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***和***溶解性代谢产物对环境因子的响应

安全与环境学报 2018年第3期18卷 1112-1117页

作者：赵芝清郑静张震方蒋栋汤晨怡衢州学院化学与材料工程学院浙江衢州324000 浙江大学环境与资源学院杭州310058 浙江工商大学环境科学与工程学院杭州310018

为了一步明晰环境因子对微生物溶解性产物形成的影响,选取活性污泥中典型革兰氏阴性菌（***）和革兰氏阳性菌（***）作为研究对象,以蛋白质、腐殖酸和多糖表征微生物代谢产物（Soluble Microbial Products,SMP）,研究了培养时间、温度... 详细信息

为了一步明晰环境因子对微生物溶解性产物形成的影响,选取活性污泥中典型革兰氏阴性菌（***）和革兰氏阳性菌（***）作为研究对象,以蛋白质、腐殖酸和多糖表征微生物代谢产物（Soluble Microbial Products,SMP）,研究了培养时间、温度、盐度和阿莫西林对两株菌SMP形成特性的影响。结果表明：当培养时间为0-48h时,***和***溶解性代谢产物质量浓度在4 h时达到了最大,分别约为48 h的3.91倍和3.27倍。当温度下降时,***溶解性代谢产物中的多糖和腐殖酸分别在25℃和15℃出现了累积,而***产生的SMP仅在15℃出现了腐殖酸累积。当盐度为5-30 mg/L时,***和***产生的SMP质量浓度均先增加后减小,分别于盐度为5 g/L和10 g/L时达到最大,组分以腐殖酸为主。当阿莫西林质量浓度为0-3.0 mg/L时,***和***产生的SMP质量浓度均先增加后减小,分别于阿莫西林质量浓度为1.0mg/L和1.5 mg/L达到最大,组分以腐殖酸和多糖为主;然而当阿莫西林质量浓度为3.0 mg/L时,两菌株产生的SMP组分以多糖为主。可见,过短的停留时间、低温、高盐和较高质量浓度的阿莫西林都会诱导***和***产生更多的SMP,但它们之间存在一定的差异。

关键词：环境工程学 E.coli b.subtilis 溶解性微生物代谢产物形成特性环境因子

血卟啉衍生物——光照条件下***细胞内DNA和蛋白质交联的形成及其生物学意义

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科学通报 1987年第22期32卷 1738-1741页

作者：马玉琴于明珠宋学玲中国科学院生物物理研究所中国科学院生物物理研究所北京

血卟啉衍生物(简称Hpd)能敏化生物分子和整体细胞对可见光的效应。同时它又能被恶性肿瘤所摄取和滞留。所以在癌的诊断和治疗上是很有前途的光敏剂。关于Hpd杀伤癌细胞的光敏机制研究受到普遍重视。多数学者认为细胞的死亡是和细胞膜有... 详细信息

血卟啉衍生物(简称Hpd)能敏化生物分子和整体细胞对可见光的效应。同时它又能被恶性肿瘤所摄取和滞留。所以在癌的诊断和治疗上是很有前途的光敏剂。关于Hpd杀伤癌细胞的光敏机制研究受到普遍重视。多数学者认为细胞的死亡是和细胞膜有关,但并不排除

关键词：蛋白质光动力 b.subtilis DNA 交联细胞内生物学意义

棉花黄萎病拮抗细菌bacillus subtilis ZL2-70抗菌蛋白的理化性质和抑菌机理

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棉花学报 2017年第6期29卷 560-569页

作者：王奕丁姜婷婷王全新疆师范大学地理科学与旅游学院乌鲁木齐830045 河北农业大学生命科学学院河北保定071001

【目的】旨在研究棉花黄萎病拮抗细菌枯草芽孢杆菌bacillus subtilis ZL2-70抗菌蛋白的抑菌谱、理化性质以及抑菌机理,为棉花黄萎病生物农药的研制与开发奠定理论基础。【方法】采用抑菌圈法测定该抗菌蛋白的抑菌谱,以及温度、pH、无机... 详细信息

【目的】旨在研究棉花黄萎病拮抗细菌枯草芽孢杆菌bacillus subtilis ZL2-70抗菌蛋白的抑菌谱、理化性质以及抑菌机理,为棉花黄萎病生物农药的研制与开发奠定理论基础。【方法】采用抑菌圈法测定该抗菌蛋白的抑菌谱,以及温度、pH、无机离子、有机溶剂、蛋白酶对其稳定性的影响,并通过无菌小瓶等方法研究抗菌蛋白对大丽轮枝菌菌丝和孢子的抑制作用,测定了抗菌蛋白的纤维素酶和几丁质酶活力。【结果】棉花黄萎病拮抗细菌*** ZL2-70抗菌蛋白抑菌谱广,对19种植物病原菌表现出抑菌活性;该蛋白理化性质相对稳定,耐高温,在pH 5.0~10.0范围内抑菌活性较稳定,经EDTA处理后活性变化不大,对Fe3+敏感,对蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶不敏感;该抗菌蛋白对大丽轮枝菌的菌丝生长和孢子萌发有双重抑制作用,能使病原菌菌丝胞壁消融、原生质凝集渗漏、菌丝细胞泡囊化,并可抑制病菌孢子的萌发;抗菌蛋白具有纤维素酶和几丁质酶活性,且酶活力与抑菌活性有关。【结论】初步推断该抗菌蛋白通过多糖酶活力破坏大丽轮枝菌的细胞壁和抑制病原菌的孢子萌发而起到抑菌作用。

关键词：棉花黄萎病大丽轮枝菌拮抗细菌 b.subtilis ZL2-70 抗菌蛋白理化性质抑菌机理

枯草芽孢杆菌E1R-j产抗菌脂肽发酵条件的优化

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西北农业学报 2012年第7期21卷 54-60页

作者：杨洁姬婧媛康振生黄丽丽旱区作物逆境生物学国家重点实验室西北农林科技大学植物保护学院陕西杨凌712100

通过对bacillus subtilis E1R-j产脂肽物质的发酵条件的优化来提高脂肽物质产量,从而为工业化生产奠定基础。在Landy培养基中,采用单因素试验法确定对E1R-j菌株产脂肽物质的影响因素及水平,结合响应面法确定最佳发酵条件。结果表明,温... 详细信息

通过对bacillus subtilis E1R-j产脂肽物质的发酵条件的优化来提高脂肽物质产量,从而为工业化生产奠定基础。在Landy培养基中,采用单因素试验法确定对E1R-j菌株产脂肽物质的影响因素及水平,结合响应面法确定最佳发酵条件。结果表明,温度40℃、培养基初始pH 9.0、接种量3.0%、装液量50mL、转速200r/min为最佳发酵条件。在最佳发酵条件下培养,粗脂肽物质的质量浓度达1.39g/L,是原发酵条件下质量浓度0.55g/L的2倍多。优化后的培养条件提高了*** E1R-j产粗脂肽物质的量,表明响应面法是一种快速、有效、简单的优化方法。

关键词： b.subtilis E1R-j Landy培养基脂肽质量浓度抑菌活性

biocontrol and Its Mechanism of bacillus amyloliquefaciens and bacillus subtilis on soybean Phytophthora blight

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Biocontrol and Its Mechanism of Bacillus amyloliquefaciens a...

益生枯草芽孢杆菌MA139体外抑菌活性及其GFP标记研究

中国植物病理学会2019年学术年会

作者：李坤缘胡九龙刘冬 Wang Weiyan Liu Xiao Li Dandan 高智谋 College of plant protection Anhui Agricultural University Department of Horticulture and Landscape Anqing Vocational and Technical College

With the improper application of fungicides,Phytophthora sojae begins to develop resistance to fungicides,and biological control is one of the potential ways to control *** screened two strains of bacillus（bacillus amyloliquefaciens JDF3 and bacillus subtilis RSS-1）,which had an efficient inhibitory effect on *** could inhibit mycelial growth,the germination of cysts,and the swimming of motile *** elucidate the response of *** under the stress of *** and ***,and the molecular mechanism of biological control,comparative transcriptome analysis was *** analysis revealed that the expression gene of *** showed significant changes,and a total of 1 616 differentially expressed genes（DEGs） were *** participated in two major types of regulation,namely,"specificity" regulation and "common" *** might inhibit the growth of *** mainly by inhibiting the activity of ribosome.A pot experiment indicated that *** and *** enhanced the resistance of soybean to ***,and their control effects were 70.7% and65.5%,*** addition,*** fermentation broth could induce an active oxygen burst,NO production,callose deposition,and *** could also stimulate the system to develop the resistance of soybean by lignification and phytoalexin.

关键词： Phytophthora sojae bacillus amyloliquefaciens b.subtilis biocontrol

来源： cnki会议评论

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益生枯草芽孢杆菌MA139体外抑菌活性及其GFP标记研究

作者：赵志丹中南民族大学

学位级别：硕士

益生菌是一类能够维持宿主健康的活微生物，能够改善肠道微生态平衡、分泌抗性物质、和致病菌竞争定殖位点和营养等从而对宿主生长和健康起到有益的作用。然而人们对芽胞杆菌调控肠道微生态平衡的机制知之甚少。本研究以具有良好益生潜... 详细信息

益生菌是一类能够维持宿主健康的活微生物，能够改善肠道微生态平衡、分泌抗性物质、和致病菌竞争定殖位点和营养等从而对宿主生长和健康起到有益的作用。然而人们对芽胞杆菌调控肠道微生态平衡的机制知之甚少。本研究以具有良好益生潜力的枯草芽孢杆菌MA139（bacillus subtilisMA139）为研究对象，探讨了其在模拟肠道环境中的作用机理。在选取的体外模拟肠道环境——MRS培养基（pH6.5）中，在微耗氧条件下，通过b. subtilis MA139与病原菌E. coli K88和有益菌乳杆菌之间的共培养试验表明：（1）E. coli K88在混合培养的条件下，其活菌数量没有明显的下降趋势。（2）在培养的12h，b. subtilis MA139显著增加了L. salivarius G1-1在培养液中的活菌数量（P b. subtilis MA139对L. reuteriG8-5增殖的促进作用效果明显，尤其在6h和12h的时候，混合培养中，L. reuteriG8-5的数量比纯培养条件下分别增加0.42log和0.20log。在6h时，b. subtilisMA139的存在使培养液中的pH从5.2降低至5.0。因此，在MRS培养液中，*** MA139在微厌氧条件下只能对E. coli K88发挥微弱的抑菌作用;在微厌氧培养条件的前期，外源b. subtilis MA139的添加对两株乳酸杆菌均有一定程度上的促进作用，并能显著降低体系的pH值。在选取的体外模拟肠道环境——仔猪小肠液中，在微耗氧条件下，通过*** MA139与病原菌E. coli K88和有益菌乳杆菌之间的共培养试验表明：（1）在前段小肠液中，在共培养终点，b. subtilis MA139将E. coli K88活菌数量从9.47log降低至8.51log（P b. subtilis MA139未能表现出对E. coli K88的抑菌活性（P>0.05）;（2）在培养的48h和60h，b. subtilisMA139能够促进L. salivarius G1-1的活菌数的显著增加（P b. subtilisMA139在前段小肠液中对E. coli K88表现出一定的抑菌活性，b. subtilis MA139的芽孢在前段小肠液中对增加乳杆菌的活性具有一定的促进作用。为了进一步探讨b. subtilis MA139在动物胃肠道中的分布、定植及其抑菌活性，本试验采用GFP标记的方法分别标记了外源的b. subtilis MA139和病原性的E. coli K88。用标准的b. subtilis168菌株xylR基因的启动子和b. subtilisMA139rpsD基因的启动子分别替换质粒pGFP4412中蜡状芽孢杆菌4412启动子，从而构建了能在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中表达绿色荧光蛋白基因gfpmut3a的穿梭载体pGFP-xylR和pGFP-rpsD，通过限制性内切酶酶切、PCR等鉴定方法筛选出阳性克隆，并利用SDS-PAGE电泳检测GFP的基因在不同启动子诱导下的表达量。将三种携带gfp基因的质粒导入宿主菌b. subtilis MA139和E. coli K88中。筛选获得具有稳定发光表型的标记菌株E. coli K88-GFP，以及携带重组质粒的b. subtilis MA139的具有抗性的重组菌株b. subtilis MA139-GFP，并在荧光显微镜下能观察到有部分绿色荧光的菌体。构建的GFP标记菌株为进一步研究外源的b. subtilis MA139在胃肠道内对E. coli K88的抑菌机理奠定了基础。

关键词： b.subtilis MA139 乳酸杆菌 E.coli K88 共培养 GFP

土壤粘粒矿物与信号分子CSF的互作及其对bacillus subtilis自然转化的影响

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土壤粘粒矿物与信号分子CSF的互作及其对Bacillus subtilis自然转...

作者：刀国华华中农业大学

学位级别：硕士

以枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和土壤中常见的三种粘粒矿物(蒙脱石、高岭石和针铁矿)为研究对象,通过构建可靠的转化频率检测质粒pHTG、引入胞外感受态调控因子CSF,研究它们与三种矿物的相互作用以及b. subtilis自然转化的情况。... 详细信息

以枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和土壤中常见的三种粘粒矿物(蒙脱石、高岭石和针铁矿)为研究对象,通过构建可靠的转化频率检测质粒pHTG、引入胞外感受态调控因子CSF,研究它们与三种矿物的相互作用以及b. subtilis自然转化的情况。获得如下主要结果：1.构建转化效率检测质粒pHTG。将b. subtilis中高效表达的绿色荧光蛋白基因gfpmut3a和组成型强启动子P43重组到pHT304质粒上,使pHTG质粒具备荧光筛选与抗性筛选双重标记,两种筛选方式的组合可使转化子的获得与计数更加的准确可靠。2.运用化学吸附方法与紫外微量DNA浓度检测技术,系统的探讨了恒电荷土壤活性颗粒对质粒pHTG吸附及固定的特点。不同矿物表面对质粒pHTG的最大吸附量顺序为：针铁矿>高岭石>蒙脱石。吸附量随着pH从5.0增加到8.0而降低。在15℃至37℃的范围内,温度对质粒的吸附没有显著的影响。电解质的存在有助于矿物对质粒pHTG的吸附,且二价阳离子要比一价阳离子更能促进吸附。3.通过HPLC.微量热分析技术等研究了b. subtilis感受态调节因子CSF与三种矿物的吸附与解吸特点,系统的阐述了信号分子CSF与矿物相互作用的量变与活性改变的情况。矿物对信号分子CSF的吸附符合Langmuir方程(R2>0.96),其最大吸附量顺序为：高岭石>蒙脱石>针铁矿。吸附过程是放热反应,故当温度从20℃上升到40℃时,三种矿物的吸附量有所下降。Mg2+比K+更能促进信号分子CSF在矿物表面的吸附。蒙脱石、高岭石和针铁矿表面信号分子用去离子水和Tris-HCl的洗脱率分别为：75.3%～81.84%,80.44%～92.47%,92.75%～94.99%,说明蒙脱石对信号分子CSF有较强的亲和力。矿物与信号分子CSF的相互作用,会降低CSF的生物活性,且高岭石的作用最显著,蒙脱石次之,针铁矿作用最小。4.研究了不同矿物种类以及不同矿物浓度存在的条件对b. subtilis发生自然转化的影响。矿物的存在会导致b. subtilis转化效率下降,随着体系中矿物浓度的增加,转化效率下降得越明显。当矿物浓度从0 mg/mL增加到8 mg/mL时,转化效率降低两个数量级。其中蒙脱石的影响最大,而针铁矿的影响较小。上述结果有助于我们了解信号分子CSF在土壤环境中的命运和外部因素对b. subtilis发生自然转化的影响。

关键词： b.subtilis 矿物质粒 CSF 吸附解吸自然转化

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枯草芽孢杆菌lipA基因表达的研究

枯草芽孢杆菌lipA基因表达的研究

作者：白俊琴天津大学

学位级别：硕士

b. subtilis的lipA基因编码胞外脂肪酶,是已知最小的纯脂肪酶之一,具有优良的酶学特性,在商业和科研领域有较大的应用前景。本文研究了lipA基因表达元件的基本特性,对于通过基因修饰实现b. subtilis lipA基因高水平表达,构建高产脂肪酶... 详细信息

b. subtilis的lipA基因编码胞外脂肪酶,是已知最小的纯脂肪酶之一,具有优良的酶学特性,在商业和科研领域有较大的应用前景。本文研究了lipA基因表达元件的基本特性,对于通过基因修饰实现b. subtilis lipA基因高水平表达,构建高产脂肪酶的工程菌株进行了初步的探索。对b. subtilis 168 lipA基因的启动子和mRNA前导区二级结构进行了软件预测,结果显示lipA基因启动子位于结构基因上游-92bp--125bp之间,而不是原来认为的在-33bp--64bp之间。转录起始位点在结构基因上游-85bp处,mRNA前导区为85nt。通过对lipA基因表达元件的分析,推断导致lipA基因低水平表达的主要原因有两个:一是弱启动子降低转录起始效率;二是mRNA二级结构妨碍核糖体对RbS序列的识别,影响翻译效率。为了使lipA基因高水平表达,制定了lipA基因启动子和mRNA前导区修饰方案,即保留原有的启动子,在原有启动子的下游插入一个与共同序列相一致的强启动子,用已知具有稳定子作用的b. subtilis aprE基因的mRNA前导区编码序列替换lipA基因原有的mRNA前导区编码序列,使修饰后的lipA基因具有双启动子,并使mRNA的半衰期延长。本文对实验室保藏的b. subtilis SH-2和Db104菌株lipA结构基因上游区域进行了测序,发现其序列与Gene bank中b. subtilis 168的序列完全一致。从而确定本研究的出发菌株为b. subtilis Db104,而不使用SH-2菌株。通过重叠PCR法拼接重组片段Lu-e-Ld。用Lu-e-Ld片段对b. subtilis Db104原生质体进行转化,实验结果表明,即使使用高浓度的线性DNA片段也难以获得转化子。推测原因是处于原生质体状态的b. subtilis细胞缺乏进行基因重组的酶和生理条件。用带有EcoRⅠ切点的LE片段与质粒pUC18相连,构建了重组质粒pUC18-LE;用该质粒转化b. subtilis Db104感受态细胞,筛选得到了具有红霉素抗性的lipA基因缺陷型菌株b. subtilis b1。经表型和PCR验证,证明b. subtilis b1的特点符合预期。

关键词： lipA基因启动子重叠PCR 基因重组 b.subtilis

土壤组分影响bacillus subtilis自然转化的内在机制初探

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土壤组分影响Bacillus subtilis自然转化的内在机制初探

作者：陈金秀华中农业大学

学位级别：硕士

为有效评估转基因生物释放到土壤环境中的生态安全性,需要全面了解土壤细菌发生自然转化的可能性。本文以土壤典型细菌枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和常见的三种粘粒矿物(高岭石、蒙脱石和针铁矿)及不同比例的矿物-腐殖酸复合体为材... 详细信息

为有效评估转基因生物释放到土壤环境中的生态安全性,需要全面了解土壤细菌发生自然转化的可能性。本文以土壤典型细菌枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和常见的三种粘粒矿物(高岭石、蒙脱石和针铁矿)及不同比例的矿物-腐殖酸复合体为材料,同时引入***重要的感受态调控信号分子CSF(competence and sporulation stimulating factor),探究了三种粘粒矿物及其与CSF的互作对***自然转化的影响,结合矿物表面固定态质粒的转化能力和矿物对细菌代谢活性的影响结果,解释矿物影响***自然转化的可能内在机制。并初步探究了不同比例的矿物-腐殖酸复合体及与CSF互作对***的自然转化效率的影响,分析腐殖酸对***自然转化的作用。获得如下主要结果:1.制备了三种矿物表面吸附态质粒pHTG,与游离态质粒同时转化***细胞。发现吸附在三种矿物表面的质粒pHTG仍然具有转化***的能力,与游离态质粒相比转化效率降低。固定在针铁矿表面的质粒转化效率下降得最多,而蒙脱石和高岭石固定态质粒的转化效率下降得较少,表明针铁矿结合的质粒的转化活性最低。2.研究了不类型和浓度的矿物对***的自然转化的影响,同时比较了CSF与三种不同矿物相互作用后***的自然转化情况。发现不同类型及浓度的矿物对***的转化有不同的影响,较低浓度矿物条件下细菌的转化能力由高到低的顺序是高岭石>针铁矿>蒙脱石,而高浓度条件下的顺序是针铁矿>蒙脱石>高岭石。CSF与不同类型及浓度的矿物相互作用后对***的自然转化效率的影响也不同,是因为矿物可通过影响信号分子CSF的生物有效性进而影响***的转化。本研究认为当矿物浓度较低时,***转化受到矿物对质粒DNA吸附和感受态形成的影响,而在较高浓度矿物存在条件下,矿物对***转化的影响更多的是矿物与胞外信号分子互作对细菌感受态的影响,表明土壤颗粒与细菌感受态形成相关因子的互作是影响细菌自然转化的重要因素。3.研究了三种矿物不同比例的矿物-腐殖酸复合体及其与CSF相互作用对***自然转化的影响,初步分析了腐殖酸对***自然转化的作用。发现与纯矿物相比,三种矿物与腐殖酸结合后对***自然转化都有不同程度的促进作用,促进程度受到腐殖酸含量的影响。上述结果有助于我们了解土壤组分对***自然转化效率的影响,为评估工程菌在环境中应用的生态风险提供理论参考。

关键词：矿物矿物-腐殖酸复合体 b.subtilis CSF 自然转化