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抗艰难梭菌b毒素单克隆抗体的制备及特性分析

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抗艰难梭菌B毒素单克隆抗体的制备及特性分析

基于类器官培养的艰难梭菌毒素b损伤结肠上皮机制的初步研究

第十一届中国生物毒素研究及医药应用年会

作者：米友军苏露刘海周建国傅思武西北民族大学医学院

【目的】:制备抗艰难梭菌b毒素的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。【方法】:用纯化的艰难梭菌b毒素免疫bALb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞。用ELISA检测mAb腹水的效价;用Western blot检测... 详细信息

【目的】:制备抗艰难梭菌b毒素的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。【方法】:用纯化的艰难梭菌b毒素免疫bALb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞。用ELISA检测mAb腹水的效价;用Western blot检测mAb的特异性。【结果】:得到1株杂交瘤细胞株(384),该株细胞分泌的mAb为IgG2a。中和试验表明,该mAb均无中和活性。腹水mAb的效价均在10以上。在非变性条件下,PAGE后Western blot的结果显示,该株mAb可与相对分子质量(Mr)为22×10的b毒素产生反应;而在变性条件下,SDS-PAGE后Western blot均显示,可与Mr为4×10的b毒素片段产生反应。【结论】:该株杂交瘤细胞株能分泌抗艰难梭菌b毒素的特异性mAb,为艰难梭菌b毒素的研究提供了有利的工具。

关键词：艰难梭菌 b毒素单克隆抗体

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国感染与化疗杂志 2023年第1期23卷 53-60页

作者：吕婷王莉赵冰黄海辉复旦大学附属华山医院抗生素研究所卫生部抗生素临床药理重点实验室上海200040 复旦大学生命科学学院

目的建立艰难梭菌感染结肠类器官模型,对艰难梭菌毒素b(Tcdb)损伤小鼠结肠上皮的作用及可能机制进行初步研究。方法处死6~8周龄C57bL/6小鼠,取结肠标本,分离、收集结肠隐窝,以基质胶包埋后加入培养基,显微镜下观察记录生长情况;在巨... 详细信息

目的建立艰难梭菌感染结肠类器官模型,对艰难梭菌毒素b(Tcdb)损伤小鼠结肠上皮的作用及可能机制进行初步研究。方法处死6~8周龄C57bL/6小鼠,取结肠标本,分离、收集结肠隐窝,以基质胶包埋后加入培养基,显微镜下观察记录生长情况;在巨大芽孢杆菌中表达重组艰难梭菌毒素b(rTcdb)蛋白,经镍柱纯化后加入结肠类器官体系继续培养,观察类器官生长情况并检测干性基因表达量变化,转录组测序分析。结果 5pmol/L rTcdb作用12 h即可致结肠类器官生长缓慢及部分死亡,干性基因Lgr5、Axin2、bmi1表达较对照组显著上调。RNA-seq测序结果显示毒素作用组较对照组差异基因有3 140个,其中上调基因有1 936个,下调基因有1 204个。Gene Ontology富集分析显示损伤组差异基因主要富集的生物过程通路分别有低氧应答和对β干扰素、γ干扰素的细胞应答。同时蛋白质互作网络(Protein-Protein Interaction Networks, PPI)筛选出9个关键基因,其中的IFIT3、IFIT1、GbP3和GbP2的编码基因也参与了α/β干扰素、γ干扰素的细胞应答通路。京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析结果表明有47条通路差异显著富集,包括花生四烯酸代谢通路和Wnt信号通路等。结论 Tcdb可能通过调节干性基因表达,增强低氧应答通路,减弱α/β干扰素、γ干扰素的细胞应答通路,调节花生四烯酸代谢通路和Wnt信号通路等介导损伤结肠上皮细胞。

关键词：艰难梭菌 b毒素结肠类器官结肠上皮损伤

亚MIC剂量的甲硝唑和万古霉素对中国株A^-b^+艰难梭菌毒力转录和表达的影响(英文)

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 116-120,124页

作者：李先平高洪元李文革王晶卢金星中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 山东省泰安市中医二院检验科泰安271000

目的艰难梭菌是医院获得性感染性腹泻的主要原因。有些抗生素能够诱导和促进艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)。本研究探讨治疗CDAD的一线药物甲硝唑和万古霉素的亚最小抑菌浓度(MIC)剂量对中国艰难梭菌A-b+高分离株bJ08生长、毒力基因转录和... 详细信息

目的艰难梭菌是医院获得性感染性腹泻的主要原因。有些抗生素能够诱导和促进艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)。本研究探讨治疗CDAD的一线药物甲硝唑和万古霉素的亚最小抑菌浓度(MIC)剂量对中国艰难梭菌A-b+高分离株bJ08生长、毒力基因转录和毒素分泌的影响。方法 bJ08菌株分别生长在含有1/4MIC的甲硝唑或万古霉素以及无抗生素的bHI液体培养基中。每4h通过检测其OD值以确定其生长曲线;通过实时荧光定量PCR检测其毒力基因的表达;通过ELISA检测上清和细胞内b毒素的表达。结果实验发现bJ08在1/4MIC剂量的甲硝唑和万古霉素存在的情况为,到达指数生长期的时间延迟;毒力基因及其毒素的表达增高且提前;但甲硝唑和万古霉素对其影响的程度不同。结论实验证明中国株A-b+在亚MIC剂量抗生素存在的情况下,其生长延迟,毒力基因和毒素表达提前且升高。本实验为临床规范治疗CDAD与合理用药提供一定的参考价值。

关键词：艰难梭菌甲硝唑万古霉素 b毒素

艰难梭菌引起抗感染免疫的主要致病因子及其基因功能的研究进展

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免疫学杂志 2013年第4期29卷 357-360页

作者：曹波李先平程颖中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室医院感染室北京102206

艰难梭菌是医院感染性腹泻中最常见的病原菌之一,在过去10年中,由于ribotyping 027型等高毒菌株的出现,全球艰难梭菌感染相关性疾病发病率显著上升,已经成为欧美许多国家法定传染病必报的监测病原。致病艰难梭菌的毒力因子主要包括A毒素... 详细信息

艰难梭菌是医院感染性腹泻中最常见的病原菌之一,在过去10年中,由于ribotyping 027型等高毒菌株的出现,全球艰难梭菌感染相关性疾病发病率显著上升,已经成为欧美许多国家法定传染病必报的监测病原。致病艰难梭菌的毒力因子主要包括A毒素和b毒素,刺激机体发生免疫应答。除外A、b毒素,少数艰难梭菌还产生二元毒素。本文对近年来艰难梭菌引起机体抗感染免疫的相关致病因子及其基因功能的最新研究进展进行了回顾和总结,并重点探讨了主要致病因子A毒素和b毒素结构功能及基因表达调控特征,包括构建A、b毒素分子模型,致病基因编码区多态性特征,以及负向调控因子tcdC的变异及影响,对未来疫苗靶位点的筛选以及艰难梭菌致病机制中信号转导研究具有指导意义。

关键词：艰难梭菌抗感染免疫 A毒素 b毒素 tcdA tcdb 二元毒素

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餐厨废水中A型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

黑龙江畜牧兽医 2014年第1期 103-104页

作者：冶贵生邹勇青海大学农牧学院动物医学系西宁810016

为了对餐厨废水中的产气荚膜梭菌进行鉴定,试验采用TSC培养基进行厌氧培养、显微镜检等常规方法进行分离,并提取细菌基因组,设计、合成产气荚膜梭菌α、β、ε与ι毒素基因引物,配制PCR反应体系并设置反应条件,对扩增产物进行电泳检测... 详细信息

为了对餐厨废水中的产气荚膜梭菌进行鉴定,试验采用TSC培养基进行厌氧培养、显微镜检等常规方法进行分离,并提取细菌基因组,设计、合成产气荚膜梭菌α、β、ε与ι毒素基因引物,配制PCR反应体系并设置反应条件,对扩增产物进行电泳检测。结果表明:分离菌在TSC培养基上产生黑色菌落,经琼脂糖凝胶电泳只有α毒素基因得到良好扩增。说明此次分离菌为A型产气荚膜梭菌。

关键词： A型产气荚膜梭菌仅毒素 b毒素 ε毒素 L毒素餐厨废水

克雷霉素、头孢噻肟对艰难梭菌毒素转录和表达的影响

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中国热带医学 2014年第1期14卷 5-8,28页

作者：李先平边富宁李文革王晶卢金星中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的研究1/2最小抑菌浓度(MIC)剂量的克雷霉素和头孢噻肟对中国艰难梭菌A-b+高分离株bJ08的生长、毒力基因转录和毒素分泌的影响。方法 bJ08菌株分别生长在含有1/2 MIC的克雷霉素或头孢噻肟以及无抗生素的脑心浸液肉汤(bHI)液体培养基... 详细信息

目的研究1/2最小抑菌浓度(MIC)剂量的克雷霉素和头孢噻肟对中国艰难梭菌A-b+高分离株bJ08的生长、毒力基因转录和毒素分泌的影响。方法 bJ08菌株分别生长在含有1/2 MIC的克雷霉素或头孢噻肟以及无抗生素的脑心浸液肉汤(bHI)液体培养基中。每4个小时,通过检测其OD值以确定其生长曲线;通过实时荧光定量PCR检测其毒力基因的表达;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测上清和细胞内b毒素的表达。结果 bJ08在1/2 MIC剂量的克雷霉素存在的情况下,菌株的生长和毒素表达几乎不受影响;但是在1/2 MIC剂量的头孢噻肟存在的情况下,菌株生长变慢,到达对数期的时间延迟;毒力基因和b毒素的表达提前且增加。结论实验证明:在亚MIC剂量的不同的抗生素存在的情况下对中国株A-b+艰难梭菌的生长和毒力基因表达影响不同。我们的研究对于临床医师规范治疗CDAD和合理应用抗生素有一定的参考价值。

关键词：艰难梭菌克雷霉素头孢噻肟 b毒素

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艰难梭菌感染的治疗及预防

中国医药指南 2013年第1期11卷 678-679页

作者：李晓娟河南省南阳市胸科医院检验科河南南阳473000

目的探讨艰难梭菌毒素测定在医院相关性腹泻患者中的应用。方法艰难梭菌产生毒素A/b。结果艰难梭菌毒素在抗生素相关性腹泻患者检出率较高。结论治疗的重点在于预防。

关键词：艰难梭菌 A b毒素抗生素相关性腹泻