的:探讨负性协同刺激分子b7同源体4(b7-h4)在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)异位内膜和非粘液性卵巢上皮性癌(epithelial ovarian carcinoma,EOC)组织中的表达情况以及内异停方对其在内异症中表达的影响。方法:1.选取2015年01月至2017年01月至江苏省中医院就诊,符合卵巢型子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)诊断的患者40例(包块大于等于5cm),随机分为两组,每组20例,A组口服内异停方3个月后行手术治疗,b组直接行手术治疗,用免疫组化方法比较两组患者异位内膜组织中b7-h4的表达情况。2.比较b组患者异位内膜组织与病理已确认的EOC(非粘液性)患者20例病理组织中b7-h4的表达情况。3.比较A组患者服药前后血清CA125和临床症状评分数值的变化。结果:b7-h4在OEM(b组)和EOC(非粘液性)组织中表达明显增高,二者差异无统计学意义(P>0.05)。b7-h4在A组中的表达明显低于b组(P

关键词：子宫内膜异位症卵巢肿瘤 b7-h4 免疫逃逸内异停方

b7-h4基因修饰的胰岛细胞对小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的影响

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B7-H4基因修饰的胰岛细胞对小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的影响

作者：赵雪倩第二军医大学

学位级别：硕士

本课题利用携带免疫负调控分子b7-h4的重组质粒转染自bAbL/c小鼠分离得到的胰岛细胞,并采用肾包膜下注射的方法将其移植给诱发Ⅰ型糖尿病的C57bL/6小鼠模型,观察移植物的功能状态和存活时间,探索避免同种异体胰岛移植排斥反应的有效方... 详细信息

本课题利用携带免疫负调控分子b7-h4的重组质粒转染自bAbL/c小鼠分离得到的胰岛细胞,并采用肾包膜下注射的方法将其移植给诱发Ⅰ型糖尿病的C57bL/6小鼠模型,观察移植物的功能状态和存活时间,探索避免同种异体胰岛移植排斥反应的有效方法。在体外将基因修饰的胰岛细胞与T淋巴细胞混合培养,观察其对T细胞增殖和细胞因子分泌的影响。结果显示:该法能明显改善受体鼠糖尿病症状,有效控制血糖水平,显著延长同种异体移植胰岛的存活期;b7-h4基因修饰的胰岛细胞在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力显著下降,并可明显抑制IL-2、IFN-γ的分泌。为Ⅰ型糖尿病的胰岛移植治疗研究提供了新的途径,为进一步的免疫负向调控分子的理论和应用研究提供了新的依据和方法。

关键词： b7-h4 同种异体移植胰岛移植胰岛细胞移植耐受 Ⅰ型糖尿病胰岛素依赖型糖尿病

b7-h4在EGFR突变体肺癌细胞中的表达调控研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B7-H4在EGFR突变体肺癌细胞中的表达调控研究

作者：曹秋逸苏州大学

学位级别：硕士

肺癌是最常见的癌症类型,肺癌病例的85%为非小细胞肺癌(NSCLC)。非小细胞肺癌中一个极其重要的驱动突变基因是表皮生长因子受体(EGFR),大约三分之一的肺腺癌中都发现了其突变。它能借助信号转导使细胞生长失控和恶性化,因此临床治疗肺... 详细信息

肺癌是最常见的癌症类型,肺癌病例的85%为非小细胞肺癌(NSCLC)。非小细胞肺癌中一个极其重要的驱动突变基因是表皮生长因子受体(EGFR),大约三分之一的肺腺癌中都发现了其突变。它能借助信号转导使细胞生长失控和恶性化,因此临床治疗肺腺癌常选用靶向阻断EGFR突变体的信号通路来作为重要策略之一。b7-h4(别称:b7-S1,b7x或VTCN1)是近年来发现的b7家族负性共刺激分子。b7-h4在人类肿瘤中广泛表达,如肾细胞癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等都存在b7-h4的过表达。研究表明,b7-h4是T细胞免疫的强弱化子,它通过与T细胞表面的特异性受体结合,可以限制T细胞的免疫反应。b7-h4的异常高表达在肿瘤组织中广泛存在,使肿瘤细胞借此来逃避机体免疫系统的攻击,预示着该分子将成为肿瘤诊断和预后判断的分子生物标志物,同时也是一个针对肿瘤、炎症、自身免疫性疾病和器官移植的潜在的有效的治疗靶点。本论文通过收集数据库和部分临床肺腺癌样本,根据驱动突变背景,进行统计分析,之后又进行了细胞水平实验,研究EGFR突变体与b7-h4和PD-L1蛋白表达之间的关系。首先通过对TCGA等肺腺癌临床数据库中分子mRNA表达水平的统计,研究b7-h4和PD-L1的表达与EGFR驱动突变的相关性;再收集临床肺癌组织进行免疫组化染色,验证数据库的分析结果;最后选取天然表达EGFR野生型或突变体的肺腺癌细胞为研究对象,通过western blot等方法研究比较b7-h4和PD-L1表达在EGFR突变体中受到的调控作用。整个研究工作从临床样本出发,通过细胞水平的实验阐释其调控机制。本论文主要包括以下内容:一、肺腺癌数据库分析各免疫检查点分子与驱动突变的相关性[目的]通过对肺腺癌的基因芯片数据库和TCGA肺腺癌的RNA-seq数据分析,研究不同驱动突变的肺腺癌中免疫检查点分子的表达,以及肿瘤浸润CD8+T细胞的数量和功能之间的差异。[方法]收集数据库中肺腺癌的15个免疫检查点分子以及CD8A,GZMb及PRF1的mRNA表达数据,根据驱动突变背景,进行统计分析。[结果]免疫检查点分子CD8A,GZMb及PRF1在EGFR突变体肺腺癌中的mRNA表达显著低于癌旁正常组织。PD-L1在EGFR突变型中的mRNA表达显著低于野生型,而b7-h4和hhLA2在EGFR突变型中的mRNA表达显著高于野生型。此外,b7-h4与GZMb表达存在负相关,PD-L1与CD8表达存在正相关。[结论]在EGFR突变型肺腺癌中,PD-L1的mRNA表达下调,而b7-h4的mRNA表达上调,并且b7-h4和hhLA2的表达可能与CD8+T细胞的功能抑制有关。二、免疫组化研究肺腺癌样本中b7-h4、PD-L1和hhLA2三个免疫检查点分子的表达与EGFR驱动突变的相关性[目的]通过免疫组化实验,验证这三个免疫检查点分子的蛋白表达水平是否与数据库分析发现的mRNA表达水平一致。[方法]收集215例临床肺腺癌样本(127例为EGFR突变型,88例为野生型),免疫组化染色分析b7-h4,PD-L1,hhLA2,CD8,GZMb的表达。[结果]免疫组化染色发现,PD-L1在EGFR突变型中的蛋白表达显著低于野生型,而b7-h4在EGFR突变型中的蛋白表达显著高于野生型,hhLA2蛋白表达在两组间无显著差异。此外,b7-h4与GZMb表达存在负相关,PD-L1与CD8表达存在正相关。[结论]在EGFR突变型肺腺癌中,PD-L1的蛋白表达下调,b7-h4的蛋白表达上调,并且b7-h4的表达与CD8+T细胞功能抑制有关。三、验证研究b7-h4与PD-L1在EGFR肺癌细胞中的蛋白表达水平及相关信号通路[目的]细胞水平验证研究肺癌细胞中的EGFR突变体与b7-h4和PD-L1蛋白表达之间的关系,研究EGFR下游信号通路对b7-h4和PD-L1表达水平的调控作用。[方法]选用几株天然表达突变型EGFR和野生型EGFR的肺癌细胞为研究对象,通过western blot等方法检测验证EGFR突变与b7-h4和PD-L1蛋白表达之间的关系,以及EGFR相关信号通路的调控作用。[结果]b7-h4在EGFR突变型中的蛋白表达水平显著高于EGFR野生型,而PD-L1的表达则相反,并且肺癌细胞中的EGFR突变体可上调b7-h4,下调PD-L1的表达。EGFR信号通路下游p-ERK1/2信号分子的表达与b7-h4有明显的正相关性,而p-Akt信号分子的表达与PD-L1有正相关性。[结论]肺癌细胞株实验验证了数据库分析和免疫组化结果,即EGFR突变体可以上调b7-h4,下调PD-L1,EGFR下游的MEK/ERK通路的激活可上调b7-h4,而PI3K/Akt通路的激活可上调PD-L1。由于这两条信号通路存

关键词： b7-h4 PD-L1 EGFR突变表达调控信号通路

抗b7-h4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测

作者：纪洪帅南京师范大学

学位级别：硕士

本研究通过SOE-PCR技术将抗b7-h4单链抗体基因与毒素PE38KDEL基因进行连接,将得到的重组免疫毒素基因anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL亚克隆到原核表达载体pET28a中诱导表达。重组免疫毒素先通过变复性得到可溶蛋白,在经过镍柱纯化得到较单一... 详细信息

本研究通过SOE-PCR技术将抗b7-h4单链抗体基因与毒素PE38KDEL基因进行连接,将得到的重组免疫毒素基因anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL亚克隆到原核表达载体pET28a中诱导表达。重组免疫毒素先通过变复性得到可溶蛋白,在经过镍柱纯化得到较单一的目的蛋白,并用免疫印迹鉴定蛋白的表达情况;后分别利用间接ELISA、流式细胞术和Western blot检测重组蛋白与b7-h4抗原的结合活性;通过MTT法和皮下异种移植瘤模型实验,检测毒素蛋白对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,处死荷瘤鼠后,解剖瘤块并对肿瘤组织进行hE染色和免疫组化分析。具体实验流程如下:1、重组免疫毒素anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL基因的扩增、克隆和重组表达载体 pET28a/anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL 的构建先分别扩增出单链抗体anti-b7-h4-scFv基因和修饰后的毒素PE38KDEL基因,再利用SOE-PCR技术将这两段基因连接。PCR反应结束后,将目的条带进行割胶回收。将回收的目的基因anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL与pUM19-T Vector按照试剂盒进行T-A克隆,保留测序结果正确的菌株。用EcoRⅠ和NotⅠ限制性内切酶对pET28a(+)质粒和anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL基因进行双酶切。所得的连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中,涂含抗生素的平板进行筛选,次日挑取平板上长出的阳性克隆送测鉴定,测序正确的阳性菌株-80 ℃保存。2、重组免疫毒素Anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL的表达、纯化及活性检测将含有正确 pET28a/anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL 重组载体质粒的 bL21(DE3)表达菌株在不同条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析蛋白在不同条件下的表达情况,并找出最优表达条件。在最优的条件下扩大培养并收集产物,将所得的包涵体沉淀进行变复性处理,以获得更多的可溶性上清。表达产物带有his标签可与镍柱结合,以此纯化蛋白,并用不同浓度的咪唑洗脱并收集洗脱液。把洗脱的蛋白液进行透析,浓缩,收集及鉴定。间接ELISA鉴定重组毒素蛋白和b7-h4抗原蛋白的亲和活性;采用间接荧光标记的方法,运用流式细胞术检测免疫毒素对人源乳腺癌细胞MCF-7、正常人肾皮细胞293a和人源肝癌细胞hepG2这3种细胞的结合活性。3、重组毒素蛋白Anti-b7-h4-scFv-PE38KDEL在体外和体内的生物学功能鉴定分别从体内和体外两部分实验检测重组毒素蛋白的生物学功能,体外利用MTT 实验在 5 个浓度梯度(0.01、0.10、1.00、10、100ug/ml)下,分别在 12h、24h、36h和48h测定重组毒素对b7-h4抗原高表达的肺癌细胞A549、少表达的肝癌细胞hepG2和不表达的正常细胞293T细这三种细胞增殖的影响。利用台盼蓝染色检测毒素蛋白(0.01、1.00、100 ug/ml)对MCF-7、hepG2、293a三种细胞的作用,并计算存活率。体内实验建立小鼠肿瘤异种移植模型,将人源肺癌A549细胞调整到一定数量注射到小鼠皮下建立模型,待瘤长到一定大小时,随机分为空白对照组、阳性对照组和实验组,空白对照组注射生理盐水,阳性对照组注射紫杉醇,实验组注射抗体蛋白,连续隔天给药,一共注射七次,期间记录小鼠体重和肿瘤体积变化。最后处死荷瘤鼠,对取出的瘤组织进行称重、固定,并进行hE染色和免疫组织化学分析。

关键词： b7-h4 scFv PE38KDEL 重组免疫毒素靶向治疗变复性 hE染色免疫组化