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atrogin-1和MuRF-1在肌肉萎缩中的作用机制及影响因素

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实用医学杂志 2012年第11期28卷 1921-1922页

作者：王慧罗勇上海交通大学新华医院 200092

骨骼肌萎缩发生于多种慢性疾病，其严重程度与患者的康复、生活能力和生活质量相关。泛素蛋白酶体途径中有多个调节点，受多种因素调控，其中两种泛素蛋白连接酶E3s——Atmgin-1和MuRF-1对肌肉萎缩具有重要意义，并可能成为治疗的新靶... 详细信息

骨骼肌萎缩发生于多种慢性疾病，其严重程度与患者的康复、生活能力和生活质量相关。泛素蛋白酶体途径中有多个调节点，受多种因素调控，其中两种泛素蛋白连接酶E3s——Atmgin-1和MuRF-1对肌肉萎缩具有重要意义，并可能成为治疗的新靶点。本综述总结了近年来国内外关于肌肉萎缩研究的部分相关机制。

关键词： atrogin-1 肌肉萎缩影响因素泛素蛋白连接酶泛素蛋白酶体骨骼肌萎缩慢性疾病生活质量

atrogin-1在慢性阻塞性肺疾病骨骼肌萎缩中的作用及其与IGF-1的关系

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Atrogin-1在慢性阻塞性肺疾病骨骼肌萎缩中的作用及其与IGF-1的关...

作者：白雪中南大学

学位级别：硕士

目的探讨atrogin-1蛋白在慢性阻塞性肺疾病中对骨骼肌的作用及与IGF-1的关系.方法70只Wistar大鼠随机分为COPD模型组和对照组,各35只。采用熏烟加气管内滴注猪胰弹性蛋白酶法建立COPD动物模型,对照组不熏烟,用生理盐水代替猪胰弹性蛋白... 详细信息

目的探讨atrogin-1蛋白在慢性阻塞性肺疾病中对骨骼肌的作用及与IGF-1的关系.方法70只Wistar大鼠随机分为COPD模型组和对照组,各35只。采用熏烟加气管内滴注猪胰弹性蛋白酶法建立COPD动物模型,对照组不熏烟,用生理盐水代替猪胰弹性蛋白酶进行手术。两组大鼠分别进行一般情况的观察,104天后检测大鼠的肺功能,取肺组织、趾长伸肌、膈肌,进行固定、病理切片和蛋白质提取。肺组织和趾长伸肌组织行HE染色光镜观察病理改变结果,趾长伸肌组织和膈肌再行免疫组化法和western bolt法检测atrogin-1蛋白和工GF-1蛋白的表达与定量及相关性的研究。所有结果应用SPSS17.0软件进行统计分析。结果(1)肺功能检查发现COPD模型组大鼠的FEV0.3/FVC(%)和FEV0.3明显低于对照组,R工高于对照组,其差别有显著性(均Patrogin-1蛋白含量表达明显高于对照组,IGF-1蛋白量低于对照组。(5) COPD大鼠骨骼肌中IGF-1蛋白表达量与atrogin-1的量呈负相关。结论(1)COPD模型组大鼠的骨骼肌细胞出现萎缩,对照组大鼠骨骼肌细胞萎缩不明显。(2)骨骼肌atrogin-1蛋白表达增加和IGF-1蛋白表达减少可能是COPD大鼠骨骼肌萎缩的机制之一。(3)在COPD中,骨骼肌中IGF-1蛋白含量与atrogin-1蛋白含量呈负相关。

关键词：慢性阻塞性肺疾病骨骼肌 atrogin-1 IGF-1

肺癌组织中atrogin-1 mRNA的表达及患者生存分析

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郑州大学学报（医学版） 2008年第1期43卷 130-133页

作者：崔玲玲张晓峰谢东王旗李文杰赵松赵高峰秦建军陈萍萍郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001 郑州大学第一附属医院胸外科郑州450052

目的:检测人肺癌组织中atrogin-1基因mRNA表达水平,了解对肺癌患者术后生存情况及其影响因素。方法:运用实时定量PCR技术测定60例肺癌患者的癌组织及配对的癌旁组织中atrogin-1基因mRNA表达水平,采用Kaplan-Meier单因素与Cox多元回归进... 详细信息

目的:检测人肺癌组织中atrogin-1基因mRNA表达水平,了解对肺癌患者术后生存情况及其影响因素。方法:运用实时定量PCR技术测定60例肺癌患者的癌组织及配对的癌旁组织中atrogin-1基因mRNA表达水平,采用Kaplan-Meier单因素与Cox多元回归进行生存分析。结果:肺癌组织中atrogin-1 mRNA表达水平(-8.15±3.94)显著高于其配对的癌旁组织(-10.39±4.35)(t=3.873,P=0.000),其中71.67%(43/60)患者atrogin-1 mR-NA高表达,28.33%(17/60)患者低表达。Kaplan-Meier法生存分析结果显示:atrogin-1的表达水平、淋巴结转移、家族史、病理分级与患者的生存率显著相关。Cox回归分析结果显示:atrogin-1 mRNA表达水平、淋巴结转移、病理分级和吸烟是影响肺癌患者生存率的独立危险因素。结论:肺癌组织中atrogin-1的高表达可能影响肺癌患者术后的生存,其可作为肺癌患者预后的一个评价指标,并可能成为基因治疗的一个作用靶点。

关键词： atrogin-1 肺肿瘤实时定量PCR 生存分析

黄鳝atrogin-1蛋白表达及细胞定位研究

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河南农业科学 2020年第5期49卷 154-160页

作者：王雨王兆广刘泽军夏中曦范玉顶钟其旺江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室江西南昌330045 中国水产科学研究院长江水产研究所湖北武汉430223

为提高黄鳝养殖效率以及肌肉的质量,进一步发掘黄鳝肌肉发育相关基因,以atrogin-1为研究对象,构建了3种原核表达载体:pCold-TF-atrogin-1、pET28a(+)-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1。将构建的重组表达载体转入Transetta(DE3)感受态细胞,重组菌株经诱导表达后,仅pCold-TF-atrogin-1/Transetta(DE3)菌株表达出可溶性较高的重组蛋白。IPTG诱导试验结果表明,诱导剂浓度对蛋白质表达可溶性及含量几乎没有影响,诱导时间在20 h最佳。可溶性部分经Ni-NTA柱亲和层析纯化以及SDS-PAGE(10%聚丙烯酰胺)电泳,证实获得了重组蛋白。构建真核表达载体pEGFP-N1-atrogin-1,转染293T细胞,结果表明,atrogin-1融合蛋白在细胞质及细胞核中均有表达,且在细胞核中表达量相对较高。

关键词：黄鳝 atrogin-1 原核表达纯化细胞转染细胞定位

乙醇诱导C2C12成肌细胞E3连接酶atrogin-1表达的机制研究

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乙醇诱导C2C12成肌细胞E3连接酶Atrogin-1表达的机制研究

作者：舒画大连医科大学

学位级别：硕士

酒精相关的肌病的特点是严重的骨骼肌生化和结构的变化,肌萎缩是其临床表现之一。乙醇在机体代谢过程中产生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起细胞的氧化应激和脂质过氧化。泛素连接酶是骨骼肌萎缩中的关键酶,目前已将泛素连接酶E3s中的At... 详细信息

酒精相关的肌病的特点是严重的骨骼肌生化和结构的变化,肌萎缩是其临床表现之一。乙醇在机体代谢过程中产生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起细胞的氧化应激和脂质过氧化。泛素连接酶是骨骼肌萎缩中的关键酶,目前已将泛素连接酶E3s中的atrogin-1作为检测肌萎缩发生的早期生物标记物。在一些肌萎缩模型研究中发现,ROS可激活MAPK里的P-38通路,上调atrogin-1的表达,继而引起肌萎缩。但乙醇与肌萎缩之间的研究甚少,且大都集中在动物模型,本实验以乙醇(100mM)染毒C2C12成肌细胞为模型,来探究乙醇引起肌萎缩的机制及具体信号通路。目的:本研究通过体外培养小鼠C2C12骨骼肌成肌细胞,观察乙醇对骨骼肌细胞的氧化损伤情况,及atrogin-1的蛋白表达水平,研究在C2C12成肌细胞模型中,乙醇对atrogin-1蛋白水平的影响,并探讨其中涉及的细胞信号转导通路,为抑制肌肉萎缩提供新的治疗方法。方法:1.乙醇(100mM)、NAC(2uM)处理C2C12细胞24小时后,采用荧光酶标仪检测不同组之间ROS水平;2.乙醇(100mM)分别作用于C2C12细胞不同时间,分别为0h、8h、16h、24h,然后检测各个不同组之间atrogin-1蛋白水平的表达,观察不同的处理时间对atrogin-1蛋白水平的表达有无变化;3.乙醇(100mM)、NAC(2uM)处理C2C12细胞8小时后,用Western Blot实验技术检测不同组之间atrogin-1蛋白水平的表达;4.乙醇(100mM)、NAC(2u M)处理C2C12细胞8小时后,用Western Blot实验技术检测磷酸化P-38蛋白水平的表达;加入MAPK细胞信号转导通路中的P38通路抑制剂SB203580,用Western Blot实验技术检测不同组atrogin-1蛋白水平的表达,观察SB203580对atrogin-1蛋白的表达是否有影响。结果:1.乙醇(100mM)作用于C2C12细胞24小时后,ROS水平升高,与正常组有显著性差异(P100m M)作用于细胞8-24小时中,atrogin-1蛋白水平与对照组相比,均有显著性差异(P100mM)作用C2C12细胞8小时后,atrogin-1蛋白水平明显升高,与对照组有显著性差异(Patrogin-1蛋白水平下降;4.乙醇(100mM)作用C2C12细胞8小时后,磷酸化蛋白P-38水平明显升高,与对照组有显著性差异(Patrogin-1蛋白水平明显降低。结论:1.乙醇(100mM)可引起C2C12细胞中活性氧产生的增加,诱发氧化应激反应。NAC(2uM)可降低由乙醇引起的ROS升高。***可通过MAPK信号通路里的P-38途径引起atrogin-1蛋白水平升高。

关键词：乙醇 C2C12 ROS P-38通路 atrogin-1

酒精通过P38 MAPK诱导C2C12成肌细胞分化中的atrogin-1表达

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酒精通过P38 MAPK诱导C2C12成肌细胞分化中的Atrogin-1表达

作者：王晓格大连医科大学

学位级别：硕士

酒精相关的肌病的特点是严重的骨骼肌生化和结构的变化,肌萎缩是其主要的临床表现之一。酒精在机体的代谢过程中产生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起细胞内的氧化应激和脂质过氧化。泛素连接酶E3是骨骼肌萎缩中的关键酶,目前已将泛素连... 详细信息

酒精相关的肌病的特点是严重的骨骼肌生化和结构的变化,肌萎缩是其主要的临床表现之一。酒精在机体的代谢过程中产生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起细胞内的氧化应激和脂质过氧化。泛素连接酶E3是骨骼肌萎缩中的关键酶,目前已将泛素连接酶E3s中的atrogin-1作为检测肌萎缩发生的早期生化标记物。本实验采用酒精作用于C2C12成肌细胞建立体外急性酒精中毒性肌病模型,运用活性氧检测和Western Blot检测技术,观察酒精处理C2C12成肌细胞前后ROS、atrogin-1、P38蛋白的变化,及给予各个MAPK通路的抑制剂后atrogin-1的表达变化,分析酒精对C2C12成肌细胞的氧化损伤情况和影响atrogin-1表达的机制。结果显示:酒精(100mM)作用于C2C12细胞2小时后,ROS水平即开始升高,与正常组有显著性差异(P100mM)作用于细胞2～12小时中,atrogin-1蛋白水平与对照组相比,均有显著性升高(P100mM)作用C2C12细胞2小时后,磷酸化蛋白P38水平明显升高,与对照组有显著性差异(Patrogin-1蛋白水平明显降低。综上所述,酒精可引起C2C12成肌细胞中活性氧产生的增加,诱发氧化应激反应,引起细胞内atrogin-1蛋白表达增加;并且酒精是通过P38MAPK信号通路引起的atrogin-1蛋白表达增加。本研究通过体外培养小鼠C2C12骨骼肌成肌细胞,在诱导其分化过程中,观察酒精对骨骼肌细胞的氧化损伤情况及atrogin-1的蛋白表达水平,并探讨其细胞信号转导通路,为探索骨骼肌萎缩的发生机制提供了新的思路。目的:本研究通过体外培养小鼠C2C12骨骼肌成肌细胞,并诱导其分化,观察酒精对骨骼肌细胞的氧化损伤情况及atrogin-1蛋白的表达影响,研究在C2C12成肌细胞急性酒精中毒性肌病的模型中,酒精对atrogin-1蛋白水平的影响,并探讨其中涉及的细胞信号转导通路,为抑制肌肉萎缩提供新的治疗方法。方法:1.通过更换增值培养基为分化培养基,诱导C2C12成肌细胞的分化。2.通过CCK-8法检测细胞活性,确定酒精能够引起细胞损伤的最适作用浓度。3.酒精(100mM)处理 C2C12 细胞 Oh、2h、4h、6h、8h 后,利用 DCF 法和倒置显微镜观察不同组之间细胞内的ROS水平。4.酒精(100mM)分别作用于C2C12细胞不同时间点,即:Oh、2h、4h、6h、8h、10h、12h,然后检测各组之间 atrogin-1、P-P38、P-JNK、P-ERK 蛋白的表达水平,以观察酒精(100mM)不同的处理时间对C2C12细胞中atrogin-1蛋白的表达及各个MAPK细胞信号转导通路的磷酸化有无影响。5.预先加入(不加)各个MAPK细胞信号转导通路的抑制剂:SB203580(P38抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂),然后加酒精(100mM)处理C2C12细胞6小时后,用Western Blot技术检测不同组atrogin-1蛋白的表达变化,以研究酒精对atrogin-1蛋白的影响与各个MAPK细胞信号转导通路之间的关系。结果:1.通过更换分化培养基的方法,诱导C2C12成肌细胞分化为肌管:在C2C12成肌细胞增殖达到80～90%融合时,将增殖培养基换为分化培养基,隔天换液,观察到在第5～7天时分化达高峰。***-8法细胞活性检测结果显示:酒精(0～200mM)对于C2C12细胞的活性无影响。3.酒精(100mM)作用于C2C12细胞2小时后,细胞内的ROS水平即有升高,在4小时达到高峰,与正常组对比有显著性差异(P100mM)作用于C2C12细胞2-12小时中,atrogin-1蛋白表达水平与对照组相比,均有显著性升高(P100mM)作用C2C12细胞2小时后,磷酸化蛋白P38水平明显升高,与对照组对比有显著性差异(Patrogin-1蛋白水平明显降低。结论:1.酒精(100mM)可引起C2C12细胞中活性氧产生的增加,诱发氧化应激反应,引起细胞内atrogin-1蛋白表达增加。2.酒精可通过P38 MAPK信号通路引起C2C12细胞内atrogin-1蛋白表达增加。

关键词：酒精 C2C12成肌细胞 ROS P38 MAPK atrogin-1

atrogin-1基因过表达对肌肉细胞营养状况的影响

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外科理论与实践 2008年第2期13卷 145-148页

作者：袁磊吴国豪张波复旦大学附属中山医院普外科上海200032

目的:构建含atrogin-1基因的慢病毒载体,并研究atrogin-1过表达对骨骼肌细胞营养状况的影响。方法:PCR合成两端含酶切位点的atrogin-1cDNA全长,酶切后多次重组使之克隆到慢病毒核心载体FG12中;经限制性酶切和测序鉴定重组载体后,用它感... 详细信息

目的:构建含atrogin-1基因的慢病毒载体,并研究atrogin-1过表达对骨骼肌细胞营养状况的影响。方法:PCR合成两端含酶切位点的atrogin-1cDNA全长,酶切后多次重组使之克隆到慢病毒核心载体FG12中;经限制性酶切和测序鉴定重组载体后,用它感染小鼠成肌细胞,构建稳定株,将细胞进行分化,以Western印迹法检测atrogin-1蛋白表达,并观察细胞形态学的变化。结果:atrogin-1慢病毒载体中含有大小、序列正确的片段,感染该病毒的小鼠成肌细胞裂解液中能检测到atrogin-1蛋白的高表达,且显示细胞明显萎缩。结论:成功构建了含atrogin-1基因的慢病毒载体。该载体可使小鼠成肌细胞过表达atrogin-1蛋白,引起肌肉细胞萎缩。

关键词：基因, atrogin-1 慢病毒载体肌营养不良小鼠

八宝丹抑制TNF-α诱导C2C12成肌细胞atrogin-1表达的研究

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福建中医药 2022年第7期53卷 21-25页

作者：赵棋琴陈进晓沃达何嘉彭军朱伟东任丹妮福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建中医药大学科技创新与转化中心福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122

目的研究八宝丹(BBD)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12成肌细胞中核因子κB(NF-κB)通路及下游通路UPS系统中萎缩相关基因1(atrogin-1)的作用。方法①筛选BBD干预浓度实验:取对数生长期C2C12成肌细胞分别予0、0.125、0.25、0.5、0... 详细信息

目的研究八宝丹(BBD)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12成肌细胞中核因子κB(NF-κB)通路及下游通路UPS系统中萎缩相关基因1(atrogin-1)的作用。方法①筛选BBD干预浓度实验:取对数生长期C2C12成肌细胞分别予0、0.125、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL不同浓度BBD干预48 h,采用MTT法检测细胞活力;②筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验:取对数生长期C2C12成肌细胞,分别予0、1、10、50 ng/mL TNF-α蛋白液刺激C2C12成肌细胞,Westernblot法检测p-P65、atrogin-1蛋白表达以筛选出TNF-α刺激细胞的最佳浓度;再根据TNF-α刺激细胞的最佳浓度干预C2C12成肌细胞0 min、8 min、15 min、30 min、1 h、4 h,West⁃ernblot法检测p-P65、atrogin-1蛋白筛选出TNF-α刺激细胞的最佳时间;③BBD干预实验:将C2C12成肌细胞随机分为空白对照组、药物对照组、模型组、八宝丹组,药物对照组和八宝丹组分别加入BBD预处理2 h,再根据筛选的TNF-α刺激细胞最佳浓度和时间,于模型组和八宝丹组中加入TNF-α刺激细胞,Westernblot法检测p-P65、atrogin-1的蛋白表达水平。结果①筛选BBD干预浓度实验结果表明,不同浓度BBD对C2C12成肌细胞活力无影响(P>0.05),根据本课题组前期研究结果,最终选取0.75 mg/mL作为BBD干预细胞浓度;②筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验结果表明,10 ng/mL TNF-α刺激C2C12成肌细胞8 min后p-P65蛋白表达明显升高(P10 ng/mLTNF-α刺激C2C12成肌细胞4 h后atrogin-1蛋白表达水平明显升高(P1);③BBD干预实验结果表明,与空白对照组比较,模型组p-P65、atrogin-1蛋白表达显著上调(P1);与模型组比较,八宝丹组p-P65、atrogin-1蛋白表达显著下调(P1)。结论BBD可抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中NF-κB的磷酸化水平及下游通路atrogin-1蛋白表达。

关键词：八宝丹 C2C12成肌细胞 TNF-α p-P65 atrogin-1

人参总皂苷对体外培养肌管形态及atrogin-1表达的影响

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中国中西医结合肾病杂志 2012年第8期13卷 666-668,I0001页

作者：许烨丁婷婷王会玲张金元中国人民解放军第四五五医院肾脏科南京军区肾脏病研究所上海200052

目的:慢性肾衰竭(CKD)尤其进入终末期透析的患者常并发以骨骼肌蛋白质-能量消耗为特征的营养不良,研究表明atrogin-1激活是肌肉蛋白分解的关键步骤。本实验通过培养肌细胞,观察人参总皂苷的干预下,对糖皮质激素作用下肌细胞形态改变及At... 详细信息

目的:慢性肾衰竭(CKD)尤其进入终末期透析的患者常并发以骨骼肌蛋白质-能量消耗为特征的营养不良,研究表明atrogin-1激活是肌肉蛋白分解的关键步骤。本实验通过培养肌细胞,观察人参总皂苷的干预下,对糖皮质激素作用下肌细胞形态改变及atrogin-1的表达的影响。方法:培养小鼠肌原细胞C2C12并使之融合成肌管,以不同浓度的地塞米松(0～10μm)和人参总皂苷(100μmol/L)刺激肌管后,镜下观察肌管形态改变,Westernblot检测atrogin-1蛋白表达水平。结果:糖皮质激素地塞米松作用下,可剂量依赖性地使肌管变细,肌管atrogin-1蛋白表达水平显著增高;在人参总皂苷干预后,肌管形态较地塞米松组增粗,同时肌管atrogin-1蛋白降低(Patrogin-1蛋白表达水平。

关键词：骨骼肌萎缩人参皂苷 atrogin-1