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三黄煎剂通过下调aurora激酶a抑制乳腺癌血管新生

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世界科学技术-中医药现代化 2022年第6期24卷 2236-2244页

作者：王聪杨美凤姚昶许岩磊南京中医药大学附属医院南京210029 江苏省中医院南京210029 南京市儿童医院南京210008

目的探索三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生之功效,并探讨其内在机制。方法siRNA沉默乳腺癌细胞中aurora激酶a,qRT-PCR、Western Blot实验分别检测三黄煎剂及aurora激酶a敲减对乳腺癌细胞aurora激酶a的mRNA、蛋白表达的影响。人脐静脉血管内... 详细信息

目的探索三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生之功效,并探讨其内在机制。方法siRNA沉默乳腺癌细胞中aurora激酶a,qRT-PCR、Western Blot实验分别检测三黄煎剂及aurora激酶a敲减对乳腺癌细胞aurora激酶a的mRNA、蛋白表达的影响。人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)迁移、管腔形成实验分别检测三黄煎剂及aurora激酶a敲减对乳腺癌细胞条件培养基诱导下的HUVECs的迁移、管腔形成的影响。鸡胚尿囊膜(Chorioallantoic Membrane,CAM)模型检测三黄煎剂和/或aurora激酶a敲减对乳腺癌血管新生的抑制效果。Western Blot实验检测三黄煎剂及aurora激酶a敲减对细胞外调节蛋白激酶(Extracellular Regulated Protein Kinases,ERK)信号通路表达的影响。结果三黄煎剂能够显著抑制aurora激酶a的mRNA、蛋白的表达,且效果与aurora激酶a敲减近似。三黄煎剂能够抑制乳腺癌细胞条件培养基诱导下的HUVECs的迁移、管腔形成,且与aurora基因敲减作用相似。三黄煎剂能够抑制CAM上乳腺癌血管新生,联合运用三黄煎剂和aurora激酶a敲减并不显著增加抑制效果。三黄煎剂能够调节ERK信号通路表达,且与aurora激酶a敲减效果类似。结论三黄煎剂可能是通过靶向性调节aurora激酶a,下调ERK信号通路,从而抑制乳腺癌血管新生。

关键词：三黄煎剂 aurora激酶a 乳腺癌血管新生鸡胚尿囊膜 ERK信号通路

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aurora激酶a调节小鼠受精卵早期发育

中国生物化学与分子生物学报 2011年第9期27卷 820-826页

作者：许琳王国丽刘彤韩峰于秉治张杰中国医科大学生物化学与分子生物学教研室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院妇产科沈阳110001

aurora激酶是参与细胞周期调节的重要激酶,已成为肿瘤研究领域的热点.近年来有研究表明,aurora激酶a(aurora kinase A,AURKA)对卵母细胞减数分裂也起到重要的调节作用,但对其在哺乳动物早期胚胎发育中的研究鲜有报道.本研究利用显微注... 详细信息

aurora激酶是参与细胞周期调节的重要激酶,已成为肿瘤研究领域的热点.近年来有研究表明,aurora激酶a(aurora kinase A,AURKA)对卵母细胞减数分裂也起到重要的调节作用,但对其在哺乳动物早期胚胎发育中的研究鲜有报道.本研究利用显微注射向受精卵中导入干扰AURKA表达的质粒,观察了AURKA表达敲低对小鼠受精卵早期发育的影响,并检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路抑制后,小鼠受精卵卵裂及AURKA表达与活性变化.实验结果表明,干扰AURKA的表达可导致受精卵发育停滞和异常分裂.MAPK通路的抑制亦可破坏受精卵正常卵裂,并下调AURKA的蛋白表达及活性.实验结果提示,AURKA是小鼠受精卵早期发育所必需的,并与MAPK通路的激活相关.

关键词： aurora激酶a 丝裂原活化蛋白激酶小鼠受精卵早期发育

aurora激酶a抑制剂Alisertib对肝癌细胞DNA损伤修复的影响

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中国临床药理学杂志 2020年第20期36卷 3257-3259,3263页

作者：郝剑文彭期臻张雪宁秦宇李慧锴天津医科大学第二医院放射科天津300211 天津医科大学诊断学教研室天津300070 天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科天津300060

目的探讨aurora激酶a(AURKA)抑制剂Alisertib对人肝癌细胞HepG2 DNA损伤修复的影响。方法将人肝癌细胞HepG2随机分为对照组(生理盐水)和低、中、高剂量实验组(0.01,0.1,1μmol·L^-1 Alisertib)。给药48 h后,用平板克隆形成法检测各组... 详细信息

目的探讨aurora激酶a(AURKA)抑制剂Alisertib对人肝癌细胞HepG2 DNA损伤修复的影响。方法将人肝癌细胞HepG2随机分为对照组(生理盐水)和低、中、高剂量实验组(0.01,0.1,1μmol·L^-1 Alisertib)。给药48 h后,用平板克隆形成法检测各组细胞克隆形成能力;用划痕愈合法检测各组细胞迁移侵袭能力;用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测各组细胞AURKA及DNA损伤标记物p-H2A.X蛋白相对表达量。结果对照组,低、中、高剂量实验组克隆形成集落数分别为312.67±13.65,283.67±6.66,59.67±3.51,11.67±3.06;划痕面积百分比分别为(15.67±4.04)%,(34.00±5.00)%,(41.67±2.89)%,(76.00±2.65)%;总凋亡率分别为(1.34±0.29)%,(4.08±0.22)%,(7.26±0.93)%,(19.71±2.40)%;AURKA相对表达量分别为0.91±0.07,0.81±0.01,0.73±0.04,0.47±0.08;p-H2A.X相对表达量分别为0.26±0.05,0.52±0.07,0.89±0.08,1.12±0.18。低、中、高剂量实验组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Alisertib可通过下调AURKA蛋白表达,上调DNA损伤标记物p-H2A.X蛋白表达,有效激活DNA损伤修复,抑制肿瘤进展。

关键词：肝细胞癌 aurora激酶a Alisertib 细胞凋亡 DNA损伤

aurora激酶a及aurora激酶B与宫颈癌发生发展的相关性研究

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临床和实验医学杂志 2018年第4期17卷 346-350页

作者：胡梦川肖晋军刘海霞广东省深圳市南山区西丽人民医院妇产科广东深圳518055

目的探讨aurora激酶a(aurora-A)、aurora激酶B(aurora-B)与宫颈癌发生发展的相关性及意义。方法回顾性选取宫颈癌标本(鳞状细胞癌)30例为宫颈癌组;宫颈上皮内瘤样病变(CIN)30例为CIN组;正常宫颈组织30例为正常组。采用免疫组化检测Auror... 详细信息

目的探讨aurora激酶a(aurora-A)、aurora激酶B(aurora-B)与宫颈癌发生发展的相关性及意义。方法回顾性选取宫颈癌标本(鳞状细胞癌)30例为宫颈癌组;宫颈上皮内瘤样病变(CIN)30例为CIN组;正常宫颈组织30例为正常组。采用免疫组化检测aurora-A、aurora-B、采用半定量RT-PCR法检测高危人乳头状瘤病毒(HPV16及HPV18)的mRNA在不同宫颈组织的表达,结合宫颈癌的病理特征进行分析。结果 (1)aurora-A、aurora-B及HPV16 mRNA、HPV18 mRNA在正常组、CIN组及宫颈癌组的表达分别为:1.54%、2.09%、(41.17±8.02)%、(16.05±6.78)%;36.58%、29.32%、(64.52±14.21)%、(28.97±7.98)%及71.59%、68.55%、(91.18±21.45)%、(46.62±13.58)%,宫颈癌组高于CIN组及正常组,差异有统计学意义(Paurora-A、aurora-B及HPV16 mRNA、HPV18 mRNA与宫颈病变呈正相关(Paurora-A或auroraB均与HPV16 mRNA、HPV18 mRNA的表达呈正相关(Paurora-A或aurora-B均与TNM分期、淋巴结转移、组织学分级呈正相关(Paurora-A、aurora-B的表达与高危HPV有密切的关系,随着子宫颈病变的进展而逐渐增加,aurora-A与aurora-B有望成为宫颈癌早期诊断的分子标记以及的预防、治疗宫颈癌的新靶点。

关键词：宫颈癌 aurora激酶a aurora激酶B HPV16 HPV18

三黄煎剂调节aurora激酶a提高表柔比星对乳腺癌MDA-MB-231细胞药效的研究

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辽宁中医杂志 2016年第4期43卷 798-803,I0003页

作者：卞卫和许岩磊陈曦琰陈绪姚昶朱小纾张媞顾铭南京中医药大学附属医院江苏南京210029 西悉尼大学生物和健康学院澳大利亚新南威尔士州彭里斯2750

目的:探讨三黄煎剂对表柔比星作用于MDA-MB-231细胞药效的影响及相关机制。方法:采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。RT-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MDA-MB-231细胞aurora A、p53的mRNA及蛋白表达水平... 详细信息

目的:探讨三黄煎剂对表柔比星作用于MDA-MB-231细胞药效的影响及相关机制。方法:采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。RT-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MDA-MB-231细胞aurora A、p53的mRNA及蛋白表达水平的影响。siRNA沉默MDA-MB-231细胞中aurora A,并用CCK-8法检测对三黄煎剂作用于MDA-MB-231细胞增殖抑制的影响。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI法检测三黄煎剂联合表柔比星对MDA-MB-231细胞增殖抑制率、凋亡率的影响。Western Blot法检测三黄煎剂联合表柔比星对MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白及aurora A表达的影响。结果:三黄煎剂对MDA-MB-231细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长(P0.05)。三黄煎剂能够调节MDAMB-231细胞aurora A、p53的mRNA及蛋白的表达。siRNA沉默aurora A后,将三黄煎剂对MDA-MB-231细胞增殖抑制率下调了34.6%(51.5%到33.7%)。三黄煎剂与表柔比星联用能够增加表柔比星对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率及凋亡率,调节凋亡相关蛋白c-PARP,c-Caspase 3,Bcl-2,Bax及aurora A的表达水平。结论:三黄煎剂能够增加MDA-MB-231细胞对化疗药物表柔比星的敏感性,可能与三黄煎剂对aurora激酶a的抑制有关。

关键词：三黄煎剂 aurora激酶a MDA-MB-231细胞增殖凋亡

三黄煎剂抑制aurora激酶a增强乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬治疗敏感性的研究

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时珍国医国药 2015年第12期26卷 2826-2829页

作者：许岩磊陈曦琰陈绪卞卫和姚昶朱小纾张媞顾铭南京中医药大学附属医院江苏南京210029 西悉尼大学生物和健康学院

目的探讨三黄煎剂对他莫昔芬作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,q-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞aurora A、p53的mRNA及蛋白表达水平的影响。siRNA沉默MC... 详细信息

目的探讨三黄煎剂对他莫昔芬作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,q-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞aurora A、p53的mRNA及蛋白表达水平的影响。siRNA沉默MCF-7细胞中aurora A,并用CCK-8法检测对三黄煎剂作用于MCF-7细胞增殖抑制的影响。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI法检测三黄煎剂联合他莫昔芬对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率的影响。Western Blot法检测三黄煎剂联合他莫昔芬对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长（P〈0.05）,给药48 h疗效好于24h（P〈0.05）,与给药72h无统计学差异（P〉0.05）。三黄煎剂能够调节MCF-7细胞aurora A、p53蛋白及mRNA的表达。siRNA沉默aurora A将三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率下调了50.0%（49.2%～24.8%）。三黄煎剂与他莫昔芬联用能够增加他莫昔芬对MCF-7细胞的增殖抑制率及凋亡率,调节凋亡相关蛋白c-PARP,c-Caspase 3,Bcl-2/Bax水平。结论三黄煎剂能够抑制MCF-7细胞增殖并增加MCF-7细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的敏感性,这可能与三黄煎剂对aurora激酶a的抑制有关。

关键词：三黄煎剂 aurora激酶a MCF-7细胞他莫昔芬细胞增殖细胞凋亡

三黄煎剂抑制aurora激酶a增强表柔比星对乳腺癌MCF-7细胞药效的研究

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世界科学技术-中医药现代化 2015年第10期17卷 2060-2068页

作者：许岩磊陈绪陈曦琰卞卫和姚昶朱小纾叶小舟南京中医药大学附属医院南京210029 西悉尼大学生物和健康学院

目的:探讨三黄煎剂对表柔比星作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法:采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。RT-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞aurora A、p53的m RNA及蛋白表达水平的影响。si RNA... 详细信息

目的:探讨三黄煎剂对表柔比星作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法:采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。RT-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞aurora A、p53的m RNA及蛋白表达水平的影响。si RNA沉默MCF-7细胞中aurora A,并用CCK-8法检测三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制的影响。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI法检测三黄煎剂联合表柔比星对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率的影响。Western Blot法检测三黄煎剂联合表柔比星对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果:三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长(P0.05)。三黄煎剂能够调节MCF-7细胞aurora A、p53蛋白及m RNA的表达。si RNA沉默aurora A将三黄煎剂对MCF-7细胞的增殖抑制率下调了50.0%(49.2%到24.8%)。三黄煎剂与表柔比星联用能够增加表柔比星对MCF-7细胞的增殖抑制率及凋亡率,调节凋亡相关蛋白c-PARP、c-Caspase 3、Bcl-2、Bax及aurora A的表达水平。结论:三黄煎剂能够增加MCF-7细胞对化疗药物表柔比星的敏感性,可能与三黄煎剂对aurora激酶a的抑制有关。

关键词：三黄煎剂 aurora激酶a MCF-7细胞细胞增殖细胞凋亡

auroraA/Bora,PLK1在小鼠受精卵有丝分裂中功能的研究

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AuroraA/Bora,PLK1在小鼠受精卵有丝分裂中功能的研究

作者：王美娇中国医科大学

学位级别：硕士

目的:有丝分裂的分子机制一直是分子生物学研究的热点问题,近年来对有丝分裂相关激酶的研究也取得了一定进展。在体细胞有丝分裂中,保守的丝苏氨酸激酶aurora A和PLK1,对G2/M期的转化以及细胞周期的调控等都起着重要的作用。Bora是近年... 详细信息

目的:有丝分裂的分子机制一直是分子生物学研究的热点问题,近年来对有丝分裂相关激酶的研究也取得了一定进展。在体细胞有丝分裂中,保守的丝苏氨酸激酶aurora A和PLK1,对G2/M期的转化以及细胞周期的调控等都起着重要的作用。Bora是近年来发现的有丝分裂调控因子,其功能之一是作为aurora A的结合蛋白,从而间接起到调控有丝分裂进程的作用。受精卵的第一次卵裂标志着生命的开始,然而其中的分子机制尚不明确。且受精卵第一次卵裂的进程与普通有丝分裂进程并不完全相同。aurora A,Bora和PLK1在受精卵的第一次卵裂中的功能并未见报道有待系统研究。小鼠是与人类基因相似度极高的哺乳动物模型。此外小鼠受精卵第一次卵裂持续时程较长这一特点也为我们对受精卵第一次有丝分裂的研究提供了良好的条件。因此本研究分别对aurora A,Bora和PLK1在受精卵1-细胞期到2-细胞期进程中的表达和定位特点及其可能存在的相互作用进行了探究。为进一步研究aurora A,Bora和PLK1在受精卵中的功能及作用方式,三者之间存在的相互作用及与其相关的信号通路的研究提供了基础。方法:本研究以小鼠受精卵为研究模型,通过显微注射技术将siRNA导入小鼠受精卵中从而分别敲低aurora A,Bora和PLK1的表达水平,再通过Real-time PCR和Western-Blot技术探究正常组和敲低组受精卵中aurora A,Bora和PLK1的表达差异,间接免疫荧光法与激光共聚焦显微镜技术检测它们的定位与共定位,统计并通过SPSS12.0软件分析其中一种基因表达下调对1-细胞期到2-细胞期卵裂进程的影响,从而探究其在小鼠受精卵第一次有丝分裂中的作用。结果:1.正常组受精卵中aurora A和Bora的mRNA及蛋白表达水平均呈上升趋势并在M期达到峰值。***1与aurora A在M期均定位于卵裂沟。3.通过与正常组aurora A,Bora和PLK1的mRNA和蛋白表达水平的对比,分别验证了胞浆注射siRNA对aurora A,Bora和PLK1的敲低效果。4.敲低aurora A,Bora和PLK1其中一种基因的表达水平,均会影响另外两者的表达水平。*** A和PLK1敲低组进入M期后出现了Bora在细胞质的异常积累,形成了连接两个子细胞核的丝状亮带。***敲低后原本定位于细胞核内的aurora A定位于细胞膜周围呈环状。且核区及其周围均未见分布。PLK1在G2期失去入核趋势。***1敲低后,aurora A在G2期大量分布于细胞核内,其含量显著高于细胞质。8.敲低组受精卵出现分裂延迟,异常分裂率大大提高。结论:aurora A、Bora、PLK1在小鼠受精卵1/2细胞期转换过程中,在M期表达最显著,三者之间存在相互作用、相互影响关系,并参与小鼠受精卵的卵裂、纺锤体形成等功能,共同调控小鼠受精卵的早期分裂。

关键词： aurora激酶a Bora PLK1 受精卵有丝分裂表达调控