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基于分子对接和QSAR方法预测b-raf Ⅱ型抑制剂活性

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物理化学学报 2015年第11期31卷 2191-2206页

作者：刘海春卢帅冉挺张艳敏徐金星熊潇徐安阳陆涛陈亚东中国药科大学理学院南京211198 中国药科大学、天然药物活性组分与药效国家重点实验室南京210009

b-raf激酶在促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中起着重要作用,已被确定为癌症治疗非常有吸引力的靶标.新型高效b-raf抑制剂的开发成为癌症治疗的一个热门研究领域.本文以结构多样的b-raf II型抑制剂为研究对象,联合应用分子对... 详细信息

b-raf激酶在促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中起着重要作用,已被确定为癌症治疗非常有吸引力的靶标.新型高效b-raf抑制剂的开发成为癌症治疗的一个热门研究领域.本文以结构多样的b-raf II型抑制剂为研究对象,联合应用分子对接和定量构效关系(QSAR)模型研究其定量构效关系去探讨抑制活性的起源.两个主题作为研究重点:生物活性构象和描述符.首先对分子对接方法(Glide、Gold、Ligand Fit、Cdocker和Libdock)进行准确性评价,后将研究的对象分子对接到b-raf活性位点并获得生物活性构象.基于准确的对接结果,计算得到16个打分评价函数和21个能量描述符,以此构建定量构效关系模型.QSAR结果表明模型具有高度精确的拟合和强的预测能力(模型M1:r2=0.852,=0.790,=0.864;模型M2:r2=0.738,=0.812,=0.8605).同时探讨了对抑制活性有重要影响的描述符,结果表明打分评价函数(G_Score,-ECD,Dock_Score,PMF)与能量描述符(S(hb_ext),DE(int),Emodel)对抑制活性影响非常大.通过虚拟筛选和QSAR模型理论预测,一些新的具有潜在抑制活性的化合物作为b-raf II型抑制剂被获得.上述信息对于进一步设计新颖高效的b-raf II型抑制剂提供了有用的指导.

关键词： b-raf Ⅱ型抑制剂分子对接打分评价函数对接能量描述符定量构效关系模型

白血病细胞系中b-raf与raf-1的表达及活性

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 533-535页

作者：张静刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 b- raf和 raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 b- raf和 raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 raf- 1及 b- raf的激酶活性。结果 raf- 1在白血病细胞... 详细信息

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 b- raf和 raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 b- raf和 raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 raf- 1及 b- raf的激酶活性。结果 raf- 1在白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中均有表达 ,表达水平基本相似，其激酶活性较低； b- raf仅在白血病细胞中表达，且在 Jurkat和 K562细胞中的表达水平较高，其激酶活性也较高。结论在白血病细胞中， b- raf的高表达及活化可能是白血病发病的机制之一。

关键词： raf-1 b-raf 激酶活性白血病细胞

甲状腺乳头状癌中b-raf基因V600E突变的检测方法对比分析

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临床与实验病理学杂志 2017年第7期33卷 815-816页

作者：阳宇杜晓华刘影郑细闰郑广娟广东省中医院病理科广州510120

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，女性多于男性，约90％甲状腺癌为甲状腺乳头状癌（papillary thyroid careinoma,PTC）。近年，甲状腺癌的发病率呈上升趋势，b—raf基因与PTC密切相关，最多见的突变位点为V600E，是目前分析和检测... 详细信息

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，女性多于男性，约90％甲状腺癌为甲状腺乳头状癌（papillary thyroid careinoma,PTC）。近年，甲状腺癌的发病率呈上升趋势，b—raf基因与PTC密切相关，最多见的突变位点为V600E，是目前分析和检测的热点。本文回顾性分析136例PTC的b—raf基因V600E突变，并采用免疫组化Ventana benchMark法和***法进行检测，分析两种方法的一致性，

关键词：甲状腺肿瘤乳头状癌 b-raf V600E

b-raf、MEK、ERK在反流性食管炎中的表达及意义

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B-Raf、MEK、ERK在反流性食管炎中的表达及意义

作者：赵静遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:检测b-raf、MEK、ERK在反流性食管炎及barrett食管组织中的表达,探讨ERK信号通道在反流性食管炎中的作用。方法:收集反流性食管炎标本40例、barrett食管标本39例,正常食管粘膜组织标本8例。用免疫组化法分别检测b-raf、MEK、ERK蛋... 详细信息

目的:检测b-raf、MEK、ERK在反流性食管炎及barrett食管组织中的表达,探讨ERK信号通道在反流性食管炎中的作用。方法:收集反流性食管炎标本40例、barrett食管标本39例,正常食管粘膜组织标本8例。用免疫组化法分别检测b-raf、MEK、ERK蛋白在上述3组食管组织的表达情况。采用实时荧光定量PCR技术检测b-raf、MEK、ERK在17例反流性食管炎及其相邻的正常食管组织中的表达水平。比较b-raf、MEK、ERK三者之间的相关性。结果:1.纳入79名反流性食管炎及barrett食管患者,平均年龄54.96±15.08岁,其中女性患者30(38.0%)例,男性49(62.0%)例,Hp感染13(16.5%)例。症状主要表现为腹胀或腹痛31人(39.2%),烧心或反流27人(34.2%),吞咽困难或梗阻感10人(12.7%),胸痛3人(3.8%),其它8人(10.1%)。2.结果显示b-raf、MEK、ERK在正常食管粘膜组织、反流性食管炎及barrett食管中均有表达,但在正常食管粘膜组织中呈极低表达,主要表达于细胞胞浆。在正常食管粘膜组织、反流性食管炎及barrett食管中其表达量呈逐渐升高趋势(Pb-raf、MEK、ERK在反流性食管炎组织中表达水平上调,与相邻的正常食管组织比较有显著性差异(Pb-raf在反流性食管炎、barrett食管组织表达与患者年龄大小、性别差异、吸烟、饮酒、幽门螺旋杆菌(Hp)感染及反流性食管炎分级均无关(P>0.05);MEK与年龄大小、性别差异、幽门螺旋杆菌感染及反流性食管炎分级无关(P>0.05),但与吸烟、饮酒相关(P0.05),但与吸烟、饮酒及反流性食管炎分级有关(Pbarrett食管患者好发于中年男性,以腹痛或腹胀,反酸或烧心等症状为主要临床表现,其发生可能与吸烟、饮酒有关。2.在正常食管黏膜组织、反流性食管炎及barrett食管中,b-raf、MEK、ERK的表达呈上升趋势,说明ERK信号通道可能参与反流性食管炎的发生,尤其在barrett食管的发生过程中可能发挥着重要的作用。3.b-raf、MEK、ERK m RNA在反流性食管炎中的表达均高于正常食管粘膜组织,它们的异常表达可能参与了反流性食管炎的发生。

关键词：反流性食管炎 barrett食管 b-raf MEK ERK

基于基因编辑技术构建b-raf突变型结肠癌细胞株并初步探究穿心莲内酯抗肿瘤的可能机制

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基于基因编辑技术构建B-Raf突变型结肠癌细胞株并初步探究穿心莲...

作者：张毛雪江苏大学

学位级别：硕士

研究目的:结肠癌是常见的恶性肿瘤之一,虽然及时诊断和适度治疗,可以有较高的生存率,但患者仍然面对复发、转移和耐药等挑战。穿心莲内酯（Andrographolide,Andro）是从药用植物穿心莲经分离提取纯化而获得的一种二萜内酯,是穿心莲的主... 详细信息

研究目的:结肠癌是常见的恶性肿瘤之一,虽然及时诊断和适度治疗,可以有较高的生存率,但患者仍然面对复发、转移和耐药等挑战。穿心莲内酯（Andrographolide,Andro）是从药用植物穿心莲经分离提取纯化而获得的一种二萜内酯,是穿心莲的主要有效成分,具有多种生物活性,包括抗菌、抗炎、抗感染、抗肿瘤等。前期研究结果显示,Andro可以抑制SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,但其具体作用机制尚未阐明。b-raf基因是一种重要的原癌基因,位于人类7号染色体的长臂上,该基因V600E的突变是最常见的,发生于多种肿瘤中。b-raf V600E突变能够引起Ras/raf/MEK/ERK信号通路的持续激活,是结肠癌发生和发展的重要原因之一。本研究通过基因编辑技术构建b-raf V600E突变的SW480细胞株并初步探讨Andro抗肿瘤的可能机制。研究方法:第一部分,本利用分子克隆技术构建AAVS1-all-in-one-CRISPR质粒,脂质体将识别并切割AAVS1基因组序列的ZFN和TALEN质粒以及AAVS1-all-in-one-CRISPR质粒共转染入HEK-293T细胞。使用嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞后,利用杀稻瘟菌素S筛选、红色荧光检测、Cas9 Western blot以及基因组PCR鉴定等方法获得CRISPR-Cas9基因编辑报道系统完整整合入AAVS1安全港的稳定细胞株。利用脂质体转染技术将EGFP修复模版单链DNA及EGFP sgRNA转染入上述细胞株,对失去荧光的EGFP进行基因编辑,荧光显微镜荧光检测EGFP的表达。第二部分,设计针对b-raf V600E基因的sgRNA和b-raf V600E供体修复模板转染至Cas9定点整合AAVS1位点的SW480细胞,同时采用以AAV6病毒作为b-raf突变供体修复模板的递送载体,用化学修饰的单引导RNA（sgRNA）和本实验表达纯化的Cas9蛋白共同转染至SW480细胞。通过PCR及PCR产物测序检测b-raf V600E基因的突变。第三部分,通过MTT实验法检测Andro抑制对野生型和突变型SW480细胞的增殖作用,采用半数抑制计量(IC)的Andro进行伤口愈合实验,比较Andro对野生型和突变型SW480细胞的转移和侵袭能力的影响。最后通过Western blot检测b-raf蛋白的表达情况,探究Andro抗肠癌的可能机制。研究结果:第一部分,获得同时具有嘌呤霉素和杀稻瘟菌素S抗性以及表达红色荧光蛋白的单克隆细胞,Western blot检测了Cas9蛋白的成功表达,基因组PCR鉴定目的基因成功整合入基因组AAVS1位点。Cas9介导的EGFP基因编辑后,荧光显微镜检测到细胞恢复绿色荧光,即Cas9具有编辑功能,成功建立基因编辑系统。第二部分,设计针对b-raf V600E基因的sgRNA,引导Cas9进行定点切割,并给予b-raf V600E供体修复模板,通过细胞基因组DNA提取、PCR扩增靶基因的DNA片段及PCR产物测序,最终获得b-raf V600E突变的SW480细胞株。第三部分,MTT结果表明,Andro抑制野生型和b-raf V600E突变型SW480细胞活力的IC值分别为44.6μM和36.5μM。伤口愈合实验结果显示,Andro对b-raf V600E突变的SW480细胞的迁移有更明显的抑制作用。Western blot结果显示,Andro可以抑制b-raf V600E突变细胞中b-raf蛋白表达的升高。研究结论:利用基因编辑术构建的b-raf V600E突变SW480细胞株可用于抗肿瘤药物筛选和抗肿瘤机制的研究。Andro可抑制野生型和突变型SW480结肠癌细胞的增殖和转移侵袭能力,且对突变型细胞株的抑制作用更强,提示Andro抑制结肠癌的机制可能与降低b-raf蛋白表达水平有关。研究结果为探讨Andro治疗肠癌的新机制奠定了基础,也有助于靶向b-raf V600E突变研发新型抗肿瘤药物。

关键词：结肠癌基因编辑肿瘤细胞模型 b-raf 穿心莲内酯

非小细胞肺癌K-RAS、b-raf、PI3K和PTEN蛋白的表达及病理意义

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非小细胞肺癌K-RAS、B-RAF、PI3K和PTEN蛋白的表达及病理意义

作者：韦鸿大连医科大学

学位级别：硕士

目的：肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年新发肺癌患者超过100万，其中80%以上为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。目前，手术切除是治疗非小细胞肺癌的首选方法，但很多患者由于确诊时肿瘤已发展到中... 详细信息

目的：肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年新发肺癌患者超过100万，其中80%以上为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。目前，手术切除是治疗非小细胞肺癌的首选方法，但很多患者由于确诊时肿瘤已发展到中晚期而失去了手术时机，只能通过特异性较差、对身体损伤较大的放化疗来延缓生命。近年来，依据患者肿瘤特点进行的个体化治疗，特别是以分子靶向药物酪氨酸激酶受体抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)为代表的分子靶向药在治疗携EGFR突变的NSCLC患者中取得的显著疗效备受关注。然而，原发或继发耐药仍是导致靶向药TKI治疗失败的主要原因。目前认为，NSCLC发生TKI耐药的原因主要是EGFR转导通路下游分子自发激活致使肿瘤细胞在EGFR处于抑制状态下仍能持续增殖。EGFR下游信号转导通路主要有RAS/raf/MEK/ERK和PI3K/AKT两条。研究发现NSCLC肿瘤细胞的K-RAS、b-raf或PI3K基因常有激活性突变，而这些突变的产生常是肿瘤耐药的标志，但目前有关这些基因的编码蛋白在NSCLC的表达状况及表达与耐药关系的报告较少。PTEN的功能是抑制PI3K/AKT信号转导通路的活性，NSCLC亦较常有其表达缺失。了解这些蛋白在NSCLC中的表达将可能有助于推测肿瘤对TKI的敏感性，即患者的受益性。本文检测K-RAS、b-raf、PI3K及PTEN编码蛋白在NSCLC中的表达状况，通过分析它们的表达与NSCLC患者临床病理参数的关系及它们表达的相互关系，探讨这些蛋白表达的病理意义，并希望能为筛选TKI治疗敏感人群提供一点帮助。方法：收集2007年-2009年大连医科大学附属医院NSCLC标本119例，并选择其中的26例癌旁组织作为对照。用免疫组化的方法检测K-RAS、b-raf、PI3K和PTEN蛋白在NSCLC及其癌旁组织的表达状况，并分析蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟史及肿瘤的淋巴结转移、组织病理类型、分化程度的相关关系以及肿瘤组织各蛋白表达的相互关系。用SPSS统计软件进行Chi-square检验和Spearman相关分析，结果均以P＜0.05为统计学具有显著意义。结果：K-RAS蛋白表达阳性率在肺癌组为40.3%，在癌旁组为42.3%，二者间无显著性差异(P>0.05)，但同病例癌与癌旁的K-RAS蛋白表达显著正相关(r=0.456, P0.05)。 b-raf蛋白表达阳性率在肺癌组为26.1%，在癌旁组为26.9%，二者间无显著性差异(P>0.05)，且同病例癌与癌旁的b-raf蛋白表达亦无显著相关关系(r=0.079, P>0.05)。肺癌组，b-raf蛋白表达阳性率在有吸烟史患者为12.2%，但在无吸烟史患者为33.3%，二者间有显著性差异(Pb-raf蛋白表达与患者的性别、年龄均无显著相关关系(P>0.05)。 PI3K蛋白表达阳性率在肺癌组为39.5%，在癌旁组为7.7%，二者间有显著性差异(P0.05)。肺癌组，PI3K蛋白表达阳性率在腺癌为33.3%，在鳞癌为54.5%，二者间有显著性差异(P0.05)。 PTEN蛋白表达阳性率在肺癌组为54.6%，在癌旁组为65.4%，二者间无显著性差异(P>0.05)，但同病例癌与癌旁的PTEN蛋白表达显著正相关(r=0.566,P0.05)。 NSCLC肿瘤组织中，K-RAS蛋白表达与b-raf蛋白表达无显著相关关系(r=-0.200, P>0.05);K-RAS蛋白表达与PI3K蛋白表达呈显著正相关关系(r=0.212,P0.05);PI3K蛋白表达与b-raf蛋白表达无显著相关关系(r=-0.010, P>0.05)。结论： 1、有K-RAS蛋白表达的NSCLC肿瘤，其癌旁组织亦常有该蛋白表达;2、在不吸烟NSCLC患者的无淋巴结转移及组织学类型为低分化鳞癌

关键词：非小细胞肺癌 K-RAS b-raf PI3K PTEN

幽门螺杆菌CagA通过b-raf和JNK2调节原癌蛋白CIP2A表达及其细胞生物学作用研究

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中国病原生物学杂志 2017年第12期12卷 1148-1151,1156页

作者：张亚云徐智渊赵大鹏王玉焦凤萍杨庆玺庄东明李晓霞孙铮赵英会郑州大学第一附属医院麻醉科河南郑州450052 泰山医学院病原生物学教研室泰山医学院附属医院检验科泰山医学院公共卫生学院山东省泰山疗养院内科泰山医学院第二临床医学院

目的了解幽门螺杆菌CagA上调CIP2A表达的分子机制。方法培养AGS细胞和GES-1细胞,一部分细胞分别转染CagA阳性质粒WT-cagA和阴性对照质粒pcDNA3.1;另一部分细胞用b-raf和JNK2信号抑制剂作用,然后分别转染质粒WT-cagA和质粒pcDNA3.1,Weste... 详细信息

目的了解幽门螺杆菌CagA上调CIP2A表达的分子机制。方法培养AGS细胞和GES-1细胞,一部分细胞分别转染CagA阳性质粒WT-cagA和阴性对照质粒pcDNA3.1;另一部分细胞用b-raf和JNK2信号抑制剂作用,然后分别转染质粒WT-cagA和质粒pcDNA3.1,Western blot检测CIP2A表达,细胞克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞迁移试验检测细胞迁移能力结果 AGS细胞和GES-1细胞转染CagA阳性质粒WT-cagA后CIP2A表达量增多;细胞经b-raf和JNK2的信号抑制剂作用后转染CagA阳性质粒WT-cagA,其CIP2A表达量比仅转染质粒WT-cagA的细胞表达量少,细胞的克隆数减少,细胞迁移能力降低。结论幽门螺杆菌CagA进入细胞通过b-raf和JNK2及其参与的信号途径调节原癌蛋白CIP2A的表达,进而影响细胞的克隆形成能力和迁移能力。

关键词：幽门螺杆菌胃癌 CagA CIP2A b-raf JNK2

HSP90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭能力及b-raf表达的影响研究

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HSP90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭能力及B-RAF...

作者：蔡志华福建医科大学

学位级别：硕士

【目的】研究HSP90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC—7901细胞增殖、侵袭能力及b-raf表达的影响,探讨HSP90在胃癌增殖、凋亡及侵袭转移中的作用及分子机制。【方法】1.以不同浓度的格尔德霉素(geldanamycim,GA)(0.20μmol/L、0.40μmol/L、0... 详细信息

【目的】研究HSP90抑制剂格尔德霉素对胃癌SGC—7901细胞增殖、侵袭能力及b-raf表达的影响,探讨HSP90在胃癌增殖、凋亡及侵袭转移中的作用及分子机制。【方法】1.以不同浓度的格尔德霉素(geldanamycim,GA)(0.20μmol/L、0.40μmol/L、0.80μmol/L、1.60μmol/L、3.20μmol/L)作用于体外培养的人胃癌SGC—7901细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态的变化,应用直接细胞计数法和四氮唑蓝比色法(MTT法)描绘细胞生长曲线,检测GA对人胃癌SGC—7901细胞的抑制增殖作用及其量效和时效关系。应用原位细胞凋亡检测(TUNEL法)观察诱导人胃癌SGC—7901细胞的凋亡表现。2.应用Transwell小室检测GA对人胃癌SGC—7901细胞侵袭及迁移能力的影响。3.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GA作用下人胃癌SGC—7901细胞中b-raf mRNA及b-raf蛋白的表达状况。【结果】1、正常对照组的人胃癌SGC—7901细胞呈良好的贴壁生长状态,而经GA处理后的人胃癌SGC—7901细胞形态则发生了显著变化:泡化、扭曲、固缩、脱离贴壁生长;GA能明显抑制体外培养的人胃癌SGC—7901细胞增殖,其细胞增殖抑制率随GA浓度增高和时间延长而增大。并呈现明显量效和时效关系。GA(1.2μmol/L)能有效诱导人胃癌SGC—7901细胞的凋亡。2.用GA(0.6μmol/L)处理48h后人胃癌SGC—7901细胞的侵袭和迁移能力有明显下降,同正常对照组相比有显著差异(Pb-raf mRNA表达有明显的下降。同正常对照组相比有显著差异(Pb-raf mRNA的表达。

关键词： HSP90抑制剂格尔德霉素胃癌增殖凋亡侵袭 b-raf

乳腺癌及癌前病变中RASSF1A基因甲基化及RASSF1A、b-raf蛋白表达研究

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乳腺癌及癌前病变中RASSF1A基因甲基化及RASSF1A、B-RAF蛋白表达...

作者：秦艳山西医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:乳腺癌是威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一,其发病率有逐年增高的趋势。目前,临床上对于乳腺癌的治疗仍是以传统的手术切除为主要手段,术后的放疗、化疗及内分泌治疗只为其辅助手段,虽然此种治疗策略使患者的生存率得以显著改... 详细信息

背景和目的:乳腺癌是威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一,其发病率有逐年增高的趋势。目前,临床上对于乳腺癌的治疗仍是以传统的手术切除为主要手段,术后的放疗、化疗及内分泌治疗只为其辅助手段,虽然此种治疗策略使患者的生存率得以显著改善,但患者远期的生活质量却很受影响。因此,发现一种早期的分子标记物,并配以适当合理的治疗方法,将乳腺癌的危害性降到最低,则显得尤为迫切。本研究拟对乳腺癌及癌前病变中RASSF1A基因启动子区CpG岛超甲基化情况及其与b-raf蛋白表达情况进行检测,分析它们与乳腺癌早期诊断及治疗的关系及临床意义。方法:收集山西医科大学第一医院病理科2005年007年乳腺癌及癌前病变的术后冻存标本,其中良性增生标本20例（单纯性增生组织4例,纤维腺瘤组织16例）,不典型增生组织10例,原位癌组织10例,原发性浸润性乳腺癌组织标本60例及相应癌旁组织20例,均经常规HE染色确定诊断;采用甲基化特异性PCR（MSP）检测上述组织中RASSF1A基因启动子区超甲基化状态;应用Western-blot方法检测上述组织中RASSF1A和b-raf蛋白表达情况。并用SPSS 11.5软件进行统计学分析。结果:1. RASSF1A基因在良性乳腺增生组织与癌旁对照组织中甲基化频率为0;不典型增生组织甲基化频率为20.0%,随着异常增生程度的加剧,呈现逐步加强趋势,但轻、中、重度间变化趋势不明显（P>0.05）;乳腺原位癌组织甲基化频率为为40.0%,与不典型增生组织相比,差异不明显（P>0.05）。2.浸润性乳腺癌组织中,RASSF1A基因甲基化频率61.7%,较癌旁组织、良性增生组织及不典型增生组织明显升高（P0.05）。4. RASSF1A蛋白表达在癌旁组织、良性乳腺增生组织、不典型增生及原位癌组织中表达率为100%、100%、80.0%、80.0%;乳腺癌组织中,表达缺失率为36.7%,在肿瘤分级及临床分期间差异具有显著性（Pb-raf蛋白仅在乳腺癌Ⅱ级、Ⅲ级组织中有所表达,阳性率为18.3%,肿瘤分级间差异具有显著性（Pb-raf蛋白与RASSF1A基因甲基化及其蛋白表达间均无相关性（P>0.05）。结论: ***实验结果显示,抑癌基因RASSF1A在乳腺癌前病变到浸润性癌的发生发展过程中的基因启动子甲基化发生水平呈进行性上调,提示RASSF1A基因启动子高甲基化可能参与乳腺癌的发生、发展。有望成为监测乳腺组织病理变化的有效分子标记物。2. Western blot实验结果显示,抑癌基因RASSF1A在乳腺癌前病变到乳腺癌的发生发展过程中蛋白表达水平呈进行性下调,说明乳腺癌的发生、发展与RASSF1A基因的表达沉默可能有关。3. RASSF1A基因超甲基化与其蛋白表达相关,提示超甲基化参与了乳腺癌的进展,可能是导致RASSF1A基因表达下调的机制之一。4. b-raf蛋白在分化较低的乳腺癌组织（Ⅱ级、Ⅲ级）有较高水平的表达,其表达与乳腺癌分级间差异具有统计学意义（Pb-raf的表达量呈升高趋势,有助于乳腺肿瘤的临床病理诊断。5. RASSF1A基因超甲基化及其蛋白表达与b-raf蛋白表达间均无统计学意义（P>0.05）,在乳腺肿瘤形成的过程中两基因可能独立的发挥作用。

关键词：乳腺癌 RASSF1A b-raf 甲基化蛋白表达