检索结果-南通市图书馆

作者：江毅丹江苏大学

学位级别：硕士

背景:过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)包括PPARα、PPARγ、PPARδ。PPARs是细胞核受体转录子,PPARs与视黄醇类X受体(RXRs)形成二聚体(PPARs/RXRs),随后结合在靶基因启动子上并调控基因的表达。大量研究表明,PPARδ异常表达或激... 详细信息

背景:过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)包括PPARα、PPARγ、PPARδ。PPARs是细胞核受体转录子,PPARs与视黄醇类X受体(RXRs)形成二聚体(PPARs/RXRs),随后结合在靶基因启动子上并调控基因的表达。大量研究表明,PPARδ异常表达或激活促进炎症、代谢及肿瘤发生。我们课题组以前的研究表明,PPARδ过表达或激活促进肿瘤细胞代谢,增强肠道炎-癌转化。此外,虽然我们之前的研究表明PPARα促进肿瘤细胞自噬,增强肿瘤细胞化疗药物敏感性,但是PPARδ对肿瘤细胞自噬的影响目前尚不清楚。自噬是细胞内重要的催化降解过程,其通过溶酶体降解细胞内大分子物质(蛋白质、脂类等)或细胞器(线粒体、细胞核等)。在自噬形成过程中,自噬相关蛋白7(atg7)发挥了重要的作用。基于此,本课题将揭示PPARδ与atg7的相关性及其对肿瘤细胞自噬的影响机制。方法:利用CRISPR/Cas9方法建立了PPARδ基因敲除SW480细胞系;构建PPARδsh RNA质粒及PPARδ质粒并转染细胞;利用Western blot分析相关蛋白的表达水平;利用免疫荧光分析细胞内自噬体形成;利用荧光定量PCR分析相关基因的表达水平;建立异植瘤模型(Xenograft)分析PPARδ过表达或激活条件下对肿瘤生长的影响。结果:Western blot和免疫荧光分析结果表明,PPARδ基因敲除或沉默增加肿瘤细胞自噬相关蛋白LC3-II的积累和自噬体的形成,与此相反,PPARδ过表达抑制这一现象。荧光定量PCR分析结果表明,PPARδ过表达抑制atg7基因表达,进而降低atg7蛋白水平,与此相反,PPARδ基因敲除或沉默逆转这一现象。异植瘤裸鼠模型分析表明,PPARδ过表达显著促进肿瘤生长,且Western blot分析表明PPARδ显著降低肿瘤组织atg7蛋白水平及减少LC3-II的积累。此外,PPARδ激活子GW501516降低肿瘤细胞atg7表达及减少LC3-II的积累,进一步分析表明,GW501516显著促进肿瘤生长,且Western blot分析表明激活子降低肿瘤组织中atg7蛋白表达和LC3-II的积累。结论:PPARδ抑制atg7基因和蛋白的表达,从而抑制自噬形成;此外,PPARδ促进肿瘤生长与抑制肿瘤细胞自噬相关。进一步分析表明,PPARδ激活子GW501516促进肿瘤生长并抑制肿瘤细胞自噬形成。

来源：

同方学位论文库评论

miR-210在食管鳞癌发生中的功能研究

引用

作者：杨万里中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

[背景]食管癌是全球第七大常见恶性肿瘤,也是第六大癌症致死病因。目前,全世界约有超过57万的食管癌患者,其发病率仍在逐年上升。由于缺乏有效的早诊及治疗手段,其五年生存率极低。因此,发现新的早诊标志物分子、建立有效的治疗策略、... 详细信息

[背景]食管癌是全球第七大常见恶性肿瘤,也是第六大癌症致死病因。目前,全世界约有超过57万的食管癌患者,其发病率仍在逐年上升。由于缺乏有效的早诊及治疗手段,其五年生存率极低。因此,发现新的早诊标志物分子、建立有效的治疗策略、提高患者的生存质量是食管癌研究领域迫切需要解决的问题。microRNAs(miRNAs)是一类长度为18-25个核苷酸的非编码小RNA。miRNAs通过抑制下游靶分子的翻译进而发挥其功能,这一过程在细胞的生理及病理过程中发挥着重要作用。前期,课题组检测了25例食管鳞癌患者的癌组织及癌旁组织中miR-210的表达水平,发现miR-210在食管鳞癌组织中表达降低,且低表达miR-210的食管鳞癌患者临床预后较差。但miR-210在食管鳞癌中的具体作用及分子机制尚不明确,本课题将对此展开深入研究。[目的]1.检测miR-210在食管鳞癌组织和细胞中的表达水平。2.探究miR-210对食管鳞癌恶性表型的影响。3.探讨miR-210影响食管鳞癌发生发展的分子机制。[方法]***检测miR-210在食管鳞癌细胞及组织中的表达。2.构建miR-210的过表达和低表达慢病毒载体,合成miR-210 mimic和inhibitor。分别通过稳定转染或瞬时转染建立miR-210过表达和低表达的细胞模型及相应的对照细胞模型。3.通过CCK-8实验及平板克隆形成实验研究miR-210对食管鳞癌细胞增殖的影响;运用流式细胞仪检测miR-210对食管鳞癌细胞周期和细胞凋亡的影响;利用Transwell实验观察miR-210对食管鳞癌细胞侵袭和迁移的影响;通过裸鼠成瘤实验和裸鼠尾静脉转移实验观察miR-210对食管鳞癌细胞体内成瘤能力及体内转移能力的影响。4.联合生物信息学分析与全基因组表达谱芯片筛选miR-210的下游靶基因;通过qPCR、Western Blot及双荧光素酶报告基因实验验证miR-210的下游靶基因。5.探究miR-210调控食管鳞癌转移的相关分子机制。[结果]1.与正常食管上皮细胞系Het-1A相比,miR-210在食管鳞癌细胞系中低表达;与癌旁组织相比,miR-210在食管鳞癌组织中的表达降低。2.成功建立了过表达和低表达miR-210的食管鳞癌细胞模型。CCK-8实验及平板克隆形成实验表明miR-210能够抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及克隆形成能力;Transwell实验表明miR-210能够抑制食管鳞癌细胞的体外侵袭和迁移能力;流式细胞检测发现miR-210可促进化疗药物ADR或VCR诱导的食管鳞癌细胞凋亡;同时,miR-210可抑制细胞周期进展;裸鼠成瘤实验及裸鼠尾静脉转移实验表明miR-210可抑制食管鳞癌细胞的体内生长及转移能力。3.通过基因芯片、生物信息学分析、qPCR、Western Blot、报告基因实验等方法证实atg7为miR-210的下游直接靶基因。4.通过功能实验及分子生物学实验等证实miR-210可以通过抑制atg7进而抑制自噬发生。通过挽救实验和机制研究发现miR-210可通过atg7/Wnt/β-catenin通路抑制食管鳞癌的侵袭和转移。[结论]本研究明确了miR-210在食管鳞癌细胞和组织中处于低表达水平,提示miR-210表达降低可能与食管鳞癌的发生发展相关。此外,我们研究了miR-210在调控食管鳞癌恶性表型中所发挥的功能,结果表明miR-210在食管鳞癌中起到抑制细胞增殖、抑制细胞侵袭转移、促进化疗药物诱导的细胞凋亡等作用。同时,我们还发现miR-210对食管鳞癌细胞自噬具有调控作用,研究结果表明miR-210可以通过抑制atg7表达进而抑制细胞自噬。最后,本研究提出并阐明miR-210可通过atg7/Wnt/β-catenin通路抑制食管鳞癌的侵袭转移。本研究为深入了解miR-210在食管鳞癌恶性表型中发挥的作用与调控机制提供了理论依据,因此,miR-210有望成为食管鳞癌治疗中的新靶点。

来源：

同方学位论文库评论

自噬诱导和抑制对MIN6细胞株分化的作用初探

引用

作者：毛淑炯浙江大学

学位级别：硕士

背景和实验目的：糖尿病发病机制中有两个重要环节,就是胰岛p细胞分泌胰岛素不足和周围组织的胰岛素抵抗。如何促进胰岛p细胞的增殖、诱导p细胞再生并抑制p细胞凋亡是近年研究的热点。胰岛ε细胞与p细胞来源于共同的内分泌前体细胞,通... 详细信息

背景和实验目的：糖尿病发病机制中有两个重要环节,就是胰岛p细胞分泌胰岛素不足和周围组织的胰岛素抵抗。如何促进胰岛p细胞的增殖、诱导p细胞再生并抑制p细胞凋亡是近年研究的热点。胰岛ε细胞与p细胞来源于共同的内分泌前体细胞,通过内源性机制保持分化的平衡。Ghrelin表达于ε细胞,insul in表达于p细胞。前期研究已发现宫内营养不良新生大鼠胰岛存在ε/p细胞分化失衡,其ε细胞数量和分布也与对照组显著不同,且上述ε/p细胞失衡与后期糖尿病风险密切相关。因此,明确ε/p分化失衡的机制有助于调控p细胞定向分化和增殖,是从发育早期干预和逆转糖尿病进程的重要切入点。新近的研究发现,自噬在调控ε/p分化、防止p细胞凋亡、维持p细胞数量及内环境稳定方面发挥极其重要的作用。自噬(autophagy)是细胞内形成的双层膜结构的自噬小体,包裹所降解的物质、大分子或细胞器,并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬相关蛋白7(autophagy-related protein 7, atg7)是维持成年干细胞多向分化性的重要调节因子;雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)是细胞内营养状态的感受器,当细胞内营养丰富时,mTOR活化,通过抑制下游atg蛋白,抑制自噬的发生;饥饿状态时mTOR活化被抑制,atg家族成员活化,促进自噬体的形成。mTOR抑制因子及自噬活化因子能够显著提高诱导性多能干细胞产生的速度和效率;自噬也有助于维持处于分化终点的细胞稳态。基于以上背景,自噬可能在胰岛p细胞和ε细胞分化过程中发生作用,但具体机制尚不清楚。本研究拟用小鼠胰岛细胞瘤MIN6细胞株为模型,在体外培养,通过抑制或诱导剂调控自噬信号,在培养的不同阶段加入针对不同自噬阶段抑制剂或诱导剂,观察其对MIN6细胞株表达定向ghrelin分布和insulin的变化,以此推测其分化为ε/p细胞的潜能的变化,希望本结果可以为探索1型糖尿病的发生原因奠定基础。实验方法：利用小鼠胰岛素瘤MIN6细胞株,在培养的不同阶段加入针对不同自噬阶段的抑制剂或诱导剂,以PT-PCR、Western blot检测其对培养细胞自噬途径中关键因子LC3、atg7、LAMP2、p62等表达的影响,同时以免疫荧光检测MN6细胞株表达ghrelin分布和insulin的变化,来探讨自噬对胰岛ε/p细胞分化的影响。实验结果：1.诱导／抑制自噬过程中几种自噬调控蛋白与效应蛋白的mRNA水平及蛋白水平进行检测发现,饥饿组细胞BECLIN1表达降低(Patg7、LAMP-2基因表达增高,Lc3和P62基因未见明显改变;3-MA组细胞中BECLn,基因和Lc3基因表达降低(P<0.05),其余基因未见明显的改变。Western-blotting对比检测抑制／诱导组与正常对照组中LC3与p62、LAMP2的水平,相对于对照组细胞,饥饿组细胞P62蛋白水平堆积(P<0.05), Lc3-Ⅱ/Ⅰ表达降低(P<0.05);3-MA组细胞中P62水平未见明显变化,Lc3-Ⅱ/Ⅰ比例明显降低(P<0.05)。LAMP-2蛋白在三组细胞中的表达未见明显变化。2. RT-PC R的结果同免疫荧光结果相一致,饥饿组细胞insulin基因的转录水平明显升高,3-MA组细胞insulin基因的转录水平则明显降低,饥饿组和3-MA组ghrelin基因的转录水平都显著降低。3.细胞分化实验的免疫荧光结果显示,同对照组细胞相比,饥饿组细胞分泌insulin的细胞比例明显升高,而3-MA组中分泌insulin的细胞比例则明显降低。同对照组相比,饥饿组和3-MA组分泌ghrelin的细胞比例都明显降低。结论：***6细胞株饥饿时出现insulin基因转录显著增加,ghrelin基因转录显著降低,提示ε/β失衡,从而说明ε/p细胞失衡与饥饿诱导有关;2.从自噬相关途径上的因子表达水平上,本实验中饥饿并没有诱导出自噬的发生。

来源：

同方学位论文库评论

油菜Bnatg8-拟南芥转基因系的建立及其自噬功能的研究

油菜BnAtg8-拟南芥转基因系的建立及其自噬功能的研究

引用

作者：秦英兰州大学

学位级别：硕士

自噬(Autophagy,AP)是一种重要的细胞分子生物学活动,通过对受损或死亡的细胞、细胞器以及生物大分子的降解和再利用,在维持细胞的静态平衡、发育模式重构、自体免疫以及抵抗逆境胁迫过程中发挥重要的用。自噬的早期研究主要集中于酵母... 详细信息

自噬(Autophagy,AP)是一种重要的细胞分子生物学活动,通过对受损或死亡的细胞、细胞器以及生物大分子的降解和再利用,在维持细胞的静态平衡、发育模式重构、自体免疫以及抵抗逆境胁迫过程中发挥重要的用。自噬的早期研究主要集中于酵母,随后扩展到动物细胞,相比而言,植物自噬的研究起步较晚,并且主要集中在离体培养的细胞,而在个体水平上的研究相对较少。本研究利用携带GFP标签和甘蓝型油菜自噬相关基因atg8(Bn atg8)的表达载体,通过农杆菌介导的花序浸染法转化野生型拟南芥,得到了相应Bn atg8转基因系,并通过形态学比较、GFP和MDC荧光检测以及RT-PCR等技术,分析比较了拟南芥野生型、Bnatg8转基因系以及自噬atg5和atg7突变体在正常生长和逆境胁迫条件下在形态学、生理生化、细胞以及分子生物学中的差异,探究了自噬在植物生长发育以及抗逆活动中的功能。主要结果如下:(1)通过转化及PCR鉴定,成功获得了3个Bn atg8-拟南芥转基因纯合系,其中两个GFP和Bnatg8二者都有表达(GFP-Bn atg8转基因系),另一个只Bn atg8表达(Bnatg8转基因系)。(2)通过半定量RT-PCR法分析比较了20、40、60天苗龄的转基因拟南芥叶片以及50天苗龄植株的叶片、花序茎及果荚中Bn atg8基因的转录水平,结果发现,不同苗龄转基因系叶片中Bnatg8基因的转录水平存在显著的差异,其中60天的转录水平高于40和20天的转录水平,40天的转录水平又高于20天的转录水平(60d>40>d20d).此外,在叶片中的表达水平高于在花序茎和果荚中的表达水平,在花序茎中的表达水平又高于在果荚中的表达水平(叶片>花序茎>果荚)。(3)激光共聚焦显微观察转基因系根尖GFP荧光分布发现,绿色荧光广泛分布在根尖的各个部位,荧光呈点状分布,其荧光强度从分生区到伸长区至根冠依次减弱。观察转基因植株花粉形成过程中不同时期中细胞内GFP荧光发现,荧光也呈点状分布,并且在四分体时期的荧光强度要高于小孢子。(4)自噬体(泡)特异染色剂MDC染色后荧光显微镜观察发现,转基因植株和野生型根尖所有区域都显示MDC荧光,但转基因根尖的荧光强度高于野生型根尖的荧光强度。(5)观察分析转基因系、野生型和自噬突变体生长过程中的表型发现,在初生根和下胚轴的生长方面,转基因系的生长速率大于野生型的生长速率,而野生型的生长速率又大于自噬突变体的生长速率;在叶面积方面,转基因型的最大,为野生型次之,自噬突变体的最小。在抽薹期方面,转基因系和自噬突变体的相对于野生型的都明显提前,生长周期缩短,其中自噬缺失突变体的变化更为明显。此外,与野生型相比,转基因系的株高和种子产量没有明显的改变,而自噬突变体的株高明显变矮,单株种子产量也明显降低。(6)生理学研究发现:在饥饿胁迫下,野生型和转基因系的萌发率无明显差异,但是两个自噬突变体的萌发率要远远低于野生型;在盐胁迫下,在种子萌发率方面,转基因系明显地高于自噬突变体,但又低于野生型。以上结果表明,油菜Bnatg8的表达对拟南芥的生长发育,耐环境胁迫的能力以及自噬活动的强度有明显的影响。这种情况表明,自噬在调节植物生长发育方面也可能发挥一定的作用。这种作用对于植物的生长发育来说既有积极的的一面也有消极的一面,只有适量强度的自噬才利于植物的生长发育。

来源：

同方学位论文库评论

线粒体自噬在红系白血病细胞中的作用

引用

作者：王健苏州大学

学位级别：硕士

目的:研究红系白血病细胞中,是否存在非经典自噬,以及非经典自噬在红系白血病细胞生长、分化和应激反应方面的作用,阐明其与经典自噬之间的关系,及其在线粒体降解过程中的作用,为理解白血病细胞的恶性生长优势提供细胞学新依据。方法:(1... 详细信息

目的:研究红系白血病细胞中,是否存在非经典自噬,以及非经典自噬在红系白血病细胞生长、分化和应激反应方面的作用,阐明其与经典自噬之间的关系,及其在线粒体降解过程中的作用,为理解白血病细胞的恶性生长优势提供细胞学新依据。方法:(1)通过使用CRISPR/Cas9技术,构建atg7敲除的K562细胞系。(2)通过台盼兰染色细胞计数、Annexin V/PI流式染色(Flow Cytometry,FCM)和细胞集落分析K562细胞生长、增殖和分化能力的变化。(3)通过透射电镜技术TEM和线粒体染色流式分析atg7-/-的K562细胞中线粒体、ROS的变化情况,同时确认在atg7缺失的情况下,细胞中是否存在自噬体状结构。(4)使用线粒体自噬的诱导剂CCCP处理野生型和atg7-/-K562细胞,通过线粒体流式染色和Western Blot技术检测细胞中线粒体数量的变化情况。(5)通过Western Blot技术检测非经典自噬的关键蛋白的表达量,分析atg7-/-K562细胞中非经典自噬过程的状态。(6)使用非经典自噬抑制剂BFA和敲低非经典自噬关键基因RAB9A,分析当两种自噬同时受到抑制的情况下,线粒体自噬的发生情况。(7)使用Comet Assay和Western Blot技术检测在细胞在经历电离辐射的情况下,两种自噬在DNA修复过程中的作用。结果:(1)成功使用CRISPR/Cas9技术构建atg7-/-K562细胞系。(2)atg7的缺失会导致K562生长速度变慢,细胞周期阻滞在G2/M期以及分化潜能降低,但不会改变细胞中线粒体数量和ROS的水平。(3)在atg7-/-K562细胞中,能够观察到双层膜包裹的自噬体状结构,同时,atg7的缺失会导致非经典自噬通路的增强。(4)CCCP诱导的线粒体自噬的发生并不依赖于atg7。(5)加入非经典自噬抑制剂BFA、敲低非经典自噬关键基因RAB9A,线粒体自噬不能正常的发生。(6)同时抑制经典自噬和非经典自噬,K562细胞在代谢压力的情况下,表现为细胞凋亡、ROS水平升高。(7)非经典自噬可能通过RAD50在DNA修复过程中发挥作用。结论:在红系白血病细胞系K562中,同时存在经典自噬和非经典自噬,当经典自噬被阻断后,非经典自噬起到一定程度的补偿作用。但同时,细胞内的一些重要事件,如线粒体自噬的发生主要通过非经典自噬。本研究从自噬的视角,理解白血病细胞的生长优势,为白血病的临床治疗提供了数据参考。

来源：

同方学位论文库评论

miR-1266在肝细胞癌中的表达及其生物学行为研究

引用

作者：韦良家广西医科大学

学位级别：硕士

目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌)是我国常见的恶性肿瘤之一,起病隐匿、病程短、死亡率高。HCC的发生发展的分子机制复杂且尚未完全清楚,相关研究发现miRNA参与HCC生物学行为,促进HCC的发生发展。本研究前期通过公... 详细信息

目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌)是我国常见的恶性肿瘤之一,起病隐匿、病程短、死亡率高。HCC的发生发展的分子机制复杂且尚未完全清楚,相关研究发现miRNA参与HCC生物学行为,促进HCC的发生发展。本研究前期通过公共数据库筛选肝癌差异表达的miR-1266及其靶基因atg7,在人群肝癌组织中验证miR-1266、atg7,在HepG2细胞株中构建miR-1266过表达和抑制表达,探讨miR-1266对肝癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等生物学行为的影响。为肝癌的早期诊断和靶向治疗提供理论依据。方法1.生物信息学分析:(1)下载TCGA数据库(the Cancer Genome Atlas)肝癌基因表达数据,筛选差异表达miRNA,再经检索文献,选择尚未在肝细胞癌中报道且参与肿瘤相关生物学功能的miR-1266作为本研究的候选基因;(2)应用miRNA靶基因预测网站(TargetScan、RNA22、miRwalk、miRtarbase)预测miR-1266的候选靶基因,再利用TCGA数据库分析miR-1266和候选mRNA的相关性,将负相关的作为miR-1266的候选靶基因。经文献检索,本研究选择atg7作为miR-1266候选靶基因进行研究;(3)下载TCGA数据库的肝癌患者临床信息数据,分析miR-1266和肝癌患者临床病理特征关系,并采用Kaplan-Meier法分析miR-1266对肝癌预后的影响。2.在人群肝癌组织中验证基因表达:收集广西医科大学附属肿瘤医院HCC患者的肝癌组织及配对癌旁组织60对,并收集患者的临床病理相关信息。实时荧光定量PCR方法检测肝癌组织及配对癌旁组织样本中miR-1266和atg7的表达,分析miR-1266和atg7的相关性及miR-1266、atg7与临床病理特征的关系。3.在肝癌细胞株中验证基因表达:在上海中科院细胞所购买6株(BEL-7404、SK-HEP-1、SMCC-7721、Hep 3B、Huh7、HepG2)肝癌细胞株,用实时荧光定量PCR检测6株肝癌细胞株miR-1266表达。对HepG2细胞构建过表达和抑制表达体系,同时检测miR-1266和atg7的表达。4.细胞功能实验:对HepG2细胞构建过表达和抑制表达体系,进行细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验,探讨miR-1266对肝癌细胞Hep G2生物学行为的影响。结果1.生物信息学分析显示:(1)TCGA数据库共提供377个HCC患者的数据,平均年龄59岁,其中209例临床数据与基因表达数据完整且匹配。对377例肝癌组织和50例癌旁组织进行测序,50例癌旁组织均来源于377例肝癌组织。(2)共筛出98个差异的miRNA,其中27个上调,71个下调,基于文献检索后,选择尚未在肝细胞癌中报道且参与肿瘤相关功能的miR-1266作为本研究的候选基因。(3)4个miRNA靶基因预测网站取交集共筛出60个mRNA,其中GRINA、PCSK2、RAB15、PTDSS2、EIF5AL1、MUTYH、atg7与miR-1266呈负相关(Patg7作为miR-1266的候选靶基因。(4)miR-1266与临床病理特征的关系:miR-1266的表达水平与肿瘤分级、甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)、年龄分布差异有统计学意义(P0.05)。(5)Kaplan-Meier法分析显示,miR-1266表达水平与HCC生存时间无统计学关联(P>0.05)。2.人群肝癌样本基因表达分析结果显示:(1)miR-1266在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织(t=3.402,P=0.001),atg7在肝癌组织中的表达水平低于癌旁组织(t=-2.44,P=0.019);(2)miR-1266在肝癌组织中与atg7呈负相关(r=-0.324,P=0.023);(3)miR-1266的表达水平在肿瘤分化程度、甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)分布差异有统计学意义(P0.05)。(4)atg7的表达水平在肿瘤大小、巴塞罗那(BCLC)分期分布差异有统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、职业、有无门脉高压、有无家族史、有无HBsAg感染、

来源：

同方学位论文库评论

去乙酰化酶介导肝癌化疗耐药机制的研究

引用

作者：王志勇南京大学

学位级别：硕士

研究一SIRT1对***的调节以及在肝癌细胞化疗耐药中的作用耐药是目前抗肿瘤治疗中化疗失败最常见的原因,肝癌对化疗放疗均不敏感。肿瘤耐药的原因很复杂,是多因素共同作用、相互影响的结果。去乙酰化酶Sirtuin蛋白与肿瘤化疗抵抗和... 详细信息

研究一SIRT1对***的调节以及在肝癌细胞化疗耐药中的作用耐药是目前抗肿瘤治疗中化疗失败最常见的原因,肝癌对化疗放疗均不敏感。肿瘤耐药的原因很复杂,是多因素共同作用、相互影响的结果。去乙酰化酶Sirtuin蛋白与肿瘤化疗抵抗和多药耐药密切相关,是自噬、凋亡的重要调控分子。细胞自噬、凋亡与肿瘤发生发展及化疗耐药密切相关。我们提出的假设：Sirtuin是否通过调控自噬及凋亡抑制相关蛋白而促进肿瘤的耐药?是否能成为治疗肿瘤的潜在靶点?本实验以基因SIRT1、atg7、XIAP为研究对象,肝癌细胞株HCC-LM3、hepG2为体外模型,研究三个基因在肝癌细胞化疗耐药中的作用以及SIRT1对atg7、XIAP的调控作用。目的观察SIRT1、 atg7以及XIAP在肝癌细胞化疗耐药中的作用以及SIRT1对atg7、XIAP调节的影响方法通过细胞增殖实验观察hepG2、HCC-LM3细胞株在化疗药物5-FU作用下的反应差异;定量PCR检测hepG2、HCC-LM3SIR1、***基因mRNA表达;通过细胞增殖实验观察分别下调三个基因表达并与5-FU联用协同效果;调节HCC-LM3SIRT1表达,定量PCR检测atg7、XIAP基因mRNA变化。结果HCC-LM3细胞株对化疗药物5-FU表现耐药,SIRT1、atg7、XIAP的mRNA的表达均高于hepG2;使用SIRT1-siRNA、3MA、Embelin联用均能协同抑制HCC-LM3细胞增殖;SIRT1激动剂白藜芦醇上调SIRT1的同时,atg7和XIAP的表达也显著上调,SIRT1特异性抑制剂EX527在下调SIRT1的同时,atg7和XIAP的表达则显著下调。结论1)化疗耐药细胞株SIRT1、atg7、XIAP均异常增高,分别下调三个基因均可提高化疗敏感。2)通过对自噬相关基因和抑制凋亡相关蛋白基因的表达的调控,可能是SIRT1高表达所产生的耐药机制。研究二SIRT1、atg7及XIAP在肝癌中表达及相关性的研究目的在临床肝癌样本进一步验证上述三个基因之间相互关系,及其临床相关性。方法荧光定量PCR法检测肝癌组织及配对正常肝组织SIRT1、atg7、XIAP mRNA表达水平。采用SPSS17.0分析三个基因之间的相关性及其与病理分期、肿瘤指标、肝功能分级、肿瘤分化程度等因素的关系。结果肝癌样本中SIRT1、atg7、XIAP mRNA水平的表达均高于相同病例中正常肝组织,而且SIRT1、atg7、XIAP的表达均呈正相关（p＜0.01）,但与肿瘤的分化程度、病理分期、甲胎蛋白AFP、肝功能分级等肿瘤生物学行为并无明显关系。结论肝癌患者中,去乙酰化酶SIRT1、细胞自噬基因atg7及凋亡抑制蛋白XIAP的表达在肝癌组织中均高于正常肝组织,三者之间呈正相关,但与肿瘤的恶性程度、肝功能及患者的预后无明显关系。

来源：

同方学位论文库评论

组蛋白转录因子Spt21的表达调控机制研究

引用

作者：徐晨湖北大学

学位级别：硕士

在真核生物中,染色体是由一连串的核小体压缩组装形成。核小体是由147 bp的DNA缠绕组蛋白八聚体形成。核心组蛋白可以分为四种,包括组蛋白H3、H4、H2A和H2B。核心组蛋白的表达严格地受细胞周期调控。细胞周期包括G1、S、G2和M四个不同... 详细信息

在真核生物中,染色体是由一连串的核小体压缩组装形成。核小体是由147 bp的DNA缠绕组蛋白八聚体形成。核心组蛋白可以分为四种,包括组蛋白H3、H4、H2A和H2B。核心组蛋白的表达严格地受细胞周期调控。细胞周期包括G1、S、G2和M四个不同的时期。在细胞周期的S期,组蛋白基因大量表达;在细胞周期的S期之外,组蛋白的表达被抑制。严格调控组蛋白的表达水平对细胞有重要意义。组蛋白表达水平不足会造成细胞周期停滞,导致细胞去分化、细胞衰老和细胞癌变。组蛋白的过多积累会对细胞产生毒性。组蛋白的表达受到很多因子的调控,分为抑制因子和激活因子。Spt21是调控组蛋白基因转录的激活因子。Spt21通过Spt10结合到组蛋白基因的启动子区域,进而招募组蛋白乙酰转移酶使启动子区域的组蛋白发生乙酰化,最终激活组蛋白基因的转录。Spt21的表达同样受细胞周期的调控。在细胞周期的S期,Spt21蛋白大量积累去激活组蛋白基因的转录。在细胞周期的S期之外,Spt21蛋白被降解。Spt21蛋白与核心组蛋白在细胞周期调控的模式上是一致的。因此,Spt21在维持组蛋白水平方面发挥着关键作用。研究在细胞周期中Spt21表达调控机制显得尤为重要。细胞内蛋白质的降解途径主要分为泛素-蛋白酶体系统和自噬途径。在泛素-蛋白酶体降解系统里,泛素分子通过三步级联酶反应被共价连接到蛋白质底物上,含有多个泛素分子的底物迅速被招募到蛋白酶体中进行降解。自噬途径是将受损细胞器和错误蛋白运输到溶酶体或液泡中进行降解的过程。当细胞处于G1期时,APC/C复合物能够识别Spt21的KEN区域,促进Spt21被泛素-蛋白酶体途径所降解。然而,在细胞周期其它时期Spt21的表达调控机制尚未报道。本文主要研究在细胞周期中Spt21表达调控机制。研究结果如下:1.在细胞中Spt21的蛋白含量处于较低水平。当缺失SPT21基因时,细胞生长几乎不受影响。我们构建过表达SPT21基因的菌株,通过细胞生长实验和梯度稀释实验发现Spt21蛋白的积累过多会导致细胞生长明显减慢,细胞抗DNA损伤的能力明显减弱。说明维持正常低水平的Spt21对细胞有重要作用。2.通过细胞周期实验发现Spt21在m RNA和蛋白水平上都受细胞周期的严格调控。SPT21的转录水平在细胞周期的G1晚期达到峰值,在其它时期较低。Spt21的蛋白水平在细胞周期的S期达到峰值,在其它时期较低。***21可以被自噬途径降解。通过敲除参与蛋白酶体途径或自噬途径的基因,发现Spt21蛋白在细胞周期的S/G2期被自噬途径降解。通过雷帕霉素和氮饥饿诱导自噬进一步验证了Spt21蛋白可以被自噬途径降解。4.为了寻找自噬途径中参与调控Spt21降解的蛋白,我们通过蛋白质免疫印迹筛选了自噬相关蛋白。结果发现敲除atg7和atg8基因可以抑制Spt21被自噬降解的过程。在雷帕霉素和氮饥饿诱导自噬的情况下,敲除atg7和atg8基因也能抑制Spt21被自噬降解的过程。***21可以与自噬蛋白直接相互作用。免疫共沉淀实验显示Spt21和自噬蛋白(atg7、atg8)存在相互作用,说明atg7和atg8蛋白通过与Spt21蛋白相互作用调控Spt21被自噬降解的过程。本研究发现了一种新的调控Spt21表达的方式,揭示了细胞周期通过调控Spt21的水平来调控组蛋白基因表达的机制。在细胞周期的G1期,Spt21蛋白通过泛素-蛋白酶体途径被降解;在S期Spt21蛋白积累来激活组蛋白基因的表达;在G2期Spt21蛋白通过自噬途径被降解。这为后续进一步研究Spt21被自噬降解的具体机制提供了理论基础。本研究发现在酿酒酵母细胞中Spt21蛋白积累过多会对细胞产生毒性。正确调控Spt21的水平对细胞进行正常生命活动具有重要意义。

来源：

同方学位论文库评论

SIRPα 3'UTR通过ceRNA网络调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬反应的机制研究

SIRPα 3'UTR通过ceRNA网络调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬反应...

引用

作者：洪丹彤宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的研究SIRPα通过miR-106a相关ceRNA网络调控自噬相关基因atgs(atg16L1、atg7、ULK-1)的表达,进而影响巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬反应的分子机制。方法1.通过qRT-PCR检测将H37Ra以不同感染复数或不同感染时间感染THP-1源性巨噬细胞,... 详细信息

目的研究SIRPα通过miR-106a相关ceRNA网络调控自噬相关基因atgs(atg16L1、atg7、ULK-1)的表达,进而影响巨噬细胞抗结核分枝杆菌自噬反应的分子机制。方法1.通过qRT-PCR检测将H37Ra以不同感染复数或不同感染时间感染THP-1源性巨噬细胞,其miR-106a、SIRPα和atgs的表达量。2.对高通量基因表达数据库进行检索,运用生物信息学分析软件分析获得miR-106a对自噬相关基因atg16L1、atg7、ULK-1以及炎症通路相关基因SIRPα的靶向调控作用,通过miRbase、mirSVR、miRTarBase等对其结合部分序列进行比对分析,构建双荧光素酶报告实验的质粒,分别将野生型SIRPα3'UTR、atg16L1 3'UTR、atg7 3'UTR和ULK-1 3'UTR及其突变体克隆到pMIR-GLO质粒中,利用双荧光素酶报告系统和Western blot,验证miR-106a对SIRPα、atg16L1、atg7和ULK-1的靶向调控作用,并利用双荧光素酶实验论证SIRPα-3'UTR/miR-106a/atgs ceRNA网络。3.构建H37Ra感染THP-1源性巨噬细胞模型,将miR-106a mimic、miR-106a inhibitor、miR-106a nc分别转染到THP-1细胞中,通过免疫荧光、透射电镜、Western blot实现对自噬流的检测,通过自噬小体分布状况及自噬相关蛋白表达水平的改变,研究miR-106a对自噬过程的调控作用。4.将SIRPα3'UTR克隆到pEGFP-C1质粒中构建pEGFP-SIRPα,分别将pEGFP-C1+miR-106a mimic,pEGFP-C1+miR-106a mimic nc,pEGFP-SIRPα+miR-106a mimic,pEGFP-SIRPα+miR-106a mimic nc四组质粒共转染进入之前构建成功H37Ra感染THP-1源性巨噬细胞模型中,通过免疫荧光、透射电镜、Western blot实现对自噬流的检测,通过自噬小体分布状况及自噬相关蛋白表达水平的改变,研究SIRPα对自噬过程的调控作用。结果1.在H37Ra感染的情况下,qRT-PCR结果显示与未感染组相比SIRPα基因的表达量明显降低,miR-106a的表达量也呈现下调的趋势(Patgs的表达量都呈现明显的上调,其中ULK-1的上调程度最为显著(Patgs(atg16L1、atg7、ULK-1)这些基因都具有靶向关系。利用双荧光素酶报告系统进行验证,转染miR-106a mimic可明显抑制SIRPαwt、atgs wt的相对荧光素酶活性,其活性下降约1倍(Patgs蛋白的表达,而miR-106a inhibitor组SIRPα、atgs蛋白表达量明显升高,结果表明miR-106a与SIRPα、atgs具有靶向性。而且进一步也通过双荧光素酶实验论证了SIRPα/miR-106a/atgs ceRNA网络的存在。3.为了论证miR-106a对自噬流的影响,首先通过Western blot实验,结果显示转染miR-106a mimic组中自噬相关蛋白atgs的表达下降,LC3-II表达量明显减少,LC3II/LC3I比值降低。其次细胞免疫荧光中miR-106a mimic组相较于nc组LC3点状聚集的数量也是减少的,再通过透射电镜对自噬小体结构进行观察并计数统计,证实自噬小体的数量降低,而miR-106a inhibitor组结果正好相反。结果表明,miR-106a可以通过靶向抑制atg16L1、atg7和ULK-1的表达抑制H37Ra介导的细胞自噬过程。4.为了研究SIRPα对自噬流的影响,Western blot实验结果显示pEGFP-SIRPα组与pEGFP-C1组相比atgs的表达升高,LC3-II表达量增加,将miR-106a mimic+pEGFP-C1组与miR-106a mimic+pEGFP-SIRPα组相比较,发现上调表达SIRPα-3'UTR能够抵消或降低miR-106a mimic对自噬的调控作用。最后通过细胞免疫荧光和透射电镜实验也证实了SIRPα能够促进自噬的作用,表明SIRPα能够通过ceRNA网络竞争miRNA-106a促进细胞自噬。结论:1.H37Ra感染巨噬细胞能够引起SIRPα、miRNA-106a以及atgs的表达量的改变。***-106a可靶向结合atgs、SIRPα基因,并证实SIRPα/miRNA

来源：

同方学位论文库评论

一次性力竭运动对骨骼肌抗氧化防御功能和自噬相关基因表达的影响

引用

作者：李娅晖杭州师范大学

学位级别：硕士

细胞自噬(autophgy)简称自噬,是将细胞内受损的细胞器、老化的蛋白质等进行降解、消化的过程,绝大多数真核细胞都存在此现象。通常来说,稳定的细胞自噬有助于保持机体的稳定状态,应激时细胞自噬会被激活,吞噬有毒或致癌的物质,抑制细胞... 详细信息

细胞自噬(autophgy)简称自噬,是将细胞内受损的细胞器、老化的蛋白质等进行降解、消化的过程,绝大多数真核细胞都存在此现象。通常来说,稳定的细胞自噬有助于保持机体的稳定状态,应激时细胞自噬会被激活,吞噬有毒或致癌的物质,抑制细胞发生癌变;但过度自噬会损伤细胞并使机体紊乱。运动训练对细胞自噬的调控作用是双向的,若运动训练强度适宜,那么细胞自噬水平会上调,降解由运动训练积累的破损的细胞器和折叠错误的蛋白质,为骨骼肌代谢提供一定的能量和合成过程中所需要的底物;若过度运动,细胞自噬过度激活,从而过度降解细胞器、蛋白质等,导致细胞损伤,甚至诱发自噬性细胞死亡。近几年关于细胞自噬的研究越来越多,发现细胞自噬对机体稳定、细胞生成与代谢、组织重建与合成有重要意义,并且对机体抗氧化、抗衰老、神经退行性变化、骨骼肌等相关疾病均有调控作用。目前,关于运动对骨骼肌自噬相关基因表达和抗氧化方面的研究意见并不一致。有人研究发现,耐力运动增强骨骼肌抗氧化防御能力,同时激活骨骼肌自噬基因的表达;但也有相反的报道,耐力运动并不能引起大鼠骨骼肌自噬基因表达。为了进一步了解运动对骨骼肌细胞自噬的影响,本课题通过运动干预探讨骨骼肌自噬和抗氧化防御功能的变化,为合理制定运动训练过程中的运动强度和运动持续时间提供理论依据。目的：通过一次性力竭运动建立急性运动负荷模型,检测ICR小鼠骨骼肌抗氧化功能的变化及其自噬相关基因atg5、atg7、LC-3和Beclin1表达水平的变化,进一步阐述一次性力竭运动对骨骼肌抗氧化水平和自噬的影响机理,预期成果为合理安排运动训练强度、疲劳恢复提供实验依据.方法：30只健康雄性ICR小鼠,4-5周龄,体重25.17±2.46g,随机分为安静对照组(Control)和一次性力竭运动组。其中,一次性力竭运动组又根据取材时间分为0h组、6h组、12h组和24h组。小鼠进行适应性跑台运动,速度20m/min,持续时间30mmin,共训练3天。正式训练时按照以下程序进行：第1级负荷：速度10m/min，运动15min;第2级负荷:15m/min,运动15min;第3级负荷：20m/min,然后运动组小鼠一直运动至力竭。力竭的标准：小鼠不能维持预设的速度,停留于跑道末端,用电刺激驱赶无反应。采用Tecan Infinite M200酶标仪测定骨骼肌T-SOD活性、Cu-ZnSOD活性、MnSOD活性、MDA含量、T-AOC含量。Real-time PCR测定小鼠骨骼肌自噬相关基因atg5、atg7、LC-3和Beclin1的mRNA表达水平。结果：①与对照组相比,运动后即刻(0h)、6h小鼠atg5mRNA的mRNA表达水平有上升趋势,12h、24h有下降趋势,但均无统计学意义(p>0.05);②与对照组相比,运动后即刻(0h)、6h小鼠atg7mRNA的mRNA表达水平有上升趋势,12h.24h有下降趋势;在12h有极显著性差异(p0.05);③与对照组相比,运动后即刻(Oh)、12h、24h小鼠LC-3mRNA表达水平有下降趋势,6h有上升趋势,但均无统计学意义(p>0.05);④与对照组相比,运动后即刻(Oh)、6h、24h小鼠Beclin1 mRNA表达水平有上升趋势,12h有下降趋势;在0h、6h有极显著性差异(p0.05);⑤与对照组相比,运动后即刻(0h)、6h、12h小鼠T-SOD活性有下降趋势,24h与对照组一样;在6h有显著性差异(p0.05);⑥与对照组相比,运动后即刻(Oh)、24h小鼠Cu-ZnSOD活性有上升趋势,6h、12h有下降趋势;在0h、6h有显著性差异(p0.05);⑦与对照组相比,运动后即刻(0h)小鼠MnSOD活性有上升趋势,且有极显著性差异(p0.05);⑧与对照组相比,运动后即刻(0h)6h、12h、24h小鼠MDA含量均有下降趋势,但均无统计学意义(p>0.05);⑨与对照组相比,运动后即刻(0h)、6h、12h、24h小鼠TAOC含量均呈上升趋势,且在6h、12h有显著性差异(p<0.05),在24h有极显著性差异(p<0.01)结论：①一次性力竭运动激活了小鼠骨骼肌自噬相关基因的表达;②在一次性力竭运动后小鼠骨骼肌的抗氧化防御功能是增强的。

来源：

同方学位论文库评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：