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CCHCR1通过与Astrin的相互作用调控CEP72及MCPH蛋白的中心体定位并影响肿瘤的生长

CCHCR1通过与Astrin的相互作用调控CEP72及MCPH蛋白的中心体定位...

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作者：应镇光深圳大学

学位级别：硕士

目的:中心体是动物细胞内最重要的无膜细胞器之一,它调控了微管组织并且保证了有丝分裂的正确进行。CCHCR1（HCR）作为中心体与P小体相关蛋白与银屑病、斑秃等多种疾病密切相关。然而,CCHCR1在细胞内确切功能,特别是其在中心体上所发挥... 详细信息

目的:中心体是动物细胞内最重要的无膜细胞器之一,它调控了微管组织并且保证了有丝分裂的正确进行。CCHCR1（HCR）作为中心体与P小体相关蛋白与银屑病、斑秃等多种疾病密切相关。然而,CCHCR1在细胞内确切功能,特别是其在中心体上所发挥的作用及相关分子机制尚不清晰。本课题旨在研究CCHCR1在中心体上的招募机制,探索其对中心体功能的影响,以进一步揭示相关疾病的机制。方法:1)使用免疫共沉淀技术确认CCHCR、Astrin、CEP72的相互作用;2)构建HCR与Astrin的分段并使用免疫共沉淀技术确认相互作用的蛋白区段;3)使用免疫印迹技术检测蛋白质的表达;4)使用免疫荧光技术观察细胞内蛋白的定位情况;5)使用si RNA转染的方法耗竭细胞内相关蛋白的表达水平;6)使用胸苷阻滞的方法同步化细胞周期以对比纺锤体的结构形态;7)使用平板克隆方法对比细胞克隆形成率;8)构建移植瘤小鼠模型以对比目标蛋白敲低后对肿瘤大小的影响。结果:1)HCR与中心体发育及有丝分裂密切相关的蛋白Astrin存在直接的相互作用以及共定位。2)HCR的表达受到Astrin的正向调控,并与Astrin共同调控中心体蛋白CEP72在中心体的定位。3)敲低HCR能够导致MCPH蛋白群从中心体上去定位。4)在具体的细胞功能上,敲低HCR导致中心粒复制及有丝分裂缺陷以及微管组织能力下降。5)HCR的耗竭同样也能够导致DNA损伤及减缓肿瘤生长的速度。结论:HCR作为中心体相关蛋白确保了中心体的复制,也保障了众多中心体相关功能的运行。对HCR的深入研究能够为未来的癌症治疗提供潜在的治疗靶点。

关键词： CCHCR1 Astrin CEP72 中心体有丝分裂 DNA损伤

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