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b亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID_(50)与p27抗原之间的相关性研究

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中国畜牧兽医 2013年第2期40卷 14-17页

作者：李薛董宣赵鹏牛星崔治中山东农业大学动物科技学院山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心山东泰安271018 山东畜牧兽医职业学院山东济南250000

为了研究b亚群禽白血病病毒(ALV-b)的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-b SDAU09C2株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原... 详细信息

为了研究b亚群禽白血病病毒(ALV-b)的半数细胞培养物感染量(TCID50)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-b SDAU09C2株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10d取样,检测10d的TCID50值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID50滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-b SDAU09C2株连续10d的TCID50值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;Pb的TCID50与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID50值。

关键词： b亚群禽白血病病毒 TCID50 p27抗原 Pearson相关

b亚群禽白血病病毒GX14FF03株感染性克隆构建与拯救

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中国家禽 2020年第4期42卷 29-33页

作者：赵亚楠石梦雅李海娟林璐璐王培坤韦平临沂大学微生物与宿主健康研究所山东临沂276005 广西大学养禽与禽病学研究所广西南宁530004

为探究从灵山土鸡分离的携带J亚群禽白血病病毒(ALV)U3区片段的b亚群ALV(ALV-b)毒株GX14FF03的致病性,试验以GX14FF03毒株核酸为模板,采用PCR方法分2段扩增病毒的cDNA,PCR扩增产物经克隆、酶切后依次连接到pbluescriptⅡKS(+)质粒,最终... 详细信息

为探究从灵山土鸡分离的携带J亚群禽白血病病毒(ALV)U3区片段的b亚群ALV(ALV-b)毒株GX14FF03的致病性,试验以GX14FF03毒株核酸为模板,采用PCR方法分2段扩增病毒的cDNA,PCR扩增产物经克隆、酶切后依次连接到pbluescriptⅡKS(+)质粒,最终获得一个含有ALV-b完整前病毒cDNA的重组质粒pblue-GX14FF03。重组质粒转染DF-1细胞进行病毒拯救,拯救病毒在DF-1细胞盲传3代后收集细胞上清液保存于-80℃,细胞固定后用于间接免疫荧光检测。另取保存细胞上清进行ALV p27抗原检测。间接免疫荧光检测结果及ALV p27抗原检测结果全部为阳性。拯救病毒及亲本病毒接种DF-1细胞后进行体外复制能力测定,结果显示拯救病毒在1、3、5、7、9 d体外复制能力与亲本病毒基本一致,差异不显著(P>0.05)。上述结果表明病毒拯救成功,命名为rGX14FF03。

关键词： b亚群禽白血病病毒感染性克隆病毒拯救体外复制能力

b亚群禽白血病病毒灭活疫苗的制备及免疫保护试验

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B亚群禽白血病病毒灭活疫苗的制备及免疫保护试验

作者：李薛山东农业大学

学位级别：硕士

禽白血病是引起禽类产生肿瘤的主要疫病之一，其病原是反转录病毒科α反转录病毒属的禽白血病病毒(Avain leukosis virus,ALV)。根据病毒囊膜糖蛋白的抗原结构、病毒宿主范围及在细胞培养上不同毒株之间的相互干扰作用，将ALV分为A～J1... 详细信息

禽白血病是引起禽类产生肿瘤的主要疫病之一，其病原是反转录病毒科α反转录病毒属的禽白血病病毒(Avain leukosis virus,ALV)。根据病毒囊膜糖蛋白的抗原结构、病毒宿主范围及在细胞培养上不同毒株之间的相互干扰作用，将ALV分为A～J10个亚群,其中A、b、C、D、E和J6个亚群存在于鸡群中。A、b和J亚群为鸡群中引发肿瘤的主要外源性ALV，而在鸡群中较少见由C、D亚群外源性ALV引发的肿瘤，E亚群病毒为内源性白血病病毒，对鸡的致病性很低或无致病。在上个世纪80年代以前，A、b亚群ALV是引起鸡群淋巴性白血病和各种类型肿瘤的两类病毒，但在80年代中期，国际大型种鸡公司已基本消除了鸡群中A、b亚型ALV的感染。由于近几十年来我国从未在全国范围内进行对经典ALV的净化措施，我国鸡群特别是地方品系中极可能存在外源性ALV的感染。朱美珍等在山东某地方品系分离到一株A亚群禽白血病病毒，赵冬敏等在我国地方品系芦花鸡中分离到b亚群禽白血病病毒，说明我国鸡群中存在A、b亚群禽白血病病毒的感染。为加快b亚群禽白血病的净化，本实验成功制备了b亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的灭活疫苗，尝试从核心种鸡群疫苗免疫的途径来减少核心种鸡群的带毒率，提高其特异性抗体水平，从而保护其免受禽白血病病毒的感染，同时通过种蛋为下一代提供母源抗体，有效预防或减缓了雏鸡的早期感染，加快禽白血病的净化进程。要制备高质量的灭活疫苗，必须保证抗原的含量，因此我们首先探索b亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的细胞培养的最优条件。将b亚群禽白血病病毒SDAU09C2株接种到对数生长期CEF细胞的12孔细胞培养板上中，孵育2h后,用含不同浓度初生牛血清(0.5%,1%,2%,3%)的DMEM培养液维持10天，每天每板每孔收集150ul细胞上清于1.5ml离心管中，用于p27抗原检测，从而确定维持液最适血清浓度。然后再将SDAU09C2接种到对数生长期CEF细胞的24孔细胞培养板上中，孵育2h后,用不同PH值(6.6～7.7)含0.5%的初生牛血清的DMEM培养液维持10天，每天每板每孔收集150ul细胞上清于1.5ml离心管中，用于p27抗原检测，从而确定维持液最适PH值。最后将SDAU09C2株接种到对数生长期CEF细胞的细胞瓶中，接种2h后,用含PH为6.8，0.5%初生牛血清的DMEM培养液维持10天，每天每瓶各收集2个1.5ml离心管，每管150ul（一管用于p27抗原检测，一管用于TCID50滴度的测定），从而确定p27和TCID50的关系。每次收集上清样品后补充等量的新鲜培养基。通过病毒连续细胞培养检测，发现病毒在PH为6.8，初生牛血清浓度为0.5%的维持液状态下，维持5天，复制出的病毒量最大而且p27和TCID50间显著正相关。将SDAU09C2接种于20瓶新长成的单层CEF上，在培养瓶中盲传3代后，用PH=6.8小牛血清浓度为0.5%的维持液维持5天，收集带毒细胞，将收集的带毒细胞用PbS稀释至5ml，用体积比为0.2%的甲醛，在37℃培养箱内作用24小时，将灭活的细胞与MONTANIDE ISA775VG(佐剂)体积比为2.6:7.4进行充分乳化，制备出ALV-b灭活疫苗。9只成年祖代鸡多点注射制备的灭活疫苗1ml（约含病毒106.8个TCID50），未注射疫苗9只成年祖代鸡作为对照。在免疫过的成年产蛋鸡抗体水平最高时，分别从免疫组和未免疫组随机抽取4只免疫过的成年鸡和4只未免疫成年鸡进行攻毒，肌肉多点注射SDAU09C21ml(TCID50为104.6/0.1ml)，每周采集抗凝血、非抗凝血、棉拭子进行跟踪检测。剩余5只成年鸡经过四次免疫，每周采集非抗凝血0.5ml，进行抗体检测跟踪。结果表明，免疫该疫苗后，在第三次免疫后的第三周抗体水平最高，S/P在1.69～1.89之间，阳性约维持四周。攻毒后的祖代鸡不论是免疫组还是对照组棉拭子p27全是阴性，也未出现病毒血症，说明成年鸡能够抵抗禽白血病病毒的感染，但对照组的S/P值比免疫组要高一些。免疫组的祖代鸡再次感染该病毒时，与对照组相比能够增强其免疫反应抗体水平更高。在免疫过的祖代鸡抗体水平最高时收集种蛋（包括无抗体对照组）进行孵化，孵出雏鸡33只，其中有抗体鸡的种蛋孵出的雏鸡17只，无抗体鸡的种蛋孵出的雏鸡16只。将雏鸡分为四组，一组为有抗体鸡的种蛋孵出的14只小鸡，1日龄腹腔攻毒;二组为确定含母源抗体雏鸡3只，腹腔注射PbS（目的是看母源抗体消长规律）;三组为无抗体鸡的种蛋孵出的13只雏鸡，1日龄腹腔攻毒;四组为无抗体鸡的种蛋孵出的3只雏鸡，腹腔注射PbS，作为对照。每周采抗凝血、非抗凝血、棉拭子进行跟踪检测。结果显示：母源抗体的消长规律：3只含母源抗体鸡

关键词： b亚群禽白血病病毒灭活疫苗病毒血症 p27 特异性抗体动态变化母源抗体

b亚群禽白血病病毒与鼠伤寒沙门氏菌共感染的研究

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B亚群禽白血病病毒与鼠伤寒沙门氏菌共感染的研究

作者：赵锦锦山东农业大学

学位级别：硕士

在我国的鸡群中普遍存在禽白血病病毒和其它病原的共感染,造成了养禽业很大的危害和经济损失。之前的研究主要集中在禽白血病病毒的各个亚群之间,禽白血病病毒和其它一些病毒之间,很少有ALV-b和细菌性疾病共感染的文献报道。为了探讨AL... 详细信息

在我国的鸡群中普遍存在禽白血病病毒和其它病原的共感染,造成了养禽业很大的危害和经济损失。之前的研究主要集中在禽白血病病毒的各个亚群之间,禽白血病病毒和其它一些病毒之间,很少有ALV-b和细菌性疾病共感染的文献报道。为了探讨ALV-b和鼠伤寒沙门氏菌的共感染可能具有致病作用,因此我们做了以下研究。从某鸡场病鸡的泄殖腔棉拭子中分离出一株菌,对该菌的半数致死量、致病性和凝集抗原进行研究。将120只健康1日龄SPF雏鸡随机分成A-D 4个组,分别接种该菌。每周每组分别随机抽取3只,采集法氏囊、胸腺、脾脏称重,计算免疫器官指数;观察临床症状和病理组织学变化;检测p27抗原及ALV-b抗体,血清中INF-γ、IL-2和鼠伤寒沙门氏菌的抗体。根据测序结果并与国内外参考株进行比较,发现与Typhimurium strain ***同源性最高为99.7%,最终确定为鼠伤寒沙门氏菌。鼠伤寒沙门氏菌的半数致死量为1.52×10CFU。鼠伤寒沙门氏菌阳性血清与自制的鼠伤寒沙门氏菌凝集抗原出现凝集现象,与鸡白痢沙门氏菌的交叉免疫学试验没有出现凝集现象。共感染组死亡率为23.33%,高于鼠伤寒沙门氏菌组(13.3%),ALV-b组(16.67%)。单感染组和共感染组的鸡都呈现一定程度生长发育迟缓的现象,其中,共感染组体重显著低于对照组(pb单感染组和共感染组使脾脏指数下降,共感染组显著低于对照组(p病鸡都出现了精神萎靡不振、食欲下降、瘦弱的现象。ALV-b单感染组和共感染组剖检后发现肝脏略微肿大,肉眼观察鸡的各脏器,并没有发现明显的病变。鼠伤寒沙门氏菌单感染组剖检发现有针尖状出血,出血性肠炎,肝脏肿大,脾脏肿大。在肝脏内炎性细胞浸润形成坏死灶,脾脏炎性细胞浸润形成坏死灶,淋巴细胞坏死,肾小管上皮细胞变性等一系列现象。单感染和共感染组的IL-2和干扰IFN-γ的分泌量与对照组差异显著(pb感染组4.34%排毒;第5周ALV-b感染组50%,共感染组54.45%排毒。前4周未检测到ALV-b抗体,ALV-b抑制机体的细胞免疫和体液免疫,导致疫病的爆发。由于1日龄SPF鸡感染ALV-b很容易发生免疫耐受,导致感染鸡持续带毒排毒而不产生抗体。从检测鼠伤寒沙门氏菌抗体结果显示,共感染组第5W时阳性率最高为45.45%,表明共感染对鸡的危害性要比单感染严重。综上所述,分离得到一株鼠伤寒沙门氏菌,并制备了该菌凝集抗原。建立了ALV-b和鼠伤寒沙门氏菌感染1日龄SPF雏鸡的模型,表明ALV-b和鼠伤寒沙门氏菌共感染可能具有协同致病作用。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌分离鉴定 b亚群禽白血病病毒共感染

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b亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备

B亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备

作者：辛敬凯山东农业大学

学位级别：硕士

禽白血病是危害我国养禽业的一大病毒性肿瘤病，由于其亚型较多，分布广泛，且垂直传播，因而，对此病的防制和净化有一定难度。在我国的地方品系鸡群中，禽白血病感染呈现较为严重的状态。相关研究学者在过去一段时期内对禽白血病研究... 详细信息

禽白血病是危害我国养禽业的一大病毒性肿瘤病，由于其亚型较多，分布广泛，且垂直传播，因而，对此病的防制和净化有一定难度。在我国的地方品系鸡群中，禽白血病感染呈现较为严重的状态。相关研究学者在过去一段时期内对禽白血病研究偏向于致病性较强的J亚群病毒，而忽略了经典的A/b亚群病毒，这间接的造成了本已存在于我国地方品系鸡群中A/b亚群禽白血病病毒的泛滥。净化地方品系鸡群中A/b亚群禽白血病病毒，成为了当务之急，研制针对性的单克隆抗体，建立标准化检测试剂盒，实现对疾病快速而准确地监控，是需首要完成的任务。本实验旨在制备针对b亚群禽白血病病毒的单克隆抗体。首先，利用IDEXX公司的Ab亚群禽白血病病毒抗体检测试剂盒对山东某地方寿光鸡场鸡群进行检测，结果显示抗体阳性率达70.37%(95/135)。剖检病鸡，观察脏器病理变化，无菌采取表面有肉眼看见肿瘤结节的肝脏、脾脏等脏器，制备组织切片进行观察。将病料冻存于超低温冰箱，作为提取病毒和前病毒DNA的病料。利用病鸡脾脏提取病毒液，并接种于DF-1细胞扩增病毒。用p27抗原检测试剂盒检测细胞上清，确定病毒存在，并命名为ALV-b-SG12，于超低温冰箱冻存病毒液。采用宝生物公司DNAiso Reagent基因组DNA提取试剂处理病料，进行前病毒DNA的提取，以获取目的基因。区分禽白血病病毒不同亚群的主要依据为gp85囊膜蛋白，不同亚群gp85基因序列的差异性决定了病毒囊膜蛋白的抗原特异性。针对ALV-b的gp85基因设计引物，进行扩增、回收和测序。结果显示1038bp测准。与国内外报道的12株ALV-A同源率在85%左右，与6株ALV-b的同源率达90%以上，其中与RAV-2、Wb11080、RSV-SCHMIDT-RUPPIN以及JS-b1203四株的同源性高达96%以上。将回收产物连接入pET32a载体，转化进bL21大肠杆菌原核表达菌株，进行目的蛋白的表达。优化表达条件，从IPTG浓度、温度和时间三个方面进行试验，对每次试验进行SDS-PAGE检测。最终确定最适诱导表达条件为：IPTG浓度0.1mmol/L、温度30℃、诱导时间8h。超声裂解菌液，过Ni柱纯化后，进行SDS-PAGE检测，在53kDa处有明显条带。用TGE透析液进行纯化蛋白的复性，最终生产出可以作为特异性免疫原的活性蛋白。在获得纯化蛋白后，首先建立间接ELISA检测方法，通过一系列对比试验确定最佳反应条件为抗原包被浓度3μg/ml、血清稀释度为1:1000、二抗的稀释比例为1:2000。于1、15、30d免疫若干bALb/c小鼠，免疫量50μg纯化蛋白每只每次，尾静脉采集血液，分离血清，用建立好的方法进行检测，显示效价均高达1:269。取三免后加强免一次的小鼠脾脏细胞与sp2/0细胞按3:1进行细胞融合，前后共进行八次细胞融合工作，最终通过间接ELISA方法检测出阳性孔。对阳性孔进行扩增和冻存，并取部分阳性孔细胞利用有限稀释法进行亚克隆，筛选出单克隆的阳性细胞株。利用单克隆抗体进行IFA检测，以及抗体分泌稳定性试验，可得所制备的单抗对b亚群禽白血病病毒具有较高特异性且分泌稳定。

关键词： b亚群禽白血病病毒 gp85基因单克隆抗体

b亚群禽白血病病毒与新城疫病毒共感染DF-1细胞的检测

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B亚群禽白血病病毒与新城疫病毒共感染DF-1细胞的检测

作者：蒋立锋山东农业大学

学位级别：硕士

动物细胞培养技术的发展,使该技术已经在各研究医学领域中获得广泛应用。利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物高技术产业的重要部分。但是动物细胞培养技术目前仍存在一定的问题,例如细... 详细信息

动物细胞培养技术的发展,使该技术已经在各研究医学领域中获得广泛应用。利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物高技术产业的重要部分。但是动物细胞培养技术目前仍存在一定的问题,例如细胞密度低、血清来源不稳定、成分不确定等。目前,世界众多研究领域集中在优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率并保证其质量和一致性上。筛选最适细胞培养条件能有效提高细胞培养的效率,节约成本,促进细胞大规模培养方法的完善显得极为重要。因此本研究对DF-1细胞的培养条件进行优化探索。禽白血病(Avian Leucosis,AL)和新城疫(Newcastle Disease,ND)会导致机体生长发育迟缓低下,严重影响生产效率,二者皆会给养殖业带来巨大经济损失。本研究在体外细胞水平证明ALV-b和NDV存在协同感染的现象,拟通过对共感染ALV-b和NDV在细胞转录水平与单独感染的差异性分析,证明ALV-b和NDV具有协同促进复制作用,协同增强感染和致病能力,且为研究联合防控及生产潜在二联疫苗提供有效的参考资料。本研究在培养DF-1细胞过程中,采用单因素法从培养基,接种密度,血清浓度,双抗浓度共四种因素进行筛选,通过初步的实验结果探索出各不同因素影响细胞生长的适宜范围。在培养基方面,探究DMEM高糖培养基、DMEM低糖培养基、DMEM/F12培养基的影响;在接种密度方面,将细胞单悬液的细胞浓度调整为8种,探究不同接种密度的影响;在血清浓度方面,配制出12种血清浓度的生长液探索不同血清浓度的影响;在双抗方面,配制7种浓度的双抗细胞生长液,探究双抗浓度造成的影响。根据初步确定的范围设置进行重复实验,利用CCK-8法检测细胞增殖状况,通过对各因素影响下细胞生长情况结果进行系统分析并最终确定各影响因素的最适条件及范围。结果表明DF-1细胞在DMEM/F12培养基,接种密度为5×10个/mL-7×10个/mL,血清浓度在7.5%-12.5%范围内的条件下生长较好。按照探索条件培养细胞,用于病毒感染实验。设定单独感染ALV-b组、NDV组、共感染组和PbS对照组。接种病毒后,分时间段收集各组细胞提取病毒核酸,进行反转录实验得到cDNA,采用实时荧光定量PCR方法进行病毒转录水平的检测,采用相对定量法常用的2法进行分析,同时在倒置显微镜下观察。确定DF-1细胞感染了两种病毒后的病毒复制情况和细胞活性。结果表明,单独感染NDV组的转录水平高峰出现在48h,共感染组的转录水平在72h时显著高于单独感染组。说明两个病毒共同感染后对细胞造成了较大的影响,随着病毒量的增多,细胞活性降低,同时证明了ALV-b和NDV存在协同感染的现象,从不同角度揭示了ALV-b和NDV的协同复制及致病作用,不仅对后续研究ALV-b和NDV协同机制明确了方向,更将为禽肿瘤疾病或其它禽病研究提供了科学理论依据,为预防和治疗禽类疾病提供了新思路。DF-1细胞培养条件在DMEM/F12培养基,培养密度为5×10个/mL-7×10个/m L,胎牛血清浓度在7.5%-12.5%下培养效率高。ALV-b与NDV可以共感染同一细胞并能促进病毒的转录、复制,增强病毒的感染能力,具有协同性。

关键词：细胞培养 b亚群禽白血病病毒新城疫病毒共感染

感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出b亚群禽白血病病毒

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病毒学报 2009年第6期25卷 445-451页

作者：刘功振张洪海刘青邱波王峰王晓伟陈洪博成子强山东农业大学动物科技学院泰安271018

通过血清学、病理学以及病毒学检测,首次在国内从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到b亚群禽白血病病毒（ALV-b）。ELISA检测该鸡场血清样品（92份）显示,ALV-A/b型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳... 详细信息

通过血清学、病理学以及病毒学检测,首次在国内从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到b亚群禽白血病病毒（ALV-b）。ELISA检测该鸡场血清样品（92份）显示,ALV-A/b型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳性。取3只表现临床症状病鸡做病理组织学观察,在肝脏同一位置发现淋巴细胞样瘤细胞和髓细胞样瘤细胞增生灶,其它组织器官（除脑、神经和法氏囊）也有不同程度的两种瘤细胞增生。根据文献设计合成ALV-A、ALV-b、ALV-J、MDV和REV的特异性引物。取该3只病鸡肝脏病料研磨接种DF-1细胞,培养7-10天后提取培养细胞DNA,PCR扩增获得1 100bp的ALV-b特异性片段和924bp的ALV-J特异性片段,其中有1只鸡为ALV-b和ALV-J双阳性,而ALV-A、MDV、REV的PCR结果为阴性,因此获得ALV-b和ALV-J各两株分离株。对ALV-b、ALV-J扩增序列进行遗传进化树分析表明,两ALV-b分离株与其代表株的同源性分别为92.8%和94.7%;两ALV-J分离株与英国原型株同源性分别为96.9%和91.5%,与美国原型株同源性为85.9%和81．5％，与国内分离毒株同源性在87．0％～98．7％之间。本研究在国内分离到ALV—b毒株，并证实了ALV-b、J在同一只鸡体内的混合感染，应引起养禽业及相关研究部门的高度重视。

关键词： b亚群禽白血病病毒 J亚群禽白血病病毒病理学混合感染

感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出b亚群禽白血病病毒

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感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒

血管瘤相关禽白血病病毒CD08株的分离与鉴定

中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会

作者：刘功振张洪海刘青邱波王峰王晓伟陈洪博成子强山东农业大学动物科技学院

通过血清学、病理学以及病毒学检测,首次在国内从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到b亚群禽白血病病毒(ALV-b).ELISA检测该鸡场血清样品(92份)显示,ALV-A/b型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳性.取3... 详细信息

通过血清学、病理学以及病毒学检测,首次在国内从感染ALV-J的海蓝白商品蛋鸡群中分离到b亚群禽白血病病毒(ALV-b).ELISA检测该鸡场血清样品(92份)显示,ALV-A/b型抗体阳性率为16.3%,ALV-J抗体阳性率为13%,其中有1只鸡呈现抗体双阳性.取3只表现临床症状病鸡做病理组织学观察,在肝脏同一位置发现淋巴细胞样瘤细胞和髓细胞样瘤细胞增生灶,其它组织器官(除脑、神经和法氏囊也有不同程度的两种瘤细胞增生.根据文献设计合成ALV-A、ALV-b、ALLV-J、MDV和REV的特异性引物.取该3只病鸡肝脏病料研磨接种DF-1细胞,培养7-10天后提取培养细胞DNA,PCR扩增获得1100bp的ALV-b特异性片段和924bp的ALV-J特异性片段,其中有1只鸡为ALLV-b和ALV-J双阳性,而ALV-A、MDV、REV的PCR结果为阴性,因此获得ALV-b和ALV-J各两株分离株.对ALV-b、ALV-J扩增序列进行遗传进化树分析表明,两ALV-b分离株与其代表株的同源性分别为92.8%和93.0%;两ALV-J分离株与英国原型株同源性分别为96.9%和91.5%,与美国原型株同源性为85.9和81.5%,与国内分离毒株同源性在87.0%～98.7%之间.本研究在国内分离到ALV-b毒株,并证实了ALV-b、J在同一只鸡体内的混合感染,应引起养禽业及相关研究部门的高度重视.

关键词： b亚群禽白血病病毒 J亚群禽白血病病毒病理学混合感染

来源： cnki会议评论

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中国兽医杂志 2009年第11期45卷 8-10,I0001页

作者：张小桃赖汉漳张贺楠徐成刚廖明辛朝安曹伟胜华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室广东广州510642

通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA抗原检测以及聚合酶链式反应（PCR）等方法,从湖南常德某集约化养殖场的疑似禽白血病感染的蛋鸡中分离到1株血管瘤相关b亚群禽白血病病毒（ALV-b）,命名为CD08。利用特异引物对分离株进行PCR检测和gp8... 详细信息

通过病理剖检、接种DF-1细胞、ELISA抗原检测以及聚合酶链式反应（PCR）等方法,从湖南常德某集约化养殖场的疑似禽白血病感染的蛋鸡中分离到1株血管瘤相关b亚群禽白血病病毒（ALV-b）,命名为CD08。利用特异引物对分离株进行PCR检测和gp85扩增,将测序得到的gp85序列与国内外各亚群禽白血病病毒相同区域序列进行相似性分析,发现其核苷酸序列相似性在44.3%-92.9%之间,其中与属于ALV-b的MAV-2株相似性最高,而与美国ALV-J ADOL-7501株相似性最低。基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明：CD08株的gp85序列与MAV-2株的亲缘关系最近。

关键词：禽白血病 b亚群禽白血病病毒血管瘤 gp85