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脑心肌炎病毒内部核蛋白体进入位点介导白介素-12基因在b16f1细胞中的表达

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江西医学院学报 2003年第4期43卷 9-11页

作者：刘金辉 Glenn Larsen 江西医学院微生物学教研室江西南昌330006 Department of Research & Development

目的　研究脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的鼠白介素 12 (mIL 12 )的 p4 0和p35双亚基基因在同一启动子的调控下能否得以有效地表达并形成异二聚体 p70。方法　采用脂质体法将表达经脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接... 详细信息

目的　研究脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的鼠白介素 12 (mIL 12 )的 p4 0和p35双亚基基因在同一启动子的调控下能否得以有效地表达并形成异二聚体 p70。方法　采用脂质体法将表达经脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的p4 0和 p35的质粒mIL - 12 /AD1 1转染b16f1细胞 ,连续 3d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的mIL 12 (p70 )量。结果　ELISA结果显示 ,mIL12 (p70 )的表达量随着时间推移逐步下降 ,由第 1天的 15 .5ng/ml逐步下降到第 3天的 9.3ng/ml。表明mIL 12 p4 0和p35双亚基基因得到有效的表达并加工形成了异二聚体p70。结论　脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的双基因p4 0和 p35在同一启动子的调控下得以同时表达。

关键词：脑心肌炎病毒白介素12 基因表达内部核蛋白体 b16f1细胞

基因转移载体脂质体和重组腺病毒介导碱性磷酸酶基因在b16f1细胞中的表达比较

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江西医学院学报 2002年第2期42卷 15-18页

作者：刘金辉 Glenn Larsen 江西医学院微生物学教研室江西南昌330006 Preclinical Researchand Develpment

目的 :探讨两种基因转移载体脂质体转染的和重组腺病毒收集并转导的SEAP基因在b16f1细胞中的表达动态。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6 b16f1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的SEAP酶活性。将重组腺病毒以 10 0 0... 详细信息

目的 :探讨两种基因转移载体脂质体转染的和重组腺病毒收集并转导的SEAP基因在b16f1细胞中的表达动态。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6 b16f1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的SEAP酶活性。将重组腺病毒以 10 0 0m .o .i、2 0 0 0m .o .i、3 0 0 0m .o .i、4 0 0 0m .o .i接种b16f1细胞 ,连续 5d收集并换细胞培养液 ,并检测其中SEAP的含量。结果 :随着时间的推移 ,脂质体转染的SEAP的表达逐渐下降 ,由第 1天的 82 1.6μUnit/ml下降到第 5天的 2 75 .2 μUnit/ml。腺病毒转导的SEAP的表达却是逐渐上升。并随接种毒量的增加而上升。且第三、四天表达达最高后 ,能保持较稳定的水平。接种 4 0 0 0m .o .i组 ,SEAP的表达由第 1天的93 .9μUnit/ml上升到第 3天 12 81.1μUnit/ml。到第 5天仍为 12 4 0 .4 μUnit/ml。结论 :脂质体和重组腺病毒作为不同的基因转移载体都能有效地介导外源基因的转移入靶细胞 ,并使外源基因在靶细胞内获得有效地表达。

关键词：脂质体重组腺病毒碱性磷酸酶基因转移基因表达 b16f1细胞载体

抑制整合素α9基因的表达对黑色素瘤细胞b16f1的生长和肺转移的影响

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肿瘤防治研究 2014年第5期41卷 363-365页

作者：孙思文王海明康世钧罗荣城南方医科大学南方医院肿瘤中心广州510515

目的观察shRNA干扰整合素α9(ITGA9)的表达对黑色素瘤细胞b16f1的生长和肺转移的影响。方法用RNA干扰技术下调b16f1中ITGA9的表达,建立小鼠皮下成瘤和肺转移模型,观察肿瘤生长情况,计数肺转移灶数量。结果 ITGA9-shRNA转染组的肿瘤生长... 详细信息

目的观察shRNA干扰整合素α9(ITGA9)的表达对黑色素瘤细胞b16f1的生长和肺转移的影响。方法用RNA干扰技术下调b16f1中ITGA9的表达,建立小鼠皮下成瘤和肺转移模型,观察肿瘤生长情况,计数肺转移灶数量。结果 ITGA9-shRNA转染组的肿瘤生长速度减慢(Pble-shRNA组相比下降36%;肺转移灶数量显著减少(P细胞b16f1在小鼠体内的生长和肺转移。ITGA9可能成为黑色素瘤的治疗靶点。

关键词：整合素α9 shRNA 黑色素瘤 b16f1细胞肺转移

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维泰醇和紫杉醇抗肿瘤转移作用比较

中国药理学通报 2011年第8期27卷 1111-1115页

作者：陈姬陈娜陈小宇张波田卉郑秋生石河子大学药学院新疆特种植物药资源教育部重点实验室新疆石河子832002

目的观察维泰醇和紫杉醇对肿瘤细胞体外迁移能力以及血管内皮细胞管腔形成能力的影响,对它们的抗肿瘤转移能力进行比较,以证实维泰醇的抗肿瘤血管新生及抗肿瘤转移作用。方法采用SRb法,划痕试验,明胶酶谱法、ELISA、AO/Eb染色法以及管... 详细信息

目的观察维泰醇和紫杉醇对肿瘤细胞体外迁移能力以及血管内皮细胞管腔形成能力的影响,对它们的抗肿瘤转移能力进行比较,以证实维泰醇的抗肿瘤血管新生及抗肿瘤转移作用。方法采用SRb法,划痕试验,明胶酶谱法、ELISA、AO/Eb染色法以及管腔样结构形成试验等方法观察比较维泰醇与紫杉醇的抗肿瘤转移能力。结果维泰醇对黑色素瘤细胞(b16f1)生长抑制率和致死率低于紫杉醇,维泰醇对黑色素瘤细胞迁移、MMP-2表达和对血管内皮细胞(ECV304)管腔形成的抑制能力略低于紫杉醇。结论维泰醇具有较强的抗肿瘤转移活性,虽然其抗转移能力弱于紫杉醇,但其低细胞毒特性依然有望成为新的抗肿瘤转移的药物。

关键词：维泰醇紫杉醇转移 b16f1细胞 ECV304细胞凋亡管腔样结构

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对b16细胞体外侵袭的抑制作用

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中国生物工程杂志 2007年第7期27卷 21-26页

作者：万榕宋军郑海音张晓艳林旭林建银福建医科大学分子医学中心福州350004

目的:建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对肿瘤侵袭的生物学作用。方法:利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载... 详细信息

目的:建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对肿瘤侵袭的生物学作用。方法:利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对b16f1细胞体外侵袭力的影响。结果:SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14kDa,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良boyden小室实验结果显示:经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的b16f1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P1),抑制率为50%。结论:成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠b16f1细胞体外侵袭作用。

关键词：蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂毕赤酵母分泌表达 b16f1细胞侵袭

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异甘草素与光甘草定抗肿瘤转移作用比较

中国实验方剂学杂志 2013年第18期19卷 245-250页

作者：刘亮亮陈姬张波郑秋生石河子大学药学院新疆特种植物药资源教育部重点实验室新疆石河子832002 杭州默沙东制药有限公司杭州310000

目的:观察异甘草素和光甘草定对肿瘤细胞体外迁移能力以及血管内皮细胞管腔形成能力的影响,比较2种药物的抗肿瘤转移能力。方法:以20,40,60,80,100,120μmol·L-1异甘草素和光甘草定作用于小鼠黑色素瘤b16f1细胞和血管内皮细胞(ECV304)... 详细信息

目的:观察异甘草素和光甘草定对肿瘤细胞体外迁移能力以及血管内皮细胞管腔形成能力的影响,比较2种药物的抗肿瘤转移能力。方法:以20,40,60,80,100,120μmol·L-1异甘草素和光甘草定作用于小鼠黑色素瘤b16f1细胞和血管内皮细胞(ECV304),干预48 h,磺酰罗丹明b(SRb)法检测细胞增殖。划痕实验评价b16f1和ECV304细胞体外迁移能力,明胶酶电泳和酶联免疫法(ELISA)测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性和表达量,吖啶橙/溴化乙锭(AO/Eb)双荧光染色以及血管内皮细胞管腔样结构形成实验评价血管新生能力。结果:异甘草素和光甘草定均能显著抑制b16f1细胞和ECV304细胞增殖,且呈明显的剂量依赖性,但光甘草定对b16f1细胞的抑制率低于异甘草素。80μmol·L-1时,异甘草素与光甘草定的愈合面积分别为19.1%和27.2%,与对照组比较均有显著性差异(P细胞迁移和管腔形成能力。光甘草定对b16f1细胞迁移,MMP-2分泌与表达,以及对ECV304细胞官腔形成的抑制能力低于异甘草素。结论:异甘草素和光甘草定都均具有抗肿瘤转移活性,80μmol·L-1时,光甘草定抗肿瘤转移作用弱于异甘草素。

关键词：异甘草素光甘草定抗肿瘤转移 b16f1细胞 ECV304细胞

阳离子脂质体介导粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤细胞作瘤苗的研究

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江西医学院学报 2007年第5期47卷 22-25,51页

作者：刘金辉 Glenn Larsen 南昌大学医学院微生物学教研室 Depart ment of Preclinical R&D Genetics Institute1 Burtt RoadAndover MA01810 USA

目的本研究拟探讨采用阳离子脂质体介导的鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的b16f1细胞作为瘤苗的抗肿瘤效果。方法阳离子脂质体复合mGMCSf DNA转染b16f1细胞,ELISA法检测mGMCSf在b16f1中的表达。[3HTdR]掺入法分析b16f1分泌的mGM... 详细信息

目的本研究拟探讨采用阳离子脂质体介导的鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的b16f1细胞作为瘤苗的抗肿瘤效果。方法阳离子脂质体复合mGMCSf DNA转染b16f1细胞,ELISA法检测mGMCSf在b16f1中的表达。[3HTdR]掺入法分析b16f1分泌的mGMCSf生物活性。γ射线照射灭活基因修饰的b16f1细胞皮下免疫小鼠,ELISA分析小鼠血清中的mGMCSf水平。7 d后免疫鼠皮下攻击未修饰的b16f1细胞以检测瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤效果5。1Cr释放实验检测免疫鼠抗b16f1的特异CTL反应。结果阳离子脂质体介导mGMCSf基因转染b16f1细胞后,未经阳性克隆筛选,mGMCSf得到特异且具有生物学活性的表达。但表达逐步下降由第1天的(135.5±21.1)μg/L下降到第5d的(47.8±5.3)μg/L。随γ射线照射剂量的增加,mGMCSf的表达逐步降低,但仍具有生物学活性。γ射线照射的5×105基因修饰b16f1接种小鼠后,鼠血清中的mGMCSf水平在4 h时为(198.4±23.1)ng/L,攻击的b16f1细胞在接种瘤苗的小鼠体内的生长完全被抑制,51Cr释放实验结果显示该瘤苗在小鼠体内诱导了特异的CTL反应。结论本研究表明阳离子脂质体作为基因载体介导鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤b16f1细胞,作为瘤苗在小鼠体内可有效地激发抗肿瘤免疫。

关键词：粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子阳离子脂质体肿瘤疫苗 b16f1细胞基因转移