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雌二醇对卵巢透明细胞癌ES-2细胞株增殖侵袭的影响及arid1a、P53、MMP9蛋白表达变化的研究

雌二醇对卵巢透明细胞癌ES-2细胞株增殖侵袭的影响及ARID1A、P53...

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作者：李秀文河北医科大学

学位级别：硕士

目的:上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)是女性三大恶性肿瘤之一,目前标准的治疗方案是彻底的肿瘤细胞减灭术及以铂类为基础的化疗。流行病学调查显示,EOC患者多数已绝经,但仍有40%左右的年轻患者因为手术或放化疗而导致过... 详细信息

目的:上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)是女性三大恶性肿瘤之一,目前标准的治疗方案是彻底的肿瘤细胞减灭术及以铂类为基础的化疗。流行病学调查显示,EOC患者多数已绝经,但仍有40%左右的年轻患者因为手术或放化疗而导致过早的医源性绝经。医源性绝经比自然绝经对年轻妇女的影响更为强烈,主要涉及潮热、出汗、阴道萎缩、性交困难、失眠、焦虑、抑郁,甚至引起骨质疏松、骨折和心血管疾病等,导致患者生活质量下降及非癌症死亡率的增加。雌激素作为绝经激素治疗(MHT)的一部分,对于治疗绝经综合征、预防骨质疏松等,尤其是对于绝经前的卵巢癌患者经过手术或者化疗之后,雌激素水平突然低落引起的绝经症状,具有显著效果。目前,EOC的发病原因及机理仍不明了。一些研究认为,肿瘤的发生发展可能涉及癌基因激活、抑癌基因失活、凋亡抑制以及细胞周期失调等其中一种或多种基因的变化。关于抑癌基因突变引起肿瘤发生发展的研究一直受到关注,arid1a作为染色质重塑复合物SWI/SNF的一个亚基,在多种恶性肿瘤中存在突变,尤其是在卵巢透明细胞癌的发生和发展中起着重要作用。有研究显示arid1a可能与PI3K途径存在相互作用,影响Akt的磷酸化水平,从而控制肿瘤细胞的增殖。降解细胞外基质(ECM)是恶性肿瘤细胞发生远处转移的重要步骤,基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase--9,MMP9)是依赖Zn2+的基质金属蛋白酶家族中的一员,又称明胶酶B,它主要作用于Ⅳ、V、Ⅶ、X、Ⅺ型胶原以及蛋白多糖、弹性蛋白和纤维连接蛋白等,通过降解细胞外基质及基底膜达到侵袭和转移的作用。p53是在妇科恶性肿瘤中突变率较高的抑癌基因,野生型p53蛋白具有调控细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制血管生成及促进DNA修复等作用。有研究显示p53蛋白阳性率在卵巢癌组织中与癌旁正常组织存在显著的差异性,提示p53蛋白异常表达与肿瘤细胞的增殖状态和发展联系密切。有研究发现p53可以与arid1a/BRG1形成复合物并调节下游基因的转录,也可以同arid1a的羧基端相互作用,在细胞周期调节中起负性调节作用。有研究显示卵巢透明细胞癌的发生与雌激素作用有一定关系,但是对于雌激素是否引起卵巢透明细胞癌复发的研究较少,雌激素在卵巢透明细胞癌患者术后的临床安全应用仍然存在很多争论。本实验通过检测不同浓度17β-雌二醇(E2)作用于卵巢透明细胞癌ES2细胞后,细胞的增殖、侵袭、移行能力变化及arid1a、p53、MMP9蛋白表达的情况,尝试探索雌激素对卵巢透明细胞癌细胞可能存在的影响,为卵巢透明细胞癌患者术后雌激素应用的安全性提供理论依据。方法:用含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养基,在37℃、饱和湿度5%CO2的培养箱中常规培养人卵巢透明细胞癌ES2细胞。取对数生长期细胞用于实验。实验设立空白对照组(不含E2及溶剂)、溶剂对照组(加入0.01%v DMSO)以及E2组(10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/L、10-11mol/L)。E2作用于ES2细胞前改用不含血清的无酚红RPMI-1640培养基饥饿处理细胞24h。实验至少分别重复3次。1细胞增殖实验(MTS法):对ES2细胞以不同浓度的E2(10-7mol/L,10-8mol/L,10-9mol/L,10-10mol/L,10-11mol/L)作用不同时间(24h,48h,72h),同时设空白对照组和溶剂对照组并观察两个对照组的区别。以细胞贴壁后,最初更换各组培养基的时间为0h,分别在更换各组细胞培养基的24h、48h、72h,按10μl/孔加入MTS试剂,继续培养1 h。酶标仪检测各孔490nm处的吸光度值,进行细胞增殖检测分析。实验至少重复3次。2细胞移行能力实验:取实验组和对照组细胞接种于transwell小室,每组设3复孔,连续培养24小时后,取出transwell小室,经甲醇固定,结晶紫染色,在显微镜下(200×)计数移至微孔膜下层的细胞,33%醋酸进行抽提脱色10min,洗脱液在酶标仪上570 nm处检测吸光度值。用于评估细胞的移行能力。3细胞侵袭实验:实验前先将50 mg/L Matrigel胶按1:8稀释,用稀释液包被transwell小室底部聚碳酸酯膜的上室面,实验组和对照组ES2细胞接种于上室,每组设3个复孔,培养24小时后,甲醇固定,结晶紫染色,显微镜下(200×)计数移至膜下层的细胞数评估细胞的侵袭能力。4蛋白印迹法(Western blot)检测对照组及不同浓度E2(10-7 mol/L,10-8 mol/L,10-9 mol/L,10-10 mol/L,10-11 mol/L)作用不同时间(48h,72h)后,arid1a蛋白、p53蛋白和MMP9蛋白的表达。5应用SPSS 21.0软件

关键词：卵巢透明细胞癌 17β-雌二醇增殖侵袭 arid1a

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沉默arid1a对胃癌MGC-803细胞增殖抑制的影响

沉默ARID1A对胃癌MGC-803细胞增殖抑制的影响

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作者：刘阳内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的本研究应用慢病毒感染技术构建arid1a基因沉默的人胃癌MGC-803细胞模型,探讨arid1a基因沉默对人胃癌细胞增殖抑制的影响。方法实验分组:根据Gen Bank数据库提供的arid1a基因序列,设计3条arid1a靶点干扰序列,分别命名为KD1、KD2、KD3... 详细信息

目的本研究应用慢病毒感染技术构建arid1a基因沉默的人胃癌MGC-803细胞模型,探讨arid1a基因沉默对人胃癌细胞增殖抑制的影响。方法实验分组:根据Gen Bank数据库提供的arid1a基因序列,设计3条arid1a靶点干扰序列,分别命名为KD1、KD2、KD3,阴性对照组(NC)。3条arid1a靶点干扰序列引物退火形成双链DNA,与经过双酶切的线性化GV493载体连接并转化;在293T细胞中进行病毒包装并测定病毒滴度;将重组慢病毒转染人胃癌MGC-803细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞arid1a m RNA和蛋白表达水平。待干扰序列靶向沉默arid1a基因,并表达稳定后,选取转染效率高的组做arid1a基因沉默后细胞增殖,细胞周期,细胞迁移,细胞侵袭,细胞凋亡等细胞行为学的研究。结果测序结果显示,设计的干扰序列正确插入GV493载体,成功构建sh RNA-arid1a重组载体;慢病毒载体在293T细胞完成包装,病毒滴度为8*10TU/m L;RT-PCR和Westen blot结果显示,慢病毒载体转染arid1a细胞后,KD3组能显著降低arid1a基因在m RNA和蛋白表达水平;在转染成功后,选用KD3组细胞进行细胞增殖,细胞周期,细胞迁移,细胞侵袭,细胞凋亡等细胞行为学实验。结果为沉默arid1a后,细胞增殖实验显示,KD3组与NC组相比,增殖能力增强,其在第1天、第2天、第3天、第4天对MGC-803细胞的增殖加强作用呈时间依赖性,差异有统计学意义(P187±2.51个,NC组细胞穿过数平均为110±1.52个,KD3组细胞侵袭能力明显增强;细胞凋亡实验显示:KD3组的细胞凋亡率平均为4.54%,NC对照组的细胞凋亡率平均为25%,KD3组相对于NC组,KD3组细胞凋亡作用明显降低。实验显示arid1a基因有明显的抑制细胞增殖,细胞迁移,细胞侵袭作用;有明显的促进凋亡作用。结论在人胃癌MGC-803细胞中,靶向沉默arid1a基因后,胃癌MGC-803细胞的增殖,迁移,侵袭能力增强;细胞凋亡行为减弱,更多细胞进入S期,细胞增殖活跃。

关键词： MGC-803 arid1a ShRNA 增殖抑制

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SWI/SNF复合物亚基arid1a与乙醛脱氢酶2在胆管癌中合成致死效应的分子机制研究

SWI/SNF复合物亚基ARID1A与乙醛脱氢酶2在胆管癌中合成致死效应的...

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作者：段瑞南京师范大学

学位级别：硕士

胆管癌是一种来源于胆管上皮细胞的肝内第二大常见肿瘤,约占所有肝胆恶性肿瘤的10%–15%。由于缺乏有效的非手术治疗途径和早期临床诊断标志物,胆管癌患者预后差,5年总体生存率不足5%,术后中位生存时间仅为3年。随着精准医疗概念逐渐兴... 详细信息

胆管癌是一种来源于胆管上皮细胞的肝内第二大常见肿瘤,约占所有肝胆恶性肿瘤的10%–15%。由于缺乏有效的非手术治疗途径和早期临床诊断标志物,胆管癌患者预后差,5年总体生存率不足5%,术后中位生存时间仅为3年。随着精准医疗概念逐渐兴起,合成致死疗法的研究得以快速发展并取得了临床治疗上的成功,其原理是:通过抑制两个非致死基因同时失活而最终导致肿瘤细胞死亡。得益于下一代测序技术的发展,在不同类型的癌症中分别鉴定出了大量的基因突变。arid1a作为编码SWI/SNF复合物亚基BAF250a的基因,在胆管癌中的突变频率高达20%。在本研究中,我们利用生物信息学方法筛选到与arid1a配对的潜在合成致死基因乙醛脱氢酶2(ALDH2),为了验证胆管癌中arid1a与乙醛脱氢酶2的合成致死效应,我们利用CRISPR/Cas9技术构建了HCCC9810和Hu CCT1两个arid1a敲除的胆管癌稳转细胞株。在细胞克隆形成实验中,我们采用高效、廉价、易获取的乙醛脱氢酶2抑制剂双硫仑(Disulfiram,DSF)在arid1a野生型和敲除型的胆管癌细胞水平上验证了合成致死表型;为了探究合成致死的分子机制,我们利用流式细胞技术检测到arid1a基因敲除后胆管癌细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量增加,乙醛脱氢酶2抑制剂联合处理后胆管癌细胞中的ROS含量进一步累积,根据这一现象提出ROS是导致DSF与arid1a敲除共处理后胆管癌细胞死亡原因的假设。为了验证提出的假设,我们利用ELISA实验、流式细胞技术证明了ROS一方面直接引起arid1a敲除型胆管癌细胞发生DNA损伤进而诱导细胞凋亡,另一方面Western blot实验结果显示arid1a敲除型胆管癌细胞中ROS激活了ASK1信号通路,通过线粒体途径激活凋亡执行蛋白Caspase3和PARP1进而诱导细胞凋亡。本研究从生物信息学分析出发,筛选出胆管癌细胞中具合成致死效应的基因组合arid1a/ALDH2,通过构建胆管癌稳转敲除细胞株,在细胞水平上从氧化应激和DNA损伤角度阐明arid1a/ALDH2基因对诱导胆管癌细胞死亡的分子机制,为携带arid1a失活突变的癌症患者提供治疗策略,为胆管癌的精准治疗提供理论依据和应用实践。

关键词：合成致死胆管癌 arid1a ALDH2 Disulfiram CRISPR/Cas9

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子宫内膜癌中arid1a的表达及与ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF相关性的研究

子宫内膜癌中ARID1a的表达及与ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF相关性的...

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作者：肖爽河北医科大学

学位级别：硕士

目的：子宫内膜癌是女性生殖系统中常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升的趋势。在过去的20年里，对子宫内膜癌的基础与临床研究也有很多进展。子宫内膜癌的发生与多种因素相关，特别与长期雌激素刺激无孕激素拮抗相关已得到普遍认同。... 详细信息

目的：子宫内膜癌是女性生殖系统中常见的恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升的趋势。在过去的20年里，对子宫内膜癌的基础与临床研究也有很多进展。子宫内膜癌的发生与多种因素相关，特别与长期雌激素刺激无孕激素拮抗相关已得到普遍认同。但是，目前子宫内膜癌的分子学发病机制仍不清楚。染色体改构复合物是当前分子生物和细胞生物学的热门领域之一，它们在基因转录、重组、DNA复制和修复中发挥作用,并在肿瘤的发生发展过程中有一定的表达及变化规律。目前研究发现染色质重塑复合物SWI/SNF的特异性的亚单位之一arid1a基因是一种抑癌基因。有人评估759种恶性肿瘤，发现6%的肿瘤中存在arid1a基因突变，说明arid1a基因突变可能与肿瘤的发生发展相关。当前国内外对arid1a基因的研究多集中在对其基因结构的分析上，对其在肿瘤中表达缺失的机制，以及其作为肿瘤抑制基因发挥生物学效应的机制研究国内外鲜有报道。本研究通过检测arid1a、ER、PR、GR、HIF-1a与VEGF在子宫内膜癌组织中的基因和蛋白的表达水平，统计学上分析在子宫内膜癌中arid1a与ER、PR、GR、HIF-1a及VEGF表达的相关性，并进一步分析arid1a基因和蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理学特征的关系，探讨arid1a在子宫内膜癌的发生、发展中的作用。方法： 1应用半定量RT-PCR法检测子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中arid1a、ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF mRNA的表达水平。 2应用免疫组织化学SP法检测I型子宫内膜癌标本30例（高分化、中分化、低分化子宫内膜样腺癌各10例），II型子宫内膜癌27例（子宫内膜透明细胞癌10例，子宫内膜小细胞癌10例，子宫内膜浆液性乳头状腺癌7例），复杂性增生子宫内膜10例，非典型增生宫内膜5例，正常子宫内膜10例中的arid1a、ER、PR、GR、HIF-1a与VEGF蛋白的表达情况。 3应用t检验和卡方检验分析arid1a、ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF在不同子宫内膜组织的表达情况，应用Spearman等级相关检验分析arid1a表达与ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF表达的相关性。结果： 1与对照组正常子宫内膜组织中的arid1a、ER、PR、GR、HIF-1a、VEGF mRNA表达相比较，子宫内膜癌组织中arid1a、ER、PR mRNA的表达显著降低（P＜0.05）;而GR、HIF-1a、VEGF mRNA的表达显著升高（P＜0.05）。 2arid1a mRNA的表达在高分化子宫内膜样腺癌中最高，显著高于中分化、低分化子宫内膜样腺癌（P＜0.05），并且癌细胞分化越差，arid1amRNA表达越低，arid1a mRNA的表达和分化级别呈负相关（P＜0.05r=-0.527）。 3正常子宫内膜组织、复杂性增生子宫内膜组织、非典型增生宫内膜组织中arid1a的表达蛋白BAF250a的表达无显著差异（P＞0.05）;在子宫内膜癌组织中BAF250a的表达显著低于正常子宫内膜组织中的表达（P＜0.05），而子宫内膜癌中GR、HIF-1a、VEGF蛋白的表达却显著高于正常子宫内膜组织中的表达（P＜0.05）。 4arid1a的表达蛋白BAF250a的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系，研究结果显示：在子宫内膜样腺癌中，高分化子宫内膜样腺癌中BAF250a的表达显著高于中分化和低分化子宫内膜样腺癌中的表达（P＜0.05），并且癌细胞分化越差，BAF250a蛋白的表达越低。BAF250a蛋白的表达与细胞分化级别呈负相关（P＜0.05r=-0.836）。在子宫内膜浆乳癌中BAF250a呈高表达，与正常子宫内膜组织、复杂性增生子宫内膜组织、非典型增生宫内膜组织中BAF250a的表达无显著差异（P＞0.05）。而且，BAF250a蛋白的表达与临床分期、肌层侵润深度等病理特征无关（P＞0.05）。 5BAF250a的表达缺失率在低分化子宫内膜样腺癌和子宫内膜透明细胞癌中分别为40%和30%。 6在低分化子宫内膜样腺癌中BAF250a蛋白的表达与ER呈正相关（P=0.035r=2.530），与PR、GR、HIF-1a、VEGF的表达无明显相关（P＞0.05）。在子宫内膜样腺癌中VEGF的表达与HIF-1a呈正相关（P=0.010r=2.774）;HIF-1a的表达与ER呈正相关（P=0.043r=2.117）;VEGF的表达与ER呈正相关（P=0.002r=3.347）。 7在子宫内膜样腺癌中，BAF250a蛋白的表达与突变的P53蛋白的高表达呈负相关（P=0.035r=-2.274），而且突变的P53蛋白的表达与ER表达呈负相关（P=0.009r=-2.690），与PR表达呈负相关（P=0.045r=-2.053）。结论：

关键词：子宫内膜癌 arid1a 糖皮质激素受体缺氧诱导因子血管内皮生长因子雌激素受体孕激素受体

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NF-κB/miR-223-3p/arid1a通路在幽门螺杆菌感染介导的胃癌发生发展中的作用

NF-κB/miR-223-3p/ARID1A通路在幽门螺杆菌感染介导的胃癌发生发...

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作者：杨丰华山东大学

学位级别：硕士

研究背景幽门螺杆菌感染易引起慢性胃炎和消化性溃疡,被认为是导致胃癌发生的Ⅰ类致病菌。幽门螺杆菌的致病性主要归因于它的各种毒力因子,其中最广泛研究的是细胞毒素相关基因蛋白CagA。CagA可被细菌编码的Ⅳ型分泌系统注射入细胞内,... 详细信息

研究背景幽门螺杆菌感染易引起慢性胃炎和消化性溃疡,被认为是导致胃癌发生的Ⅰ类致病菌。幽门螺杆菌的致病性主要归因于它的各种毒力因子,其中最广泛研究的是细胞毒素相关基因蛋白CagA。CagA可被细菌编码的Ⅳ型分泌系统注射入细胞内,在细胞中激活多种信号分子,其中包括炎症因子NF-κB。NF-κB被激活后,可在细胞中发挥多种生物学效应,如炎性,细胞永生化,细胞增殖,抗凋亡,血管新生,肿瘤转移等。NF-κB发挥生物学功能的分子机制之一是:NF-κB可引起细胞中的关键miRNAs表达失调,这些miRNAs的失调又可引起下游靶蛋白的异常表达,进而引起以上生物学效应,促进肿瘤发生发展。幽门螺杆菌毒力因子CagA在胃黏膜上皮细胞激活NF-κB后,NF-κB通过调控哪些miRNAs的表达来促进胃癌发生发展的,目前尚未见报道。我们通过文献检索发现:幽门螺杆菌感染胃黏膜上皮细胞后,通过miRNAs芯片筛选到31种差异性表达的miRNAs,其中miR-223-3p是唯一一种表达上调的miRNA。软件分析发现:miR-223-3p启动子区存在NF-κB的结合位点。基于以上研究成果和分析,本研究拟探讨以下问题:NF-κB能否通过直接结合在miR-223-3p的启动子区来调控其表达?miR-223-3p在细胞中发挥何种生物学功能?分子机制如何?NF-κB能否通过调控miR-223-3p参与幽门螺杆菌感染引起的炎癌转变?研究目的(1)探究幽门螺杆菌毒力因子CagA通过NF-κB途径调控miR-223-3p表达引起胃黏膜组织炎癌转变的分子机制,丰富幽门螺杆菌感染致胃癌发生的分子机制的认识;(2)探究在胃癌中miR-223-3p的生物学功能及其下游靶基因,阐明其在幽门螺杆菌感染介导的胃黏膜组织恶性转化中的作用。研究方法(1)幽门螺杆菌(CagA+/CagA-)、CagA 过表达质粒(pcDNA3.1-CagA)分别处理胃癌细胞,westerm blot和qRT-PCR检测细胞中CagA和miR-223-3p的表达水平;(2)使用NF-κB抑制剂BAY 11-7082检测NF-κB是否参与幽门螺杆菌CagA上调miR-223-3p表达;qRT-PCR和双荧光素酶活性实验等方法检测NF-κB对miR-223-3p的表达调控;(3)使用多个数据库预测miR-223-3p的潜在靶蛋白;western blot、qRT-PCR和双荧光素酶活性实验等方法检测miR-223-3p对候选靶蛋白的表达调控;(4)使用EdU和Transwell实验分别检测CagA、miR-223-3p、候选靶蛋白对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响;(5)qRT-PCR检测胃癌及相应癌旁组织中miR-223-3p和候选靶蛋白的表达水平,并分析两者表达水平的相关性。结果1.幽门螺杆菌CagA通过NF-κB途径调控miR-223-3p表达(1)幽门螺杆菌通过CagA依赖的途径促进miR-223-3p表达:幽门螺杆菌(CagA+)感染胃癌细胞后,miR-223-3p表达显著上调,而幽门螺杆菌(CagA-)感染对miR-223-3p的表达没有显著影响。转染CagA过表达载体后,细胞中miR-223-3p的表达显著上升。(2)CagA对miR-223-3p的调控依赖于NF-κB途径:NF-κB抑制剂BAY 11-7082可以回复由幽门螺杆菌CagA阳性菌(CagA +)感染引起的miR-223-3p表达上升。BAY 11-7082也回复了转染CagA过表达载体引起的miR-223-3p的表达上调。NF-κB siRNA可降低胃癌细胞中的miR-223-3p表达水平。双荧光素酶活性实验结果:NF-κB可直接与miR-223-3p前体的启动子结合来调控其表达。2.miR-223-3p在胃癌中的生物学功能与调控机制(1)miR-223-3p直接靶向arid1a(SWI/SNF染色质重塑复合物家族)的3'UTR并降低其表达:miR-223-3p类似物转染胃癌细胞后,arid1a mRNA和蛋白表达均下降;反之,miR-223-3p抑制剂可增加arid 1A mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶活性实验表明:miR-223-3p高表达降低野生型arid1a 3'UTR的活性,而对突变的arid1a 3'UTR活性没有明显影响。(2)miR-223-3p通过arid1a促进胃癌细胞增殖和迁移:miR-223-3p高表达促进细胞增殖和迁移能力增加。arid1a沉默促进细胞增殖和迁移;arid1a高表达抑制细胞增殖和迁移。而且过表达arid1a部分回复miR-223-3p高表达介导的生物学效应。Western blot显示arid1a分别通过调控p21和E-cadherin来抑制胃癌细胞的增殖及迁移。3.NF-KB/miR-223-3p通路参与幽门螺杆菌CagA介导的生物学效应胃癌细胞共转染CagA过表达载体和miR-223-

关键词：胃癌幽门螺杆菌 NF-κB miR-223-3p arid1a

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LRP6、arid1a mRNA在宫颈癌中的表达及临床意义

LRP6、ARID1A mRNA在宫颈癌中的表达及临床意义

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作者：汤雅丽中南大学

学位级别：硕士

目的：通过检测低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low density lipoprotein receptor-related protein6, LRP6) mRNA、AT丰富结合域蛋白1A(AT-rich interacting domain containing protein1A, arid1a) mRNA在宫颈炎组织、中-重度宫颈上皮内瘤变组织(CIN Ⅱ-Ⅲ)、宫颈癌组织的表达情况,探讨LRP6、arid1amRNA的表达与宫颈癌临床病理参数的关系。方法：1.应用实时荧光定量PCR技术检测15例宫颈炎、15例CIN Ⅱ-Ⅲ、40例宫颈癌组织中LRP6、arid1amRNA的表达。2.分析LRP6、arid1amRNA的表达与宫颈癌临床病理参数之间的关系。3.分析LRP6、arid1amRNA在宫颈癌中的表达相关性。4.应用统计学SPSS17.0软件进行数据分析,检验水准α=0.05。结果：1.LRP6mRNA在宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌组织中的相对表达量分别为1.6463±0.2501、2.2306±0.3213.2.8432±0.8687,在宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌组织中表达逐渐升高,差异有统计学意义(Parid1amRNA在宫颈炎、CINⅡ-Ⅲ宫颈癌组织中的相对表达值分别为16.4405±4.0526、8.3827±3.5489、0.9682±0.9187,在宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌组织中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P0.05)。4.arid1amNA在宫颈癌中的表达与组织分化程度、组织类型有关,差异有统计学意义(P0.05)。5. Spearman相关性检验结果显示LRP6、arid1a mRNA在宫颈癌中的表达呈负相关(r=-0.393,P=0.0121.LRP6mRNA在宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌组织中表达逐渐升高,且与宫颈癌的临床分期、组织分化程度、高危型HPV感染有关,提示LERP6的过度表达可能参与宫颈癌的发生发展。2.arid1amRNA在宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、宫颈癌组织中表达逐渐下降,且与宫颈癌的组织分化程度、组织病理类型有关,提示arid1a的失活可能与宫颈癌的发生有关。

关键词：宫颈癌 LRP6 arid1a 实时荧光定量PCR

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甲状腺癌组织中PI3KP85α、EZRIN和arid1a的表达及作用

甲状腺癌组织中PI3KP85α、EZRIN和ARID1A的表达及作用

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作者：姜家利青岛大学

学位级别：硕士

目的:通过对甲状腺癌及癌旁正常组织中磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3KP85α)、EZRIN和抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基(AT rich interactive domain 1A:arid1a)mRNA和蛋白质的表达情况,探讨PI3KP85α、EZRIN和arid1a相互之间的... 详细信息

目的:通过对甲状腺癌及癌旁正常组织中磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3KP85α)、EZRIN和抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基(AT rich interactive domain 1A:arid1a)mRNA和蛋白质的表达情况,探讨PI3KP85α、EZRIN和arid1a相互之间的关联性,与病理因素的关系,来试图阐明PI3KP85α、EZRIN和arid1a的表达在甲状腺癌发生发展、浸润及转移中的意义。方法:收集2017年1月—2018年5月在枣庄市立医院乳甲外科(乳腺甲状腺外科)就诊的患者,就诊前无任何措施治疗,经病理诊断为甲状腺癌患者的癌组织114例,术前均未行放、化学治疗;其中男51例,女63例,年龄25-61岁(39.6±11.0)岁;癌旁正常甲状腺组织43例,其中男17例,女26例,年龄28-65岁(42.7±12.0)岁。应用免疫组织化学方法检测乳头状甲状腺癌69例、滤泡状癌18例、未分化癌15例和髓样癌12例及癌旁正常甲状腺组织中PI3KP85α、EZRIN和arid1a的表达水平;用RT-PCR方法检测甲状腺癌及癌旁正常甲状腺组织中PI3KP85α、EZRIN和arid1a mRNA的表达水平。实验结果采用SPSS19.0软件进行统计学分析处理;应用t检验和卡方检验分析PI3KP85α、EZRIN、arid1a在不同甲状腺组织中的表达情况;应用Spearman等级相关检验分析arid1a表达与EZRIN、PI3KP85α表达的相关性。结果:1.与癌旁正常组织PI3KP85α、EZRIN和arid1a mRNA及蛋白阳性表达情况相比较,PI3KP85α、EZRIN在甲状腺癌组织中mRNA及蛋白阳性表达率显著升高(P1),而arid1a的mRNA及蛋白阳性表达率在甲状腺癌组织中显著降低(P1);2.arid1a mRNA的表达在乳头状甲状腺癌中最高(0.67±0.39),显著高于分化差的滤泡状癌(0.50±0.33)、未分化癌(0.38±0.29)和髓样癌(0.52±0.54)(Parid1a mRNA表达越低,arid1a mRNA的表达与恶性程度呈负相关(Parid1a的蛋白阳性表达情况:乳头状癌:63.8%,53.7%,55.1%;滤泡状癌:72.2%,66.7%,44.4%;未分化癌:86.7%,86.6%,33.3%;髓样癌:75.0%,75.0%,41.7%。结论:PI3KP85α、EZRIN、arid1a在甲状腺癌的发生、侵袭、转移中发挥了重要作用。PI3KP85α和EZRIN mRNA及其蛋白质在甲状腺癌组织中高表达,在正常甲状腺组织者中呈现低表达,提示二者的高表达或与甲状腺癌的发病具有一定关联性,为甲状腺癌的侵袭、转移提供了较为坚实的理论基础。arid1a的缺失或降低,能够促进PI3KP85α和EZRIN蛋白高表达,进而促进甲状腺癌的发生、发展和侵袭;联合检测该三项指标,有助于甲状腺癌对潜能侵袭转移的判断,从而为甲状腺癌的治疗和疗效评估,提供依据。

关键词：甲状腺癌 PI3KP85α EZRIN arid1a RT-PCR

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TP53和arid1a共突变对胃癌ICIs治疗的潜在预测价值

TP53和ARID1A共突变对胃癌ICIs治疗的潜在预测价值

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作者：程冰蕾福建医科大学

学位级别：硕士

背景和目的胃癌是预后较差的常见恶性肿瘤,在我国癌症相关死亡原因中高居第二位,疾病负担形式严峻。近年来,胃癌传统治疗方式如化学治疗、靶向治疗和放射治疗的发展进入了瓶颈期,而免疫治疗,尤其是免疫检查点抑制剂（immune checkpoint ... 详细信息

背景和目的胃癌是预后较差的常见恶性肿瘤,在我国癌症相关死亡原因中高居第二位,疾病负担形式严峻。近年来,胃癌传统治疗方式如化学治疗、靶向治疗和放射治疗的发展进入了瓶颈期,而免疫治疗,尤其是免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors,ICIs）治疗在其他癌种的治疗中逐渐崭露头角,掀起研究热潮。目前在胃癌中也有大量ICIs治疗相关的临床研究工作正在开展,但不同于其他癌肿中振奋人心的治疗效果,ICIs在胃癌中的研究结果不尽如人意。因此,寻找疗效相关的生物标记物,筛选治疗获益人群从而提高治疗效果就显得尤为重要。TP53和arid1a是胃癌中高频突变基因,当前的研究指出,TP53和arid1a基因突变与肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性、肿瘤浸润性淋巴细胞以及PD-L1表达中的一个或几个指标相关,而后者已在多个研究中被证实能够有效预测ICIs的疗效,那么,TP53和arid1a共突变对胃癌ICIs治疗是否有潜在的预测价值呢?方法我们通过利用公共数据库如TCGA、ICGC、c Bio Portal中的数据,从基因、m RNA和蛋白表达水平进行系统性分析,通过二代测序和MSIsensor检测本中心样本基因突变和MSI状态,并运用ESTIMATE和CIBERSORT生物信息分析技术评估样本肿瘤微环境中肿瘤浸润性淋巴细胞的类型和含量。基因突变对临床ICIs疗效的预测价值从既往临床试验（MSKCC）结果进行分析。结果1.在TCGA队列中,共突变样本TMB显著高于TP53单一基因突变组、arid1a单一基因突变组和野生型组（P＜0.05）;而在ICGC队列中,共突变样本的TMB也显著高于TP53单一基因突变组和野生型组（P＜0.05）,而稍低于arid1a单一基因突变组,但差异无统计学意义;在本中心队列中也观察到TP53和arid1a共突变的样本具有较高的TMB水平。在探究共突变对TMB影响的机制中表明,DNA复制过程中的POLD1基因和DNA双链断裂修复过程中的ATM基因突变率在四组间的差异与TMB差异相一致。2.TCGA队列中,MSI-H样本所占的比例在TP53和arid1a共突变组中最高,显著高于TP53单一基因突变组和野生型组（P＜0.05）,但与arid1a单一基因突变组之间的差异无显著性。而在本中心队列中,1例TP53和arid1a共突变样本为MSI-H,其他样本均为MSS。在分析共突变对MRR相关基因的影响表明,MLH1、MSH2、MSH6以及MMR综合基因的突变在各组间的差异与MSI-H的差异相一致,而PMS2在共突变组与另外三组之间无显著差异。MSH2和MSH6蛋白表达在各组间没有显著差异。3.ESTIMATE分析结果显示,TP53和arid1a共突变样本的总体免疫评分处于中等水平,与其他三组没有显著差异,但在随后的CIBERSORT分析中指出,共突变组具有较高水平的CD8+T细胞、CD4+记忆性T细胞、滤泡辅助性T细胞以及M1型巨噬细胞的浸润,尤其是活化的CD4+记忆性T细胞含量显著高于TP53单一基因突变组和野生型组（P＜0.05）,而其他免疫细胞浸润差异未达到显著性水平。PD-L1表达在TP53和arid1a共突变组中也具有较高水平,显著高于TP53单一基因突变组（P＜0.05）,而与另外两组没有显著差异。4.65例接受ICIs治疗患者的生存分析显示,TP53和arid1a共突变组中77.8%的患者在随访终止时仍未发生终点事件,共突变组与非共突变组的1年生存率为44.4%vs 16.1%、2年生存率为11.1%vs 5.4%,但OS延长却未达到显著性水平（P=0.168＞0.05）,多因素分析结果也仅具有边缘统计学水平（P=0.071＞0.05）。对其中28例有详细疗效评估的患者PFS分析显示,共突变组与非共突变组的中位PFS为14.0月vs 1.87月,PFS延长也无显著性差异（P=0.212＞0.05）。5例TP53和arid1a共突变患者在接受ICIs治疗后,有3例出现肿瘤完全缓解,其中2例PFS达到14.0、15.6月,另1例在随访结束时仍未发生肿瘤进展。结论1.TP53和arid1a共突变现象在胃癌中较为常见,共突变可能可通过影响DNA双链断裂修复和干扰DNA复制过程,从而增加基因组的不稳定性,导致基因突变率增加和肿瘤突变负荷水平升高。因此,其可能可作为胃癌患者接受ICIs治疗的生物标志物。2.TP53和arid1a共突变可通过增加MMR相关基因的突变,尤其是MLH1、MSH2和MSH6的突变,但并不影响PMS2的突变,从而导致MSI-H,但当基因突变类型为错义突变时,突变并不影响蛋白的表达,此时仅依靠免疫组织化学检测的结果并不能真正反应MMR的状态。3.TP53和arid1a共突变患者具有一定水平的TILs浸润和PD-L1表达,其可能是ICIs治疗的获益人群。4.TP53和arid1

关键词： TP53 arid1a 共突变胃癌免疫治疗

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CD133、SPARC、arid1a在胃癌中的表达及临床意义

CD133、SPARC、ARID1A在胃癌中的表达及临床意义

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作者：李彩燕安徽医科大学

学位级别：硕士

目的胃癌已成为影响健康的一个重要的全球性问题，世界范围内仍有较高的发病率、死亡率，特别在亚洲国家，胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤。早期诊断、治疗对胃癌预后有较大影响，但多数胃癌患者早期无明显的症状体征，或仅有恶心呕吐等... 详细信息

目的胃癌已成为影响健康的一个重要的全球性问题，世界范围内仍有较高的发病率、死亡率，特别在亚洲国家，胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤。早期诊断、治疗对胃癌预后有较大影响，但多数胃癌患者早期无明显的症状体征，或仅有恶心呕吐等轻微胃肠道不适，并不足以引起患者的重视，因此早期诊断率较低，就诊时绝大多数已经处于局部晚期或发生了远处转移。在治疗方面，根治性的胃癌切除术、必要的术后辅助化疗是主要的治疗方法。但根治性手术及术后辅助化疗并不能提高所有病人的无病生存期(disease free survival，DFS)和总生存期（overallsurvival，OS）。各种分子标记物应运而生，成为研究的热点，在提高胃癌的早期诊断率、选择治疗敏感人群和评估患者预后方面可能发挥较大作用。本研究通过检测胃癌组织中CD133、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidicand rich in cysteine，SPARC)、AT丰富结构域1A（AT rich interactivedomain1A，arid1a）基因的表达水平，探讨并分析其与胃癌临床特征的关系以及对预后的影响。方法于安徽医科大学第一附属医院，收集90例在2005年1月-2010年12月期间行胃癌根治术并接受术后辅助化疗的临床病历资料以及患者石蜡包埋的蜡块标本，应用免疫组织化学技术检测胃癌组织中CD133、SPARC、arid1a的表达，并进行远期随访，记录疾病进展和死亡时间。应用SPSS17.0统计学软件包进行统计描述和生存分析。结果胃癌组织中CD133、SPARC、aridIA的阳性表达率分别为26.7%（24/90）、72.2%（65/90）、30.0%(27/90)。3种蛋白的表达与年龄、性别、瘤体大小均无关，与TNM分期有关（P﹤0.05）。arid1a的表达与肿瘤侵及深度、分化程度相关（P＜0.05）;CD133的表达与分化程度、脉管侵犯、淋巴结转移、肿瘤发生部位有关（P﹤0.05）;SPARC的表达与淋巴结转移及脉管侵犯有关（P﹤0.05）。COX多因素分析显示，TNM分期、术后辅助化疗、arid1a及SPARC的表达是影响患者无病生存期（disease freesurvival，DFS）的独立因素，而TNM分期、术后辅助化疗及CD133的表达是影响总生存期（overall survival，OS）的独立预后因素。CD133阳性者的中位无病生存期（DFS）和中位生存期（OS）分别为12个月和17个月，SPARC高表达者的中位DFS和OS分别为41个月和54个月，随访期内arid1a阳性者中位DFS和OS未达。结论CD133、SPARC、arid1a在胃癌中的表达均与TNM分期相关。arid1a的表达还与肿瘤浸润深度、分化程度相关;CD133的表达与分化程度、脉管侵犯、淋巴结转移、肿瘤原发部位显著相关;SPARC的表达与脉管侵犯淋巴结转移相关。TNM分期、术后辅助化疗、arid1a及SPARC的表达是影响患者DFS的独立预后因素，而TNM分期、术后辅助化疗及CD133的表达是影响患者OS的独立预后因素。

关键词：胃肿瘤 CD133 SPARC arid1a 预后

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RNA干扰arid1a表达增强ATR抑制剂AZD6738与放疗联合疗法对大肠癌的抗肿瘤效应

RNA干扰ARID1A表达增强ATR抑制剂AZD6738与放疗联合疗法对大肠癌...

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作者：余国宇华中科技大学

学位级别：硕士

目的:arid1a是SWI/SNF染色质重塑复合物中的核心亚基,参与表观遗传调控、DNA损伤应答、DNA损伤修复以及维持基因组稳定性。在大肠癌中,arid1a缺失和低表达广泛存在,这与大肠癌的分化差、淋巴管浸润、远处转移显著相关。靶向治疗结合新... 详细信息

目的:arid1a是SWI/SNF染色质重塑复合物中的核心亚基,参与表观遗传调控、DNA损伤应答、DNA损伤修复以及维持基因组稳定性。在大肠癌中,arid1a缺失和低表达广泛存在,这与大肠癌的分化差、淋巴管浸润、远处转移显著相关。靶向治疗结合新的癌症标志物的策略,具有显著提高放疗疗效的潜力,目前ATR抑制剂AZD6738作为放疗增敏剂与放疗联用的策略正处于临床试验阶段。在此背景下,本研究将明确arid1a表达缺失和低表达对ATR抑制剂AZD6738与放疗联合疗法抗肿瘤效应的影响。方法:首先使用RNA干扰技术模拟arid1a缺失和低表达大肠癌细胞,然后从增殖曲线、细胞活力曲线、细胞融合率和克隆形成的角度来比较细胞增殖能力;并且使用流式细胞术和细胞免疫荧光来评价凋亡;最后用彗星实验和蛋白免疫印迹来评估DNA损伤和修复状态。结果:在AZD6738与放疗联合诱导下,sh RNA-arid1a干扰组大肠癌细胞的增殖曲线受到抑制,细胞活力和细胞融合率降低,克隆形成能力降低,并且其对增殖抑制呈现出射线剂量依耐性特点;与sh RNA阴性对照相比,sh RNA-arid1a干扰组的大肠癌细胞凋亡标志物Active-caspase3表达增多、凋亡比率增大;彗星实验和蛋白免疫印迹实验显示,sh RNA-arid1a干扰组大肠癌细胞DNA损伤积累增多、且γ-H2AX表达降低,回顾既往研究发现,DNA损伤积累增多可能与γ-H2AX低表达相关。结论:总之,我们发现RNA干扰arid1a表达增强了AZD6738与放疗联合疗法对大肠癌的抗肿瘤效应,这将有助于arid1a缺失和低表达大肠癌患者,在使用ATR抑制剂作为放疗增敏剂的条件下,从放疗中更多的获益;并将有助于ATR抑制剂和放疗联用的临床试验进行受益人群的筛选和更合理的病人分层,以加快临床转化。

关键词： arid1a ATR抑制剂放疗大肠癌 DNA损伤

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