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卵巢浆黏性肿瘤Arid1a的表达及其临床病理意义

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中华病理学杂志 2020年第6期49卷 588-593页

作者：丁效蕙田侠王利群王昀刘爱军解放军总医院第一医学中心病理科北京100853

目的探讨卵巢浆黏性肿瘤的临床病理特征及免疫组织化学特点。方法收集解放军总医院第一医学中心病理科2006年6月至2018年12月确诊的卵巢浆黏性肿瘤的临床病理资料,分析其组织病理学特点,并通过免疫组织化学EnVision法检测细胞角蛋白(CK)... 详细信息

目的探讨卵巢浆黏性肿瘤的临床病理特征及免疫组织化学特点。方法收集解放军总医院第一医学中心病理科2006年6月至2018年12月确诊的卵巢浆黏性肿瘤的临床病理资料,分析其组织病理学特点,并通过免疫组织化学EnVision法检测细胞角蛋白(CK)7、PAX8、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、WT1、p16、p53以及Arid1a编码蛋白Baf250a的表达。结果本组卵巢浆黏性肿瘤共75例,其中良性浆黏性囊腺瘤30例,年龄12~83岁,平均年龄36岁,镜下由宫颈内膜型黏液上皮和浆液性上皮混合组成,每种成分占10%以上。交界性浆黏性肿瘤34例,患者年龄21~72岁,平均年龄39岁,7例伴发子宫内膜异位症;镜下见宽大的乳头状结构,分支复杂,衬覆上皮层次增加,细胞成分复杂,主要为宫颈内膜样黏液细胞(非肠型,无杯状细胞),其次为嗜酸性细胞,其他可见透明细胞、鞋钉样细胞、纤毛细胞、子宫内膜样细胞等。间质疏松水肿,常伴大量急性炎性细胞浸润。浆黏性癌11例,患者年龄26~61岁,平均年龄40岁,2例伴发子宫内膜异位症;镜下呈乳头状、融合腺样、微腺或实性结构,多呈扩张性浸润生长方式,局部呈破坏性浸润;细胞成分复杂,与交界性肿瘤相似。免疫组织化学显示Arid1a编码蛋白Baf250a阳性表达于肿瘤细胞核,交界性浆黏性肿瘤表达缺失率30%(6/20;其中1例完全缺失,5例部分缺失),浆黏性癌表达缺失比例2/11(均为部分缺失);CK7、PAX8、p16在肿瘤细胞表达阳性;ER、PR均为阳性(10%~80%),WT1阴性,p53野生型表达,Ki-67阳性指数20%~60%。浆黏性癌10例行全子宫、双侧/单侧附件、大网膜、阑尾切除术及淋巴结清扫术,1例行患侧附件及阑尾切除术,术后均行化疗。根据2014版卵巢癌国际妇产科联盟(FIGO)分期,ⅠA期4例,ⅡA期3例,ⅢC期4例。浆黏性癌8例存活(其中2例复发),1例死于疾病,2例失访。交界性肿瘤34例均行患侧附件切除术,均存活,1例复发。结论浆黏性肿瘤具有较为独特的临床病理学特征,交界性浆黏性肿瘤与浆黏性癌均具有复杂的结构和细胞成分。Arid1a作为肿瘤抑制基因,在致瘤转化过程中起一定作用,在浆黏性肿瘤中具有表达缺失的特点,以及p53野生型表达,均支持浆黏液性肿瘤是Ⅰ型肿瘤而非Ⅱ型肿瘤,患者预后相对较好。

关键词：卵巢肿瘤肿瘤,囊性,黏液性和浆液性免疫组织化学 Arid1a

LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/Arid1a轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖

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现代肿瘤医学 2023年第18期31卷 3335-3341页

作者：强贤欧阳俊王海珍葛素梅常州市妇幼保健院病理科江苏常州213003

目的:探讨LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/Arid1a轴对孕激素耐药的子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养Ishikawa细胞,构建EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/醋酸甲羟孕酮(MPA),MTT法验证Ishikawa/MPA细胞的耐药性;qRT-PCR法检测Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中孕激素受体(PR)、LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和Arid1a mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证Ishikawa/MPA细胞中LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和Arid1a间靶向关系。Ishikawa/MPA细胞分为Ad-NC组、Ad-IQCH-AS1组、Ad-IQCH-AS1+miR-NC组和Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组,qRT-PCR法检测LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p、Arid1amRNA、PR mRNA表达;MTT检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Arid1a、PR、CyclinD1、CDK4、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达。裸鼠成瘤实验观察LncRNA IQCH-AS1对Ishikawa/MPA细胞裸鼠移植瘤生长和MPA耐药性的影响。结果:本研究构建的Ishikawa/MPA细胞耐药指数为4.33。Ishikawa/MPA细胞中PR mRNA、LncRNA IQCH-AS1和Arid1a mRNA低表达,而miR-494-3p高表达(P1、Arid1a均存在靶向关系。Ishikawa/MPA细胞中过表达LncRNA IQCH-AS1能够下调miR-494-3p表达,同时上调Arid1a、PR mRNA和蛋白表达,降低细胞存活率和CyclinD1、CDK4蛋白表达,提高细胞凋亡率和cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达(P1对Arid1a、PR表达以及细胞增殖、凋亡的影响。此外,过表达LncRNA IQCH-AS1可抑制Ishikawa/MPA细胞的裸鼠移植瘤生长,并降低MPA耐药性。结论:LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/Arid1a轴抑制孕激素耐药的EC细胞增殖,并诱导其凋亡。

关键词： LncRNA IQCH-AS1 miR-494-3p Arid1a 孕激素耐药性子宫内膜癌

Durable response to olaparib in pancreatic duct adenocarcinoma with deleterious Arid1a mutation

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Chinese Medical Journal 2019年第24期132卷 3012-3014页

作者： Xue-Song Zhao Jing Zhou Lei Dong Hui Zhang Ying-Jiang Ye Laboratory of Surgical Oncology Peking University People’s HospitalBeijing 100044China Department of Gastrointestinal Surgery Peking University People's HospitalBeijing 100044China

To the Editor:Pancreatic cancer is one of the leading causes of cancer death worldwide.The significant symptoms prompting diagnosis often appear once the tumor invades surrounding tissues or metastasizes,resulting in the late diagnosis and the infeasibility of complete resection.For the patients at advanced stage,the shortage of efficient medication for systemic therapy further limited their survival time.Olaparib,a poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitor(PARPi),possesses several documented mechanisms of action,including the inhibition of base excision repair as well as trapping of PARP.[1]These mechanisms inhibit the repair of single-stranded break(SSB)and therefore lead to the induction of doublestranded break(DSB).Tumors with severe defect in homologous recombination-DNA damage repair(HRDDR)are ineffective in repair of DSB,which is theoretically susceptible to PARPi therapy.Arid1a,a part of the large ATP-dependent chromatin remodeling complex SNF/SWI,is required for transcriptional activation of genes normally repressed by chromatin.Both truncating mutation and loss of copy number may lead to the shortage of functional Arid1a protein,causing HR-DRR deficiency that associates with the response to PARPi.Preclinical studies showed the loss of Arid1a may sensitize cancer cells to PARPi.[2]However,no relevant trial or case report of pancreatic ductal adenocarcinoma(PDAC)was published to date.Here we present the report of a PDAC patient with deleterious Arid1a mutation(p.Q1327*)who remained response to olaparib-based therapy for more than 13.0 months.

关键词： Arid1a diagnosis adenocarcinoma

Arid1a及PTEN在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性

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现代肿瘤医学 2022年第10期30卷 1772-1776页

作者：夏红蕾顾立萍兰州市妇幼保健院病理科甘肃兰州730030 甘肃省中医院病理科甘肃兰州730050

目的:探讨乳腺癌组织中Arid1a及PTEN的表达情况,并分析其与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。方法:收集2015年7月至2019年12月就诊于我院并经病理科诊断为乳腺癌92例、乳腺纤维腺瘤55例及癌周正常乳腺组织38例,采用免疫组化染色方法EnVi... 详细信息

目的:探讨乳腺癌组织中Arid1a及PTEN的表达情况,并分析其与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。方法:收集2015年7月至2019年12月就诊于我院并经病理科诊断为乳腺癌92例、乳腺纤维腺瘤55例及癌周正常乳腺组织38例,采用免疫组化染色方法EnVision二步法检测各组中Arid1a及PTEN的表达水平,并分析二者在各组间表达的差异性及相关性;将乳腺癌组按照临床病理特征进行分组,统计分析这两种蛋白在各组间表达的差异性及与预后相关性。结果:浸润性乳腺癌组织中Arid1a及PTEN的阳性表达率低于乳腺纤维腺瘤及癌周正常乳腺组织,且差异有统计学意义(PArid1a及PTEN的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、分子分型、远处转移等因素均无相关性(P>0.05);Arid1a的表达与组织学分级、T分期及脉管侵犯有关,而PTEN与淋巴结转移、神经侵犯、脉管侵犯有关(PArid1a和PTEN蛋白在乳腺癌中的表达呈正相关(r=0.243,PArid1a及PTEN蛋白表达缺失组的乳腺癌患者生存期明显短于阳性组乳腺癌患者,预后较差。结论:Arid1a及PTEN在乳腺癌中均存在低表达的状态,并与肿瘤的脉管侵犯、高级别组织学分级等恶性生物学特征间存负向关联性,有望成为提示乳腺癌预后的两项可供参考的生物学指标。

关键词：乳腺癌 Arid1a PTEN 病理特征相关性预后

靶向治疗染色质重塑因子Arid1a突变肿瘤的分子机理

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中国细胞生物学学报 2022年第7期44卷 1407-1415页

作者：杨淑娴陈佳钰孙序序王英上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室癌基因及相关基因国家重点实验室上海200025

染色质重塑因子Arid1a(the AT-rich interaction domain 1A)基因是肿瘤中突变率最高的基因之一,Arid1a突变通常导致其蛋白质表达和功能缺失,Arid1a突变的肿瘤细胞和小鼠模型均证明Arid1a突变可促进肿瘤发生发展,提示Arid1a突变在肿瘤演... 详细信息

染色质重塑因子Arid1a(the AT-rich interaction domain 1A)基因是肿瘤中突变率最高的基因之一,Arid1a突变通常导致其蛋白质表达和功能缺失,Arid1a突变的肿瘤细胞和小鼠模型均证明Arid1a突变可促进肿瘤发生发展,提示Arid1a突变在肿瘤演化中的恶性作用。挖掘靶向Arid1a突变肿瘤细胞的治疗方式和药物靶标有助于未来靶向Arid1a突变肿瘤的临床药物研发,且具有临床应用意义。该文总结了针对Arid1a突变肿瘤细胞的合成致死(synthetic lethality)方法和Arid1a突变肿瘤免疫治疗策略的分子机理和最新研究进展,旨在为未来探索Arid1a突变肿瘤的临床治疗方法提供参考。

关键词： Arid1a 抑癌基因基因突变免疫治疗合成致死

miR-485-3p靶向调节Arid1a在PM2.5致小鼠肝脏胰岛素抵抗的机制研究

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miR-485-3p靶向调节ARID1A在PM2.5致小鼠肝脏胰岛素抵抗的机制研究

作者：姜涛河北医科大学

学位级别：硕士

目的:建立PM实时暴露小鼠模型,观察PM导致的小鼠肝脏胰岛素抵抗,并进一步探索其可能的机制。方法:1.动物模型建立48只健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为3组:洁净空气组(FA)、大气组(UA)和浓缩PM组(CA),分别吸入HEPA过滤空气、未过滤空气和... 详细信息

目的:建立PM实时暴露小鼠模型,观察PM导致的小鼠肝脏胰岛素抵抗,并进一步探索其可能的机制。方法:1.动物模型建立48只健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为3组:洁净空气组(FA)、大气组(UA)和浓缩PM组(CA),分别吸入HEPA过滤空气、未过滤空气和浓缩PM空气,每天6小时,每周7天,其余时间吸入洁净空气,分别暴露8周。使用空气动力学粒径谱仪和气溶胶颗粒物检测仪分别监测各组暴露腔内颗粒物的粒径分布以及PM的实时浓度,同时监测各暴露腔内的温度。2.PM水溶液制备使用大流量空气采样器和PTFE膜采集空气中的PM,流速为1.05m/min,每天采样12小时。使用超声振荡配合冷冻干燥法获取PM粉末,用去离子水溶解至浓度为20mg/ml后-80℃保存备用。3.细胞培养及细胞模型建立人正常肝细胞细胞株L02于含10%热灭活小牛血清的RPMI-1640培养基中,37℃,5%CO饱和湿度下培养。选对数生长期的细胞,用PM染毒处理24 h,剂量为50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L;以RPMI-1640为阴性对照。4.重组细胞株的建立50 nM miR-485-3p inhibitor处理L02细胞48 h,建立miR-485-3p低表达细胞株(miR-485-3p)。pc DNA-Arid1a质粒转染L02细胞4h,建立Arid1a高表达细胞株(Arid1a)。5.肝组织形态及病理学观察小鼠肝脏以4%多聚甲醛固定并包埋在石蜡中,切5μm厚的切片。用苏木精和曙红(H&E)对其进行染色,观察组织病理学改变。6.小鼠胰岛素抵抗的检测便携式血糖仪检测小鼠血糖。只用ELISA实验检测小鼠血胰岛素水平。使用腹腔葡萄糖耐量实验(ip GTT)和腹腔胰岛素耐受实验(ip ITT)检测小鼠葡萄糖耐量和胰岛素耐受。使用HOMA-IR指数评估胰岛素抵抗情况。7.Western blot高通量组织磨碎机在4℃下匀浆肝组织,用含1%PMSF的RIPA裂解液裂解细胞提取蛋白。L02细胞直接使用1%PMSF的RIPA裂解液裂解。采用Western blot方法检测Arid1a、乙酰化STAT3/STAT3、IRS1/2、磷酸化AKT2/AKT2蛋白表达情况。8.荧光定量PCRTrizol提取肝组织或细胞总RNA,miRNA 1st Strand c DNA和Go Script T M试剂盒分别反转录生成c DNA,实时荧光定量PCR检测miR-485-3p和Arid1a m RNA的表达。9.双荧光素酶检测miR-485-3p和Arid1a m RNA结合情况用miR-485-3p mimic以及对应的NC和Arid1a WT/MUT荧光素酶质粒共转染L02细胞。使用超灵敏管式发光仪检测细胞荧光强度。结果:1.暴露腔内的PM暴露特征暴露期间,FA、UA和CA组不同暴露腔内的平均温度分别为22.89±1.11℃、21.65±1.03℃和22.24±1.98℃。FA组未检测到颗粒物的存在,UA组暴露腔内有90.46%的颗粒物空气动力学直径小于2.5μm,CA组有99.48%的颗粒物空气动力学直径小于2.5μm。暴露期间,FA组、UA组和CA组暴露腔内的PM平均浓度分别为0、94.84和900.21μg/m。2.PM暴露对小鼠体重和肝脏脏器系数的影响FA组、UA组和CA组小鼠体重无显著差异。但CA小鼠的肝脏脏器系数显著高于UA和FA小鼠(P1/2蛋白水平呈剂量依赖性降低(P1/2的含量,阻碍了胰岛素信号在肝脏中的传导。6.Arid1a负向调控STAT3乙酰化水平在PM暴露致肝胰岛素抵抗发生中的作用Western blot实验结果提示,PM暴露小鼠以及L02细胞中Arid1a蛋白水平均呈剂量依赖性降低(P<0.05

关键词： PM2.5 肝脏胰岛素抵抗 Arid1a STAT3乙酰化 miR-485-3p

circBMPR2通过miR-6814-5p/Arid1a轴抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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circBMPR2通过miR-6814-5p/ARID1A轴抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移...

作者：王慧敏江苏大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:在全世界范围内,肺癌是常见的一种恶性肿瘤,也是导致癌症相关死亡的最主要原因。2020年全球大约有1796144人死于肺癌,我国的肺癌新发及死亡病例数稳居世界第一。由于肺癌患者的早期症状不明显,导致许多患者确诊时已是晚... 详细信息

研究背景及目的:在全世界范围内,肺癌是常见的一种恶性肿瘤,也是导致癌症相关死亡的最主要原因。2020年全球大约有1796144人死于肺癌,我国的肺癌新发及死亡病例数稳居世界第一。由于肺癌患者的早期症状不明显,导致许多患者确诊时已是晚期,目前的治疗效果差,患者生存期大大缩短。因此,开发新型的肺癌特异性生物标志物及治疗靶点对提高肺癌患者的生存率至关重要。环状RNA(Circular RNA,circ RNA)是一种与传统线性RNA不同的新型单链RNA,其在真核生物中广泛表达,通过共价键连接首尾构成了稳定的封闭环状结构。近年来,随着高通量测序技术及生物信息学的快速发展,越来越多的环状RNA被发现在肿瘤组织中差异性表达,并且参与调控肿瘤的发生发展。本课题通过高通量测序结果筛选出在肺腺癌和癌旁组织中表达差异较大的circ BMPR2,并且进一步探究circ BMPR2在肺腺癌细胞中的作用及潜在机制,旨在为肺腺癌的早期诊断及治疗靶点提供新的思路。研究方法:1.circ BMPR2的筛选及临床相关性分析(1)采用高通量测序技术检测肺腺癌组织与癌旁组织中差异性表达circ RNA;(2)RNase R消化实验鉴定circ BMPR2环状结构;(3)荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测circ BMPR2在临床肺腺癌组织及癌旁组织、肺腺癌细胞株及正常支气管黏膜上皮细胞的表达量,分析肺腺癌组织中circ BMPR2表达水平与肺腺癌患者临床特征(年龄、性别、肿瘤分化程度与临床分期)之间的关系。2.circ BMPR2对肺腺癌细胞体外生物学行为的影响(1)circ BMPR2对肺腺癌细胞体外增殖能力影响的探究选用平板克隆形成实验以及CCK-8实验;(2)circ BMPR2对肺腺癌细胞体外迁移及侵袭能力影响的探究选用细胞划痕实验及Transwell实验;(3)通过蛋白印迹法检测circ BMPR2对肺腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达水平的影响。3.circ BMPR2影响肺腺癌细胞体外生物学行为的潜在作用机制(1)采用生物信息学分析以及双荧光素酶基因报告实验筛选出circ BMPR2的下游mi RNA以及m RNA,利用q RT-PCR、蛋白印迹法实验验证靶向关系;(2)通过设计功能挽救实验检测circ BMPR2/mi R-6814-5p/Arid1a对肺腺癌细胞生物学行为及EMT相关蛋白表达的调控。研究结果:1.circ BMPR2具有稳定环状结构,在肺腺癌组织及细胞系中低表达;2.circ BMPR2表达水平与肺腺癌患者的肿瘤分化程度、临床分期呈负相关,而与年龄、性别无明显关系;3.circ BMPR2过表达可以抑制肺腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭,而circ BMPR2敲减可以促进肺腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭;4.circ BMPR2通过mi R-6814-5p/Arid1a信号轴调控肺腺癌细胞生物学行为及EMT相关蛋白表达水平。研究结论:Circ BMPR2通过mi R-6814-5p/Arid1a轴调控肺腺癌细胞生物学行为。由于circ BMPR2在肺腺癌细胞系中显著下调,对mi R-6814-5p的竞争性抑制作用减弱,Arid1a表达水平下降,使得肺腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力增强。因此,circ BMPR2有望成为肺腺癌新型诊断标志物以及潜在治疗靶点。

关键词：肺腺癌 circBMPR2 miR-6814-5p Arid1a 细胞生物学行为

Arid1a与PIK3CA在卵巢子宫内膜异位症恶变中的作用及意义

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ARID1A与PIK3CA在卵巢子宫内膜异位症恶变中的作用及意义

作者：王阳阳郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的子宫内膜异位症是常见的妇科良性疾病之一,在育龄妇女中发病率约为10%,虽然其形态学呈良性表现,但具有种植、侵袭及远处转移等恶性肿瘤的临床特征。异位的子宫内膜可侵犯全身任何部位,最常见于卵巢,导致卵巢子宫内膜异位症(ov... 详细信息

背景与目的子宫内膜异位症是常见的妇科良性疾病之一,在育龄妇女中发病率约为10%,虽然其形态学呈良性表现,但具有种植、侵袭及远处转移等恶性肿瘤的临床特征。异位的子宫内膜可侵犯全身任何部位,最常见于卵巢,导致卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)。近年来研究发现,OEM有恶变为子宫内膜异位症相关卵巢癌(endometriosis-associated ovarian carcinoma,EAOC)的风险,其中卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)为EAOC的常见类型。OCCC是一类特殊的上皮性卵巢癌,与其他组织类型的上皮性卵巢癌(other types of epithelial ovarian cancer,OEOC)相比具有不同的临床和分子特征,其恶性程度高,对放化疗不敏感,预后较差。因此寻找OEM恶变为OCCC的临床指标,为OCCC的治疗提供依据至关重要。目前有研究发现:相关基因如AT丰富结合域 1A基因(the AT rich interactive domain 1A,Arid1a)和磷脂酰肌醇 3 激酶催化亚单位α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)的突变可能参与OCCC的早期发生。但是,Arid1a与PIK3CA在OEM恶变为OCCC中作用机制尚不明确。因此,本研究旨在通过检测Arid1a及PIK3CA在OEM、OCCC、OEOC中的表达情况,探讨Arid1a及PIK3CA在OCCC发生发展中的作用及机制,为OCCC的早期筛查、预防及免疫治疗寻找新的靶点,为OCCC的临床诊断和治疗提供理论指导。方法1.收集2019年6月至2021年6月,就诊于郑州大学人民医院妇科行手术治疗的子宫内膜异位症相关卵巢透明细胞癌(OCCC)组织样本30例,收集同期行手术治疗的OEM、OEOC组织样本各20例。采用免疫组化和实时荧光定量 PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测 OEM、OCCC、OEOC 组织中Arid1a、PIK3CA的表达情况并分析OCCC患者中Arid1a、PIK3CA的表达与其临床病理特征间的关系;2.采用免疫组化及qRT-PCR检测OEM、OCCC、OEOC组织中PI3K/AKT通路下游分子AKT、p-AKT的表达情况,采用Western blot检测各组组织中IL-6、IL-10、CXCR4、PD-L1、CTLA-4 的表达情况;3.采用RNA干扰技术沉默或过表达Arid1a和PIK3CA,采用CCK8实验检测沉默或过表达Arid1a/PIK3CA对OCCC细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测对OCCC细胞周期的影响;采用qRT-PCR检测对IL-6表达水平的影响;4.使用IL-6受体抑制剂处理OCCC细胞,采用ELISA测定细胞中IL-6、IL-10、CXCR4、PD-L1、CTLA-4 的表达水平变化。结果1.与OEM和OEOC组织相比,OCCC组织中arid 1A表达水平降低(PArid1a、PIK3CA的表达水平与患者EM病史、FIGO分期、肿瘤直径有关(P0.05)。3.与OEM和OEOC组织相比,OCCC组织中p-AKT、IL-6、IL-10、CXCR4、PD-L1、CTLA-4表达水平显著升高(P0.05)。4.OCCC细胞中,与空白对照组相比,沉默Arid1a或过表达PIK3CA显著促进OCCC细胞增殖(PArid1a或过表达PIK3CA相比,共同沉默Arid1a和过表达PIK3CA显著促进OCCC细胞增殖(PArid1a或沉默PIK3CA显著抑制细胞增殖(PArid1a或过表达PIK3CA,G1期细胞显著减少,S期细胞显著增加(PArid1a或沉默PIK3CA,G1期细胞显著增加,S期细胞显著减少(PArid1a或过表达PIK3CA,IL-6表达水平显著升高(PArid1a或过表达PIK3CA相比,共同沉默Arid1a和过表达PIK3CA,IL-6表达水平显著升高(PArid1a或沉默PIK3CA,IL-6表达水平显著降低(PArid1a或沉默PIK3CA相比,共同过表达Arid1a和沉默PIK3CA,IL-6表达水平显著降

关键词： Arid1a PIK3CA 卵巢透明细胞癌卵巢子宫内膜异位症

Arid1a协同P53调控PD-L1在子宫内膜癌中的机制研究

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ARID1A协同P53调控PD-L1在子宫内膜癌中的机制研究

作者：赵金仪中国医科大学

学位级别：硕士

目的:AT丰富结合域1A（AT-rich interactive domain 1A,Arid1a）作为染色质重塑复合体SWI/SNF（The SWItch/Sucrose Non-fermentation,SWI/SNF）的核心亚基,是肿瘤中突变最频繁的染色质调节因子。作为一个抑癌基因,Arid1a的突变或缺失在PI3K/AKT、IL-6/STAT3和Wnt等不同的调控通路中参与肿瘤的发生与发展。我们在研究中发现,子宫内膜癌中Arid1a的表达缺失与程序性死亡受体-配体1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）高表达相关,进而探讨Arid1a调控PD-L1的机制。方法:1.利用免疫组化技术,在33例子宫内膜癌组织中检测Arid1a和PD-L1的表达水平。2.利用CRISPR/Cas9技术,建立靶向P53和Arid1a稳定敲除的人子宫内膜癌Ishikawa细胞系和KLE细胞系。3.利用细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。4.利用蛋白免疫印记方法检测Cleavd-caspase8蛋白和Cleavd-caspase3蛋白表达水平。5.通过蛋白免疫印记方法检测PD-L1的蛋白表达水平。6.通过Real-Time PCR实验检测PD-L1 m RNA表达水平。结果:1.在PD-L1表达阳性的23例子宫内膜癌中发现了17例Arid1a低表达（73.9%）,6例Arid1a高表达（26.1%）在PD-L1表达阴性的10例子宫内膜癌中发现了3例Arid1a低表达（30%）,7例Arid1a高表达（70%）。2.经测序验证,靶向人P53的puro-Cas9-sg RNA质粒构建成功;经单克隆筛选,P53完全敲除的Ishikawa细胞系构建完成。3.经测序验证,靶向人Arid1a的puro-Cas9-sg RNA质粒构建成功;经单克隆筛选,Arid1a完全敲除的Ishikawa细胞系和KLE细胞系构建完成。4.CCK-8细胞活性检测、细胞计数实验表明,与野生型（WT）相比,Arid1a敲除的子宫内膜癌细胞增殖加快;Arid1a过表达抑制细胞增殖;在P53缺失的细胞中过表达Arid1a,细胞增殖无明显变化。PD-L1过表达子宫内膜癌细胞增长加快。5.蛋白免疫印记实验证实,Arid1aKO的人子宫内膜癌细胞与对照组（WT）相比,PD-L1表达增高;Arid1a过表达PD-L1表达降低;在P53缺失的细胞中过表达Arid1a,PD-L1表达无明显变化。6.Real-Time PCR实验证实,Arid1a-KO的人子宫内膜癌细胞与对照组（WT）相比,PD-L1 m RNA表达水平增高;Arid1a过表达时,PD-L1m RNA表达水平降低。在P53缺失的细胞中过表达Arid1a,PD-L1无明显变化。结论:在子宫内膜癌Ishikawa细胞系和KLE细胞系中,Arid1a抑制PDL1的表达;Arid1a对于子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用依赖于P53;Arid1a协同P53在转录水平下调PD-L1的表达,影响肿瘤细胞增殖,进而抑制子宫内膜癌的发展。

关键词： Arid1a PD-L1 P53 癌症