检索结果-南通市图书馆

霍乱毒素b亚单位与胰岛素b链融合基因的克隆及原核表达分析

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中国生物工程杂志 2005年第4期25卷 56-61页

作者：陈丽欧阳凤秀钱炳俊任宏王强姜庆五王玉炯刘静波梁婉琪潘爱虎宁夏大学生命科学学院银川750021 复旦大学公共卫生学院上海200032 复旦大学生命科学学院上海200433 南京大学生命科学学院南京210093 上海市农业科学院农业生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

构建了霍乱毒素b亚单位(cholera toxin b subunit,CTb)与胰岛素(insulin)b链的融合基因 CTb-INSb,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIb;并将该质粒转入大肠杆菌菌株bL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后... 详细信息

构建了霍乱毒素b亚单位(cholera toxin b subunit,CTb)与胰岛素(insulin)b链的融合基因 CTb-INSb,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIb;并将该质粒转入大肠杆菌菌株bL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15％SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的 30％。含CTb-INSb重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Western blotting分析结果显示CTb-INSb可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素b亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTb-INSb在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTb五聚体的高级结构,具有生物活性。

关键词：霍乱毒素b亚单位融合基因胰岛素表达分析 b链 SDS-PAGE Western 原核大肠杆菌分析结果神经节苷脂表达载体基因克隆重组质粒融合蛋白表达产物 IPTG 重组菌株重组蛋白特异结合高级结构生物活性分析表分子量

bALb/c小鼠免疫重组相思子毒素b链蛋白的免疫应答

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中国免疫学杂志 2017年第12期33卷 1824-1827页

作者：王俊虹武佳魏茂提天津市职业与环境危害防治重点实验室天津300309 武警后勤学院部队流行病学和统计教研室天津300309

目的:评价重组相思子毒素b链蛋白(r ATb)免疫雌性bALb/c小鼠的免疫效果,并初步探讨其免疫机制。方法:以r ATb为免疫原,腹腔免疫雌性bALb/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中Ig G、Ig G1、Ig G2a,流式细胞技术检测IFN-γ、IL-4,并进行天... 详细信息

目的:评价重组相思子毒素b链蛋白(r ATb)免疫雌性bALb/c小鼠的免疫效果,并初步探讨其免疫机制。方法:以r ATb为免疫原,腹腔免疫雌性bALb/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中Ig G、Ig G1、Ig G2a,流式细胞技术检测IFN-γ、IL-4,并进行天然毒素攻毒实验和体外中和实验。结果:血清Ig G、Ig G1效价达到1∶106以上,且攻毒后产生二次免疫应答,与PbS对照组差别有统计学意义(PbS组差异无统计学意义,而IL-4的表达量显著提高(Pb可以抵抗最高剂量为5×LD50的天然AT毒素中毒,保护率为100%。结论:r ATb蛋白免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,能诱导以Ig G1为主的抗体和Th2优势应答,为候选疫苗的研制奠定基础。

关键词：相思子毒素 b链免疫应答生物恐怖

PDGF b链反义寡核苷酸对脑膜瘤培养细胞生长影响的研究

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中国神经精神疾病杂志 2002年第2期28卷 110-112,W001页

作者：徐广明杨树源刘杰文天津医科大学总医院神经外科天津300052 中国医学科学院血液学研究所

目的　探讨阻断血小板源生长因子 (PDGF)b链表达对脑膜瘤细胞生长的影响。方法　在体外进行脑膜瘤细胞培养 ,观察转染PDGFb链反义寡核苷酸对脑膜瘤培养细胞生长的影响。结果　PDGFb链反义寡核苷酸能够阻断脑膜瘤培养细胞表达PDGFb链 ,... 详细信息

目的　探讨阻断血小板源生长因子 (PDGF)b链表达对脑膜瘤细胞生长的影响。方法　在体外进行脑膜瘤细胞培养 ,观察转染PDGFb链反义寡核苷酸对脑膜瘤培养细胞生长的影响。结果　PDGFb链反义寡核苷酸能够阻断脑膜瘤培养细胞表达PDGFb链 ,转染后细胞增殖活性减弱 ,细胞生长受到抑制。

关键词：脑膜瘤细胞培养血小板源生长因子反义寡核苷酸 b链

重组蓖麻毒素b链蛋白疫苗的免疫原性及对接种小鼠的保护作用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第4期32卷 501-504页

作者：王俊虹徐忠伟谢宏伟武警后勤学院部队流行病学和统计学教研室天津市职业与环境危害防治重点实验室、武警后勤学院武警后勤学院中心实验室武警后勤学院卫勤教研室天津300309

蓖麻毒素（ricin toxin,RT）来源于植物蓖麻籽（Ricinuscommunis）,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating proteins,RIP）,由RTA和RTb两条多肽链组成,其中RTA是RNA N-糖苷酶,为毒性链;RTb是半乳糖结合型蛋白,为结合链,通过介... 详细信息

蓖麻毒素（ricin toxin,RT）来源于植物蓖麻籽（Ricinuscommunis）,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating proteins,RIP）,由RTA和RTb两条多肽链组成,其中RTA是RNA N-糖苷酶,为毒性链;RTb是半乳糖结合型蛋白,为结合链,通过介导A链进入细胞内而发挥作用。

关键词：蓖麻毒素 b链免疫原性生物恐怖

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尿激酶b链的制备及性质研究

河北省科学院学报 1992年第2期9卷 55-60页

作者：汪继东余瑞荣司世林河北省科学院生物研究所南京大学生物化学系

本文将巯基乙醇还原法与苯甲脒-Sepharose 4b亲和层析法相结合,于亲和柱上裂解了尿激酶蛋白的A、b链,制备出高纯度的尿激酶b链,活力回收达89.3％。样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为均一单带,测得分子量为32KD,比活为214×10~3iu/mg蛋... 详细信息

本文将巯基乙醇还原法与苯甲脒-Sepharose 4b亲和层析法相结合,于亲和柱上裂解了尿激酶蛋白的A、b链,制备出高纯度的尿激酶b链,活力回收达89.3％。样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为均一单带,测得分子量为32KD,比活为214×10~3iu/mg蛋白,活性的最适pH为8.0。在体外测活系统中,尿激酶b链有类似于尿激酶的性质。若以纤维蛋白溶酶原为底物,测得b链的Km值为尿激酶的3.2倍。由此推测,天然形成的尿激酶结构更有利于纤溶反应。

关键词：尿激酶 b链

我在早期胰岛素A、b链拆合组学习的经历和见闻

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生命科学 2015年第6期27卷 664-667页

作者：刘望夷中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

今年是我国成功化学合成结晶牛胰岛素发表50周年。我大学毕业前后曾参加过早期牛胰岛素A、b链的二硫键拆合工作，在工作中学习到很多知识。为纪念半个世纪前我国科学家所作的贡献，本文记述我参加这项工作的经历、见闻和印象。

关键词：结晶牛胰岛素早期学习 b链化学合成二硫键科学家

重组相思子毒素b链蛋白冻干保存与免疫效果评价

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中国预防医学杂志 2017年第11期18卷 857-860页

作者：王俊虹魏茂提武佳武警后勤学院天津300309 天津市职业与环境危害防制重点实验室

目的探讨重组相思子毒素b链蛋白(rATb)的冻干保存条件及其免疫雌性balb/C小鼠后的免疫效果评价。方法 rATb分别与不同冻干保护剂配方混合进行真空冷冻干燥,复融后免疫小鼠4次。每次免疫后,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG效价,四免后采... 详细信息

目的探讨重组相思子毒素b链蛋白(rATb)的冻干保存条件及其免疫雌性balb/C小鼠后的免疫效果评价。方法 rATb分别与不同冻干保护剂配方混合进行真空冷冻干燥,复融后免疫小鼠4次。每次免疫后,间接ELISA方法检测小鼠血清中IgG效价,四免后采用相思子毒素(abrin toxin,AT)攻毒,并进行小鼠体外中和试验。结果 rATb与10g/L的蔗糖混合保存所测浓度最高,纯度可达98%以上。四免后rATb组血清IgG效价与PbS对照组比较差异有统计学意义(Pb可以抵抗5×LD50的天然AT攻毒。结论 rATb和10g/L蔗糖混合冻干条件下所测定的浓度最高,且冻干蛋白复融后免疫小鼠后显示出良好的免疫原性。

关键词：相思子毒素 b链疫苗冻干免疫效果评价

balb/C小鼠免疫重组蓖麻毒素与相思子毒素b链嵌合体蛋白的免疫应答

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武警后勤学院学报（医学版） 2017年第11期26卷 925-928页

作者：王俊虹魏茂提徐忠伟武警后勤学院部队流行病学和统计教研室天津300309 天津市职业与环境危害防治重点实验室天津300309 武警后勤学院中心实验室天津300309

【目的】探讨重组蓖麻毒素、相思子毒素b链蛋白(RTb-ATb)免疫balb/C小鼠的免疫机制。【方法】雌性balb/C小鼠随机分为两组:RTb-ATb组和PbS组,分别腹腔免疫4次,间隔1周;间接ELISA检测血清中IgG效价和抗体分型,流式细胞技术检测细胞因子I... 详细信息

【目的】探讨重组蓖麻毒素、相思子毒素b链蛋白(RTb-ATb)免疫balb/C小鼠的免疫机制。【方法】雌性balb/C小鼠随机分为两组:RTb-ATb组和PbS组,分别腹腔免疫4次,间隔1周;间接ELISA检测血清中IgG效价和抗体分型,流式细胞技术检测细胞因子IFN-γ、IL-4,并进行攻毒实验和体外中和实验。【结果】四免后RTb-ATb组血清IgG、IgG1的效价与PbS对照组差别有统计学意义(Pb-ATb组与PbS组相比差别有显著性(P0.05)。攻毒保护实验和体外中和实验结果说明,嵌合体蛋白RTb-ATb可以抵抗4×LD50的天然AT或RT攻毒。【结论】RTb-ATb诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答且显示出良好的免疫原性,为二价疫苗的研制奠定基础。

关键词：蓖麻毒素相思子毒素 b链免疫应答生物恐怖

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重组相思子毒素b链蛋白免疫原性研究

武警后勤学院学报（医学版） 2016年第2期25卷 93-96页

作者：王俊虹魏茂提徐忠伟武警后勤学院部队流行病学和统计学教研室天津300309 天津市职业与环境危害防治重点实验室天津300309 武警后勤学院中心实验室天津300309

【目的】评价重组相思子毒素b链蛋白(r ATb)作为相思子毒素疫苗的免疫原性。【方法】以r ATb为免疫原,采用2×2×2×3析因设计方式分别免疫雌性balb/C小鼠,主因素包括:重组蛋白的剂量、免疫方式、免疫周期、攻毒剂量。每次采用间接ELIS... 详细信息

【目的】评价重组相思子毒素b链蛋白(r ATb)作为相思子毒素疫苗的免疫原性。【方法】以r ATb为免疫原,采用2×2×2×3析因设计方式分别免疫雌性balb/C小鼠,主因素包括:重组蛋白的剂量、免疫方式、免疫周期、攻毒剂量。每次采用间接ELISA方法检测小鼠血清中Ig G,并进行天然毒素攻毒实验。体外中和实验依据上述所选的免疫方案进行,分析免疫保护效果。【结果】间接ELISA结果表明r ATb蛋白免疫小鼠后血清中能检测到相应的抗AT特异性抗体,Ig G的效价均可达到1:106以上,PbS对照组则没有抗体产生(Pb在25μg/只的蛋白免疫剂量下,免疫周期为0-14-28-42 d,可以抵抗最高剂量为5×LD50的天然AT毒素中毒,保护率为100%。【结论】r ATb蛋白免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,为相关疫苗研究奠定基础。

关键词：相思子毒素 b链免疫原性疫苗生物恐怖